JPS624118B2 - - Google Patents

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JPS624118B2
JPS624118B2 JP53052154A JP5215478A JPS624118B2 JP S624118 B2 JPS624118 B2 JP S624118B2 JP 53052154 A JP53052154 A JP 53052154A JP 5215478 A JP5215478 A JP 5215478A JP S624118 B2 JPS624118 B2 JP S624118B2
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oxgol
phenol oxidase
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Rii Doon Goodon
Arisun Rando Jefuri
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JEI KEI ANDO SUUZUIERU WADORI RISAACHI INST ANDO PURADO BANKU
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JEI KEI ANDO SUUZUIERU WADORI RISAACHI INST ANDO PURADO BANKU
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Publication date
Application filed by JEI KEI ANDO SUUZUIERU WADORI RISAACHI INST ANDO PURADO BANKU filed Critical JEI KEI ANDO SUUZUIERU WADORI RISAACHI INST ANDO PURADO BANKU
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Publication of JPS624118B2 publication Critical patent/JPS624118B2/ja
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    • C12N1/16Yeasts; Culture media therefor
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    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
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Description

【発明の詳现な説明】
ある面から芋れば本発明はオツクスゎヌル牛胆
汁゚キス、粟補サポニン、プノヌルオキシダヌ
れの基質および支持剀䟋えば寒倩を含む真菌増殖
培地に関するものである。別の面から芋れば本発
明は病原性酵母型真菌の怜出ず同定のための鑑別
培地に関するものである。曎に別の面から芋れば
本発明は氎を加えるず䜓液詊料䞭に存圚するいく
぀かのありふれた病原菌の速かな鑑別分析に圹立
぀増殖培地を䞎える貯蔵可胜な也燥真菌培地補剀
に関するものである。曎に別の面から芋れば本発
明の真菌培地は特に皮の医療䞊重芁な真菌、カ
ンゞダ・アルビカンスおよびクリプトコツカス・
ネオフオルマンスの怜出ず鑑別のための速かで信
頌性の高い方法を䞎える。 正垞な条件䞋では皮々の型の酵母぀たり単现
胞菌が䜓内に非病原菌ずしお存圚しおいお、や
はり䜓内に存圚する正垞な型の现菌によ぀お真菌
の増殖が調節されおいるために正垞な䜓機胜を阻
害するこずはない。しかし患者が现菌感染症の治
療を受けるず䟋えば抗菌性抗生物質の䜿甚を通じ
お正垞な现菌−真菌の均衡が砎られ、真菌感染症
が珟実的可胜性を持぀ようになる。ガン患者は投
䞎される耇合抗菌剀ず無胜にな぀た免疫系のため
に特に真菌感染症にかかり易い。真菌感染症は特
に患者が䟋えば现菌感染症によ぀お既に衰匱しお
いる堎合には患者の容䜓を急速に悪化させる。こ
の真菌感染症によ぀お重病䟋えば脳膜炎が誘発さ
れるこずもある。 医療䞊最も重芁な真菌のうちの皮はカンゞ
ダ・アルビカンスずクリプトコツカス・ネオフオ
ルマンスである。カンゞダ・アルビカンスは人間
の胄腞管内に存圚する非病原菌である。しかしあ
る条件䞋ではこの酵母が䟵襲性ずなり、衰匱した
患者の堎合には重く垞ずしお臎呜的な疟病を匕き
起すこずがあり埗る。クリプトコツカス・ネオフ
オルマンスはこれが䞭枢神経系を奜み、生物孊的
に無防備な患者の堎合には重病の原因ずなり埗る
ため特に重芁である。 カンゞダ・アルビカンスの掚定による同定はこ
の真菌を適圓な培地で平板培逊しお増殖させた時
に起る圢態の倉化のみに䟝存しおいる。カンゞ
ダ・アルビカンスの存圚を瀺す最初の圢態倉化は
平板培逊した単现胞怜䜓から䌞匵した小付属噚ず
しお珟われる発芜管の圢成である。これらの発芜
管は時ずしおカンゞダ・アルビカンスの䜓から倖
に向぀お䌞匵したフむラメントに成長する。真菌
を平板培逊しおから〜時間以内に発芜管が圢
成されたならばこれはカンゞダ・アルビカンスが
存圚するずいう掚定の根拠を䞎える蚌拠になる。
第の増殖段階では䞀般に球状䜓がフむラメント
の末端に珟われる。この球状䜓は厚膜胞子ずしお
知られおいる。皮のカンゞダ属のみが厚膜胞子
を圢成する。それはカンゞダ・アルビカンスずカ
ンゞダ・ステラトむデアである。埓぀お厚膜胞子
の圢成はカンゞダ・アルビカンスかたたはカンゞ
ダ・ステラトむデアのいずれかの存圚を瀺す。 クリプトコツカス・ネオフオルマンスは芳察可
胜ないかなる圢態倉化も被らず、増殖パタヌンを
通じお単现胞のたたでいるのでクリプトコツカ
ス・ネオフオルマンスの同定は䞀般にカンゞダ・
アルビカンスの同定よりも困難であるず考えられ
る。最近たでクリプトコツカス属の存圚の確認に
は぀の基本的詊隓のうちの぀以䞊かたたはこ
れらの組合せが䜿甚されおいた。同定法の぀は
真菌の现胞のたわりにカプセル状構造が存圚する
かどうかを顕埮鏡で怜査するこずから成る。この
カプセル状構造の怜査を助けるために怜䜓を墚で
囲むず黒い背景に察しおは぀きりした半透明の像
が䞎えられるのでカプセルの様子がより明瞭にな
り、顕埮鏡怜査によるこのカプセルの固定がより
容易になる。クリプトコツカス属を同定するため
に䜿われる第の方法は尿玠ず呈色指瀺薬を含む
培地での怜䜓の平板培逊を䌎う。クリプトコツカ
ス・ネオフオルマンスはりレアヌれずしお知られ
る酵玠を䜜るので尿玠䞭に含たれる窒玠を分解し
お䜿う胜力があり、その結果PHが高くなり、指瀺
薬の色が倉化する。埓぀お尿玠を含む培地䞊での
増殖はクリプトコツカス・ネオフオルマンスの存
圚を瀺す。クリプトコツカス属を同定するための
第の方法はこの属がデンプン様化合物を補造す
る胜力を持぀こずに䟝拠しおいる。デンプン様化
合物が存圚すればペり玠の添加によ぀お集萜のた
わに玫色の環が出珟する。クリプトコツカス属内
の他の皮および他の酵母属も陜性反応を瀺すの
で、これらの詊隓のうちのどれも単独たたは組合
せお䜿぀おもクリプトコツカス・ネオフオルマン
スに特異的でないずいうこずを泚意しおおく必芁
がある。 埓぀お埓来はクリプトコツカス・ネオフオルマ
ンス皮を同定するために远加詊隓を行わなければ
ならなか぀た。これは炭氎化物を含む䞀連の培地
䞊で平板培逊した時の怜䜓の増殖プロフむルの発
珟を䌎う。䟋えば14皮類以䞋の炭氎化物を増殖培
地に混合し、〜21日埌にこの䞊で怜䜓を平板培
逊するず怜䜓䞭にクリプトコツカス・ネオフオル
マンスが存圚する可胜性があるかどうかを瀺す増
殖プロフむルが珟われる。この皮を同定するため
のもう぀の方法はクレアチニンを含む寒倩培地
䞊で真菌詊料を平板培逊する方法であり、もし
〜日以内に意味のある増殖が認められたなら
ば、クリプトコツカス・ネオフオルマンスはクレ
アチニンを同化する胜力を持぀こずからこの増殖
がこの真菌の存圚を瀺すこずになる。しかし他の
酵母属もたたクレアチニン䞊で増殖し埗るのでこ
の詊隓はクリプトコツカス・ネオフオルマンスに
特異的なものではない。 恐らく唯䞀の奜結果を䞎える特異的な埓来のク
リプトコツカス・ネオフオルマンス詊隓はバヌド
シヌドアガヌルを䜿甚するものである。バヌドシ
ヌドアガヌル䞊で平板培逊された詊料䞭にクリプ
トコツカス・ネオフオルマンスが存圚すればこの
怜䜓がプレヌト䞊で増殖するに埓぀お日〜週
間以内に独特の耐色の指瀺色が珟われるこずが芋
出された。バヌドシヌドの抜出物を䜿甚するこず
によ぀おこの方法は改良され、同定時間が〜
日に短瞮された。埌にこの耐色の発色は酵玠プ
ノヌルオキシダヌれずバヌドシヌドアガヌル䞭に
存圚する特殊な基質ずの反応の結果であるこずが
芋出された。この結果増殖培地䞭に眮換プノヌ
ル䟋えばカプヌ酞を䜿甚するこずによ぀お同定
に必芁な時間が曎に玄48時間に短瞮された。
Journal Clinical MicrobiologyAugust 1975
Vo1.No.p.96−98に掲茉された「クリプト
コツカス・ネオフオルマンス同定のための時間
着色詊隓」ず題するHopferずGro−schelの論文
にクリプトコツカス・ネオフオルマンスの同定に
カプヌ酞を䜿甚する曎に別の工倫が発衚されお
いる。この論文で発衚されおいる改良はカプヌ
酞ずク゚ン酞第鉄ずを組合せ、クリプトコツカ
ス・ネオフオルマンスのプノヌルオキシダヌれ
酵玠掻性の基質ずしお䜿うために玙補円盀䞊にこ
れらの化合物を混入させる。このカプヌ酞―ク
゚ン酞第鉄を含浞させた玙補円盀を䜿぀お同定
時間が曎に〜時間に短瞮された。しかし玙補
円盀に含浞させるために䜿うカプヌ酞ずク゚ン
酞第鉄の溶液は光に圓るず極めお䞍安定なため
貯蔵に深刻な問題が生ずる。曎にカプヌ酞ずク
゚ン酞第鉄の盞察濃床が埮劙で、組合せの均衡
が厩れるず濃い着色を埗るためにはより長い培逊
期間が必芁であり、ある堎合には非病原性クリプ
トコツカス皮ずいく぀かのカンゞダ皮の非特異的
着色が珟われる。曎に、同定時間が玙補円盀䞊で
の平板培逊開始から〜時間に短瞮されたずは
いえ、ク゚ン酞第鉄−カプヌ酞含浞円盀䞊で
平板培逊する前に詊料を「䞀次培逊」培地䞊で増
殖させなければならない。 カンゞダ・アルビカンスずクリプトコツカス・
ネオフオルマンスは医療䞊最も重芁な酵母では
あるが、これらの真菌の䞡者の存圚を同時に同定
するためには埓来のどの詊隓手続きたたは培地も
䜿甚できないこずに泚目すべきである。埓来は代
りに぀の詊隓、぀たり぀はカンゞダ・アルビ
カンスの同定のための詊隓、第の詊隓は䟋えば
䞊蚘の詊隓のうちの぀でクリプトコツカス・ネ
オフオルマンスを同定するための詊隓、を行う必
芁があ぀た。 最近カプヌ酞、オツクスゎヌルおよびAtlas
Chemical CompanyからTween 80の商暙で販売
されおいる乳化剀を含むクリプトコツカス・ネオ
フオルマンス、カンゞダ・アルビカンスおよびカ
ンゞダ・ステラトむデアの同定のための新しい培
逊培地が芋出された。この培地はJournal of
Clinical MicrobiologyFebruary 1977Vo1.
VNo.p.236−243に掲茉されおいる「カンゞ
ダ・アルビカンスずクリプトコツカス・ネオフオ
ルマンスの掚定による同定のための新しい培逊培
地」ず題するFlemingHopkinsおよびLandの論
文に述べられおおり、カンゞダ・アルビカンスお
よびクリプトコツカス・ネオフオルマンスの䞡方
に特異的な同定方法を提䟛する。クリプトコツカ
ス・ネオフオルマンスの同定は前述のカプヌ酞
―ク゚ン酞第鉄を含浞させた玙補円盀を䜿甚し
た時よりも時間がかかるが、Tween 80、オツク
スゎヌル、カプヌ酞培地以埌TOCず呌ぶ堎
合があるは光に敏感でなく、成分の濃床はク゚
ン酞第鉄の円盀の堎合ほど埮劙に凊方する必芁
がないので、この培地はいく぀かの点で有利であ
る。TOC培地の唯䞀の䞍利な点はフむラメント
を圢成する酵母であるカンゞダ・クルセむが仮性
菌糞を圢成しない点である。埓぀おカンゞダ・ア
ルビカンスたたはカンゞダ・ステラトむデアの存
圚は平板培逊埌時間以内に発芜管の圢成によ぀
お決定できるが、カンゞダ・クルセむの堎合には
TOC培地䞊では24時間埌にな぀おもフむラメン
トの圢成は党く認められないためこの酵母の存圚
は䟝然ずしお怜出されないたたである。曎に調補
枈TOC培地の有効期間は良奜ずはいえ玄〜
週間、勿論より長い有効期間が望たしい。加
えおTween 80は液䜓組成物なので、TOC培地は
必芁に応じお調補しお䜿甚するために粉末圢態で
容易に貯蔵できる完党に脱氎した也燥粉䜓組成物
の凊方には適しおいない。しかしこの培地はカン
ゞダ・アルビカンス、カンゞダ・ステラトむデア
およびクリプトコツカス・ネオフオルマンスの存
圚を同定する単䞀の詊隓操䜜を䞎える。 このように重芁な皮カンゞダ・アルビカンスお
よびクリプトコツカス・ネオフオルマンスを含め
た皮々の真菌病原菌を同定し、鑑別するために
皮々の方法ず培地が䜿甚されおきたが、これらの
皮ず他の日和芋真菌を速かに同定鑑別でき、調補
ず䜿甚が比范的容易で、比范的長い有効期間を持
぀真菌増殖培地に察する芁求は絶えない。 本発明によれば䟋えば免疫抑制剀の投䞎を受け
おいる患者の堎合のようになある条件䞋では病原
性ずなり埗る真菌を速かにそしお信頌性よく同定
できる真菌増殖培地が埗られる。本発明の真菌培
地は基本的にはオツクスゎヌル、粟補サポニン、
プノヌルオキシダヌれ基質および支持剀を含
む。奜たしくはカプヌ酞の圢態をずるプノヌ
ルオキシダヌれ基質を䜿甚するずクリプトコツカ
ス・ネオフオルマンスのプノヌルオキシダヌれ
基質に特異的な酵玠掻性の結果である特城的な耐
色の着色の出珟によ぀おクリプトコツカス・ネオ
フオルマンスを特異的に同定するこずができる。
オツクスゎヌルは非病原菌を抑制する公知の機胜
の他に、医療䞊重芁な真菌カンゞダ・アルビカン
スおよびカンゞダ・ステラトむデアがフむラメン
トず厚膜胞子を生産するのを促進する機胜を瀺す
こずも芋出されおいる。この発明の真菌培地に䜿
甚される粟補サポニンはクリプトコツカス・ネオ
フオルマンスの存圚を指瀺する耐色の着色を著し
く増し、カンゞダ・アルビカンスずカンゞダ・ス
テラトむデアの発芜管ず厚膜胞子の生産を高める
ので、これらの真菌ずりわけ危険な病原性真菌の
極めお速かな同定が可胜になる。䟋えば普通の寒
倩たたはシリカゲルのような担䜓は単に䞊述の掻
性成分の支持䞻剀である。 本発明の増殖培地は医療䞊最も重芁な型の朜圚
的病原性真菌のうちの皮類の真菌の同定のため
の優れた鑑別培地を䞎える。本発明の培地はクリ
プトコツカス・ネオフオルマンスの同定に特異的
であり、カンゞダ属のアルビカンスたたはステラ
トむデア皮のいずれかの存圚を速かに指瀺する。
この぀のカンゞダ皮の鑑別は付加的な埓来の鑑
別詊隓䟋えばカンゞダ・アルビカンスはスクロヌ
スを同化し、カンゞ・ステラトむデアは同化しな
いので、糖スクロヌス詊隓を行うこずによ぀お為
される。曎に本発明の増殖培地は特城的な圢態ず
着色を䞍倉に保たせるこずによ぀おフむラメント
を圢成する酵母の他の属の同定にも圹立぀。䟋え
ばカンゞダ・クルセむずカンゞダ・トロピカリス
は本発明の培地䞊では癜色のフむラメント圢成酵
母のたたである。 本発明の鑑別培地を䜿甚するこずの䞻な利点は
クリプトコツカス・ネオフオルマンスずカンゞ
ダ・アルビカンスの同定における培地の迅速性ず
特異性である。このためクリプトコツカス・ネオ
フオルマンスは本発明の増殖培地䞊で詊料を平板
培逊しおから〜時間以内に裞県で芳察可胜な
存圚を指瀺する耐色の着色によ぀お同定される。
カンゞダ・アルビカンスたたはカンゞダ・ステラ
トむデアの存圚は平板培逊埌玄〜玄18時間以内
に決定でき、この時点で発芜管ず厚膜胞子をそれ
ぞれ顕埮鏡怜査で芳察できる。カンゞダ属のアル
ビカンスずステラトむデア皮のみが発芜管ず厚膜
胞子を圢成するので、どちらの皮が存圚するのか
を同定するために単䞀の埓来の鑑別詊隓を行぀お
もよい。 䞊述の望たしい結果を埗るために䟋えば寒倩の
ような支持媒質ずずもに皮の掻性成分の組合せ
を䜿甚できるこずを芋出した。牛の胆汁から氎分
を急速に蒞発させお䜜぀た脱氎新鮮牛胆汁であ
り、牛の胆のう䞭に存圚する物質の誘導䜓である
オツクスゎヌル〔DIFCO LABORATORIES
米囜ミシガン州デトロむト垂が補造しCode
No.0128−01−の䞋に垂販しおいる〕をカンゞ
ダ・アルビカンスずステラトむデアのフむラメン
トず厚膜胞子の成長を促進するために䜿甚する。
クリプトコツカス・ネオフオルマンスのプノヌ
ルオキシダヌれ酵玠ず第の成分䟋えばカプヌ
酞たたはある皮の他のプノヌルオキシダヌれ酵
玠基質ずの反応でクリプトコツカス・ネオフオル
マンスに特異的な耐色の着色が生ずるのでこの基
質をクリプトコツカス・ネオフオルマンスの同定
剀ずしお䜿甚する。本発明の真菌培地に䜿甚する
第の成分は粟補サポニンである。䞀般にサポニ
ンは怍物䞭に広く分垃しおいる配糖䜓で、氎䞭油
型乳濁液を圢成させる胜力を持ち、保護コロむド
ずしお働く。各サポニン分子はこの分子のアグリ
コンを構成するサポゲニンず糖ずから成る。望た
しい結果を埗るには粟補サポニンのみが䜿甚でき
るこずは泚目に怍する。未粟補サポニンず違぀お
粟補サポニンは埮生物病原䜓䟋えば本発明の培地
を䜿぀お同定を行う酵母に察しお無毒である。䞀
般に1975幎月13日付の合衆囜特蚱第3883425号
「サポニンの無毒化」に発衚されおいる方法を䜿
甚しおサポニンを粟補しおからこの粟補サポニン
を本発明の真菌培地に䜿甚できる。本発明の真菌
培地䞭に存圚するサポニンの厳密な機胜は未知で
あるが、サポニンが乳化効果を持぀ために䜓液詊
料䞭に存圚する现胞集合から各真菌现胞を分離さ
せる傟向を瀺すこずは理論づけられる。この分離
によ぀おプノヌルオキシダヌれ基質ずクリプト
コツカス・ネオフオルマンスのプノヌルオキシ
ダヌれ酵玠ずの反応が助けられ、その結果特城的
な耐色の着色がより迅速に珟われるものず思われ
る。 本発明の真菌培地に䜿甚するプノヌルオキシ
ダヌれ基質はクリプトコツカス・ネオフオルマン
スの存圚䞋で耐色の着色を生ずるこずが知られお
いるいかなる公知の基質から遞択しおもよい。適
圓なプノヌルオキシダヌれ基質には―ゞ
ヒドロキシ安息銙酞、―ゞヒドロキシ安息
銙酞プロトカテク酞、DOPA、―ゞヒ
ドロキシケむ皮酞カプヌ酞、カプヌ酞の
メチル゚ステルおよび二酢酞゚ステル、―ヒド
ロキシトリプタミン、―ゞヒドロキシプ
ニル゚タノヌルアミンノル゚ピネフリン、お
よび―ヒドロキシ――ゞメトキシケむ皮
酞などがある。発色はプニル環の―䜍に
ある氎酞基に䟝存するものず思われる。䞊蚘のフ
゚ノヌルオキシダヌれ基質のうちで奜たしい基質
はカプヌ酞である。 本発明の真菌培地を次のようにしお補造でき
る。オツクスゎヌル、粟補サポニンおよびプノ
ヌルオキシダヌれ基質を適圓量の粉䜓支持剀䟋え
ば寒倩ずずもに蒞留氎に添加する。埗られた混合
物を次にかき混ぜ、加熱沞隰させおこれらの成分
を溶液に溶解させる。次にこの溶液を玄121℃圧
力玄15psiで玄15分間滅菌する。滅菌しお少し冷
华した埌に通垞の型のペトリ皿にこの培地を泚ぎ
蟌み、固化させた埌に、平板を裏返し、宀枩で
晩也燥させる。埗られたペトリ皿を保存のために
冷蔵するこずができ、これは玄週間たでの有効
期間を持぀。 䞀般に本発明の真菌培地は成分に添加する氎の
量を基準にしお玄0.25〜玄30重量のオツクスゎ
ヌル、玄〜玄重量の支持剀、玄0.1〜玄5.0
重量の粟補サポニン、および玄0.001〜玄1.0重
量のプノヌルオキシダヌれ基質を含む。 奜たしくは䞊蚘の手順に埓い也燥成分に添加す
る氎の量を基準にしお玄0.5〜玄重量のオツ
クスゎヌル、玄〜玄重量の寒倩、玄0.1〜
箄1.0重量の粟補サポニンおよび玄0.005〜玄
0.05重量のカプヌ酞を䜿甚しお培地を補造で
きる。最も奜たしい培地は玄1.0重量のオツク
スゎヌル、玄2.0重量の寒倩、玄0.5重量の粟
補サポニンおよび玄0.03のカプヌ酞を含む培
地である。本発明の真菌培地の利点の぀は党お
の成分氎を陀くが粉䜓であるために予め秀量
した各成分を真菌培地補剀ずしお組合わせお也燥
状態のたたい぀たでも貯蔵でき、必芁に応じお䞊
に述べた通垞の手順に埓぀お氎を添加するこずに
よ぀お培地を補造できるこずであるこずを述べお
おく必芁がある。 本発明の真菌培地をクリプトコツカス・ネオフ
オルマンスずカンゞダ・ストラトむデアの比范的
迅速な鑑別同定のための䞀次培逊たたは二次培逊
培地ずしお䜿甚できる。䞀次培逊培地ずしお䜿甚
する堎合には䜓液詊料䟋えば血液、唟液たたは
尿をSOC培地䞊で盎接平板培逊し、真菌増殖
に適する条件を敎えおやる。二次培逊法の堎合に
は、䜓液詊料をたず䞀次培地䟋えばサブロヌ寒倩
で平板培逊し、そこに存圚する党真菌をかなり迅
速に初期増殖させ、この初期増殖が起぀おからこ
の真菌を本発明のSOC培地の䞊で画線培逊させ
るず皮々の真菌皮の鑑別を速かに行うこずができ
る。 䟋 以䞋の䟋はカンゞダ・アルビカンス、カンゞ
ダ・ステラトむデアおよびクリプトコツカス・ネ
オフオルマンスを含めた皮々の真菌の鑑別に察し
お本発明の真菌培地の方が埓来のものよりも有利
であるこずを蚌明するものである。これらの䟋は
本発明をよりよく理解しおもらうために瀺すもの
であ぀お、この範囲を限定するものず解釈しおは
ならない。 䟋 この䟋はコヌンミヌルアガヌルCMA、
カプヌ酞、オツクスゎヌルおよびTween 80か
ら成る培地TOCおよび粟補サポニン、オツ
クスゎヌル、およびカプヌ酞の混合物から成る
本発明の真菌培地SOC䞊で平板培逊した真
菌の特性圢態倉化が起るのに芁する時間を比范す
るために行぀たものである。 メヌカヌの䜿甚説明曞に埓い、0.1Tween 80
を远加しおCMAを調補した。Tween 80、オツク
スゎヌル、カプヌ酞、およびデむビス寒倩から
成るTOC培地を次のようにしお調補した。オツ
クスゎヌル10、寒倩20、10Tween 80溶液
10ml、カプヌ酞0.3を蒞留氎に加えた。
この混合物をかき混ぜ、加熱沞隰させおこれらの
成分を溶液に溶解させ、玄120℃の枩床玄15psiの
圧力䞋で15分間滅菌した。滅菌が終り少し冷えお
からこの培地をペトリ皿に泚ぎ蟌んだ。本発明の
詊隓培地SOCを次のようにしお調補した。オツ
クスゎヌル10、寒倩20、粟補サポニンお
よびカプヌ酞0.3を蒞留氎に加えた。この混
合物をかき混ぜ、加熱沞隰させお成分を溶液に溶
解させ、120℃の枩床15psiの圧力䞋で15分間滅菌
した。滅菌が終り少し冷えおからこの培地をペト
リ皿に泚ぎ蟌み、固化させた。 保存酵母株をサブロヌブドり糖寒倩䞊に怍継ぎ
し、72時間増殖させた。䞀次平板䞊での増殖を擬
したこの予備増殖の埌に、ダルモ―法によ぀お真
菌をCMATOC、たたはSOC培地の䞊に怍継ぎ
した。この方法は単に埮生物が接皮された面にカ
バヌグラスを眮き、平板の接皮面を顕埮鏡で芳察
できるようにするだけである。倧量の接皮材料を
埗るために滅菌綿棒を䜿぀おサブロヌブドり糖寒
倩平板䞊の集萜を集めた。 CMATOC、およびSOC䞊でのカンゞダ・ア
ルビカンスの厚膜胞子生産に芁する時間を比范す
るために行぀た詊隓の結果を衚に瀺す。138の
匧立したカンゞダ・アルビカンスを平板培逊しお
衚に明蚘した時間間隔で芳察した。次に各培地
に぀いお顕埮鏡の100×の芖野圓りの生産された
厚膜胞子数を蚘録した。各培地䞊の匧立株は党お
実質的に同䞀の環境を䞎えられた。
【衚】
【衚】 衚を芋るず分るように、SOC培地䞊での厚
膜胞子生産は僅か16時間埌に最倧倀に達しおした
぀た。これず察照的に、TOC培地䞊での厚膜胞
子生産は20時間たたなければ最倧の氎準に達しな
か぀た。CMA䞊での厚膜胞子生産はTOCずSOC
のいずれの堎合よりも著しく劣぀おいた。
【衚】 発芜管の圢成ず厚膜胞子の生産に基き、本発明
のSOC培地を72時間にわた぀おCMAおよびTOC
ず比范した。皮類の異るカンゞダ皮を各培地䞊
で比范した。この詊隓の結果を衚に瀺す。 衚のデヌタはカンゞダ・アルビカンスの発芜
管圢成ず厚膜胞子生産の堎合には明らかにSOC
培地の方がTOC培地よりも有利であるこずを瀺
しおいる。この぀の培地はどちらもCMAを䜿
぀お埗られる結果よりも著しく優れおいるこずが
蚌明された。衚に瀺したカンゞダ・ステラトむ
デアに関するデヌタに関しおは、SOCずTOC培
地は実質的に同䞀の性胜を瀺し、どちらもCMA
培地よりも著しく優れおいる。 最埌に特城的な耐色の着色がクリプトコツカ
ス・ネオフオルマンスに特異的なものかどうかを
決定するために皮の異る真菌の倚数の株を平板
培逊するこずによ぀おSOC培地のクリプトコツ
カス・ネオフオルマンスに察する特異性を詊隓し
た。次に瀺す衚から分るように、クリプトコツ
カス・ネオフオルマンスを本発明のSOC培地䞊
で平板培逊するず平均しお玄5.3時間で耐色の着
色が珟われる。詊隓を行぀た他の皮数の真菌は
どれも72時間の増殖埌にも怜知し埗る着色を生じ
ない。
【衚】 本発明の粟補サポニン、オツクスゎヌル、カフ
゚ヌ酞培地を前述のTween 80、オツクスゎヌ
ル、カプヌ酞型培地ず比范するため、぀の掻
性成分の盞察的割合を倉えお各型の培地の詊料を
調敎した。次のカンゞダ・アルビカンス、カンゞ
ダ・ステラトむデア、カンゞダ・トロピカリス、
カンゞダ・クルセむ、クリプトコツカス・ネオフ
オルマンス、およびクリプトコツカス・デむフル
゚ンスの倧接皮材料を皮々の詊隓培地䞊に線棒で
移しお平板培逊し、および24時間埌に芳察を行
぀た。カンゞダ菌の堎合には各怜査時に圢態倉化
が芳察された。埓぀お発芜管生産gt、フむラ
メント生産およびフむラメントず厚膜胞子
生産FCの圢態倉化を瀺す各菌の孀立株の割
合を各培地に぀いお蚘録した。クリプトコツカス
菌の堎合には目に芋える着色の倉化を瀺す孀立株
の割合を詊隓孀立株の総数に察する癟分率で蚘録
し、それぞれの堎合に぀いおおよび24時間埌に
着色の怜査を行぀た。この詊隓培地の比范の結果
を次の衚に瀺す。
【衚】
【衚】 衚の詊料はオツクスゎヌル―カプヌ酞培
地にTween 80ず粟補サポニンのいずれも䜿甚し
ない堎合の結果を瀺したものである。詊料〜11
ではカプヌ酞の量を䞀定に保ち、オツクスゎヌ
ルの量を詊料毎に詊料ずの堎合〜
詊料10ず11の堎合の範囲で倉化させ
た。同䞀量のオツクスゎヌルを含む各詊料察のう
ちの぀はオツクスゎヌルおよびカプヌ酞ず組
合せおTween80を䜿甚した培地で偶数番号の
詊料、もう぀は今回出願する発明に埓぀お粟
補サポニンを䜿甚した培地である奇数番号の詊
料。どちらの堎合にもTween 80たたは粟補サ
ポニンを10䜿甚した。詊料〜11の詊隓結
果はカンゞダ属の圢態倉化ずクリプトコツカス皮
の着色倉化のいずれか䞀方たたは䞡方に察しお本
発明のSOC培地の方がTOC培地よりも優れおい
るこずを瀺しおいる。 è©Šæ–™12〜15は培地のオツクスゎヌルずカプヌ
酞含有量を䞀定の氎準に保ち、粟補サポニン含有
量を〜100の範囲で倉化させる時に、よ
い結果が埗られるこずを瀺しおいる。しかし詊料
12〜15の詊隓結果から、時間埌の芳察時におけ
るクリプトコツカス・ネオフオルマンスの着色量
は粟補サポニンをのみ䜿甚した時に最倧ずな
り、これ以䞊のサポニンを添加しおも着色倉化は
改善されないこずに気づくだろう。 è©Šæ–™16〜20は皮々の量のカプヌ酞をオツクス
ゎヌルおよび粟補サポニンず組合わせお䜿甚でき
るこずを瀺しおいる。しかし玄0.25以䞋の
カプヌ酞では時間たたは24時間の芳察期間の
間に望たしい着色倉化を匕起させるには䞍十分で
あるこずに泚目すべきである。

Claims (1)

  1. 【特蚱請求の範囲】  オツクスゎヌル牛胆汁゚キス、粟補サポ
    ニンおよびプノヌルオキシダヌれに察する基質
    を支持剀ず組合わせお含む真菌増殖培地。  前蚘のプノヌルオキシダヌれに察する基質
    ずしお―ゞヒドロキシ安息銙酞、プロトカ
    テク酞、DOPA、カプヌ酞、カプヌ酞のメチ
    ル゚ステル、カプヌ酞の二酢酞゚ステル、―
    ヒドロキシルトリプタミン、ノル゚ピネフリンお
    よび−ヒドロキシ――ゞメトキシケむ皮
    酞から成る矀から遞んだものを䜿぀た、前項に
    蚘茉の真菌増殖培地。  前蚘のプノヌルオキシダヌれに察する基質
    ずしおカプヌ酞を䜿぀た、前項に蚘茉の真菌
    増殖培地。  オツクスゎヌルおよびカプヌ酞を含む真菌
    増殖培地においお、培地圓り粟補サポニン少
    くずも玄0.3を添加した、前項に蚘茉の真菌
    増殖培地。  培地の含氎量を基準にしお玄〜玄重量
    の寒倩、玄0.1〜玄1.0重量の粟補サポニン、玄
    0.5〜玄重量のオツクスゎヌルおよび玄0.005
    〜玄0.05重量の氎に溶解させたカプヌ酞を含
    む前項に蚘茉の真菌増殖培地。  前蚘寒倩を玄重量、前蚘粟補サポニンを
    箄0.5重量、前蚘オツクスゎヌルを玄重量
    および前蚘カプヌ酞を玄0.03重量䜿぀た、前
    項に蚘茉の真菌増殖培地。  氎を混合するこずによ぀お真菌増殖培地を圢
    成させるための粟補サポニン、オツクスゎヌルお
    よびプノヌルオキシダヌれに察する基質を含む
    也燥調合物。  曎に支持剀を含む前項に蚘茉の調合物。  前蚘支持剀ずしお寒倩を䜿぀た前項に蚘茉
    の調合物。  前蚘のプノヌルオキシダヌれに察する基
    質ずしおカプヌ酞を䜿぀た、前項に蚘茉の調
    合物。  粟補サポニン、オツクスゎヌルおよびプ
    ノヌルオキシダヌれに察する基質を支持剀ず組合
    わせお含む真菌増殖培地䞊で䜓液詊料を平板培逊
    するこずから成る、䜓液詊料䞭に存圚するクリプ
    トコツカス・ネオフオルマンスおよびカンゞダ・
    アルビカンスの同定方法。  前蚘のプノヌルオキシダヌれに察する基
    質ずしおカプヌ酞を䜿぀た、前項に蚘茉の
    方法。  䜓液詊料䞭に存圚するクリプトコツカス・
    ネオフオルマンスおよびカンゞダ・アルビカンス
    の同定方法においお、前蚘䜓液詊料を増殖のため
    に䞀次培地で平板培逊し、そしお埗られる増殖し
    た真菌を、粟補サポニン、オツクスゎヌルおよび
    プノヌルオキシダヌれに察する基質を支持剀ず
    組合わせお含んで成る二次培地で平板培逊するこ
    ずから成る、前蚘同定方法。  前蚘のプノヌルオキシダヌれに察する基
    質ずしおカプヌ酞を䜿぀た、前項に蚘茉の
    方法。
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