JPS62294099A - 基質の安定化法 - Google Patents
基質の安定化法Info
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- JPS62294099A JPS62294099A JP13628886A JP13628886A JPS62294099A JP S62294099 A JPS62294099 A JP S62294099A JP 13628886 A JP13628886 A JP 13628886A JP 13628886 A JP13628886 A JP 13628886A JP S62294099 A JPS62294099 A JP S62294099A
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
3、発明の詳細な説明
〔産業上の利用分野〕
本発明はペルオキシダーゼの活性を測定するのに用いる
フェニレン・アミン類と過酸化水素水から成る基!1を
安定化する方法に関するものである。
フェニレン・アミン類と過酸化水素水から成る基!1を
安定化する方法に関するものである。
従来、ペルオキシダーゼ(POD)の活性を測定する場
合、酸化還元系発色試薬等のフェニレン・アミン類〔た
とえば0−フェニレンジアミン。
合、酸化還元系発色試薬等のフェニレン・アミン類〔た
とえば0−フェニレンジアミン。
DAB (3,3’−ジアミノベンジジン、テトラヒド
ロクロリド)、TMBZ (3,3’ 、5゜5′−テ
トラメチルベンジジン)、TMBZ・HCI )と過酸
化水素水(H202)をMIjiとした溶液を用いて、
PODの活性値を吸光度の変化から検出する。
ロクロリド)、TMBZ (3,3’ 、5゜5′−テ
トラメチルベンジジン)、TMBZ・HCI )と過酸
化水素水(H202)をMIjiとした溶液を用いて、
PODの活性値を吸光度の変化から検出する。
′たとえば、フェニレン・アミン類に属する0−フェニ
レン・ジアミン(OPD)とH2O2を基質とし、ペル
オキシダーゼ(POD)の活性を測定する場合について
述べる。あらかじめ、発色反応の起こりやすいPH4〜
6の緩衝液で、0PD−H202溶液を調整し、冷暗所
に保存しておく。
レン・ジアミン(OPD)とH2O2を基質とし、ペル
オキシダーゼ(POD)の活性を測定する場合について
述べる。あらかじめ、発色反応の起こりやすいPH4〜
6の緩衝液で、0PD−H202溶液を調整し、冷暗所
に保存しておく。
そしてPODの活性を測定する際、PODを0PD−ト
1202溶液へ添加し、一定時間後、吸光度を測定し、
その吸光度から、活性値を求める。
1202溶液へ添加し、一定時間後、吸光度を測定し、
その吸光度から、活性値を求める。
(発明が解決しようとする問題点)
しかし、OPD −H202溶液は、冷暗所に保存して
おいても、十分に安定ではなく、PODが添加されてい
ないのにもかかわらず、時間と共に発色し、吸光度が増
加してしまう。そのため、保存性がわるく、長時間にわ
たり、高い精度で、PODの測定がむずかしい。
おいても、十分に安定ではなく、PODが添加されてい
ないのにもかかわらず、時間と共に発色し、吸光度が増
加してしまう。そのため、保存性がわるく、長時間にわ
たり、高い精度で、PODの測定がむずかしい。
第1図は、PI−1=5.5で調整したOPD−H2O
2溶液を4℃で保存した場合のλ= 280nmの吸光
度の変化を線1で示したものである。
2溶液を4℃で保存した場合のλ= 280nmの吸光
度の変化を線1で示したものである。
このように、OPD −H202溶液の吸光度は、溶液
作成直後に比べ、100分で約2倍に上界するため、特
に低い活性の試料を測定する場合、問題となり、正確な
測定ができない。
作成直後に比べ、100分で約2倍に上界するため、特
に低い活性の試料を測定する場合、問題となり、正確な
測定ができない。
以上、述べたことは、フェニレンアミン類とH202を
基質としたPODの活性の測定をする場合、常に生じる
問題点である。
基質としたPODの活性の測定をする場合、常に生じる
問題点である。
そこで、本発明は、前記した基質を安定化しその保存性
を向上させることが目的である。
を向上させることが目的である。
〔問題点を解決するための手段および作用〕上記目的を
達成するため、本発明の基質の安定化法においては、P
ODの活性を測定するのに用いられるフェニレン・アミ
ン類と過酸化水素水から成る基質を安定化するに当り、
基質へ非イオン系界面活性剤を添加する。
達成するため、本発明の基質の安定化法においては、P
ODの活性を測定するのに用いられるフェニレン・アミ
ン類と過酸化水素水から成る基質を安定化するに当り、
基質へ非イオン系界面活性剤を添加する。
通常、本発明において、上記基質の安定化は、フェニレ
ン・アミン類と過酸化水素水を基質として調整する際、
PHを調整する緩衝液中に非イオン系界面活性材を添加
し、これを基質に加えることにより行なわれる。
ン・アミン類と過酸化水素水を基質として調整する際、
PHを調整する緩衝液中に非イオン系界面活性材を添加
し、これを基質に加えることにより行なわれる。
この際用いられる非イオン系界面活性剤としては、たと
えばポリオキシエチレンアルキルエーテル系、ポリオキ
シエチレンアルキルフェニルエーテル系、ポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステル系、ポリオキシエチレ
ングリセリン脂肪酸エステル系、ポリエチレンゲルコー
ル脂肪酸エステル系、ポリオキシエチレン脂肪アミン系
、脂肪酸モノグリセリド系、ソルビタン脂肪酸エステル
系、ペンタエリスリトール脂肪酸エステル系、プロピレ
ングリコール脂肪酸エステル系、しよ糖脂肪酸エステル
系、ポリグリセリン脂肪酸エステル系、脂肪酸アルカノ
ールアミド系などが挙げられる。
えばポリオキシエチレンアルキルエーテル系、ポリオキ
シエチレンアルキルフェニルエーテル系、ポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステル系、ポリオキシエチレ
ングリセリン脂肪酸エステル系、ポリエチレンゲルコー
ル脂肪酸エステル系、ポリオキシエチレン脂肪アミン系
、脂肪酸モノグリセリド系、ソルビタン脂肪酸エステル
系、ペンタエリスリトール脂肪酸エステル系、プロピレ
ングリコール脂肪酸エステル系、しよ糖脂肪酸エステル
系、ポリグリセリン脂肪酸エステル系、脂肪酸アルカノ
ールアミド系などが挙げられる。
本発明において、上記のように非イオン系界面活性材を
添加した緩衝液により基質のPHを調整することで、従
来の問題点が解決されると共に基質の保存性が改善され
る。
添加した緩衝液により基質のPHを調整することで、従
来の問題点が解決されると共に基質の保存性が改善され
る。
次に本発明を実施例により説明する。
実施例1
ペルオキシダーゼの活性の測定に用いる、基質の安定性
を以下のように調べた。
を以下のように調べた。
0.3M Na 2 HPO4−0,15MりIンM
−0,05重量%トゥイーン80によりPH=5に調整
した0PD−H2O2溶液を溶液−1、また、0.3M
Na 2 HPO2−0,15MクエンIFIニよ
りPH=5に調整した0PD−H202溶液を溶液−2
とした。
−0,05重量%トゥイーン80によりPH=5に調整
した0PD−H2O2溶液を溶液−1、また、0.3M
Na 2 HPO2−0,15MクエンIFIニよ
りPH=5に調整した0PD−H202溶液を溶液−2
とした。
溶液−1と溶液−2を4℃の暗所で保存し、一定時間間
隔でλ= 280nmの吸光度を測定した。その結果を
第2図に溶液−1については線3、溶液−2については
線2で示す。トウイーン80が添加されている溶液−1
は、トウイーンが添加されていない溶液−2に比べ明ら
かに発色の速度が遅くなっている。溶液−1および、溶
液−2の発色速度は、それぞれ、1,3X 10’ (
A B S / min ) 。
隔でλ= 280nmの吸光度を測定した。その結果を
第2図に溶液−1については線3、溶液−2については
線2で示す。トウイーン80が添加されている溶液−1
は、トウイーンが添加されていない溶液−2に比べ明ら
かに発色の速度が遅くなっている。溶液−1および、溶
液−2の発色速度は、それぞれ、1,3X 10’ (
A B S / min ) 。
5.3X10−’ (Δ[38/1llin)であった
。以上のことから、0.05重世%トウイーン80が添
加されていない0PD−H20’2溶液に比べ、0.0
5重量%トウイーン80が添加されている0PD−H2
O2溶液は保存の安定性が、および5倍向上している。
。以上のことから、0.05重世%トウイーン80が添
加されていない0PD−H20’2溶液に比べ、0.0
5重量%トウイーン80が添加されている0PD−H2
O2溶液は保存の安定性が、および5倍向上している。
実施例2
実施例1と同様に、0.05 fflffi%トルトン
×100を添加したOPD −H202溶液の溶液−3
と、前記溶液−2を比較した。その結果を第3図に溶液
−2については!5A2、溶液−3についてはl!4で
示す。トリトンX 100の添加されている溶液−3
の発色速度は3,6x10’ (ABS/min )と
、溶液−2に比べ、約1,5倍の保存の安定性が向上し
た。
×100を添加したOPD −H202溶液の溶液−3
と、前記溶液−2を比較した。その結果を第3図に溶液
−2については!5A2、溶液−3についてはl!4で
示す。トリトンX 100の添加されている溶液−3
の発色速度は3,6x10’ (ABS/min )と
、溶液−2に比べ、約1,5倍の保存の安定性が向上し
た。
本発明によると、OPDと)−1202を基質とする溶
液を調整する場合、非イオン系界面活性剤を添加するこ
とで、基質の発色の安定性が向上し、保存性が良くなり
、ざらに、活性が低い試料を測定する場合にも、信頼性
の高い測定値を得ることができるという効果が得られる
。
液を調整する場合、非イオン系界面活性剤を添加するこ
とで、基質の発色の安定性が向上し、保存性が良くなり
、ざらに、活性が低い試料を測定する場合にも、信頼性
の高い測定値を得ることができるという効果が得られる
。
第1図はPH=5.5に調整したOPD −H202溶
液を4℃で保存した場合のλ−280nmの吸光度の経
時変化を示ず線図、 第2図は実施例1のPH=5.0に調整した溶液−1お
よび溶液−2の第1図の場合と同様の吸光度の経時変化
を示ず線図、 第3図は実施例2の溶液−3と前記溶液2の第1図の場
合と同様の吸光度の経時変化を示す線図である。 第1図 E今ルn (mi?tコ 第2図 第3図 晴間Cm1n1 手 ′Ift 補 正 書 昭和61年12月11日 特許庁長官 黒 1) 明 雄 殿1、事件
の表示 昭和61年特許願第136288号 2、発明の名称 基質の安定化法 3、補正をする者 事件との関係 特許出願人 (037) オリンパス光学工業株式会社4、代理人 1、明細書第5頁第8行、第10行、第6頁第8行、第
7頁第3〜4行rOPD−HIO□」をr4.43■/
■I 0PD−0,035χnzo□」に補正する。 2、同第5頁第13行r280nm Jをr440ns
+ Jに補正する。 3、同第6頁第7行「トルトン」を「トリトン」に補正
する。
液を4℃で保存した場合のλ−280nmの吸光度の経
時変化を示ず線図、 第2図は実施例1のPH=5.0に調整した溶液−1お
よび溶液−2の第1図の場合と同様の吸光度の経時変化
を示ず線図、 第3図は実施例2の溶液−3と前記溶液2の第1図の場
合と同様の吸光度の経時変化を示す線図である。 第1図 E今ルn (mi?tコ 第2図 第3図 晴間Cm1n1 手 ′Ift 補 正 書 昭和61年12月11日 特許庁長官 黒 1) 明 雄 殿1、事件
の表示 昭和61年特許願第136288号 2、発明の名称 基質の安定化法 3、補正をする者 事件との関係 特許出願人 (037) オリンパス光学工業株式会社4、代理人 1、明細書第5頁第8行、第10行、第6頁第8行、第
7頁第3〜4行rOPD−HIO□」をr4.43■/
■I 0PD−0,035χnzo□」に補正する。 2、同第5頁第13行r280nm Jをr440ns
+ Jに補正する。 3、同第6頁第7行「トルトン」を「トリトン」に補正
する。
Claims (1)
- 1、ペルオキシダーゼの活性を測定するのに用いるフェ
ニレン・アミン類と過酸化水素水から成る基質を安定化
するに当り、基質へ非イオン系界面活性剤を添加するこ
とを特徴とする基質の安定化法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP13628886A JPS62294099A (ja) | 1986-06-13 | 1986-06-13 | 基質の安定化法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP13628886A JPS62294099A (ja) | 1986-06-13 | 1986-06-13 | 基質の安定化法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62294099A true JPS62294099A (ja) | 1987-12-21 |
Family
ID=15171666
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP13628886A Pending JPS62294099A (ja) | 1986-06-13 | 1986-06-13 | 基質の安定化法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS62294099A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5804404A (en) * | 1996-01-22 | 1998-09-08 | Dako Corporation | Stable substrate-chromogen solutions for enenzyme activity detection |
CN103884563A (zh) * | 2014-04-10 | 2014-06-25 | 上海太阳生物技术有限公司 | 过氧化物酶(pox)染色液(化学染色法) |
-
1986
- 1986-06-13 JP JP13628886A patent/JPS62294099A/ja active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5804404A (en) * | 1996-01-22 | 1998-09-08 | Dako Corporation | Stable substrate-chromogen solutions for enenzyme activity detection |
CN103884563A (zh) * | 2014-04-10 | 2014-06-25 | 上海太阳生物技术有限公司 | 过氧化物酶(pox)染色液(化学染色法) |
CN103884563B (zh) * | 2014-04-10 | 2016-08-17 | 上海太阳生物技术有限公司 | 过氧化物酶(pox)染色液(化学染色法) |
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