JPS62294099A - 基質の安定化法 - Google Patents
基質の安定化法Info
- Publication number
- JPS62294099A JPS62294099A JP13628886A JP13628886A JPS62294099A JP S62294099 A JPS62294099 A JP S62294099A JP 13628886 A JP13628886 A JP 13628886A JP 13628886 A JP13628886 A JP 13628886A JP S62294099 A JPS62294099 A JP S62294099A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- substrate
- solution
- activity
- nonionic surfactant
- added
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 title claims description 5
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 title claims description 5
- -1 Polyoxyethylene Polymers 0.000 claims abstract description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 16
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 15
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 abstract description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 4
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 abstract description 2
- 125000005037 alkyl phenyl group Chemical group 0.000 abstract description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 10
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 10
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 10
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 10
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 4
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJDSORYAHBAGPP-UHFFFAOYSA-N 4-(3,4-diaminophenyl)benzene-1,2-diamine;hydron;tetrachloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.C1=C(N)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C(N)=C1 KJDSORYAHBAGPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
３、発明の詳細な説明
〔産業上の利用分野〕
本発明はペルオキシダーゼの活性を測定するのに用いる
フェニレン・アミン類と過酸化水素水から成る基！１を
安定化する方法に関するものである。
フェニレン・アミン類と過酸化水素水から成る基！１を
安定化する方法に関するものである。
従来、ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）の活性を測定する場
合、酸化還元系発色試薬等のフェニレン・アミン類〔た
とえば０−フェニレンジアミン。
合、酸化還元系発色試薬等のフェニレン・アミン類〔た
とえば０−フェニレンジアミン。
ＤＡＢ （３，３’−ジアミノベンジジン、テトラヒド
ロクロリド）、ＴＭＢＺ （３，３’ 、５゜５′−テ
トラメチルベンジジン）、ＴＭＢＺ・ＨＣＩ ）と過酸
化水素水（Ｈ２０２）をＭＩｊｉとした溶液を用いて、
ＰＯＤの活性値を吸光度の変化から検出する。
ロクロリド）、ＴＭＢＺ （３，３’ 、５゜５′−テ
トラメチルベンジジン）、ＴＭＢＺ・ＨＣＩ ）と過酸
化水素水（Ｈ２０２）をＭＩｊｉとした溶液を用いて、
ＰＯＤの活性値を吸光度の変化から検出する。
′たとえば、フェニレン・アミン類に属する０−フェニ
レン・ジアミン（ＯＰＤ）とＨ２Ｏ２を基質とし、ペル
オキシダーゼ（ＰＯＤ）の活性を測定する場合について
述べる。あらかじめ、発色反応の起こりやすいＰＨ４〜
６の緩衝液で、０ＰＤ−Ｈ２０２溶液を調整し、冷暗所
に保存しておく。
レン・ジアミン（ＯＰＤ）とＨ２Ｏ２を基質とし、ペル
オキシダーゼ（ＰＯＤ）の活性を測定する場合について
述べる。あらかじめ、発色反応の起こりやすいＰＨ４〜
６の緩衝液で、０ＰＤ−Ｈ２０２溶液を調整し、冷暗所
に保存しておく。
そしてＰＯＤの活性を測定する際、ＰＯＤを０ＰＤ−ト
１２０２溶液へ添加し、一定時間後、吸光度を測定し、
その吸光度から、活性値を求める。
１２０２溶液へ添加し、一定時間後、吸光度を測定し、
その吸光度から、活性値を求める。
（発明が解決しようとする問題点）
しかし、ＯＰＤ −Ｈ２０２溶液は、冷暗所に保存して
おいても、十分に安定ではなく、ＰＯＤが添加されてい
ないのにもかかわらず、時間と共に発色し、吸光度が増
加してしまう。そのため、保存性がわるく、長時間にわ
たり、高い精度で、ＰＯＤの測定がむずかしい。
おいても、十分に安定ではなく、ＰＯＤが添加されてい
ないのにもかかわらず、時間と共に発色し、吸光度が増
加してしまう。そのため、保存性がわるく、長時間にわ
たり、高い精度で、ＰＯＤの測定がむずかしい。
第１図は、ＰＩ−１＝５．５で調整したＯＰＤ−Ｈ２Ｏ
２溶液を４℃で保存した場合のλ＝ ２８０ｎｍの吸光
度の変化を線１で示したものである。
２溶液を４℃で保存した場合のλ＝ ２８０ｎｍの吸光
度の変化を線１で示したものである。
このように、ＯＰＤ −Ｈ２０２溶液の吸光度は、溶液
作成直後に比べ、１００分で約２倍に上界するため、特
に低い活性の試料を測定する場合、問題となり、正確な
測定ができない。
作成直後に比べ、１００分で約２倍に上界するため、特
に低い活性の試料を測定する場合、問題となり、正確な
測定ができない。
以上、述べたことは、フェニレンアミン類とＨ２０２を
基質としたＰＯＤの活性の測定をする場合、常に生じる
問題点である。
基質としたＰＯＤの活性の測定をする場合、常に生じる
問題点である。
そこで、本発明は、前記した基質を安定化しその保存性
を向上させることが目的である。
を向上させることが目的である。
〔問題点を解決するための手段および作用〕上記目的を
達成するため、本発明の基質の安定化法においては、Ｐ
ＯＤの活性を測定するのに用いられるフェニレン・アミ
ン類と過酸化水素水から成る基質を安定化するに当り、
基質へ非イオン系界面活性剤を添加する。
達成するため、本発明の基質の安定化法においては、Ｐ
ＯＤの活性を測定するのに用いられるフェニレン・アミ
ン類と過酸化水素水から成る基質を安定化するに当り、
基質へ非イオン系界面活性剤を添加する。
通常、本発明において、上記基質の安定化は、フェニレ
ン・アミン類と過酸化水素水を基質として調整する際、
ＰＨを調整する緩衝液中に非イオン系界面活性材を添加
し、これを基質に加えることにより行なわれる。
ン・アミン類と過酸化水素水を基質として調整する際、
ＰＨを調整する緩衝液中に非イオン系界面活性材を添加
し、これを基質に加えることにより行なわれる。
この際用いられる非イオン系界面活性剤としては、たと
えばポリオキシエチレンアルキルエーテル系、ポリオキ
シエチレンアルキルフェニルエーテル系、ポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステル系、ポリオキシエチレ
ングリセリン脂肪酸エステル系、ポリエチレンゲルコー
ル脂肪酸エステル系、ポリオキシエチレン脂肪アミン系
、脂肪酸モノグリセリド系、ソルビタン脂肪酸エステル
系、ペンタエリスリトール脂肪酸エステル系、プロピレ
ングリコール脂肪酸エステル系、しよ糖脂肪酸エステル
系、ポリグリセリン脂肪酸エステル系、脂肪酸アルカノ
ールアミド系などが挙げられる。
えばポリオキシエチレンアルキルエーテル系、ポリオキ
シエチレンアルキルフェニルエーテル系、ポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステル系、ポリオキシエチレ
ングリセリン脂肪酸エステル系、ポリエチレンゲルコー
ル脂肪酸エステル系、ポリオキシエチレン脂肪アミン系
、脂肪酸モノグリセリド系、ソルビタン脂肪酸エステル
系、ペンタエリスリトール脂肪酸エステル系、プロピレ
ングリコール脂肪酸エステル系、しよ糖脂肪酸エステル
系、ポリグリセリン脂肪酸エステル系、脂肪酸アルカノ
ールアミド系などが挙げられる。
本発明において、上記のように非イオン系界面活性材を
添加した緩衝液により基質のＰＨを調整することで、従
来の問題点が解決されると共に基質の保存性が改善され
る。
添加した緩衝液により基質のＰＨを調整することで、従
来の問題点が解決されると共に基質の保存性が改善され
る。
次に本発明を実施例により説明する。
実施例１
ペルオキシダーゼの活性の測定に用いる、基質の安定性
を以下のように調べた。
を以下のように調べた。
０．３Ｍ Ｎａ ２ ＨＰＯ４−０，１５ＭりＩンＭ
−０，０５重量％トゥイーン８０によりＰＨ＝５に調整
した０ＰＤ−Ｈ２Ｏ２溶液を溶液−１、また、０．３Ｍ
Ｎａ ２ ＨＰＯ２−０，１５ＭクエンＩＦＩニよ
りＰＨ＝５に調整した０ＰＤ−Ｈ２０２溶液を溶液−２
とした。
−０，０５重量％トゥイーン８０によりＰＨ＝５に調整
した０ＰＤ−Ｈ２Ｏ２溶液を溶液−１、また、０．３Ｍ
Ｎａ ２ ＨＰＯ２−０，１５ＭクエンＩＦＩニよ
りＰＨ＝５に調整した０ＰＤ−Ｈ２０２溶液を溶液−２
とした。
溶液−１と溶液−２を４℃の暗所で保存し、一定時間間
隔でλ＝ ２８０ｎｍの吸光度を測定した。その結果を
第２図に溶液−１については線３、溶液−２については
線２で示す。トウイーン８０が添加されている溶液−１
は、トウイーンが添加されていない溶液−２に比べ明ら
かに発色の速度が遅くなっている。溶液−１および、溶
液−２の発色速度は、それぞれ、１，３Ｘ １０’ （
Ａ Ｂ Ｓ ／ ｍｉｎ ） 。
隔でλ＝ ２８０ｎｍの吸光度を測定した。その結果を
第２図に溶液−１については線３、溶液−２については
線２で示す。トウイーン８０が添加されている溶液−１
は、トウイーンが添加されていない溶液−２に比べ明ら
かに発色の速度が遅くなっている。溶液−１および、溶
液−２の発色速度は、それぞれ、１，３Ｘ １０’ （
Ａ Ｂ Ｓ ／ ｍｉｎ ） 。
５．３Ｘ１０−’ （Δ［３８／１ｌｌｉｎ）であった
。以上のことから、０．０５重世％トウイーン８０が添
加されていない０ＰＤ−Ｈ２０’２溶液に比べ、０．０
５重量％トウイーン８０が添加されている０ＰＤ−Ｈ２
Ｏ２溶液は保存の安定性が、および５倍向上している。
。以上のことから、０．０５重世％トウイーン８０が添
加されていない０ＰＤ−Ｈ２０’２溶液に比べ、０．０
５重量％トウイーン８０が添加されている０ＰＤ−Ｈ２
Ｏ２溶液は保存の安定性が、および５倍向上している。
実施例２
実施例１と同様に、０．０５ ｆｆｌｆｆｉ％トルトン
×１００を添加したＯＰＤ −Ｈ２０２溶液の溶液−３
と、前記溶液−２を比較した。その結果を第３図に溶液
−２については！５Ａ２、溶液−３についてはｌ！４で
示す。トリトンＸ １００の添加されている溶液−３
の発色速度は３，６ｘ１０’ （ＡＢＳ／ｍｉｎ ）と
、溶液−２に比べ、約１，５倍の保存の安定性が向上し
た。
×１００を添加したＯＰＤ −Ｈ２０２溶液の溶液−３
と、前記溶液−２を比較した。その結果を第３図に溶液
−２については！５Ａ２、溶液−３についてはｌ！４で
示す。トリトンＸ １００の添加されている溶液−３
の発色速度は３，６ｘ１０’ （ＡＢＳ／ｍｉｎ ）と
、溶液−２に比べ、約１，５倍の保存の安定性が向上し
た。
本発明によると、ＯＰＤと）−１２０２を基質とする溶
液を調整する場合、非イオン系界面活性剤を添加するこ
とで、基質の発色の安定性が向上し、保存性が良くなり
、ざらに、活性が低い試料を測定する場合にも、信頼性
の高い測定値を得ることができるという効果が得られる
。
液を調整する場合、非イオン系界面活性剤を添加するこ
とで、基質の発色の安定性が向上し、保存性が良くなり
、ざらに、活性が低い試料を測定する場合にも、信頼性
の高い測定値を得ることができるという効果が得られる
。
第１図はＰＨ＝５．５に調整したＯＰＤ −Ｈ２０２溶
液を４℃で保存した場合のλ−２８０ｎｍの吸光度の経
時変化を示ず線図、 第２図は実施例１のＰＨ＝５．０に調整した溶液−１お
よび溶液−２の第１図の場合と同様の吸光度の経時変化
を示ず線図、 第３図は実施例２の溶液−３と前記溶液２の第１図の場
合と同様の吸光度の経時変化を示す線図である。 第１図 Ｅ今ルｎ （ｍｉ？ｔコ 第２図 第３図 晴間Ｃｍ１ｎ１ 手 ′Ｉｆｔ 補 正 書 昭和６１年１２月１１日 特許庁長官 黒 １） 明 雄 殿１、事件
の表示 昭和６１年特許願第１３６２８８号 ２、発明の名称 基質の安定化法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 （０３７） オリンパス光学工業株式会社４、代理人 １、明細書第５頁第８行、第１０行、第６頁第８行、第
７頁第３〜４行ｒＯＰＤ−ＨＩＯ□」をｒ４．４３■／
■Ｉ ０ＰＤ−０，０３５χｎｚｏ□」に補正する。 ２、同第５頁第１３行ｒ２８０ｎｍ Ｊをｒ４４０ｎｓ
＋ Ｊに補正する。 ３、同第６頁第７行「トルトン」を「トリトン」に補正
する。
液を４℃で保存した場合のλ−２８０ｎｍの吸光度の経
時変化を示ず線図、 第２図は実施例１のＰＨ＝５．０に調整した溶液−１お
よび溶液−２の第１図の場合と同様の吸光度の経時変化
を示ず線図、 第３図は実施例２の溶液−３と前記溶液２の第１図の場
合と同様の吸光度の経時変化を示す線図である。 第１図 Ｅ今ルｎ （ｍｉ？ｔコ 第２図 第３図 晴間Ｃｍ１ｎ１ 手 ′Ｉｆｔ 補 正 書 昭和６１年１２月１１日 特許庁長官 黒 １） 明 雄 殿１、事件
の表示 昭和６１年特許願第１３６２８８号 ２、発明の名称 基質の安定化法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 （０３７） オリンパス光学工業株式会社４、代理人 １、明細書第５頁第８行、第１０行、第６頁第８行、第
７頁第３〜４行ｒＯＰＤ−ＨＩＯ□」をｒ４．４３■／
■Ｉ ０ＰＤ−０，０３５χｎｚｏ□」に補正する。 ２、同第５頁第１３行ｒ２８０ｎｍ Ｊをｒ４４０ｎｓ
＋ Ｊに補正する。 ３、同第６頁第７行「トルトン」を「トリトン」に補正
する。
Claims (1)
- １、ペルオキシダーゼの活性を測定するのに用いるフェ
ニレン・アミン類と過酸化水素水から成る基質を安定化
するに当り、基質へ非イオン系界面活性剤を添加するこ
とを特徴とする基質の安定化法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13628886A JPS62294099A (ja) | 1986-06-13 | 1986-06-13 | 基質の安定化法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13628886A JPS62294099A (ja) | 1986-06-13 | 1986-06-13 | 基質の安定化法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62294099A true JPS62294099A (ja) | 1987-12-21 |
Family
ID=15171666
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13628886A Pending JPS62294099A (ja) | 1986-06-13 | 1986-06-13 | 基質の安定化法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62294099A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5804404A (en) * | 1996-01-22 | 1998-09-08 | Dako Corporation | Stable substrate-chromogen solutions for enenzyme activity detection |
| CN103884563A (zh) * | 2014-04-10 | 2014-06-25 | 上海太阳生物技术有限公司 | 过氧化物酶（pox）染色液（化学染色法） |
-
1986
- 1986-06-13 JP JP13628886A patent/JPS62294099A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5804404A (en) * | 1996-01-22 | 1998-09-08 | Dako Corporation | Stable substrate-chromogen solutions for enenzyme activity detection |
| CN103884563A (zh) * | 2014-04-10 | 2014-06-25 | 上海太阳生物技术有限公司 | 过氧化物酶（pox）染色液（化学染色法） |
| CN103884563B (zh) * | 2014-04-10 | 2016-08-17 | 上海太阳生物技术有限公司 | 过氧化物酶（pox）染色液（化学染色法） |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bonner | [121] Succinic dehydrogenase | |
| Spiro | The standard potential of the peroxosulphate/sulphate couple | |
| Guilbault et al. | New substrate for fluorometric determination of oxidative enzymes | |
| IE42398L (en) | Composition for pickling metals | |
| ATE340587T1 (de) | Stabilisierte wachstumshormon zubereitung und verfahren zu deren herstellung | |
| Pruszkowska et al. | Direct determination of cadmium in coastal seawater by atomic absorption spectrometry with the stabilized temperature platform furnace and Zeeman background correction | |
| JPS62294099A (ja) | 基質の安定化法 | |
| Scholes et al. | Energetics of ATP-driven reverse electron transfer from cytochrome c to fumarate and from succinate to NAD in submitochondrial particles | |
| GB893301A (en) | Colorimetric test for serum enzymes | |
| Conant et al. | Free and total energy changes in the reduction of quinones | |
| US4239649A (en) | Cholesterol standard | |
| JPH02253566A (ja) | グルコース生物電池及びグルコースセンサー | |
| Nicholls et al. | Cytochromes a and a3: Catalytic activity and spectral shifts in situ and in solution | |
| Braun | An electrochemical study of flavin adenine dinucleotide | |
| KR970054573A (ko) | 반도체 산화 공정의 소크타임 (Soak Time) 설정 방법 | |
| JPH04262796A (ja) | 基質液の安定化法及び基質液 | |
| US4846937A (en) | Method of detecting carbon dioxide in a gaseous or liquid sample | |
| US3375079A (en) | Colorimetric reagent for analysis of nitrogen dioxide in air and method of use | |
| US4659434A (en) | Gas sensor | |
| Butzow | Probe of subunit structure in fungal p-diphenol oxidase by treatment with guanidine hydrochloride and at high pH | |
| Yagi et al. | Kinetic behavior of d-amino acid oxidase in its reaction with basic amino acids | |
| JPS62134099A (ja) | ペルオキシダ−ゼ活性の測定方法 | |
| Chow | The Absorption of Oxygen by Linseed Oil in the Presence of Catalysts of Different Oxidation—Reduction Potentials | |
| US3433597A (en) | Colorimetric reagent for analysis of sulfur dioxide in air | |
| US4849058A (en) | Method of detecting nitrogen oxides in gaseous or liquid samples |