JPS62277331A - 蛋白質標識のための放射性ハロゲン化小分子 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 特に抗体、を標識するための放射性ハロゲン化小分子、
および蛋白質分子に高い比放射能放射性ハロゲンを導入
する方法に関する。

放射性ハロゲン化蛋白質は広範囲にわたる科学的研究の
対象物であったし、ｉｎ　ｖｉｔｒｏとｉｎ　ｖｉｖ。

の両方の各種の臨床的応用に有効であるという見込があ
る。例えば、放射性ヨウ素化フェリチンは血清中のフェ
リチン濃度のｉｎ　　ＶｉｔｒＯ診断的測定に用いられ
る。放射性ヨウ素化甲状腺刺激ホルモンは同様の検定に
用いられる。

ハロゲンのｆｌｉ射性射程核種断的県影および放射線療
法の両方にとって非常に魅力的なものとする性質をもつ
、例えば、ヨウ素−１２３としての放射性Ｅ　ウ＃　（
　Ｔ　　ｉ／　２　＝　１３ｈ、＋５９ＫｅＶガンマ、
電子捕獲）は瑛在のガンマカメラによる擺影には殆ど理
想的であり、ヨウ素−１３１＜７　１／２　＝８ｄ、３
６４ＫｅＶガンマ、ベータ粒子）は、より質の低い像を
作るけれども、甲状腺の臨床的放射線療法に有効である
ことが焼成されている。同様に、臭素−７５（Ｔ　＋／
２　＝　　１．６ｈ　、陽電子）および臭素−７６（Ｔ
　Ｉ／２　＝１６ｈ　、陽電子）のような臭素放射性核
種は陽電子断層撮影にとってよい性質をもち、臭素−７
７（Ｔ　１／２　−　２．４ｄ　、いくつかのガンマ、
電子捕獲〉は放射線療法にとってよい性質をもつ、弗素
−１８（Ｔ　１／２　＝１１０ｍｉｎ，　ｌｉｊｌＴｉ
子）およびアスタチン−２１　（Ｔ　Ｉ／２　−　　７
．２ｈ　、アルファ粒子）のような他の放射性ハロゲン
はまた放射線撮影および放射線療法にとって将来有望な
物質である。

その高い特異性と！！瘍細胞表面の抗原に対する親和性
により癌組織に局在するモノクローナル抗体のｒＡ発は
診断と治療に対する放射８！！標識抗体の臨床的応用の
期待を増した。抗体はその高い特異性により、癌部位に
放射能を放出する特異的ｒｉＩｌ射性核種を付着させる
担体分子として有望である。

残念ながら、ｉｎ　ｖｉｖｏで使用するための放射性ハ
ロゲン標識抗体の日常的な臨床的診断または治療への応
用は今のところない。抗体や他の蛋白質の直接的放射性
ハロゲン標識は難しいことが分っている。抗体は故！）
１線標識反応条件に対しているいろな感受性を示し、放
射性ハロゲン化に必要な酸化反応条件は特に有毒である
。蛋白質の直接的放射性ヨウ素化は日常的となってきて
いるが、蛋白質の生物学的活性の無視できない減少が起
ることが非常によくある。付着した放射性ラベルの安定
もいろいろ変化すると考えられる。例えば、抗体からの
放射性ヨウ素の喪失はある標識抗体では２４時間で５０
％にも上ることが分っている。放射性臭素化は放射性ヨ
ウ素化よりも強い酸化反応条件を必要とし、蛋白質を直
接に放射性臭素化する試みは、高価で面倒であるけれど
も酵素を酸化剤として使用しなければ、成功例は少ない
。ざらに、蛋白質の直接的放射性ハロゲン化は先ずヂロ
ジル残基で起り、チロシンの放射化フェノール環は結果
として生ずるオルト−置換放射性ハロゲンラベルの固有
の電子的不安定の一因となっている。放射性ハロゲンラ
ベルはまた立体障害効果の原因にもなっており、ざらに
構造的に同じ甲状腺ホルモン、すなわちチロキシンを異
化するディオディナーゼ酵素に利用できる。

直接的な放射性ハロゲン化に必要な厳しい反応条件に蛋
白質をおくのを回避する１つのアプローチは別々の反応
容器中で放射線標識され、その結果緩い反応条件下で蛋
白質にカップルされる小さな分子の使用である。このア
プローチは市販されているＢｏｌｔｏｎ　−Ｈｕｎｔｅ
ｒ試薬、Ｎ−スクシンイミジル−３−（４−ヒドロキシ
フェニル）プロピオネート、の基本である。それにより
、中程度の放射性標識収量が放射性ヨウ素を用いて得ら
れているが（放射性蛋白質の３５〜６０％収り　、　１
１１射性ヨウ素ラベルの安定性は化学的に類似した放射
性ヨウ素化チロシル残基について述べられているのと同
じ問題をこうむる。同様に、市販されているＷ００ｄＳ
試薬、メチル−４−ヒドロキシベンズイミデート、は蛋
白質への付着の前に放射性ヨウ素化することができる。

しかしながら、放射性ヨウ素化生成物はまたオルト−ヨ
ウ素化フェノールの固有の不安定性にも見舞われる。こ
れらの試薬は望まれるだけの安定な放射性ラベルを生じ
ないけれども、蛋白質の非活性化はその使用からは少し
しか起らないので、それは放射性ヨウ素化に広く利用さ
れている。

活性化芳香族環は高い比放射能放射性ヨウ素をこれらの
分子に導入するために必要であるのでフェノール環はＢ
ｏｌＣｏｎ　−Ｈｕｎｔｅｒ試薬とＷ００ｄ’ｓ試薬の
両方に利用される。放射性ラベルがより安定にくっつく
ように、放射性ハロゲンをフェノール以外の芳香族環を
含む小さな分子に導入することが非常に望ましい；さら
に、ヒドロキシルが存在しないならば、放射性ラベルは
電子および立体障害効果を余り受けない。

文献の中の最近の報告は、高比放射能放躬性ハロゲンを
前記の欠点なしに蛋白質にくっつけることのできるより
複雑な有機分子にではなくて、簡単な有機分子の非活性
化芳香族環に導入する有機金属中間体の使用を述べてい
る。

本発明は高比放射能ハロゲン放射性核種を蛋白質の生物
学的活性を保持する条件下で蛋白質に抱合されつる小さ
な分子の非活性化芳香族環に導入する迅速かつ有効な方
法を提供する。非活性化芳香族環への放射性ハロゲンの
置換はフェノールのような活性化芳香族環へのこれまで
の方法による置換よりも安定性の高い放射性８１！！識
蛋白質を提供する。ざらに、放射性ハロゲンは、ディオ
ジナーゼ酵素による攻撃をうけやすくない放射性ラベル
を与えるためにヒドロキシ官能性を含まない芳香族環の
パラまたはメタのような位置に置換することができる。

この方法によって、ハロアリール化合物は次の有機金属
グループ、Ｓｎ　　（ｎ−８ｕ　）３あるいｔ、ｔ　Ｓ
ｎ　ｊｙｌｅ　３の１つによりメタル化される。その結
果生成するアリール錫化合物は次の有機金属グループ、
ＨＱＸ２、Ｈ９（○△Ｃ）２、ＢＸｌ、あるいはＢＺ３
、この場合のＸは（１８）　、３ｒ　、ｉＲルイは■で
、Ｚはアルキルあるいはアルコキシである。

この１つと部位特異反応においてメタル転移される。そ
の結果、メタル化化合物は脱メタル反応によって放射性
ハロゲン化される。蛋白質への抱合に適した官能基が放
射性ハロゲン化の後あるいはむしろ前に加えられる。

Ｒ＋　が放射性ハロゲンかあるいは前述の有機金属グル
ープの何れか１つであり、Ａｎは芳香族あるいは複素式
芳香族環であり、Ｒ２は芳香族環を強く活性化せず、蛋
白質の生物学的活性を保持する垣鎖置換基であるところ
の式、Ｒ＋　　Ａｒ−Ｒ２０）化合物も提供される。本
発明の放射性ハロゲン化小分子は診断や治療に用いられ
るモノクローナル抗体のような蛋白質に抱合されつる。

本発明は、Ｘが放射性ハロゲンであり、Ａｒが芳香族ま
たは複素式芳香族環であり、Ｒが、放射性ハロゲンＸが
置換される環Ａｒを強く活性化せず、蛋白質の生物学的
活性を保持する緩い、例えばアシル化、条件下で蛋白質
への抱合に適した官能基をもつ短鎖置換基であるところ
の式ＩｖＸ−Ａｒ−ＲＩ の放射性ハロゲン化小分子に関する。式Ｉの化合物は診
断または治療に用いられる試薬を提供するためにモノク
ローナル抗体あるいは血漿蛋白質のような蛋白質（ある
いは引き続いて蛋白質にカップルされるアミノ酸重合体
のような担体）にカップルされる。

ここで用いられているように、記号Ｘはヨウ素、特にｌ
−１２３、ｌ−１２５、およびＩ　−１３１：臭素、特
にＢ　ｒ−７５、Ｂ　ｒ−７６、およびＢ　ｒ−７７：
弗素、特にＦ−１８：およびアスタチン、特にＡＣ−２
１１の放射性同位元素を示す。診断的厖影目的のための
望ましい放射性ハロゲン！Ｘはｌ−４３１を含み、ガン
マカメラによる撮影にはｌ−１２３が最も望ましい。ま
た陽電子断層撮影にはＦ−１８、Ｂｒ−７５、および３
　ｒ−７６が望ましい。診療的放射線療法のためには、
望まれる放射性ハロゲン”×はｌ−１３１、（３ｒ−７
７、およびＡｔ−２１１を含む、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ放射
線免疫検定のための望ましい放射性ハロゲノＸはｌ−１
２５とｌ　−１３１を含む。本発明により、デハロゲナ
ーゼ酵素による異化を受けにくい放射性ハロゲンを提供
するために、放射性ハロゲン７Ｘはデハロゲナーゼ酵素
による異化を受けにくい放射性ハロゲンを提供するため
に置換基Ｒに関係する環Ａｒ上のパラ−またはメタ−位
にある。

記号Ａｒは芳香族または複素式芳香族環を示す。

望ましい環Ａｒはベンゼン、ごリジン、フラン、および
チオフェンを含み、後者の３つが水溶性促進のためによ
り好ましい。環Ａｒの炭素原子への放射性ハロゲンの付
加は芳香族または複素式芳香族環の炭素−ハロゲン結合
の結合度増加によりアルキル炭素原子への付加以上に望
ましい。ｆｆ１Ａｒの性質は決定的ではなく、モノ−１
ご−、トリーあるいはより高い環数であってもよいが、
単環は水溶性が大きいために望ましい。環Ａｒは全て炭
素原子から成るかあるいは窒素、酸素、または硫黄のよ
うなペテロ原子から成る。ピリジン、フラン、あるいは
チオフェンのような複素式芳香族環を含んでいることに
より、放射性ヨウ素化小分子抱合体の水溶性を増すこと
ができる。ニトロ、スルホン酸、カルボン酸、あるいは
ジアルキルアミン基のような極性置換基を用いてＦＸと
Ｒを除外して、環Ａｒをさらに置換することは水溶性を
促進するためにも利用される。水溶性の増進は蛋白質と
の抱合反応においてより高い収率（および可能性のより
少ない凝集）を与え、抗体抱合体の好脂性の摂動を少な
くするために望ましい。他の置換基は酵素的分解に対し
ていくらかの調整を行うために加えられる。

記号Ｒは次の３つの必要条件に合致する置換弁を示す：
先ず、Ｒ置換基は求電子的置換反応に対して環Ａｒを強
く活性化するはずがない。別の言葉で言うと、Ｒは遊離
のヒドロキシあるいは１次的アミン置換反応により作ら
れる増加の順にＡｒの電子密度を増す結合により環Ａｒ
に結合されることはない。第２に、非抱合あるいは開裂
した放射性ハロゲン化分子が腎臓により迅速に除去され
るように、Ｒは短鎖置換基でなければならない。

このように、Ｒはアリール結合と蛋白質抱合のための官
能基の間のアルキルまたは他のスペーサ−鎖を含むこと
が考えられるが、このようなスペーサー鎖は５以下の、
３以下が最も望ましいが、直鎖炭素原子を含まねばなら
ない。第３に、Ｒ置換基は蛋白質の生物学的活性を保持
するアシル化またはアミシネ−シコンのような緩い抱合
条件下での蛋白質への抱合に用いられる官能基をもって
いなければならない。このように、Ｒは蛋白質、糖蛋白
質、あるいは続いて蛋白質分子に抱合されるアミノ１１
！重合体のような担体分子のアミノ酸または炭水化物残
基上の対応する官能グループ〈あるいは抱合結合部位〉
への共有結合のためのイミドエステルまたはイミデート
エステルのような官能基（ここではＱと名付ける）を与
えなければならない。

前述の目的のための適切な官能基Ｑはフェノールエステ
ル（例えば、バラ−ニトロフェノール）、イミドエステ
ル（例えば、スクシンイミドエステル）、イミデートエ
ステル、酸無水物、アシルスクシンイミド、アルデヒド
、イソチオシアネート、ヂＡ−ル、ジアゾ、アミン、ヒ
ドラジン、ハロゲン化アルキル、マレイミドのようなＭ
　１ｃｈａｅｌ受容器α、β−不不飽和シルボニル化合
物および共有結合により分子を蛋白質に結合させるのに
用いることのできる他のグループを含む。Ｒ１換基が官
能基Ｑの前駆物質をもっところの式Ｉの放射性ハロゲン
化小分子も提供される。適切な前駆物質はＱがフェノー
ルエステル、イミドエステル、酸無水物、アシルスクシ
ンイミド、あるいはマレイミドであるところのカルボン
酸、Ｑがイミデートエステルであるところのニトリル、
Ｑがアルデヒドであるところのアルコール、Ｑがイソチ
オシアナート、チオール、ヒドラジンあるいはアミンで
あるところのハロゲン化物、およびＱがジアゾあるいは
マレイミドであるところのアミンを含む。

代表的なＲｆｌ換基はイミドエステル、アルキルイミド
エステル、アミドアルキルイミドエステル、イミデート
エステル、アルキルイミデートエステルおよびアミドア
ルキルイミデートエステルを含む。

本発明の代表的な放射性ハロゲン化小分子は、×が前述
のような放射性ハロゲンであり、ｎは整数であり、Ｑは
前述のような官能基であるところの式■とｍの化合物を
含む。

放射性ハロゲンは芳香族環Ａｒのどの放射性異性体とし
ても位置することができるが、放射性ハロゲンが立体的
不安定性およびディオディナーゼ酵素による異化を受け
にくくするためにバラ−あるいはメタ−置換が好ましい
。スペーサー成分（ｃＨ２）ｎは１２までであるが、好
ましいのはわずか５の直鎖炭素原子を含む直鎖または枝
分れ鎖アルキルまたはヘテロアルキル基である。最も望
ましい具体例においては、わずか３の直鎖炭素原子が官
能基Ｑを芳香族環から分離している。すなわちｎ−０，
１，２，または３である。診断的撮影のためにバックグ
ラウンド放射能を迅速に取り除き、生体器官に対する放
射線日を最小にするためには、アルキルスペーサー成分
は、非抱合および化学的または酵素的開裂放射性ハロゲ
ン化化合物が心臓または肝臓にあける脂肪酸分解経路を
通じてよりも腎臓を通じて迅速に除去されるように、短
くしなければならない。他方、ある応用のためには、放
射性標識アリール環と蛋白質の間の短いアルキルまたは
ヘテロアルキルスペーサーが望ましいと考えられる。

本発明の放射性ハロゲン化小分子の実例である非制限的
な例は、Ｎ−スクシンイミジル３−（４’　　−［”Ｉ
　Ｅヨードフェニル）−プロごオネート、メチル３−　
（４’　　−［”ｒ　］ヨードフェニル）プロピオイミ
デート、Ｎ−スクシンイミジル４−［１３１Ｉ］ヨード
ベンゾエート、メチル４−［”ｌ＋］−ヨードベンズイ
ミデート、Ｎ−スクシンイミジル４−〔１３１１１−ヨ
ードベンズアミドアセテ−１〜あるいはＮ−スクシンイ
ミジル４−［”’Ｉ］ヨード馬尿酸エステル、メチル４
−［’ＩＮヨードベンズアミドアセトイミデート、およ
び４−［：”’Ｉ］ヨードベンズアミドアセトニトリル
を含む。

また、本発明によりＭがＳｎ　　（ｎ−ＥＢｕ　）３　
　（ＢＵはブチル）、ｓｎＭｅ３　（Ｍｅはメチル）、
ＨＯＸ　＜ＸはＣｆｆ１．ＳｒまたはＩ）　、Ｈａ　０
Ａｃ（ＯＡｃはアセテート）　、Ｂ　（ＯＨ）２　、あ
るいはＢＺ２　　（Ｚはわずか５個、および好ましくは
より少数の炭素原子を含むアルキルまたはアルコキシ）
であり、ＡｒとＲの両者は式■により定義されていると
ころの式■ Ｍ−Ａｒ　−ＲＩＶ の有機金属中間分子も提供される。有機金属基Ｍはパラ
−またはメタ−位であることが望ましい。

本発明の有機金属中間物質の実証的であるが非制限的な
例は、Ｎ−スクシンイミジル３−（４′−トリブチルス
タンニルフエニル）プロピオネート、メチル３−（４’
−１−リブチルスタンニルフェニル）プロピオイミデー
ト、Ｎ−スクシンイミジル４−トリブチルスタンニルベ
ンゾエート、メチル４−トリブチールスタンニルベンズ
イミデート、Ｎ−スクシンイミジル４−トリブチルスタ
ンニルベンズアミドアセテートあるいはＮ−スクシンイ
ミジル４−トリブチルスタンニル馬尿酸エステル、メチ
ル４−トリブチルスタンニルペンズアミドアセトイミデ
−トおよび４−トリブチルスタンニルベンズアミドアセ
トニトリルを含む。

式■の化合物を合成する方法が提供される。簡単に言う
と、下に述べる３つの反応の１つは官能基Ｑあるいは官
能基Ｑの前駆動物質をもつハロ芳香族誘導体の位置的異
性体をメタル化するために使用される。メタル化にはＳ
ｎ　　（ｎ　−８ｕ　）３あるいはＳｎＭｅ３のような
トリアルキル錫試薬が用いられる。その結果生成するア
リール錫化合物は、ＸがＳｒ　Ｉあるいは好ましくはＣ
２で、Ｚがアルキルあるいはアルコキシであるところの
次の有機水銀あるいは有機ホウ素試薬、ＨＧ　Ｘ２　Ｈ
！１（ＯＡＣ）２、ＢＸ３あるいはＢｚ３の１つとの部
位特異性反応においてメタル転移ざｂる。その結果生ず
る有機金属中間物質は下に述べるメタル化反応により代
りにつくられる。スタンニル化あるいは別のメタル化化
合物は、官能基Ｑが存在してからが望ましいが、脱メタ
ル反応により放射性ハロゲン化される。

前記有機金属試薬は既知の化学により得られ、例えば△
Ｉｐｈａ　　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　、　［）ａｎｖｅｒｓ
、　ＭＡから市販されている。

弐■の有機金属中間分子の前駆動物質は既知の化学によ
り得られ、市販もされている。適切な前駆物質分子は、
バラ−ブロム−およびバラ−ヨード安息香酸（ｐｆａｌ
ｔＺおよび３　ａＬｌｅｒ、　５ｔａｌｌｌｆｏｒｄ。

Ｃｏｎｎ、）、パラ−ブロム−およびパラ−ヨードベン
ゾニトリル（Ｐ　ｒａ＋ｔｚおよびＢ　ａｕｅｒ）を含
む。

パラ−ブロムフェニルプロごオン酸の高収率の合成は実
施例１に）ホベる。酸の対応するニトリルへの転換はＪ
、○ｒｇ、　Ｃｈｅｍ、４１　（７）　：　１１８７−
１１９１゜１９７６年に）ボへられているようにして行
うことができる。アリールスタナンの合成は次の明らか
に異なった３つの反応のいずれか１つにより行うことが
できる。第１の反応においては、ハロ芳香族化合物は−
１００℃近くでｎ−ブチルリチウムとあるいは室温でマ
グネシウムと反応させ、次いでアリール金属をトリアル
キル錫試薬のハロゲン化物誘導体と反応させる。第２０
）反応においては、ハロ芳香族化合物はヘキサアルキル
ジ錫およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラ
ジウムと反応させる。第３の反応においては、ハロ芳香
族化合物はトリアルキルスタンニルアルカリ（例えば、
トリメチルスタンニルナトリウム）と０℃でテトラグラ
イム中で反応させる。

有機水銀および有機ホウ素中間物質の合成は前述の方法
によって（Ｑ　ｒｇａｎｏｍｅｔａｌ　ｌ　ｉｃ　　Ｃ
ｈｅｍ、　Ｒｅｖ、　　１　：　　３０５−　３２９．
１９８２；丁ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　３８（１２）　
：　１７１３−１７５４．１９８２）あるいは前記アリ
ールスタナンのメタル転移によって行われる。アリール
錫化合物の前記有機水銀あるいは有機ホウ素グループの
１つによるメタル転移は芳香族環への部位特異性置換を
達成するために１１ねれる。例えば、Ｂ（１８）ｓ　と
のメタル転移は対応するアリール−ＢＣＩ！２化合物を
生じ、これは次に対応するアリール−８（ＯＨ）２化合
物に転換されるベースとなれる。Ｈｇ　（ＯＡｃ　）２
　との反応は、ハロゲン化物イオン（Ｘ＞との反応によ
りアリール−ＨりＸにさらに転換される対応するアリー
ル−Ｈｇ○ＡＣ化合物を生成する。

放射線標識されることになっている化合物を蛋白質にく
っつけるには、優れた残るグループ、例えばヒドロキシ
スクシンイミドを含むエステルにカルボン酸前駆物質グ
ループを転換することにより、あるいはシアノ前駆物質
をイミデートエステルに転換することによって得ること
ができる官能基Ｑが必要である。このような転換は蛋白
質のアミノ基（例えばリジン残基）、チオールあるいは
ヒドロキシ（あるいは余り好ましくないがカルボキシレ
ート）のような対応する官能基との反応へ向って分子を
活性化するものと考えることができる。アルカリ金属中
間物質の求核的性質により、これらの試薬が使用される
場合には、活性化イミドおよびイミデートエステルある
いは他の求核的試薬に感受性のある前記官能基Ｑはトリ
アルキル錫官能性を芳香族環に導入した後でのみ合成す
ることができる。従って、我々は、第２０）アリールス
タナン合成反応は求核反応に感受性のある化合物を製造
するのに特に有用であることを認めた。

活性化イミドおよびイミデートエステルあるいは他の官
能基Ｑを放射性ハロゲンを導入する前につくることによ
って、放射線化学的収率のロスと他の方法では生ずると
思われる放射線化学的不純物の取込みを避けられる。

アリール錫かそうでなければ遊離のカルボン酸またはそ
のスタンニルエステルからのメタル化誘導体のＮ−スク
シンイミジルエイチルへの転換は、無水テトラヒドロフ
ラン（ＴＨＦ）中でジシクロへキシルカルボジイミド（
ＤＣＣ＞およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨ８
）を用いて放射線ハロゲン化ステップ前に達成される。

しかしながら、シアン化合物からのイミデートエステル
の合成はアリール−金属結合、特にアリール錫結合の酸
不安定性により問題とされている。このように、シアン
含有化合物はイミデートエステル生成の前に放射性ハロ
ゲン化される。望ましい方法は対応するハロゲンジニト
リルあるいはハロアリールアルキルニトリルのイミデー
トエステルを生成し、その後でイミデート含有化合物を
ヘキサアルキルジ錫およびテトラキス〈トリフェニルホ
スフィン）パラジウムを用いて（第２０）アリールスタ
ナン合成ルートを用いて）メタル化することである。

対応するＮ−スクシンイミジルエステルの放射線ハロゲ
ン化は部位特異的膜メタル反応により所望の化合物を生
成する。Ｎ−スクシンイミジルエステルの加水分解の可
能性により、反応は反応時間を最小にする条件を用いて
行うべきである。例えば、反応物質は反応時間を短縮す
ることによって加水分解を最小にするために室温にもっ
てくる。

あるいは、加水分解が比較的遅い反応混合物が用いられ
る。驚いたことには、反応混合物に酢酸を加えるとＮ−
スクシンイミジルエステルの加水分解が非常に遅くなる
。例えば、４−トリーローブチルスタンニルベンゾエー
トのＮ−スクシンイミジルエステルは５％酢酸／メタノ
ール溶液中で何ケ月も安定であることが認められており
、例えば３ｏｌｔｏｎ　−１−（ｕｎｔｃｒ法で一般に
経験する短時間の制限を有利に取り除いている。

放射性ハロゲン化反応混合物は精製あるいはワークアッ
プ工程の前に添加される稀チオ疏酸ナトリウム溶液をも
っていなければならない。残留する放射性ハロゲン化物
の分離はクロマトグラフィーによる分離によって放射性
標識蛋白質の精製の前あるいは精製の間に簡単に完了す
ることができる。

放射性ハロゲン化反応は水、メタノール、エタノール、
あるいはその混合物のようなプロトン溶媒中で実施され
る。アルコール溶媒は放射性化合物を蛋白質溶液に加え
る前にうまく除去することができる（あるいは逆もまた
同じ）。しかし、非プロトン溶媒（例えば四塩化炭素）
は、２相システムは遊離の放射性ハロゲン化物を標識化
合物から分離する便利な方法を提供できることから放射
性ハロゲン化に使用することができる。

放射性ハロゲン化は放射線−ＨＰＬＣにより、例えばＭ
ｅ　ＯＨ／１％ＨＯＡＣの混合物で水中に稀釈逆相高性
能液体クロマトグラフカラム（ｃ−１８〉上で監視し、
精製することができる。

また、放射性ハロゲンの導入が所望の放射性ハロゲン化
分子を与える適切な試薬と一緒に適切な官能！！Ｑをも
つ化合物（ＴＶ）を含むバイアルを含めた臨床使用のた
めの放射性薬剤キットも提供される。次いで、放射性ハ
ロゲン化生成物は、別々のバイアル中に与えられるモノ
クローナル抗体のような蛋白質に抱合される。キットは
また放射性ハロゲン化蛋白質製品からの残留する前駆物
質と不純物のクロマトグラフィーによる分離のための１
個以上の小さなカラムを含む。

本発明は次の実施例によりさらに詳しく説明される。

実施例１ ３−（４−ブロムフェニル）プロピオン酸の合成 窒素下で無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中に溶解し
た１０．０ｇの２．４，４．−１−ウメチル−２−オキ
サゾリン（８８ｇモル）を含むフラスコを一７８℃（ド
ライアイス／アセトン浴）で１０分間平衡を保たせた。

このフラスコにゆっくりとｎ−ブチルリチウム（１，６
Ｎ、　８５　ｍモル）　５５１１Ｌを加えた。次に、淡
黄色の溶液は一７８℃で窒素のもとて２００ｍ　ｌの無
水ＴＨＦ中に２９．４９の（１００ｍモル）４−ブロム
ベンジル臭化物を含む第２０）フラスコに移した。

その添加が完了したら、反応混合物は一７８℃で２０分
間撹拌した二次に冷浴を取り外し、撹拌を３時間続けた
。

飽和Ｎ　Ｈ４（１５），０２００ｍ１量を加え（ｔ１重
に〉、２つの相を分離した。ＴＨＦ層を無水ＭｇＳＯ３
上で乾燥させ、油を生成させるために蒸発させた。

この油を２００１１１１のジメトキシエタンと１００ｆ
ｆｌＬの３ＮＨ（１８）中に溶解し、５時間還流させる
ために加熱した。その結果生ずる溶液を氷に注ぎ、淡黄
褐色の固体を集めたく収量：１７ｇ）。

この固体を約３００ｍしの１５％ＫＯＨ中に溶解し、２
ＱＯｉ　Ｌのジエチルエーテルで抽出した。ＫＯＨ溶液
を氷で稀釈し、ａＨＣ，Ｑで酸性化した。白色の沈澱物
を集め、Ｈ２０で十分に洗った（収量＝１０ｇ）。

実施例２ ４−トリーローブチルスタンニルベンゾニトリルの合成 蒸留したばかりの無水ＴＨＦ中に１当＠（例えば、１０
０Ｉ１１モル）の４−ブロムベンゾニトリルを含むフラ
スコを窒素のもとて約３０分間約−１００℃（ジエチル
エーテル／液体窒素浴）で平衡を保たせておいた。次に
、このフラスコに１．１当ｍ（例えば１１　ｍモル）の
ｎ−ブチルリチウム溶液（ヘキサン中に２．３Ｍ　）を
−９０℃以下の反応温度を保たせるような速度で添加し
た。添加が完了したら、反応混合物を更に５分間約−１
００℃で撹拌した。

次に、無水ＴＨＦ中の１．１当聞く例えば、１１　ｍモ
ル〉のトリーｎ−ブチル錫塩化物の溶液を１滴づつ加え
た。前と同じく、その添加は反応温度を＝９０℃以下に
保つような速度で行った。その添加が完了したら、反応
混合物を３０分間−１００℃で撹拌した。次いで、冷浴
を取り除き、反応混合物は２時間以上で室温になるよう
にした。

次に、ＴＨＦを回転蒸発により除去し、乳状の油が得ら
れた。この油をＣＨ２（１８）２中に溶解し、Ｈ２０で
洗い、Ｍ（ｌｓＯＪ上で乾燥させた。ＣＨ２（１８）２
０）蒸発により淡黄色の油が生成したく９６％）。１３
２℃７１００ミクロンでの蒸留によるこの油の精製によ
り、ＨＰＬＣ分析で８５％純度の無色の油が得られた。

ＨＮＭＲ＜ＣＤ（１８）３）δ　０．６８−２．０（ｍ
　、　２７Ｈ）、７．６８　　（ｓ　、４Ｈ）。

実施例３ トリーｎ−ブチルスタンニル４−（トリーｎ＝ブチルス
タンニル）ベンゾエートの合成 方法１ニー１００℃（ジエチルエーテル／液体窒素）に
冷やした無水Ｔ　ＨＦ　１００ｍＬ中の２．０１ｇ（１
０ｍモル〉の４−ブロム安息香酸（Ａ　ｌｒａ　　ｐ　
ｒｏｄｕＣｔＳ　＞の溶液に（温度計、添加漏斗および
磁気撹拌棒を装備したフラスコ中で）、ヘキサン（Ａｅ
ｄｒｉｃｈ　）中の１３．５　ｍＬ　（２１ｍモル）の
４．５５　Ｎｎ−ブチルリチウムを内部温度が一９０℃
を越えないような速度で１滴づつ添加した。粘性のある
混合物を一７８℃にまで温め、５．７０ｍＬ　（６，８
３ｇ）　、２１ｍモル）の塩化ｎ−トリブチル錫（△１
ｄｒｉｃｈ）を１５分以上かけて添加した。添加が完了
したら、混合物を室温にまでもってきて、１時間撹拌し
た。

次に、混合物に１５０ｍ　Ｌの飽和＜ＮＨ４）２３０４
溶液を添加し、混合物を１５０１１１Ｌのジエチルエー
テルで抽出した。上層をかん水で洗い、乾燥しくＭｑＳ
○４）、ろ過し、濃縮して７．４９１３の液体が得られ
た。シリカゲルクロマトグラフィーによる精製（２５％
ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で２，３２０　（３３％）のト
リーローブチルスタンニル４−（トリーｎ−ブチルスタ
ンニル）ベンゾエートが粘性のある油として得られた：
　　’ＨＮＭＲ＜Ｃ（１８）　）４　　δ　０．３２−
２．７０　　（ｍ　、　５４Ｈ）、７．５０　　（ｄ　
、　Ｊ−７Ｈｚ、２Ｈ）、７．９９　　（ｄ　、　Ｊ−
７Ｈ２，２Ｈ）。

Ｉ　Ｒ＜　ｎｃａｔ）　１６３５．１４５０．１３１５
ｃｍ−’　。

方法２：Ｎ２雰囲気の下で７．６　ｍＬのへキサブチル
錫（Ａｌ！ｆａ）および１０１１１Ｌのトルエン中の１
、ＯＯＧ（５ｍモル）（７）４−７０ム安患香酸（ＡＩ
！ｌ１ｈａ）の撹拌した懸濁液に５８＋ｎｇのテトラキ
ス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（○）（Ａｇ
ｄｒｉｃｈ　）を添加し、混合物を９５℃で２０時間撹
拌した。

涼しい時には、オレンジ色の混合物が１ｏＯ１１ＩＬの
１０％水性ＫＦ液と１００ｆｆｌＬのジエチルエーテル
の間で分配された。エーテル層はかん水で洗い、乾燥し
くＭ（＋　５０４　）　、ろ過し、濃縮し、Ｋ　ｕｇｅ
ｌｒｏｈｒにより蒸留し、　１．１４ｇ（３３％）のト
リーｎ−ブチルスタンニル４−（トリーｎ−ブチルスタ
ンニル）ベンゾエートが粘性のある油として得られた：
　　２００−２５０℃で蒸留、０．２５＋ｎｍ　Ｈｇ。

実施＠４ Ｎ〜スクシンイミジル４−（トリーローブチルスタンニ
ル〉ベンゾエート １８．４１１１１の無水ＴＨＦ中の１．２９ｇ　（１，
８４ｍモル）のトリーローブチルスタンニル４−（トリ
ーローブチルスタンニル）ベンゾエートの溶液に４１７
ｍｇ（２，０２１Ｉ１モル）のジシクロへキシルカルボ
ジイミド＜　Ｓ　ｉｕ＋ａ）と２１２ｍｇ　　（１，８
４ｍモル）のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（Ｓ　ｉｇ
ｔａ＞を添加し、混合物を室温で１５時間撹拌した。固
体はろ過によって除去し、混合物を濃縮した。シリカゲ
ルクロマトグラフィーにる［１（２５％ＥｊＯＡｃ（ヘ
キサン）で７３１ｍｇ　　（７８％）のＮ−スクシンイ
ミジル４−（トリーｎ−ブチルスタンニル）ベンゾエー
トが生成した。　　ＨＮＭＲ（ｃＤＣｆｆｉ３）δ　０
．５０−　２．２０　　（［Ｑ　、２７Ｈ）、２．９０
　　＜ｓ　、　４Ｈ）、７．６５（ｄ　、Ｊ＝８Ｈｚ　
、２Ｈ）、８．０６　　（ｄ　、　Ｊ−８Ｈｚ　、２Ｈ
）　、Ｉ　Ｒ（ｎｉａｔ）　１７８０．１７５０．１１
９０．１０５５．９８０ｃｍ　−’。

実施例５ ４−（トリーローブチルスタンニル）馬尿酸の合成 ６．４ｍ　ｌのＣＨ３ＣＮ中の４０６ｍｇ　　（０，８
０ｍモル）のＮ−スクシンイミジル４−（トリーブチル
スタンニル）ベンゾエートの溶液に２２４μＬ（１ｅｏ
ｍｇ、１．６０ｍモル）のＥＣ３Ｎ　（Ｆｉｓｈｅｒ　
）を、次イテ１．６ｍ　ｌのＨ２Ｃ中の６０ｍｇ　（０
，８ｍモル）のグリシン（Ｆ　１ｓｈｅｒ　）の溶液を
加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、次に１０ｍ　Ｌ
の５％ｚ　ｃ　Ｑ水溶液とｉｏｍ　ＬのＥＣ２０の間で
分配させた。Ｅｔ２０層をかん水で洗い、乾燥しくＭｇ
５Ｏ４）ろ過し、濃縮し、３７４ｍｇ　（１００％）の
４−〈トリーｎ−ブチルスタンニル）馬尿酸、その後の
反応に十分純粋な粘性のある油、が得られた：　　’Ｈ
ＮＭＲ（ｃＤＣ２３）６０．４０−２．５０　　（ｍ　
、　２７Ｈ）、３．９４−４．５３　（＋１１　、２Ｈ
）、６．７０−７．２５　（ｍ　、コＨ）、７．５３　
　（ｄ　、　Ｊ−８Ｈ２，２Ｈ）、７．８０（ｄ　、　
Ｊ−８Ｈｚ　、　２Ｈ）　　９．００−９．６５　　（
ｂｒｄｓ。

１　Ｈ）　、　Ｉ　Ｒ（ｎｅａｔ）　３３３０．１７２
０．１６３５．１５３ｃｍ−直により強い吸収をもつ３
６００−２３００範囲。

実施例６ Ｎ−スクシンイミジル４−（トリーローブチルスタンニ
ル）馬尿酸エステルの合成 ８ｍＬのＴＨＦ中の３７５ｍＱ　（０，８０ｍ−Ｅ／ｌ
ｚ　）　（７）　４−（トリーｎ−ブチルスタンニル）
馬尿酸の溶液に１８２ｍｇのジシクロヘキシルカルボジ
イミドｌＩｌａ）、次いで９２ｍｇのＮ−ヒドロキシス
クシンイミド＄　（　Ｓ　ｉｇｍａ）を加えた。混合物
を室温で６時間撹拌し、次に酢酸を３滴加えた。混合物
をろ過し、濾液を濃縮し、油っこい固体にした。シリカ
ゲル上のクロマトグラフィーによる精製（５０％ＥｔＯ
Ａｃ／ヘキサン）により、純粋なＮ−スクシンイミジル
４−（トリーローブチルスタンニル）馬尿酸エステルｉ
ｓｇｍａ　　（３５％）が白色の固体として得られた：
　ｍｌ）　１（１９−１１１℃（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン
）；’ＨＮＭＲ（０００区３）δ　０．３３−２．２７
　　（ｍ、２７Ｈ〉、２．８５　　（ｓ　、４Ｈ）、４
．６６　　（ｄ　、　Ｊ＝６Ｈｚ　、２Ｈ）、７．０２
　　（ｔ　、　Ｊ＝６Ｈｚ　、　Ｉ　Ｈ）、７．６３　
　（ｄ　、　Ｊ＝８Ｈｚ　、２Ｈ）、７．８９　　（ｄ
　。

Ｊ＝８Ｈｚ　、２Ｈ）。

実施例７ トリーローブチルスタンニル３−＜４’　　−トリーｎ
−ブチルスタンニルフェニル〉プロピオネート Ｔ　ＨＦ　１２５ｍＬとヘキサン２Ｓｍ　Ｌ中の２．２
５ｇ（１０ｍモル）の３−４′　−ブロムフェニル）プ
ロピオン酸の溶液（Ｎ！雰囲気したで、Ｎ２注入口、添
加漏斗、および温度計を備えたフラスコ中で）、を−１
００℃に冷却下（ジエチルエーテル／液体窒素）。この
溶液に溶液の温度が一９０℃を超えないような速度でヘ
キサン（Ａ　Ｉｄｒｉｃｈ）中のブチルリチウムの１．
５５　Ｍ溶液１３．５　ｍＬ　（２１ｍモル）を１滴づ
つ添加した。生成する粘性の塊を１ｚ２時間以上−７５
℃に温めておき、５．７０１１１の塩化ｎ−トリブチル
錫（Ａ　Ｉｄｒｉｃｈ）を１分間以上１滴づつ添加した
。次に、この混合物を再び液状にし、３０分間−１５℃
で撹拌した。次に、冷浴を取り外し、混合物の温度が室
温に達するまでこれを撹拌した。

この混合物に１００１Ｌの飽和（ＮＨ４）２　ＳＯ４溶
液を加えた。分離漏斗の中で撮った後、上層を１００１
１ＩＬの１０％ＫＦ液と５０ｍＬのかん水で連続的に洗
い、ＭＱ　３０４で乾燥させ、ろ過し、濃縮して、ろう
状の固形物を得た。この物質のＨ２０／アセトンからの
２回の再結晶により、４０５ｍｇ（４２％）のトリーロ
ーブチルスタンニル３−（４’−ｉ−リ〜ｎ−ブチルス
タンニルフェニル）プロピネートが白ｆＡ粉末トシＴ生
成シタ：ｍｐｓ９−６ｏ℃：ＩＨＮ　Ｍ　Ｒ（ｃＤ（１
８）３）δ０，５０−２．３４　　（ｌｉｔ　、　５４
Ｈ）、２．７５　　（ｍ　　、　　４Ｈ）　　、　７．
２３　　（ｄ　　、　　Ｊ−８Ｈ２。

２Ｈ）　　、　７．４５　　（ｄ　　、　　Ｊ−８ｔ−
１ｚ　　、　　２Ｈ）　　；　　ＩＲ（ｍｅｌｔ）＋６
９５．１５３０ｃｍ−’　。

実施例８ Ｎ−スクシンイミジル３−（４’−ｔ−ソーｎ−ブチル
スタンニルフェニル）プロごオネートの合成 ６．５　ｍＬの無水ＴＨＦ中の４６０１１１０　　（０
，６３Ｉｎ　モル）のトリーローブチルスタンニル３−
＜４’　　−トリーローブチルスタンニルフェニル）プ
ロピオネートの溶液に１４３ｍＱ　　（０，６９ｍモル
）のシンクロヘキシルカルボジイミド（Ｓ　ｉｇｍａ）
を、次いで７３ｍｇ（０，６３ｍモル）のＮ−ヒドロキ
シスクシンイミド（Ｓ　ｉｇｍａ）を添加した。この混
合物を２４時間撹拌し、３７μＬ　（３８ｍｇ、０．６
３　ｍモル）の酢酸を添加した。この混合物をろ過し、
５Ｉｉｌシた。シリカゲルクロマトグラフィー（３０％
Ｆ（○Ａｃ／ヘキサン）による精製で、約１９５ｍｇ（
５８％）のＮ−スクシンイミジル３−（４’−１−ジ−
１−ブチルスタンニルフェニル）プロごオネートを粘性
の油として得た：’ＨＮＭＲ（ｃＤＣｉ３）δ　０．３
８−２．１５（ｍ、２７）−１）　　、　　２．５３　
−　３．３２　　（＋１１　．８Ｈ）　　、７．２０　
　（ｄ　　、Ｊ−８Ｈｚ　　、　２Ｈ）　　、　　７．
３８　　（ｄ　　、Ｊ−８Ｈｚ　　、　　２Ｈ）　　：
　　ＩＲ（ｎｅａｔ）１８２０．１７９０．１７４０、
１１８５、１０４５ｃＩｌｒ’　。

実施例９ メチル４−ブロムベンズイミデートの合成全ての固形物
が溶液になるまで、２０　ｍｌのメタノール中の７．２
０　　（４０１１モル）の４−ブロムベンゾニトリル（
Ｐ　ｆａｌｔｚと３ａｕｅｒ）の懸濁液を通じてＨ（１
８）、ガスを泡立たせた。メチル４−ブロムベンズイミ
デートの塩化水素塩の長い針晶が生成される９０時間の
間この混合物を４℃で冷蔵庫の中に置いた。この塩を真
空ろ過により集め、８．１７ｇ（８１％）の長い白色針
晶が得られ、５０ｍ１の水冷１０％Ｎａ２ＣＯ３溶液と
５０ｍ１−のジエチルエーテルの間で　１．３３０のＨ
Ｏ２塩を分配することによって一塩基に転換した。ジエ
チルエーテル層を５０ｍＬのかん水で洗い、ＭＶＳＯ４
で乾燥させ、ろ過し、濃縮し、ヘキサンから再結晶して
、０，８３ａ　（６０％全収率）の純メチル４−ブロム
ベンズイミデートを針晶としｒｗた：　ｍｐ６４−６５
°　；’ＨＮＭＲ（ｃＤ（１８）ｇ　）δ　３，９１　
　（Ｓ　、　３Ｈ）、　７．６０　　（Ｓ　、　４Ｈ）
、７．５３−７．９０　　（ｂｒｄ　、１　Ｈ）実施例
１０ メチル４−（トリーローブチルスタンニル）ベンズイミ
デートの合成 Ｎ２雰囲気下トルエン２＋ｌＬ中（７）　２１４ｍｇ（
１，０ｍモル）のメチル４−ブロムベンズイミデートの
溶液に　１．５２　　ｍＬ　＜　　１．７４（１，３，
Ｏｍモ／Ｌ、）のへキサブチルジ錫＜ＡＱｆａ＞、次い
で１１ｍｇ（０，０１ｍモル）のテトラキス（トリフェ
ニルホスフィン）パラジウム（０）　　（Ａ　１ｄｒｉ
ｃｈ）を加えた。この混合物を油浴中で１８時間７５−
８０℃で加熱した。涼しい場合には、この混合物を１０
ｍ１−の１０％水性ＫＦ液と１０　ｍＬのジエチルエー
テルの間で分配させた。

ジエチルエーテル層をＭＱＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、
′ａ縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（２５％Ｅ
ｔ　ＯＡｃ　／ヘキサン）による油状濃縮物の精製で、
２２６ｍｇ　　（５３％）の純粋な４−（トリーｎ−ブ
チルスタンニル）ベンズイミデートが粘性油として得ら
れた：’ＨＮＭＲ’（ｃＣ２４）δ　０．５４−２．１
８　　（ｍ　、２７Ｈ）、３．８７（ｓ　、３　Ｈ）、
７．４５　　（ｄ　、　Ｊ−８Ｈｚ　、２Ｈ）、　７．
６７　　（ｄ　、　Ｆ−８Ｈｚ　、　２Ｈ）　：　Ｉ　
Ｒ（ｎｅａｔ＞　３３４０．１６３５ｃｍ−’　。

実施例１１ ４−（３’　　−プロピオン酸）フェニル臭化第二水銀
の合成 無水ＴＨＦ１５１！ＩＬ中の９６１１１Ｑ　（０，３０
ｍモル）酢酸第二水銀（Ａ　１ｄｒｉｃｈ＞の溶液に２
０℃（水浴）で１．７２　　ｍｌの酢酸、次いでＴＨＦ
１ｍＬ中ノ２１８ｍｇのトリーローブチルスタンニル３
−（４’−ｔ−ジ−ｎ−ブチルスタンニルフェニル）プ
ロピオネートの溶液を加えた。生成する溶液を２０℃で
１時間撹拌し、＋５ｍ１−の水性３％ＫＢｒ液を加えた
。さらに１時間後、白色の沈澱物が瑛われるまで回転蒸
発器で殆どのＴＨＦを除去し、この混合物を４５ｍＬの
Ｎ２０で稀釈した。沈澱物を真空ろ過により集め、少量
のＥｔ　ＯＨで洗い、９３ｍｇ　（７２％）の４−（３
′プロピオン酸）フェニル臭化第二水銀か白色の固形物
として得られた：’ＨＮＭＲ＜ＤＭＳＯ−ｄ６）６２．
２３−３．（１９　　（ｍ　、４Ｈ）、７．１５（ｄ　
、Ｊ＝８Ｈｚ　、２Ｍ）、７．３９　　（ｄ　、　Ｊ＝
８Ｈｚ、２Ｈ）；質！スペクトル（ｃｅ）ｌＩｌ／ｚ４
３１、　４３３　　（Ｍ　　＋　　１８．７　、　６．
０）　、　　３５１　　＜２７）　　、　　１３３（１
００）。

有機ホウ素グループを含むメタル転移は同様の方法でな
しとげられる。

実施例１２ Ｎ−スクシンイミジル４−〈トリブチルスタンニル）ベ
ンゾエートの放射性ヨウ素化５％ＨＯＡｃ　／メタノー
ル５０μＬ中に１０−５０μ９のＮ−スクシンイミジル
４−（トリーローブチルスタンニル〉ベンゾエート（０
，０２−０，１０μモル〉３含むバイアルにメタノール
ｊＯ−２０μＬ中の１０−２０μ（］　　＜　０．０８
−０．４５μモル）のＮ−クロルスクシンイミドを添加
した。この溶液に１０μしのＮ　ａ　ｌｌｒ　Ｉ溶液（
［）　ｅｌｂｅｃｃｏ’ｓノＶ）　ｌｖｕＭ衝Ｆａ　：
　Ｇｉｂｃｏ　　１−ａｂｏ　）　　（１００μＣｉ　
−２ｍ　Ｃｉ　＞を加えた。３−５分後に、Ｎａ　２３
２０５（７）　０．２５　μｇ／　ｍＬ溶液２０μＬを
加えた。反応混合物をさらに５０μＬのＰＢＳ溶液で稀
釈し、容量が減少して水性のもののみになるまで溶液の
表面にＮ２流を吹きつけた。７５−９５％の放射線標識
が得られた。この物質は下で述べるように蛋白質標識試
験に直接に使用することができる。

ヨウ素−１３１による放射線ヨウ素化は同じやり方で匹
敵する収率で行われた。

実施例１３ 放射性ハロゲン化小分子による蛋白質標識前述の粗水性
放射性ヨウ素化エステル浪合物を緩衝蛋白質溶液（ＰＨ
８，５−９＞を含むバイアルに移した；あるいは逆でも
よい。抱合反応（よｌｉｉで５分以内に完了した。抱合
収率は約３５〜６５％の範囲に及んだ。標識蛋白質はゲ
ル浸透クロマトグラフィーカラムかあるいは小孔ろ過シ
ステム（例えば、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ超遠心分離）の何
れかを用いて非抱合放射能から精製した。

実施例１３のＩＷ射性ハロゲン化蛋白質生成物は放射線
診断や治療に用いることがでさる。例えば、モノクロー
ナル抗体あるいは腫瘍細胞関連抗原と特異的に反応する
抗原結合フラグメントはこの方法によって放射性ハロゲ
ン化することができ、哺乳動物の身体の腫瘍細胞の位置
を撮影するために使用することができる。放射性ハロゲ
ン化抗体の適切な量は、例えば静脈内注射により、患者
の体内に導入され、その後に身体をガンマカメラのよう
なシンチレーション検出器を用いてスキャンする。この
ような放射性ハロゲン化抗体はＬｌｓの放射線療法の目
的でも哺乳動物の体内に導入される。

器官あるいは疾患のある組織に集中する傾向のある他の
蛋白質やペプチドはこの方法によって同様に放射性ハロ
ゲン化でき、ホメオスタシスからの逸脱や疾病状態を監
視するのに利用することができる。例えば、放射性ハロ
ゲン化フィブリノーゲン（よｉｎ　ｖｉｖｏ撮影により
深部の静脈血栓症をつきとめるのに使用することができ
る。脳下垂体や他のペプチドホルモンの病気による摂取
の変動は同様にして監７′、することができる。

もつと後の例として、この明細書により放射性ハロゲン
化された抗体はｉｎ　ｖｉｔｒｏ放射線免疫検定に用い
ることができる。

放射性ハロゲンは抱合体の非活性化芳香族あるいは複素
式芳香族環に置換されるために、前述の放射性ハロゲン
化蛋白質の全てはしっかりと放射性標識される。ざらに
、ヒドロキシル官能性の存在なしでパラあるいはメタ−
位に放射性ハ゛ロゲンを置換することによって、放射性
ハロゲンは身体のデイオディナーゼ酵素による異化に対
して感受性がより小さくなる。

実施例１４ 生物分布研究 フェノール含有芳香族環により常法により放射性ヨウ素
化された蛋白質に比べて、被検者の小分子の放射性ヨウ
素化蛋白質の有利なｉｎ　ｖｉｖｏ安定性は次の動物実
験によって証明された。実験において、放射性ヨウ素の
甲状腺取込み（首の放射能により測定）はｉｎ　ｖｉｖ
ｏ代謝の測度として利用された。

１２匹のマウスに実施例１２０）放射性ヨウ素化製品で
標識した抗体を注射した。３匹づつのグループを注射後
２時間、２４時間、４８時間および７２時間開目殺し、
放射性ラベルの生物分布を常法により直ちに測定した。

その結果を第１図と第２図に棒グラフとして示す。ここ
では次の記号が用いられている。ＢＬ、［Ｉｈ液：ＴＡ
、尾；ＴＬＩ、色素細胞１１ｌ：ＳＫ、皮膚；Ｍｕ骨格
筋：Ｂｏ３骨：ＬＬＩ、肺；Ｌｌ、肝臓：ＳＰ、牌臓：
Ｓ丁、胃：ＮＥ、首（甲状腺を含む）；に■、腎臓；お
よびＩＮ、腸。

その結果は代りに％線量／グラム組織あるいは％総線量
として表わされる。（％総線量を示すグラフは血液、皮
膚、筋肉および骨の全身放射能の小部分を示すにすぎな
い。）甲状腺における放射能の量は最初の２時間の基線
蓄積から時間とともには増加しなかった。

２４時間の安定性の比較として、追加の３匹のマウスに
既知のクロラミン−下酸化を経て放射性ヨウ素で直接に
標識された以外の同じ抗体の同一量を注射した。放射性
ラベルの生物分布は前記のように測定し、その結果を第
３図と第４図に示す。

図を見ると、２４時間では被検者の生物分布と前からの
試薬の生物分布は皮膚、骨、肝臓、腎臓、および腸では
非常に類似していた。このことは放射性標識抗体が同じ
ように作用することを示している。反対に、クロラミン
−Ｔ標識蛋白質を注射した動物においては、胃と首が注
入放射性ヨウ素のかなり大きな画分を蓄積していた。こ
のことは遊離の放射性ヨウ素はクロラミン−■標識蛋白
質の代謝によって最もつくられ易いことを示している。

これらの比較試験結果は、被検者のバラ−ヨードフェニ
ル標識抗体はｉｎ　ｖｉｖｏでずっと安定であり、この
ことは高比放射能放射性ヨウ素を含む非活性化芳香族環
はｉｎ　ｖｉｖｏで代謝的にあるいはその反対に脱ヨウ
素化されないことを初めて証明した。対照データ（第３
図と第４図）は、クロラミン−Ｔ酸化によるように直接
的に標識されようと、Ｂｏｌｔｏｎ　−Ｈｕｎｔｅｒあ
るいはＷｏｏｄ’ｓ試薬によるように間接的に標識され
ようと、一般に放射性標識フェノール含有芳香族環に匹
敵できると考えられる。

Ｆ（ａｂ’）２を用いた補助的な生物分布研究は、この
方法によって放射性標識された抗体画分は１ｎｖｉｖｏ
　ｆｒ陳代謝に対して安定であることを示した。

ざらに、このタイプの放射性標識試薬は前に検討した標
識全抗体製品よりも早く取り除かれ、身体器官に７２時
間開目最小の残留物を残す。

本発明は優先の具体例と共に述べられたが、前）本の明
細書を読んだ後の通常技術の１つがいろいろな変化、相
当するものの置換、およびここに述べられている成分や
方法に対するその他の変動を有効にすることがで切るで
あろう。そこで、与えられる保護は特許請求の範囲とそ
れに相当する物に含まれる定義によってのみ限定される
と考えられる。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図、第３図および第４図は、実施例１４に
述べられているように、本明細書により放射性標識され
たモノクローナル抗体の促進されたｉｎ　ｖｉｖｏ安定
性を確証する比較的生物分布を示す棒グラフである。 ％艮ｉ／グラム

Claims (40)

【特許請求の範囲】
1. （１）＾＊Ｘがヨウ素、臭素、弗素あるいはアスタチン
   であり、Ａｒが芳香族あるいは複素式芳香族環、および
   Ｒが、放射性同位元素が置換される環を強く活性化せず
   、また蛋白質の生物学的活性を保持する条件下で蛋白質
   に対する抱合に適する官能基をもつ短鎖置換基であると
   ころの式 ＾＊Ｘ−Ａｒ−Ｒ をもつ化合物。
2. （２）＾＊ＸがＩ−１２３、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、
   Ｂｒ−７５、Ｂｒ−７６、Ｂｒ−７７、Ｆ−１８、ある
   いはＡｔ−２１１である特許請求の範囲第（１）項に記
   載の化合物。
3. （３）置換基Ｒの官能基がフェノールエステル、イミド
   エステル、イミデートエステル、酸無水物、アシルスク
   シンイミド、アルデヒド、イソチオシアネート、チオー
   ル、ジアゾ、アミン、ヒドラジン、ハロゲン化アルキル
   およびマレイミドから選ばれる特許請求の範囲第（１）
   項に記載の化合物。
4. （４）Ｒがイミドエステル、アルキルイミドエステル、
   アミドアルキルイミドエステル、イミデートエステル、
   アルキルイミデートエステル、あるいはアミドアルキル
   イミデートエステルである特許請求の範囲第（１）項に
   記載の化合物。
5. （５）＾＊Ｘが置換基に関してパラ−あるいはメタ−位
   である特許請求の範囲第（１）項に記載の化合物。
6. （６）Ｎ−スクシンイミジル３−（４′−［＾＊Ｘ］ハ
   ロフェニル）プロピオネート；メチル３−（４′−［＾
   ＊Ｘ］ハロフェニル）−プロピオイミデート；Ｎ−スク
   シンイミジル４−［＾＊Ｘ］ハロベンゾエート；メチル
   ４−［＾＊Ｘ］ハロベンズイミデート；Ｎ−スクシンイ
   ミジル４−［＾＊Ｘ］ハロベンズアミドアセテートある
   いはＮ−スクシンイミジル４−［＾＊Ｘ］ハロ馬尿酸エ
   ステル；メチル４−［＾＊Ｘ］ハロベンズアミドアセト
   イミデート；および４−［＾＊Ｘ］ハロベンズアミドア
   セトニトリルの化合物からなるグループから選ばれた特
   許請求の範囲第（１）項に記載の化合物。
7. （７）ＭがＳｎ（ｎ−Ｂｕ）＿３、ＳｎＭｅ＿３、Ｈｇ
   Ｘ＿２、（ＸはＣｌ、Ｂｒ、あるいはＩである）、Ｈｇ
   ＯＡｃ、Ｂ（ＯＨ）＿２、あるいはＢＺ＿３、（Ｚはア
   ルキルあるいはアルコキシである）であり、Ａｒが芳香
   族あるいは複素環式芳香族環であり、およびＲが、Ｍが
   置換される環を強く活性化せず、また蛋白質の生物学的
   活性を保持する条件下で蛋白質に対する抱合に適する官
   能基をもつ短鎖置換基であるところの式 Ｍ−Ａｒ−Ｒ をもつ化合物。
8. （８）置換基Ｒの官能基がフェノールエステル、イミド
   エステル、イミデートエステル、酸無水物、アシルスク
   シンイミド、アルデヒド、イソチオシアネート、チオー
   ル、ジアゾ、アミン、ヒドラジン、ハロゲン化アルキル
   、およびマレイミドである特許請求の範囲第（７）項に
   記載の化合物。
9. （９）Ｒがイミドエステル、アルキルイミドエステル、
   アミドアルキルイミドエステル、イミデートエステル、
   アルキルイミデートエステル、アミドアルキルイミデー
   トエステルである特許請求の範囲第（７）項に記載の化
   合物。
10. （１０）Ｍが置換基Ｒに関してパラ−あるいはメタ−位
    である特許請求の範囲第（７）項に記載の化合物。
11. （１１）Ｎ−スクシンイミジル３−（４′−トリブチル
    スタンニルフエニル）プロピオネート；メチル３−（４
    ′−トリブチルスタンニルフエニル）プロピオイミデー
    ト；Ｎ−スクシンイミジル４−トリブチルスタンニルベ
    ンゾエート；メチル４−トリブチルスタンニルベンズイ
    ミデート；Ｎ−スクシンイミジル４−トリブチルスタン
    ニルベンズアミドアセテートあるいはＮ−スクシンイミ
    ジル４−トリブチルスタンニル馬尿酸エステル；メチル
    ４−トリブチルスタンニルペンズアミドアセトイミデ−
    ト；および４−トリブチルスタンニルベンズアミドアセ
    トニトリルの化合物からなるグループから選ばれた特許
    請求の範囲第（７）項に記載の化合物。
12. （１２）（ａ）有機金属グループがＳｎ（ｎ−Ｂｕ）＿
    ３およびＳｎＭｅ＿３から選ばれ、官能基あるいは官能
    基の前駆物質をもつハロ芳香族化合物のハロゲンと有機
    金属グループを置換し、 （ｂ）ステップ（ａ）の生成物の前駆物質グループを官
    能基に転換し、および （ｃ）有機金属グループを除去し、ヨウ素、臭素、弗素
    あるいはアスタチンの放射性同位元素を置換するために
    ステップ（ａ）または（ｂ）の官能基含有生成物をハロ
    脱メタル化するステップから成る、＾＊Ｘがヨウ素、臭
    素、弗素、あるいはアスタチンの放射性同位元素であり
    、Ａｒが芳香族環または複素環式芳香族環であり、およ
    びＲが、放射性同位元素が置換されている環を強く活性
    化せず、まだ蛋白質の生物学的活性を保持する条件下で
    蛋白質に対する抱合に適した官能基をもつ短鎖置換基で
    あるところの式 ＾＊Ｘ−Ａｒ−Ｒ をもつ、蛋白質標識のための放射性ハロゲン化小分子を
    合成する方法。
13. （１３）ステップ（ａ）のハロ芳香族化合物がパラ−ま
    たはメタ−置換性である特許請求の範囲第（１２）項に
    記載の方法。
14. （１４）官能基がフェノールエステル、イミドエステル
    、イミデートエステル、酸無水物、アシルスクシンイミ
    ド、アルデヒド、イソチオシアナート、チオール、ジア
    ゾ、アミン、ヒドラジン、ハロゲン化アルキルおよびマ
    レイミドから選ばれる特許請求の範囲第（１２）項に記
    載の方法。
15. （１５）官能基の前駆物質がカルボン酸、ニトリル、ア
    ルコール、およびアミンから選ばれる特許請求の範囲第
    （１２）項に記載の方法。
16. （１６）ステップ（ａ）の前駆物質がカルボン酸であり
    、ステップ（ｂ）の官能基がイミドエステルである特許
    請求の範囲第（１２）項に記載の方法。
17. （１７）ステップ（ａ）が （ｉ）ハロ芳香族化合物を−１００℃でｎ−ブチルリチ
    ウムと反応させるかまたは室温でマグネシウムと反応さ
    せ、 （ｉｉ）上記（ｉ）の反応生成物を有機金属グループと
    反応させるステップから成る特許請求の範囲第（１２）
    項に記載の方法。
18. （１８）ハロ芳香族化合物をヘキサアルキル錫とテトラ
    キス（トリフェニルホスフィン）パラジウムと反応させ
    ることから成る特許請求の範囲第（１２）項に記載の方
    法。
19. （１９）ステップ（ａ）がハロ芳香族化合物をトリアル
    キルスタンニル、アルカリと０℃でテトラグライム中で
    反応させることから成る特許請求の範囲第（１２）項に
    記載の方法。
20. （２０）ステップ（ａ）が、ＸがＣｌ、ＢｒまたはＩで
    あり、ＺがアルキルまたはアルコキシであるところのＨ
    ｇＸ＿２、Ｈ＿ｇ（ＯＡｃ）＿２、ＢＸ＿３、およびＢ
    Ｚ＿３から選ばれた有機金属化合物によりアリール錫置
    換化合物をメタル転移することから成る特許請求の範囲
    第（１２）項に記載の方法。
21. （２１）（ａ）有機金属グループがＳｎ（ｎ−Ｂｕ）＿
    ３およびＳｎＭｅ＿３から選ばれ、官能基の前駆物質を
    もつハロ芳香族化合物のハロゲンと有機金属グループを
    置換し、 （ｂ）有機金属グループを除去し、ヨウ素、臭素、弗素
    またはアスタチンの放射性同位元素を置換するためにス
    テップ（ａ）の生成物をハロ脱メタル化し、また （ｃ）ステップ（ｂ）の生成物の前駆物質グループを官
    能基に転換するステップから成る、＾＊Ｘがヨウ素、臭
    素、弗素またはアスタチンであり、Ａｒがフェニルまた
    は複素環式芳香族環であり、またＲが、放射性同位元素
    が置換される環を強く活性化せず、蛋白質の生物学的活
    性を保持する条件下で蛋白質に対する抱合に適した官能
    基をもつ短鎖置換基であるところの式、 ＾＊Ｘ−Ａｒ−Ｒ をもつ、蛋白質標識のための放射性ハロゲン化小分子を
    合成する方法。
22. （２２）ステップ（ａ）のハロ芳香族化合物がハロゲン
    パラ−またはメタ−置換である特許請求の範囲第（２１
    ）項に記載の方法。
23. （２３）グループの前駆物質がカルボン酸、ニトリル、
    アルコールおよびアミンから選択される特許請求の範囲
    第（２１）項に記載の方法。
24. （２４）官能基がフェノールエステル、イミドエステル
    、イミデートエステル、酸無水物、アシルスクシンイミ
    ド、アルデヒド、イソチオシアネート、ジアゾ、アミン
    、ヒドラジン、ハロゲン化アルキルおよびマレイミドか
    ら選ばれる特許請求の範囲第（２１）項に記載の方法。
25. （２５）前駆物質グループがニトリルで、官能基がイミ
    デートエステルである特許請求の範囲第（２１）項に記
    載の方法
26. （２６）ステップ（ａ）が、 （ｉ）ハロ芳香族化合物を−１００℃でｎ−ブチルリチ
    ウムとまたは室温でマグネシウムと反応させ、（ｉｉ）
    上記（ｉ）の反応生成物を有機金属グループと反応させ
    ることから成る特許請求の範囲第（２１）項に記載の方
    法。
27. （２７）ステップ（ａ）がハロ芳香族化合物をヘキサア
    ルキル錫およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）
    パラジウムと反応させることから成る特許請求の範囲第
    （２１）項に記載の方法。
28. （２８）ステップ（ａ）がハロ芳香族化合物を０℃でテ
    トラグライム中でトリアルキルスタンニルアルカリと反
    応させることから成る特許請求の範囲第（２１）項に記
    載の方法。
29. （２９）ステップ（ａ）が、ＸがＣｌ、ＢｒまたはＩで
    、Ｚがアルキルまたはアルコキシであるところの有機金
    属グループによりアリール錫置換化合物をメタル転移す
    ることから成る特許請求の範囲第（２１）項に記載の方
    法。
30. （３０）特許請求の範囲第（１）項に記載の化合物と前
    記蛋白質のアミノ、チオールまたはヒドロキシ基を水性
    媒質中で反応させるステップから成る、蛋白質を放射性
    ハロゲン化する方法。
31. （３１）特許請求の範囲第（３０）項に記載の方法の放
    射性ハロゲン化蛋白質生成物。
32. （３２）前記蛋白質が放射線診断法あるいは放射線療法
    の何れか、あるいは両者に有効である特許請求の範囲第
    （３０）項に記載の方法。
33. （３３）前記蛋白質が抗体、抗原結合フラグメント、ア
    ミノ酸重合体、血漿蛋白質、およびペプチドホルモンか
    ら成るグループから選ばれる特許請求の範囲第（３０）
    項に記載の方法。
34. （３４）前記蛋白質がモノクローナル抗体である特許請
    求の範囲第（３０）項に記載の方法。
35. （３５）前記モノクローナル抗体が腫瘍結合抗原と特異
    的に反応する特許請求の範囲第（３４）項に記載の方法
    。
36. （３６）特許請求の範囲第（３５）項に記載の方法の放
    射性ハロゲン化モノクローナル抗体生成物。
37. （３７）特許請求の範囲第（３５）項に記載の生成物の
    有効量を体内に導入し、その後でシンチレーシヨン検出
    器を用いて身体をスキャンするステップから成る哺乳動
    物の体内の腫瘍細胞の位置を映し出す方法。
38. （３８）特許請求の範囲第（３５）項に記載の生成物の
    有効量を哺乳動物の体内に導入するステップから成る腫
    瘍放射線療法の方法。
39. （３９）特許請求の範囲第（３１）項に記載の放射性ハ
    ロゲン化蛋白質を導入することに改良点のある、哺乳動
    物の身体に放射性ハロゲン化蛋白質を導入し、その後シ
    ンチレーション検出器を用いて身体をスキャンするステ
    ップを含むｉｎ　ｖｉｖｏ撮影の方法。
40. （４０）（ａ）対応するハロベンゾニトリルあるいはハ
    ロアリールアルキルニトリルのイミデートエステルを生
    成し、 （ｂ）有機金属グループをステップ（ａ）の生成物のハ
    ロゲンと置換し、その有機金属グループはＳｎ（ｎ−Ｂ
    ｕ）＿３およびＳｎＭｅ＿３から選ばれ、またその置換
    はイミデート含有のステップ（ａ）の生成物をヘキサア
    ルキル錫およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）
    −パラジウムと反応させることから成り、 （ｃ）有機金属グループを除去し、ヨウ素、臭素、弗素
    またはアスタチンの放射性同位元素を置換させるために
    ステップ（ｂ）の生成物をハロ脱メタル化するステップ
    から成る、＾＊Ｘがヨウ素、臭素、弗素あるいはアスタ
    チンであり、Ａｒがフェニルまたは複素環式芳香族環で
    あり、Ｒが、放射性同位元素が置換される環を強く活性
    化せず、蛋白質の生物学的活性を保持する条件下で蛋白
    質に対する抱合に適した官能基をもつ短鎖置換基である
    ところの、式 ＾＊Ｘ−Ａｒ−Ｒ をもつ蛋白質標識のための放射性ハロゲン化小分子を合
    成する方法。