JPS62273905A - Cosmetic - Google Patents

Cosmetic

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JPS62273905A
JPS62273905A JP11486286A JP11486286A JPS62273905A JP S62273905 A JPS62273905 A JP S62273905A JP 11486286 A JP11486286 A JP 11486286A JP 11486286 A JP11486286 A JP 11486286A JP S62273905 A JPS62273905 A JP S62273905A
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chitosan
cosmetic
hair
bacillus
chitosanase
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Tomiyuki Nanba
富幸 難波
Masato Izume
正人 井爪
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Katakura Chikkarin Co Ltd
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Abstract

PURPOSE:A cosmetic which has high moisture retention, no greasiness, provides the skin and the hair with mild and good moisture and moisture retention, obtained by blending a cosmetic with chitosan oligosaccharide. CONSTITUTION:A cosmetic such as preferably toilet lotion, hair cream, lipstick, cream, hair dressing agent, etc., used for the skin or the hair is blended with usually 0.5-20wt% based on the cosmetic of chitosan oligosaccharide having especially 2-8 polymerization degree of D-glucosamine which is obtained by decomposing chitosan with chitosanase stable in pH 5-11, produced by a bacterium preferably belonging to the genus Bacillus, especially Bacillus No.7-M (FERM P-8139) to give a cosmetic which provides cosmetic with no greasiness, supplies the skin, the hair, etc., with mild and good moisture and moisture retention and can makes them soft and moist.

Description

【発明の詳細な説明】 3、発明の詳細な説明 〔産業上の利用分野〕 本発明はNQい保湿性を有し、べとつきのない化粧料に
関し、詳しくは、皮膚や毛髪に対して温和で良好な潤い
と保湿性を与える化粧料に関する。
[Detailed Description of the Invention] 3. Detailed Description of the Invention [Field of Industrial Application] The present invention relates to a cosmetic that has excellent moisturizing properties and is non-sticky. This invention relates to cosmetics that provide good moisture and moisturizing properties.

本発明の化粧料は、化粧料としての通常の用途に使用さ
れ、また人の皮膚や毛髪に使用される。
The cosmetic composition of the present invention is used for ordinary purposes as a cosmetic composition, and is also used for human skin and hair.

〔技術の背景および従来技術の説明〕[Technical background and explanation of conventional technology]

化粧料は、皮膚に対して水分と潤いを与え、毛髪に対し
て光沢や柔軟性を−与えることを重要な目的の−とする
。このために化粧料には、吸湿性の大きい保湿剤を配合
し、このような保湿剤として、グリセリン、1.3−ブ
チレングリコール、プロピレングリコールなどの多価ア
ルコール、ヒアルロン酸などの水溶性高分子あるいは2
−ピロリドン−5−カルボン酸のナトリウム塩、アミノ
酸塩またはトリエタノールアミン塩などを用いている。
The important purposes of cosmetics are to provide water and moisture to the skin, and to add luster and flexibility to the hair. For this reason, cosmetics are formulated with highly hygroscopic humectants, such as polyhydric alcohols such as glycerin, 1,3-butylene glycol and propylene glycol, and water-soluble polymers such as hyaluronic acid. Or 2
-Pyrrolidone-5-carboxylic acid sodium salt, amino acid salt, triethanolamine salt, etc. are used.

一方、キトサンは、エビやカニなどの甲殻類の殻に含ま
れるキチンを脱アセチル化して得られる多蔚類であって
、D−P−グルコサミンがβ−1,4結合によって直鎖
状に結合した多朝類であり、キトサンを分解して得られ
る低重合度のキトサンも知られている。キトサン尋分解
する方法には、塩酸による加水分解法、亜硝酸による酸
化分解法およぴ塩素による酸化分解法などの化学的な方
法、および酵素(キトサナーゼ)による方法がある。キ
トサナーゼを生産する微生物として、バチルス(Bac
illus sp、 )  R−4(トミナガ他:ビオ
ヒミ力・工・ビオフィジ力・アクタ(Y、 Tomin
agaet at : Biochimica et 
Biophysica Acta )第410巻第14
5−155頁(1957年)〕、ペニシリウム・イスラ
ンディクム(Penicilliumislandic
um )  (ディー・エム・フェントン他:ジャーナ
ル・オブ・ジェネラル・ミクロバイオロジー(D、M、
Fenton et al Jourr+al of 
Genera1Microbio4og)’ ) W 
126巻第151−165頁(1981年)〕、バチル
ス (口acillus Sp、 )  99−5 (
嘱内:日本農芸化学会、昭和59年度大会講演要旨集第
550頁)、ストレプトミセス(5trepto+ay
ces ) N[L6 (ジェイ・ニス・プライス他:
ジャーナル・オブ・バクテリオロジー(J、S、 Pr
1ce et al : Jounal ofBaCt
eriOIOgY )第124巻第1574−1584
頁(1975年)〕、ストレプトミセス・グリセウス(
Streptomyces griseu5 )  C
オオタカラ他:キチン・キトサン・アンド・リレイテッ
ド・エンザイムス(A、0htakara et al
 : Chitin、 Chitosanand Re
1ated  Enzymes )第147−160頁
’ (1985年)アカデミツク・プレス〕およびバチ
ルス([1acillus Sp、 ) NO,7−M
  (特願昭60−120673号)があり、キトサン
が植物病原性のカビの生育に影響を及ばすこと〔ピー・
ニス・ストエラセル他:フイトパソロギッシエ・ツアイ
トシュリフト(P、 5toessel et al 
:r’hytopathologische Zeit
schrift )第111巻第82−89頁(198
4年)、シー・アール・アラン他:エクスベリメンタル
・マイコロジー(C,R,A11an  et al 
: ExperimentalMycology )第
3巻第285−287頁(1979年)〕およびキトサ
ンの分解物かえん豆のカビの生育の抑制に影響を及ぼす
こと〔ディー・エフ・ケンドラ他:エクスペリメンタル
会マイコロジー(D、F、 Kendra et al
 Experimental Mycology)第8
8第276−281頁(1984年)〕が知られ、さら
にキトサンおよびキトサンの軽度分解物が細菌の生育を
抑制すること(特願昭60−223749号)およびキ
トサンならびにキトサンの分、解産物によって植物病害
を防除すること(特願昭61−40400号)が提案さ
れている。
On the other hand, chitosan is a polyester obtained by deacetylating chitin contained in the shells of crustaceans such as shrimp and crabs. Chitosan with a low degree of polymerization obtained by decomposing chitosan is also known. Methods for decomposing chitosan include chemical methods such as hydrolysis using hydrochloric acid, oxidative decomposition using nitrous acid, and oxidative decomposition using chlorine, and methods using enzymes (chitosanase). Bacillus (Bacillus) is a microorganism that produces chitosanase.
illus sp, ) R-4 (Tominaga et al.: Biophysics, Engineering, Biophysics, Acta (Y, Tomin
agaet at: Biochimica et
Biophysica Acta) Volume 410 No. 14
5-155 (1957)], Penicillium islandicum
um) (D.M. Fenton et al.: Journal of General Microbiology (D.M.,
Fenton et al Jourr+al of
Genera1Microbio4og)' ) W
126, pp. 151-165 (1981)], Bacillus Sp. 99-5 (
Kounai: Japanese Society of Agricultural Chemistry, 1981 Conference Abstracts, p. 550), Streptomyces (5 trepto+ay
ces ) N[L6 (Jay Nis Price et al.:
Journal of Bacteriology (J, S, Pr
1ce et al: Journal ofBaCt
eriOIOgY) Volume 124 No. 1574-1584
(1975)], Streptomyces griseus (
Streptomyces griseu5) C
Otakara et al.: Chitin, chitosan and related enzymes (A, Ohtakara et al.
: Chitin, Chitosanand Re
1ated Enzymes) pp. 147-160' (1985) Academic Press] and Bacillus ([1ated Enzymes) NO, 7-M
(Japanese Patent Application No. 120673/1983), there is evidence that chitosan affects the growth of plant pathogenic molds [P.
Nis Stoessel et al.
: r'hytopathologische Zeit
scrift) Vol. 111, pp. 82-89 (198
4th year), C, R, A11an et al.: Experimental Mycology (C, R, A11an et al.
: Experimental Mycology), Vol. 3, pp. 285-287 (1979)] and that decomposed products of chitosan affect the inhibition of mold growth on maple beans [D.F. Kendra et al.: Experimental Mycology (D. , F., Kendra et al.
Experimental Mycology) No. 8
8, pp. 276-281 (1984)], and furthermore, it is known that chitosan and mild decomposition products of chitosan inhibit the growth of bacteria (Japanese Patent Application No. 60-223749) and that chitosan and its components and decomposition products inhibit the growth of bacteria. It has been proposed to control plant diseases (Japanese Patent Application No. 61-40400).

またキトサンの水に性塩を毛髪の手入れ用薬剤に加え、
それによって毛髪の状態を調整すること(特開昭54−
95740号公報)、D−グルコサミンのアミノ糖を高
級脂肪酸とともに乳化剤または洗浄剤として化粧料に使
用すること(特開昭59−39813号公報)およびD
−グルコサミンのアミノ糖を水浴性カルボキシビニルポ
リマーとともに増粘剤として化粧料に使用すること(特
開昭59−39814号公報)が提案されている。
In addition, sex salts are added to the chitosan water as a hair care agent.
Adjusting the condition of the hair thereby
95740), the use of the amino sugar of D-glucosamine together with higher fatty acids as an emulsifier or detergent in cosmetics (Japanese Unexamined Patent Publication No. 59-39813), and
- It has been proposed to use the amino sugar of glucosamine together with a bathable carboxyvinyl polymer as a thickener in cosmetics (Japanese Patent Laid-Open No. 59-39814).

本発明者らは、キチンの脱アセチル化物のキトサンにつ
いて研究を続けているが、キトサンを、バチルスNo、
7−M(微工研菌寄第8139号)により生産されたキ
トサナーゼによって分解して得たキトサンオリゴ糖が高
い保湿性を有し、これを化1暫Iψ1′lI′+ナナー
ン身I−ベン1どごンがtxど一古虐に対して、温和で
良好な潤いを与えることを見出し、この知見にもとづい
て本発明に到達した。
The present inventors have been continuing research on chitosan, which is a deacetylated product of chitin.
Chitosan oligosaccharide obtained by decomposition with chitosanase produced by 7-M (Feikoken Bacterial Serial No. 8139) has high moisture retention properties, and it is It has been discovered that 1 dogon provides mild and good moisture to tx doichi koji, and based on this knowledge, the present invention has been achieved.

〔発明の目的および発明の要約〕[Object of the invention and summary of the invention]

本発明の目的は、高い保湿性を有し、べとつくことがな
い化粧料を提供することにあり、詳しくは、人の皮膚や
毛髪に対して温和で良好な潤いおよび保湿性を与えるこ
とができる化粧料を提供することにある。
An object of the present invention is to provide a cosmetic that has high moisturizing properties and does not become sticky. Specifically, it is capable of providing mild and good moisturizing and retaining properties to human skin and hair. Our goal is to provide cosmetics.

本発明は、化粧料にキトサンオリゴ糖を配合し、それに
よって化粧料に、べとつくことがなく、すぐれた保湿性
を与え、これを皮膚や毛髪に使用したとき、皮膚および
毛髪に温和で良好な潤いと保湿性を与え得る特性を付与
した化粧料である。
The present invention blends chitosan oligosaccharide into cosmetics, thereby giving the cosmetics excellent moisturizing properties without stickiness, and when used on the skin and hair, it provides a mild and good effect on the skin and hair. It is a cosmetic that has properties that can provide moisture and moisturizing properties.

本発明の化粧料に配合するキトサンオリゴ聾は、D−グ
ルコサミンの重合度が2〜8のキトサンオリゴ粘である
のが好ましく、このキトサンオリゴ粘は、キトサンを、
バチルス属に属する微生物により生産され、pH5〜1
1において安定なキトサナーゼにより分解することによ
って得られるが、このようなキトサナーゼは、バチルス
No、 7− M(微工研菌寄第8139号)によって
生産することができる。
The chitosan oligo viscous compounded in the cosmetic of the present invention is preferably a chitosan oligo viscosity in which the degree of polymerization of D-glucosamine is 2 to 8.
Produced by microorganisms belonging to the genus Bacillus, pH 5-1
1 by decomposition with stable chitosanase, but such chitosanase can be produced by Bacillus No. 7-M (Feikoken Bacterial Serial No. 8139).

〔発明の詳細な説明〕[Detailed description of the invention]

本発明の化粧料において、キトサンオリゴ塘を配合する
化粧料は、皮膚または毛髪に使用するいかなるものであ
ってもよいが、化粧水、ヘアクリーム、口紅、クリーム
および整髪料に使用するのが好ましい。
In the cosmetics of the present invention, the cosmetics containing chitosan oligomers may be any products used for skin or hair, but are preferably used in lotions, hair creams, lipsticks, creams, and hair styling products. .

本発明の化M料において、キトサンオリゴ糖は、化粧料
に保湿性を与え、これを使用したときに、皮膚または毛
髪に温和で良好な潤いと保湿性を与える限りにおいて、
いかなる量においても配合することができるが、通常化
粧料に対して0.5〜20%(重ff1)の量において
配合される。
In the chemical composition of the present invention, the chitosan oligosaccharide imparts moisturizing properties to the cosmetic, and insofar as it imparts mild and good moisture and moisturizing properties to the skin or hair when used,
Although it can be blended in any amount, it is usually blended in an amount of 0.5 to 20% (weight ff1) based on the cosmetic composition.

本発明の化粧料に配合するキトサンオリゴ糖は、化粧料
にすぐれた保湿性を与えるが、べとつくことがなく、こ
れを使用したときに、皮膚または毛髪に、温和で良好な
潤いと保湿性を与える限りにおいて、いかなるものであ
っても、これを使用することができるが、D−グルコサ
ミンの重合度が20以下のもの(特に好ましくはD−グ
ルコサミンの重合度が2〜8のもの)であって、HLW
を含まないものを使用するのが好ましい。
The chitosan oligosaccharides blended into the cosmetics of the present invention give the cosmetics excellent moisturizing properties, but are not sticky, and when used, provide mild, good moisture and moisturizing properties to the skin or hair. Any type of D-glucosamine can be used as long as it is provided, but D-glucosamine with a polymerization degree of 20 or less (particularly preferably D-glucosamine with a polymerization degree of 2 to 8) can be used. Teh, HLW
It is preferable to use one that does not contain

キトサンオリゴ糖は、単体または塩などのいかなる形態
のものであっても、これを化粧料に配合することができ
るが、水に溶解しうる酸の塩、たとえば塩酸、硝酸、ギ
酸、酢酸、グルタミン酸またはアスコルビン酸の塩を使
用するのが好ましい。
Chitosan oligosaccharide can be blended into cosmetics in any form, such as alone or as a salt, but it cannot be added to water-soluble acid salts, such as hydrochloric acid, nitric acid, formic acid, acetic acid, and glutamic acid. Alternatively, it is preferable to use a salt of ascorbic acid.

本発明の化Haに配合するキトサンオリゴ替は、キトサ
ンを公知手段により分解し、所望の特性を有するキトサ
ンオリゴ糖を分別取得することによって得られるが、I
I!LtI!まで分解することのないキトサナーゼによ
りキトサンを分解することによって得るのが好ましく、
キトサナーゼは、バチルス属に属する微生物により生産
され、5〜11のpH領域において安定なキトサナーゼ
を使用するのが好ましく、さらにバチルスNlN11L
7−微工研菌寄第8139号)により生産されたキトサ
ナーゼを使用するのがさらに好ましい。
The chitosan oligosaccharide compounded in the chemical compound of the present invention can be obtained by decomposing chitosan by known means and fractionating and obtaining chitosan oligosaccharides having desired properties.
I! LtI! It is preferable to obtain it by decomposing chitosan with chitosanase, which does not decompose it until
Chitosanase is preferably produced by a microorganism belonging to the genus Bacillus and is stable in a pH range of 5 to 11, and more preferably Bacillus NlN11L.
It is more preferable to use chitosanase produced by A.

バチルスNo、7−Mは、長崎県南高来郡小浜町雲仙の
原生沼の土壌よりキチンまたはキトサンを唯一の炭素源
とする培地に生育しうる細菌として分層されたバチルス
(Bacillus sp、 ) No、 7株を親株
として、この親株をN−メチルーダ−ニトロソ−N−ニ
トロソグアニジン(NTG)で処理して突然変異を誘発
させ、得られたストレプトマイシン耐性の変異株の中か
ら、高活性のキトサナーゼを生産しうるものとして分離
された変異株であって、微工研菌寄第8139号(FE
RN P −8139)として通商産業省微生物工業技
術研究所に寄託されている。
Bacillus No. 7-M is a Bacillus (Bacillus sp.) No. 7-M that was isolated from the soil of a virgin swamp in Unzen, Obama Town, Minamitakagi District, Nagasaki Prefecture, as a bacterium that can grow in a medium containing chitin or chitosan as the sole carbon source. 7 strains as parent strains, this parent strain is treated with N-methyluda-nitroso-N-nitrosoguanidine (NTG) to induce mutations, and highly active chitosanase is produced from among the streptomycin-resistant mutant strains obtained. It is a mutant strain isolated as a possible
It has been deposited as RNP-8139) at the National Institute of Microbial Technology, Ministry of International Trade and Industry.

バチルスNo、 7− Mの菌学的性質は以下に示され
る。
The mycological properties of Bacillus No. 7-M are shown below.

A、細胞の形態 (1)細胞の形および大きさ:短桿菌、(肉汁および肉
汁寒天斜面培養、37℃、24〜72時間の培養) (2)細胞の多形性の有無:無し、 (3)運動性の有無:有り、 (肉汁寒天半流動高層穿刺培1) (4)胞子の有無二有り、内生胞子および裸の胞子、球
状、 〔トーナー(Dornet )の染色法およびウィッツ
(WltW)変法〕 (5ングラム染色性:g)性、 〔肉汁寒天斜面培養、37’C,18時間、ヒュヅカー
(Hucker )の変法によりQ色〕口、各t8地に
おける生育状態 (1)肉汁寒天平板培養(37℃、24〜168時間)
:糸状の周縁を有する円形で、隆起した乳白色のコロニ
ーを形成する。コロニーの表面は凹凸でやや光沢があり
、半透明である。時間の経過とともに盛上ってくる1色
葉は生産しない。
A. Cell morphology (1) Cell shape and size: Brachybacillus, (broth and broth agar slant culture, 37°C, 24-72 hours culture) (2) Presence or absence of cell pleomorphism: None, ( 3) Presence or absence of motility: Yes, (broth agar semi-fluid high-layer puncture medium 1) (4) Presence or absence of spores 2, endospores and naked spores, spherical, [Dornet's staining method and WltW ) Modified method] (5 gram stainability: g), [Meat juice agar slant culture, 37'C, 18 hours, Q color by Hucker's modified method] Mouth, Growth status in each T8 area (1) Meat juice Agar plate culture (37℃, 24-168 hours)
: Forms a round, raised, milky-white colony with a filamentous periphery. The surface of the colony is uneven, slightly shiny, and translucent. It does not produce single-colored leaves that develop over time.

(2)肉汁寒天斜面培養(37°C,24〜168時間
):拡布状に盛上った乳白色のコロニーを形成する。
(2) Broth agar slant culture (37°C, 24-168 hours): Forms milky white colonies that are spread out.

コロニーは凸円形の隆起があり、光沢がある。生育は良
好で、時間とともに鉱がってくる。0塁は生産しない。
Colonies have convex circular ridges and are shiny. Growth is good and minerals will appear over time. 0 base is not produced.

(3) 肉fNFi体t15a (37°C,24−t
6g 時間)  :表面に膜を形成しない。時間ととも
に全体的に濁ってくる。底部に葉状(顆粒状)の沈デン
が形成され、徐々に多くなってくる。
(3) Meat fNFi body t15a (37°C, 24-t
6g hours): No film is formed on the surface. The whole thing becomes cloudy over time. Leaf-like (granular) sediments are formed at the bottom and gradually increase in number.

(4)肉汁ゼラチン穿刺培養(25°C124〜168
時間): 穿刺線に沿って生育し、液化する。表面および内部は漏
斗状に生育し、液化する。液化部分は内温する。
(4) Meat juice gelatin puncture culture (25°C124-168
Time): Grows along the puncture line and liquefies. The surface and interior grow funnel-shaped and liquefy. The liquefied part becomes internally warm.

(5)リドマスミルク(37℃、24〜168時間) 
=2日後から上部が少しずつ液化し、4日目には色は完
全に変色し、酸性となった。凝固はしない。
(5) Lidmus milk (37℃, 24-168 hours)
= After 2 days, the upper part gradually liquefied, and on the 4th day, the color completely changed and became acidic. It does not coagulate.

時間の経過とともに、液化は進み、半透明になった。As time passed, liquefaction progressed and it became translucent.

C・生理学的性質 口→硝酸塩の還元ニー (硝酸塩肉汁培地、37°C124〜120時間)(2
)脱窒反応ニー (駒形らの方法、発酵管を使用、379C124〜12
0時間) (3)MRテスト:+ (37°C124〜168時間) (4)VPテスト(アセチルメチルカルビノール生成試
験:+ (37℃、24〜168時間) (5)インドールの生成ニー (37℃、24〜168時間) (6)硫化水素の生成ニー (TSI寒天法、37℃、24〜168時間)(7)デ
ン粉の加水分解:+ (37℃、24〜168時間) (8)クエン酸の利用 (コーザーの培地、37°C124〜168時間): 
− (クリステンセンの培地、37°0124〜168時間
):+ (9)無機窒素源の利用(3760124〜168時間
) 硝酸塩:未定、 アンモニウム塩:未定、 Ho)色素の生成 (マンニット・酵母エキス寒天斜o′iJ培地)ニー〔
キング(King)  A5′!:天斜面培地〕ニー(
l])蛍光の有無二煎し く12)ウレアーゼ:+ (クリステンセンーウレア寒天培地、37°c124〜
168時間) (13)オキシダーゼ:+ (肉汁寒天培地、37°0124〜48時間)(14)
カタラーゼ:+ (肉汁寒天培地、3760124〜48時間)(15)
生育の範囲= (肉汁寒天培地)温度:未定、 pH:5〜10゜ 添加食塩n度:未定、 (16)酸素に対する態度:好気性 (1%グルコース肉汁高層寒天培地、37°c124〜
72時間) (+7)O−Fテスト〔ヒューーライフソン(Ilug
h −Leifson )法、37°C,D−グルコー
ス〕 :発酵的に酸を生成する。
C. Physiological properties → Nitrate reduction knee (nitrate broth medium, 37°C 124-120 hours) (2
) Denitrification reaction knee (Komagata et al. method, using fermentation tube, 379C124-12
0 hours) (3) MR test: + (37°C, 124-168 hours) (4) VP test (acetylmethylcarbinol production test: + (37°C, 24-168 hours) (5) Indole formation knee (37 ℃, 24-168 hours) (6) Formation of hydrogen sulfide (TSI agar method, 37℃, 24-168 hours) (7) Hydrolysis of starch: + (37℃, 24-168 hours) (8) Utilization of citric acid (Koser's medium, 37°C 124-168 hours):
- (Christensen's medium, 37°0124-168 hours): + (9) Utilization of inorganic nitrogen source (3760124-168 hours) Nitrate: undetermined, ammonium salt: undetermined, Ho) Pigment production (mannitol/yeast extract agar) oblique o'iJ medium) knee [
King A5'! : Ceiling medium] Knee (
l]) Presence or absence of fluorescence 12) Urease: + (Christensen-urea agar medium, 37°c124~
168 hours) (13) Oxidase: + (Meat juice agar medium, 37°0124-48 hours) (14)
Catalase: + (broth agar medium, 3760124-48 hours) (15)
Growth range = (gravy agar medium) Temperature: undetermined, pH: 5-10° Added salt level: undetermined, (16) Attitude towards oxygen: aerobic (1% glucose gravy high-rise agar medium, 37°C 124~
72 hours) (+7) O-F test [Hugh Lifeson (Ilug)
h-Leifson) method, 37°C, D-glucose]: Acid is produced fermentatively.

(+8)u類からの酸およびガスの生成の有無(37℃
、24〜168時間): 剪 類     酸   ガス D−グルコース  十    − D−マンノース  −− D−ガラクトース −   − D−フラクトース 十    − L−アラビノース −− D−キシロース  −− D−ソルビット  −− D−マンニット  −− イノシヅト    −− マルトース    +    − サッカロース   十    − ラクトース    −    − デン粉      十   − セルロース    −− グリセリン   −− 以上の菌学的性質について、パージエイス・マオロジー
(Bergey’ s Manual of Dete
rminativeBaeteriology )の第
8版(1974年)を検索したところ、NO,7−M株
はバチルス(Bacillus )属に属するのが相当
であることがわかった。
(+8) Presence or absence of acid and gas generation from u-type (37℃
, 24-168 hours): Scissors Acid Gas D-glucose - D-mannose - D-galactose - D-fructose - L-arabinose - D-xylose - D-sorbitol - D-mannite -- Boar seeds -- Maltose + -- Sucrose 10 -- Lactose -- Starch 10 -- Cellulose -- Glycerin -- The above mycological properties are described in Bergey's Manual of Dete.
A search of the 8th edition (1974) of Rminative Baeteriology revealed that the NO,7-M strain most likely belongs to the genus Bacillus.

バチルスN117−Hにより生産されたキトサナーゼの
酵素化学的性質は以下に示すとおりである。
The enzymatic chemical properties of chitosanase produced by Bacillus N117-H are as shown below.

(1)作 用: キトサンに作用し、分子の内部鎖から任意にβ−1,4
結合を分解して、主としてキトサンオリゴ1! (Gl
eN)  (n=2〜8) (2量体〜8量体)を生成
する。キトサンオリゴ糖は高速液体クロマトグラフィー
を用いてキトサン分解液から分層することができる。こ
の分解液におけるキトサンの分解度は約45%である。
(1) Action: Acts on chitosan and optionally removes β-1,4 from the internal chain of the molecule.
By decomposing the bonds, mainly chitosan oligo 1! (Gl
eN) (n=2 to 8) (dimer to octamer) is produced. Chitosan oligosaccharide can be separated from the chitosan decomposition solution using high performance liquid chromatography. The decomposition degree of chitosan in this decomposition liquid is about 45%.

カルボキシメチルセルロース(CMC)にも作用し、あ
る程度はこれを分解するが、キチンには全く作用しない
It also acts on carboxymethyl cellulose (CMC) and decomposes it to some extent, but it has no effect on chitin.

(2)作用温度範囲および最適作用温度:可溶性キトサ
ンを基質とした場合、80°Cまで作用し、最適作用温
度は50°Cである。
(2) Working temperature range and optimal working temperature: When soluble chitosan is used as a substrate, it works up to 80°C, and the optimal working temperature is 50°C.

pH6Jにおいて10分間反応させた場合の温度と比活
性の関係を第1図に示す。
FIG. 1 shows the relationship between temperature and specific activity when reacting for 10 minutes at pH 6J.

(3)作用p+(範囲および最ap)l:pH3〜9の
範囲において作用し、最ap++はpl! 6である。
(3) Effect p+ (range and maximum ap) l: It acts in the pH range of 3 to 9, and the maximum ap++ is pl! It is 6.

1%可溶性キトサンl mllに各pHの緩衝液2rr
Lilおよび酵素液I m/を加えた反応液を376C
において10分間反応させた場合のpHと酵素の比活性
の関係を第2図に示す。
1ml of 1% soluble chitosan and 2rr of each pH buffer
The reaction solution to which Lil and enzyme solution I m/ was added was heated to 376C.
Figure 2 shows the relationship between pH and specific activity of the enzyme when the reaction was carried out for 10 minutes.

(4)熱安定性: 50℃における15分間の保温まで、はぼ安定で、60
°Cにおける15分間の加熱により、酵素の約40%が
失活し、70°Cにおける15分間の加熱により、完全
に失活した。
(4) Thermal stability: Stable for up to 15 minutes at 50°C,
Approximately 40% of the enzyme was inactivated by heating for 15 minutes at 70°C, and completely inactivated by heating for 15 minutes at 70°C.

温度と比活性の関係を第3図に示す。Figure 3 shows the relationship between temperature and specific activity.

(5)pH安定性: 0.1M緩衝液中で30’(:において2時間展層した
後、残存する酵素活性を測定したが、pH5〜11の範
囲において安定であった。pH10〜11において安定
であることは、バチルスNo、7−Hにより生産された
キトサナーゼの大きな特徴の一つである。pHと比活性
の関係を第4図に示す。
(5) pH stability: After spreading for 2 hours at 30' in 0.1M buffer, the remaining enzyme activity was measured, and it was stable in the pH range of 5 to 11. Stability is one of the major characteristics of chitosanase produced by Bacillus No. 7-H. The relationship between pH and specific activity is shown in FIG.

(6)阻害剤: バチルスNo、7 14により生産されたキトサナ−ゼ
は、1×lOMの終濃度のHgC1。
(6) Inhibitor: Chitosanase produced by Bacillus No. 714 was treated with HgC1 at a final concentration of 1×1OM.

PbC1、AgN0  、およびPCMBの存在により
はば100%が阻害された。
The presence of PbC1, AgN0, and PCMB resulted in 100% inhibition.

(7)基質特異性: 種々の基質を使用し、基質の終濃度を0.25%とした
時に、酵素反応液4 wtlj当り酵素蛋白質!rrt
9によって1時間後に遊離する全還元糖とヘキソサミン
のffi(77Lg/TLg蛋白質/時)を測定した。
(7) Substrate specificity: When various substrates were used and the final concentration of the substrate was 0.25%, the enzyme protein per 4 wtlj of the enzyme reaction solution! rrt
The ffi (77 Lg/TLg protein/hour) of total reducing sugars and hexosamine released after 1 hour was measured using 9.

その結果が第1表に示される。The results are shown in Table 1.

(以下余白) 第1表 基質特異性 注) ※:ライシッヒ(Re1551g )法による。(Margin below) Table 1 Substrate specificity Note) *: Based on the Reisig (Re1551g) method.

バチルスNo、 7− Hにより生産されたキトサナー
ゼは、コロイダルキトサン、可溶性キトサンおよびグラ
イコールキトサンをよく分解し、カルボキシメチルセル
ロース(CMC)も若干分解したが、粉末キトサンには
作用しなかった。またコロイダルキチン、グライコール
キチン、粉末キチンおよびメチルセルロースは全く分解
しなかった。
Chitosanase produced by Bacillus No. 7-H degraded colloidal chitosan, soluble chitosan, and glycol chitosan well, and also slightly degraded carboxymethylcellulose (CMC), but had no effect on powdered chitosan. Furthermore, colloidal chitin, glycol chitin, powdered chitin, and methylcellulose were not decomposed at all.

(8)分子量: 5DS−ポリアクリルアミド電気泳動法により分子量を
測定した結果を第5図に示す。第5図において(0)は
バチルスNN11L7−により生産されたキトサナーゼ
の分子量であって、約41 、 OQQである。
(8) Molecular weight: Figure 5 shows the results of measuring the molecular weight by 5DS-polyacrylamide electrophoresis. In FIG. 5, (0) is the molecular weight of chitosanase produced by Bacillus NN11L7-, which is approximately 41 OQQ.

セファデックスG−100を用いたゲル濾過法により分
子量を測定した結果を第6図に示す。第6図において(
○)はバチルスlh7−Mにより生産されたキトサナー
ゼの分子量であって、約30.000である。
The results of molecular weight measurement by gel filtration using Sephadex G-100 are shown in FIG. In Figure 6 (
○) is the molecular weight of chitosanase produced by Bacillus lh7-M, which is approximately 30.000.

(9)#業力価の測定法: IQの粉末キトサン(28メツシユ)を50m/!の0
.1M酢酸水着液に溶解し、O,1M酢酸ナトリウム水
溶液でpl+ 6.0に調整した後、0.1M酢酸Ij
11衝H(pH: 6−0)を加えて、全容をloOm
Jにして、基質の1%可溶性キトサン溶液を調製する。
(9) #Measurement method of karmic power: 50m/! of IQ powdered chitosan (28 mesh)! 0 of
.. Dissolve in 1M acetic acid swimsuit solution, adjust to pl+ 6.0 with O, 1M sodium acetate aqueous solution, and then add 0.1M acetic acid Ij
Add 11 ton of H (pH: 6-0) and evaporate the entire volume.
Prepare a 1% soluble chitosan solution of the substrate in J.

37°Cにおいて5分間ブレインキュベートした基質の
1%可溶性キトサン溶液1rrLβに、同様にブレイン
キュベートした酵素液1rrLβを加え、37°Cにお
いて正確に10分間酵素反応を行なわせる。その後反応
液を3分間煮沸して#累度応を停止させ、反応液中に生
成した還元糖を定量する。
To a 1% soluble chitosan solution 1rrLβ of the substrate that was incubated at 37°C for 5 minutes, an enzyme solution 1rrLβ that was similarly incubated was added, and the enzymatic reaction was carried out at 37°C for exactly 10 minutes. Thereafter, the reaction solution is boiled for 3 minutes to stop the cumulative reaction, and the amount of reducing sugar produced in the reaction solution is quantified.

この条件において1μモルのグルコサミンに相当する還
元塘を遊離させる酵業量を、1単位(unlt)のキト
サナーゼ活性とする。
Under these conditions, the amount of fermentation that liberates a reduced mass equivalent to 1 μmol of glucosamine is defined as 1 unit (unlt) of chitosanase activity.

以下において本発明を参考例、実施例および試験例によ
ってさらに詳しく説明する。
The present invention will be explained in more detail below using reference examples, working examples, and test examples.

参考例1 (種培養の調all) 250 mll容三角フラスコに、酵母エキス0.8%
、ペプトン0.4%、肉エキス0.296、コロイダル
キトサン0・5%を含む液体培地(pH: 7.2) 
 50m1lを入れ、常法により殺菌した後、これに予
め液体培養したバチルス(Bacillus sp−)
 No、 7−M  (FERM P −8139)を
接種し、30°Cにおいて、1日間振とう培養した。
Reference Example 1 (Seed culture preparation) In a 250 ml Erlenmeyer flask, add 0.8% yeast extract.
, a liquid medium containing 0.4% peptone, 0.296% meat extract, and 0.5% colloidal chitosan (pH: 7.2)
Pour 50 ml of water, sterilize it using a conventional method, and add Bacillus sp-, which has been previously cultured in liquid.
No. 7-M (FERM P-8139) was inoculated and cultured with shaking at 30°C for 1 day.

(酵素生産用培養液の調製) 51容三角フラスコ2本に、上記と同一の組成の液体培
地をそれぞれlEずつ入れ、常法により殺菌した後、こ
れに上記で得られた種培養液40rrLlを接種し、3
06Cにおいて、4日間振とう培養した。培養液を6,
000 r、p、mにおいて遠心分票して、菌体を除去
し、得られた上澄液のキトサナーゼの活性を前記の酵素
力価の測定法によって測定した。上g1’e t rn
l当り0.99ffi位であった。
(Preparation of culture solution for enzyme production) Pour 1E each of a liquid medium with the same composition as above into two 51-volume Erlenmeyer flasks, sterilize it by a conventional method, and add 40rrLl of the seed culture solution obtained above to it. Inoculate, 3
The cells were cultured with shaking at 06C for 4 days. 6 culture solution,
The cells were centrifuged at 000 r, p, m to remove the bacterial cells, and the chitosanase activity of the resulting supernatant was measured by the enzyme titer measurement method described above. Upper g1'e trn
It was around 0.99ffi per liter.

(酵素液の精製) 上記で得られた上澄液を混合し、得られた混合液IJI
 j!に固体硫安1,015 jp  (硫安80%飽
利に相当する)を加え、濾過し、得られた沈デン物を蒸
留水に溶解し、177mgとした。この酵素液を蒸留水
、引き続いて、0.02 Mリン酸緩衝液(pH: e
、o)に対して透析した後、得られた酵f液を、予め0
.02 Mリン酸N衝液で平衡化したCM−セファデッ
クスC−50を充填したカラム(2,6Ci(径)X4
5cfIL(長さ)〕に流してキトサナーゼを吸首させ
た。はとんどの不純迅白質は素通り区分に集まっていた
。このカラムを0.02M IJ ン酸MwIfFI1
350 m/! テ洗浄シタm、O〜0.5Mの塩化ナ
トリウムで直線的濃度勾配により酵素出口質を溶出した
(Purification of enzyme solution) The supernatant obtained above was mixed, and the obtained mixture IJI
j! 1,015 jp of solid ammonium sulfate (equivalent to 80% saturation of ammonium sulfate) was added to the mixture, and the mixture was filtered, and the resulting precipitate was dissolved in distilled water to give a total weight of 177 mg. This enzyme solution was mixed with distilled water and subsequently with 0.02 M phosphate buffer (pH: e
After dialysis against , o), the obtained fermentation solution was preliminarily
.. A column (2,6Ci (diameter)
5cfIL (length)] to cause chitosanase to be absorbed. Most of the impure white matter was concentrated in the pass-through section. This column was treated with 0.02M IJ acid MwIfFI1.
350 m/! After washing, the enzyme output material was eluted with a linear gradient of 0 to 0.5M sodium chloride.

次にキトサナーゼ活性を示した第218〜240のフラ
クションを合し、これをダイアフローメンブレンフィル
ターPM−10(アミコン社製品)を用いた限外濾過装
置で17倍に濃縮し、この濃縮液に、セファデックスc
−tooを用いるゲル濾過を行なった。
Next, the 218th to 240th fractions that showed chitosanase activity were combined and concentrated 17 times using an ultrafiltration device using a diaflow membrane filter PM-10 (manufactured by Amicon). sephadex c
Gel filtration using -too was performed.

このゲル濾過のキトサナーゼ活性を示した第50〜63
のフラクションを合し、再びCM−セファデックスC−
50によるカラムクロマトグラフィーを行なった。前回
と同じ条件で酵素を吸善し、0〜0.5Mの塩化ナトリ
ウムで直線的濃度勾配によりM素田白質を溶出した。
Nos. 50 to 63, which showed chitosanase activity of this gel filtration.
Combine the fractions and add again CM-Sephadex C-
Column chromatography using 50 was performed. The enzyme was absorbed under the same conditions as the previous time, and the M Soda white matter was eluted using a linear concentration gradient with 0 to 0.5 M sodium chloride.

参考例2 25〇−容三角フラスコに、キトサン(脱アセチル化度
=99%)5gを取り、これに脱イオン水50−および
IN酢酸27.5−を加え、充分撹拌した後、脱イオン
水を加えて、全量を100mj+にした。
Reference Example 2 5 g of chitosan (degree of deacetylation = 99%) was placed in a 250-capacity Erlenmeyer flask, 50 g of deionized water and 27.5 g of IN acetic acid were added thereto, and after thorough stirring, deionized water was added. was added to make the total amount 100 mj+.

このキトサン酢酸溶液のpHは5.74であった。この
キトサン酢酸溶液を376Cの恒温槽において15分間
ブレインキュベートした。
The pH of this chitosan acetic acid solution was 5.74. This chitosan acetic acid solution was incubated in a thermostat at 376C for 15 minutes.

これとは別に、参考例1のCM−セファデツクスC−5
0によるカラムクロマトグラフィーで得たキトサナーゼ
溶液を希釈して、10.5 unit /1rdlとし
、そのlO−を試験管に取り、前記と同様にブレインキ
ュベートし、これを前記のキトサン酢酸溶液に加え、3
7℃の恒温槽において反応させた。1時間40分後に三
角フラスコを沸とう浴に6分間入れ、反応液を加熱して
反応を停止させた。
Apart from this, CM-Sephadex C-5 of Reference Example 1
Dilute the chitosanase solution obtained by column chromatography with 0 to 10.5 units/1rdl, take the 1O- into a test tube, incubate in the same manner as above, add this to the chitosan acetic acid solution, 3
The reaction was carried out in a constant temperature bath at 7°C. After 1 hour and 40 minutes, the Erlenmeyer flask was placed in a boiling bath for 6 minutes to heat the reaction solution and stop the reaction.

反応液の還元糖の生成量を、D−グルコサミン塩酸塩を
標準試料として、測定し、22.5■/rniの結果を
得た。反応液を遠心分層し、さらに濾紙で濾過した後、
凍結乾燥して、6.18.9’のキトサンオリゴ話粉末
を得た。
The amount of reducing sugar produced in the reaction solution was measured using D-glucosamine hydrochloride as a standard sample, and a result of 22.5 μ/rni was obtained. After centrifuging the reaction solution and filtering it with filter paper,
After freeze-drying, 6.18.9' chitosan oligo powder was obtained.

反応液の一部を高速液体クロマトグラフィーにかけて、
キトサンオリゴ塘の重合度別の生成量を調べた。
A portion of the reaction solution was subjected to high performance liquid chromatography,
The amount of chitosan oligomer produced depending on the degree of polymerization was investigated.

その結果は第7図に示すとおりであった。The results were as shown in FIG.

第7図において、ヨコ軸はキトサンオリゴ着の重合度で
あり、そのタテ軸は生成したキトサンオリゴ粘における
それぞれの重合度のキトサンオリゴ1の含有比率(%)
である。第7図におけるそれぞれの重合度のキトサンオ
リゴ曹の含有比率は棒グラフの面積比によって示される
In Figure 7, the horizontal axis is the degree of polymerization of the chitosan oligo attached, and the vertical axis is the content ratio (%) of chitosan oligo 1 at each degree of polymerization in the generated chitosan oligo viscosity.
It is. The content ratio of chitosan oligocarbonate of each degree of polymerization in FIG. 7 is shown by the area ratio of the bar graph.

参考例3 IN酢酸27.5−の代りに、IN乳酸31−を使用し
たこと以外は、参考例2と同様にして、p)I5.74
のキトサン乳酸溶液をつくり、これを参考例2と同様に
して、反応液の還元IFflを測定し、キトサンオリゴ
塘の重合度別の生成量を調べ、そしてキトサンオリゴ糎
の粉末を得た。
Reference Example 3 p) I5.74 was prepared in the same manner as Reference Example 2 except that IN lactic acid 31- was used instead of IN acetic acid 27.5-.
A chitosan lactic acid solution was prepared, and the reduced IFfl of the reaction solution was measured in the same manner as in Reference Example 2. The amount of chitosan oligo paste produced depending on the degree of polymerization was examined, and chitosan oligo starch powder was obtained.

6時間の反応における反応液の還元糖の生成量は24.
3■/艷であり、そしてキトサンオリゴ琥の収量は6.
9211であった。
The amount of reducing sugar produced in the reaction solution in a 6-hour reaction was 24.
3■/艷, and the yield of chitosan oligosaccharide is 6.
It was 9211.

キトサンオリゴ塘の重合度別の生成量の測定の結果は第
8図に示すとおりであった。
The results of measuring the amount of chitosan oligomers produced depending on the degree of polymerization are shown in FIG.

第8図において、ヨコ軸はキトサンオリゴ替の重合度で
あり、そのタテ軸は生成したキトサンオリゴ糖における
それぞれの重合度のキトサンオリゴ曹の含有比率(%)
である。第8図におけるそれぞれの重合度のキトサンオ
リゴ粘の含有比率は棒グラフの面積比によって示される
In Figure 8, the horizontal axis shows the degree of polymerization of the chitosan oligosaccharide, and the vertical axis shows the content ratio (%) of chitosan oligocarbonate at each degree of polymerization in the produced chitosan oligosaccharide.
It is. In FIG. 8, the content ratio of chitosan oligo viscosity for each degree of polymerization is shown by the area ratio of the bar graph.

次に試験例、実施例および比較例を挙げて、本発明をさ
らに詳しく説明するが、本発明はこれらの例示に限定さ
れるものではない。
Next, the present invention will be explained in more detail with reference to Test Examples, Examples, and Comparative Examples, but the present invention is not limited to these examples.

試験例 (1)試料 (1−1)L−3試料 参考例3の方法で得たキトサンオリゴ[15gを取り、
これにIN乳酸85m71を加え、充分撹拌した後、脱
イオン水を加えて、全量を150−とじ、キトサンオリ
ゴ刻の乳酸塩の10%水浴液を調製した。
Test Example (1) Sample (1-1) L-3 Sample Chitosan oligo obtained by the method of Reference Example 3 [15 g was taken,
After adding 85 ml of IN lactic acid and stirring thoroughly, deionized water was added and the total volume was adjusted to 150 mL to prepare a 10% water bath solution of lactate of minced chitosan oligo.

(1−2)A−5試料 参考例2の方法で得たキトサンオリゴ[15/iを取り
、これにIN酢酸30−を加え、充分撹拌した後、脱イ
オン水を加えて、全量を+50 rniとし、キトサン
オリゴ諧の酢酸塩の10%水溶液を調製した。
(1-2) Take the chitosan oligo [15/i] obtained by the method of Sample Reference Example 2 of A-5, add 30% of IN acetic acid to it, stir thoroughly, add deionized water, and bring the total amount to +50%. A 10% aqueous solution of acetate of chitosan oligo was prepared as rni.

(1−3)グリセリン グリセリンの10%水啓液、 (1−4)  1.3−ブチレングリコール1.3−ブ
チレングリコールの10%水溶液、(2)試験方法 試料2μlをマイクロシリンジに取り、これを暢紙(I
XI偲)に塗布し、25℃の温度および50%の相対湿
度の恒温恒温の室内で、RG型電気天秤〔カーノ(Ca
hn)社製〕により、この濾紙の重量変化を調べ、次式
における水分蒸発速度定数(k)を算出した。
(1-3) 10% aqueous solution of glycerin, (1-4) 1.3-butylene glycol 10% aqueous solution of 1.3-butylene glycol, (2) Test method Take 2 μl of the sample into a microsyringe, and The paper (I)
XI 偲) was coated on an RG type electric balance [Ca No (Ca No.
The weight change of this filter paper was investigated using the following method (manufactured by H.H.H.N.), and the water evaporation rate constant (k) was calculated using the following formula.

ΔW k=− (W:試料の重量、△W:1分当 りの試料の減少した重ff1) 測定は各試料について3回行ない、その平均値を算出し
た。
ΔW k=− (W: weight of sample, ΔW: weight decreased by ff1 of sample per minute) The measurement was performed three times for each sample, and the average value was calculated.

対照試料として、保湿剤を加えない精製水について同様
の試験を行なった。
As a control sample, a similar test was conducted using purified water without added humectant.

(3)試験結果 試験結果は第1表に示すとおりであった。(3) Test results The test results were as shown in Table 1.

kの値が小さいものは水分の蒸発速度が遅く、保湿性が
高い。
Materials with a small k value have a slow water evaporation rate and high moisture retention.

第1表によると、キトサンオリゴ式のL−3試料はグリ
セリンと同程度の保湿性を有し、またキトサンオリゴ式
のA−5試料は1.3−ブチレングリコールと同程度の
保湿性を寵することがわかる。
According to Table 1, the chitosan oligo type L-3 sample has the same level of moisture retention as glycerin, and the chitosan oligo type A-5 sample has the same level of moisture retention as 1,3-butylene glycol. I understand that.

実施例1 下記の処方により栄養クリームを調製した。Example 1 A nutritional cream was prepared according to the following formulation.

(1)スクワラン           8.0%(2
)2−エチルへキシルパルミテート 3.0%(3)ラ
ノリンアルコール       2.096(4)ショ
ートニングオイル      3.0%(5) ミツロ
ウ             2・0%(6)マイクロ
クリスタリンワックス  2.0%(7)セタノール 
           2.5%(8)ポリオキシエチ
レン(20)ソルビタンモノステアレート      
  2.0%(9)プロピレングリコールモノステアレ
ート(lO)香料        0.296(11)
キトサンオリゴ糖(参考例3)   8.096(12
)メチルバラヘン0.296 (13)M製水              残り上記
の処方の(It )〜(I3)の成分を70℃に加熱し
て水相を調製し、上記の処方の(1)〜(10)の成分
を加熱して融解した後、これに香料を加え、70°Cに
保持して油相を調製した。水相に油相を加え、ホモミキ
サーで均一に乳化し、その乳化後、よく撹拌しながら、
30℃まで冷却して製品の栄養クリームを調製した。
(1) Squalane 8.0% (2
) 2-ethylhexyl palmitate 3.0% (3) Lanolin alcohol 2.096 (4) Shortening oil 3.0% (5) Beeswax 2.0% (6) Microcrystalline wax 2.0% (7) Setanol
2.5% (8) polyoxyethylene (20) sorbitan monostearate
2.0% (9) Propylene glycol monostearate (lO) fragrance 0.296 (11)
Chitosan oligosaccharide (Reference example 3) 8.096 (12
) Methylbarahen 0.296 (13) M water The remaining components (It) to (I3) of the above formulation were heated to 70°C to prepare the aqueous phase, and the remaining components (1) to (10) of the above formulation were heated to 70°C. After heating and melting the ingredients, perfume was added thereto and maintained at 70°C to prepare the oil phase. Add the oil phase to the water phase and homogeneously emulsify it with a homomixer. After the emulsification, while stirring well,
The product nutritional cream was prepared by cooling to 30°C.

比較例1 実施例1の処方において、キトサンオリゴ替の代りにグ
リセリンを使用し、実施例1と同様にして、栄養クリー
ムを調製した。
Comparative Example 1 A nutritional cream was prepared in the same manner as in Example 1 except that glycerin was used instead of chitosan oligo in the formulation of Example 1.

比較例2 実施例1の処方において、キトサンオリゴ塘の代りに、
1.3−ブチレングリコールを使用し、実施例1と同様
にして栄養クリームを調製した。
Comparative Example 2 In the formulation of Example 1, instead of chitosan oligotang,
A nutritional cream was prepared in the same manner as in Example 1 using 1.3-butylene glycol.

試験例2 実施例11比較例!および比較例2の製品の栄養クリー
ムを等間パネラー20名が使用し、下記の(A)〜(C
)の項目毎に各5段階の評点評価ルア千fX −q  
? − (評点評価) (A)使用直後の肌のべたつき l:べたつく、 2:ややべたつく、 3:普通、 4:ややさっばりする、 5:さっばりする、 (n)肌のしっとりさ I:がさつく、 2:ややがさつく、 3:普通、 4:ややしっとりする、 5:しっとりする、 (C)翌朝の肌のしっとりさ 1:がさつく、 2:ややがさつく、 3:普通、 4:ややしっとりする、 5:しっとりする、 試験の結果は第2表に示すとおりであった。
Test Example 2 Example 11 Comparative Example! The nutritional cream of the product of Comparative Example 2 was used by 20 panelists, and the following (A) to (C)
) 5-level rating for each item Lua 1,000 fX -q
? - (Rating evaluation) (A) Stickiness of the skin immediately after use L: Sticky, 2: Slightly sticky, 3: Average, 4: Slightly light, 5: Light, (n) Moistness of the skin I: Dry, 2: Slightly rough, 3: Average, 4: Slightly moist, 5: Moist, (C) Moistness of the skin the next morning 1: Rough, 2: Slightly rough, 3: Average , 4: Slightly moist, 5: Moist The test results are as shown in Table 2.

第2表における記号は、各項目毎のパネラ−20名の評
点の平均値を次のとおりに表わしたものである。
The symbols in Table 2 represent the average scores of the 20 panelists for each item as follows.

記 号  パネラ−20名の評点の平均値■   ” 
 4.5〜5.0 0    3.5〜4.4 Δ     2.5〜3.4 ×1@5〜2.4 X X     1.0〜1.4 第2表によると、実施例1の製品は、グリセリンを使用
した比較例1の製品および1,3−ブチレングリコール
を使用した比較例2の製品の栄養クリームよりもすぐれ
た使用感覚を有することがわかる。
Symbol Average score of 20 panelists■ ”
4.5-5.0 0 3.5-4.4 Δ 2.5-3.4 ×1@5-2.4 X X 1.0-1.4 According to Table 2, in Example 1 It can be seen that the product has a better feel in use than the nutritional creams of the product of Comparative Example 1 using glycerin and the product of Comparative Example 2 using 1,3-butylene glycol.

実施例2 下記の処方により化粧水を調製した。Example 2 A lotion was prepared according to the following formulation.

(1)キトサンオリゴ箇       20.0%(重
合度6〜8、グルタミン酸塩) (2)95%エタノール        10.0%(
3)ポリオキシエチレン ソルビタンラウレート      1.0%(4)香B
         O,1%(5)メチルパラベン  
       0.1%(6)精製水        
     残り(1)を(6)に均一に溶解し、これに
(2)、(3) 、(4)および(5)を均一に溶解し
たものを添加し、撹拌可溶化した後、濾過して製品の化
粧水を調製した。
(1) Chitosan oligo 20.0% (degree of polymerization 6-8, glutamate) (2) 95% ethanol 10.0% (
3) Polyoxyethylene sorbitan laurate 1.0% (4) Fragrance B
O, 1% (5) Methylparaben
0.1% (6) Purified water
The remaining (1) was uniformly dissolved in (6), and the uniformly dissolved solutions of (2), (3), (4) and (5) were added thereto, solubilized by stirring, and then filtered. The product lotion was prepared.

実施例2の製品は使用時にべとつきを感じることがなく
、肌をしっとりとさせるものであった。
The product of Example 2 did not feel sticky when used and left the skin moist.

実施例3 下記の処方により化粧水を調製した。Example 3 A lotion was prepared according to the following formulation.

(1)95%エタノール        8.0%(2
)グリセリン         3.0%(3)プロピ
レングリフール     3.0%(4)キトサンオリ
ゴMO番5% (重合度2〜3) (5)し−アルギニン        0.82%(6
)  EDTAジナトリウム       0.01%
(7)ポリオキシエチレン(20) オレイルアルコールエーテル  0.8%(8)香a 
       O,1% (9)メチルパラベン        0.1%(10
)HJ製氷           残り(2)、(3)
 、(5)、(6)および(10)を均一に溶解したも
のに(4)を添加し、よく撹拌した後、これに(1)、
(7)、(8)、(9)を均一に溶解したものを添加し
、撹拌可溶化した後濾過して製品の化粧水を調製した。
(1) 95% ethanol 8.0% (2
) Glycerin 3.0% (3) Propylene Glyfur 3.0% (4) Chitosan Oligo MO No. 5% (degree of polymerization 2-3) (5) Arginine 0.82% (6)
) EDTA disodium 0.01%
(7) Polyoxyethylene (20) Oleyl alcohol ether 0.8% (8) Fragrance a
O, 1% (9) Methylparaben 0.1% (10
) HJ ice making remaining (2), (3)
, (5), (6) and (10) were uniformly dissolved, and after stirring well, (1),
A homogeneous solution of (7), (8), and (9) was added, stirred and solubilized, and then filtered to prepare a product lotion.

実施例3の製品はなめらかな使用感触をもち肌に潤いを
与えるものであった。
The product of Example 3 had a smooth feel and moisturized the skin.

実施例4 下記の処方によりヘアークリームをwI製した、(1)
セタノール           2.0%(2)ワセ
リン            2.0%(3)スクワラ
ン          8.0%(4)ポリオキシエチ
レン(25) オレイルアルコールエーテル  2.0%(5)グリセ
リンモノステアレート  1.5%(6)プロピレング
リコール     5.0%(7)キトサンオリゴ塘 (重合度4〜5、酢酸塩)1.0% (8)L−リジン          l・7%(9)
キサンチンガム        0.1%(10)香料
       0.1% (I+)プロピルパラベン       0.1%(1
2)精製水            残り(6) N 
 (8) N  (+2)を70℃で均一に溶解し、(
7)および(9)を加え、よく撹拌溶解させ水相を調製
し、別に(1)〜(5)  (10)(!l)を70°
Cで均一に溶解し、これを上記水相に加え、ホモミキサ
ーにて乳化処理した後、よくかきまぜながら冷却して製
品のへアークリームを調製した。
Example 4 A hair cream was made wI according to the following formulation (1)
Setanol 2.0% (2) Vaseline 2.0% (3) Squalane 8.0% (4) Polyoxyethylene (25) Oleyl alcohol ether 2.0% (5) Glycerin monostearate 1.5% (6 ) Propylene glycol 5.0% (7) Chitosan oligoton (degree of polymerization 4-5, acetate) 1.0% (8) L-lysine 1.7% (9)
Xanthine gum 0.1% (10) Fragrance 0.1% (I+) Propylparaben 0.1% (1
2) Purified water remaining (6) N
(8) Dissolve N (+2) uniformly at 70°C and (
Add 7) and (9), stir well to dissolve and prepare an aqueous phase, and separately add (1) to (5) (10) (!l) at 70°
The mixture was uniformly dissolved in C, added to the aqueous phase, emulsified in a homomixer, and then cooled while stirring thoroughly to prepare a hair cream product.

実施例4の製品はべたつかず、髪をしっとりとさせるも
のであった。
The product of Example 4 was non-greasy and moisturized the hair.

実施例5 下記の処方によりクリームリンスを調製した。Example 5 A cream rinse was prepared according to the following recipe.

(1)セタノール           2.0%(2
)グリセリンモノステアレート3.0%(3)ポリエチ
レングリコール 1500     2.0% (4)ポリオキシグリセリン モノバルミテート1.096 (5)ポリオキシグリセリン トリイソステアレート     1.0%(6)香料 
      0.3% (7)メチルパラベン        0.1%(8)
キトサンオリゴ着       3.0%(重合度4〜
5、塩酸塩) (9)トリメチルステアリル  ゛ アンモニウムクロリド     5.0%(10) ク
エン酸           !、096(11)精製
水           残り(8)〜(11)を70
°Cで均一溶解し、水相を調製し、また、(1)〜(7
)を70°Cで均一溶解して、油相を調製し、水相に油
槽を添加しホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくか
きまぜながら冷却して、製品のクリームリンスを調製し
た。
(1) Setanol 2.0% (2
) Glycerin monostearate 3.0% (3) Polyethylene glycol 1500 2.0% (4) Polyoxyglycerin monobalmitate 1.096 (5) Polyoxyglycerin triisostearate 1.0% (6) Fragrance
0.3% (7) Methylparaben 0.1% (8)
Chitosan oligo 3.0% (polymerization degree 4~
5. Hydrochloride) (9) Trimethylstearyl ammonium chloride 5.0% (10) Citric acid! , 096 (11) Purified water 70% of the remaining (8) to (11)
Dissolve homogeneously at °C to prepare an aqueous phase, and also (1) to (7)
) was uniformly dissolved at 70°C to prepare an oil phase, an oil bath was added to the aqueous phase and homogeneously emulsified with a homomixer, and after emulsification, the product was cooled while stirring thoroughly to prepare a cream rinse for the product.

実施例5の製品は使用感触がなめらかで、髪に潤いを与
えるものであった。
The product of Example 5 had a smooth feel and moisturized the hair.

実施例6 下記の処方により口紅を調製した。Example 6 A lipstick was prepared according to the following formulation.

(1)ヒマシ油           50%(2)イ
ソステアリン酸 ジグリセライド        10%(3)キャンデ
リラロウ        8%(4)固形パラフィン 
       to%(5)  POE  (20) 
POP  (20)2テトラデシルオクタデシル エーテル            4%(6)赤色20
2号          1.5%(7)酸化チタン 
          1%(8)赤酸化鉄      
      s、596(9)黄酸化鉄       
     1%(10)精製水           
 10%(11)キトサンオリゴ塘 (重合度3〜4、乳酸塩)396 (1)〜(5)を80℃で均一に溶解し、(6)〜(9
)を加えて分散し、さらに(lO)と(11)を加えて
乳化し、撹拌を続けながら成型容器に充填し、冷却して
口紅を調製した。
(1) Castor oil 50% (2) Isostearic acid diglyceride 10% (3) Candelilla wax 8% (4) Solid paraffin
to% (5) POE (20)
POP (20) 2tetradecyl octadecyl ether 4% (6) Red 20
No. 2 1.5% (7) Titanium oxide
1% (8) red iron oxide
s, 596(9) yellow iron oxide
1% (10) purified water
10% (11) chitosan oligoton (degree of polymerization 3-4, lactate) 396 (1) to (5) were uniformly dissolved at 80°C, and (6) to (9
) was added and dispersed, and (lO) and (11) were further added to emulsify, filled into a molding container while stirring, and cooled to prepare a lipstick.

実施例6の製品は使用時にべたつかず唇をしっとりさせ
るものであった。
The product of Example 6 was non-sticky and moisturized the lips upon use.

実施例7 下記の処方により固形ファンデーションを調製した。Example 7 A solid foundation was prepared according to the following formulation.

(1)マカデミアナツツオイル    2596(2)
ワセリン            596(3)セレシ
ン           596(4)  POE  
(10)  POP  (15)2ドデシルヘキサデシ
ル エーテル            4%(5ンカオリン
            15%(6)マイカ    
        20%(7)酸化チタン      
    8%(8)赤酸化鉄           1
%(9)黄酸化鉄           3%(lO)
バラオキシ安息香酸メチル   O,196(11)香
料       0・1% (12)精製水           1000%(1
3)キトサンオリゴw!3% (1)〜(4)を80℃で均一に溶解し、(5)〜(l
O)を加えて分散し、さらに(12)と(13)をくわ
えて乳化し、撹拌を続けながら(11)を添加した後、
容器に流し込み冷却して固形ファンデーションを調製し
た。
(1) Macadamia nut oil 2596 (2)
Vaseline 596 (3) Ceresin 596 (4) POE
(10) POP (15) 2-dodecylhexadecyl ether 4% (5-kaolin 15% (6) Mica
20% (7) Titanium oxide
8% (8) red iron oxide 1
%(9) Yellow iron oxide 3%(lO)
Methyl roseoxybenzoate O, 196 (11) Fragrance 0.1% (12) Purified water 1000% (1
3) Chitosan oligo lol! 3% (1) to (4) were uniformly dissolved at 80°C, and (5) to (l
O) was added and dispersed, and (12) and (13) were added to emulsify, and while stirring was continued, (11) was added.
A solid foundation was prepared by pouring into a container and cooling.

実施例7の製品は使用時にべたつきを感することがなく
肌をしっとりとさせるものであった。
The product of Example 7 did not feel sticky upon use and left the skin moist.

〔発明の効果〕〔Effect of the invention〕

化粧料にキトサンオリゴ蔚を配合することにより、化粧
料にべとつきを与えることなく、高い保湿性およびなめ
らかな使用感覚を与えることができ、化粧料を使用した
皮膚や毛髪などに温和で良好な潤いと保湿性を与え、ま
たその皮膚や毛髪などを柔軟にし、さらにしっとりとさ
せることができる。
By blending chitosan oligogel into cosmetics, it is possible to give the cosmetics high moisturizing properties and a smooth feeling of use without making them sticky, providing mild and good moisture to the skin and hair used in the cosmetics. It provides moisturizing properties and makes the skin and hair soft and moisturized.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

第1図は、バチルスNo、7−Mにより生産されたキト
サナーゼにおける温度と比活性の関係を示す図表、第2
図は、バチルス11h7−Hにより生産されたキトサナ
ーゼにおけるpHと比活性の関係を示す図表、第3図は
、バチルスtk 7− Hにより生産されたキトサナー
ゼにおける温度と比活性の関係を示す図表、第4図は、
バチルスN17− Hにより生産されたキトサナーゼに
おけるpHと比活性の関係を示す図表、第5図は、バチ
ルス1tlo、7−Hにより生産されたキトサナーゼの
電気泳動法による分子量を示す図表、そして第6図は、
バチルス1!lL7− Mにより生産されたキトサナー
ゼのゲル濾過法による分子量を示す図表であり、第7図
は、参考例2で得たキトサンオリゴ普のD−グルコサミ
ンの重合度分布を示す図表、そして第8図は、参考例3
で得たキトサンオリゴ塘のD−グルコサミンの重合度分
布を示す図表である。
Figure 1 is a diagram showing the relationship between temperature and specific activity of chitosanase produced by Bacillus No. 7-M;
The figure is a diagram showing the relationship between pH and specific activity in chitosanase produced by Bacillus 11h7-H. Figure 3 is a diagram showing the relationship between temperature and specific activity in chitosanase produced by Bacillus tk7-H. Figure 4 is
Figure 5 is a diagram showing the relationship between pH and specific activity of chitosanase produced by Bacillus N17-H, and Figure 6 is a diagram showing the molecular weight by electrophoresis of chitosanase produced by Bacillus 1tlo, 7-H. teeth,
Bacillus 1! FIG. 7 is a chart showing the molecular weight of chitosanase produced by 1L7-M by gel filtration method, FIG. is reference example 3
FIG. 2 is a chart showing the degree of polymerization distribution of D-glucosamine in the chitosan oligotang obtained in FIG.

Claims (4)

【特許請求の範囲】[Claims] (1)キトサンオリゴ糖を配合することを特徴とする化
粧料。
(1) A cosmetic characterized by containing chitosan oligosaccharide.
(2)キトサンオリゴ糖が、D−グルコサミンの重合度
が2〜8のキトサンオリゴ糖であることを特徴とする特
許請求の範囲第1項に記載の化粧料。
(2) The cosmetic according to claim 1, wherein the chitosan oligosaccharide is a chitosan oligosaccharide in which the degree of polymerization of D-glucosamine is 2 to 8.
(3)キトサンオリゴ糖が、キトサンを、バチルス属に
属する微生物により生産され、pH5〜11の領域にお
いて安定なキトサナーゼにより分解して得られたもので
あることを特徴とする特許請求の範囲第1項または第2
項に記載の化粧料。
(3) The first claim characterized in that the chitosan oligosaccharide is obtained by decomposing chitosan with chitosanase, which is produced by a microorganism belonging to the genus Bacillus and is stable in the pH range of 5 to 11. term or second
Cosmetics listed in section.
(4)バチルス属に属する微生物が、バチルスNo.7
−M(微工研菌寄第8139号)であることを特徴とす
る特許請求の範囲第3項に記載の化粧料。
(4) The microorganism belonging to the genus Bacillus is Bacillus no. 7
-M (Feikoken Bokuyori No. 8139), the cosmetic according to claim 3.
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