JPS62269045A

JPS62269045A - メタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定方法

Info

Publication number: JPS62269045A
Application number: JP61112682A
Authority: JP
Inventors: Tomotsugu Kamiyama; 智嗣上山; Satoru Isoda; 悟磯田
Original assignee: Mitsubishi Electric Corp
Current assignee: Mitsubishi Electric Corp
Priority date: 1986-05-19
Filing date: 1986-05-19
Publication date: 1987-11-21

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕この発明は、メタン菌を有する被検体におけるメタン菌
の菌数またはメタン生成活性を測定する方法に関し、特
に下水処理システムのメタン醗酵槽内等における、多数
の微生物群および消化：・η泥等の異物の中に存在する
メタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定にも適用で
きる方法に関する。

〔従来の技術〕

第１４図は例えば柳田友道編「微生物学実験法」、講談
社、１９７５年、Ｐ、２０６に示された微生物濃度を測
定する装置を改変したものの概念図であり、同図におい
て、１０１は微生物を有する被検体、１０２は光源、１
０３はこの光源１０２に電圧を印加する電源、１０４は
被検体１０１を介して光源１０２に対向配置された光電
子増倍管、１０５はこの光電子増倍管１０４に電圧を印
加する電源、１０６は光電子増倍管１０４の光電流を測
定する検出部である。

次に、従来の測定方法について説明する。光源１０２か
ら発する光は微生物を有する被検体１０１を透過して、
この透過光が光電子増倍管１０４により受光され、その
強度が光電子増倍管１０４の光電流値として検出部１０
６により測定される。

このようにして得られる、可視光を光源として用いた場
合の吸光度と被検体１０１に存在する微生物濃度との間
には一定の関係が成り立つため、吸光度を測定すること
により微生物濃度が評価でき、その結果あるいはそれに
関連して菌数または微生物の′活性が評価できる。

また、微生物の活性を測定する他の方法として、微生物
に含まれるＡＴＰ　（アデノシン　トリフォスフエイト
）　　（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　Ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔ
ｅ）あるいはＮＡＤ（Ｐ）Ｈにコチンアミド　アデニン
　ジヌクレオチド（フォスフエイト）　　（Ｎｉｃｏｔ
ｉｎａｍｉｄｅａｄｅｎｉｎｅ　Ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉ
ｄｅ　（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ））　　というエネルギー
代謝に係わる生体物質の量を光学的に測定する方法があ
った。

〔発明が解決しようとする問題点〕

従来の微生物の菌数または活性の測定方法は以上のよう
に、被検体の吸光度を測定する方法であるため、被検体
が一種類の微生物により構成され、かつ汚泥等の異物が
含まれていない場合には有効であるが、例えばメタン醗
酵槽内の被検体等のような被検体が多種類の微生物によ
り構成され、かつ異物が含まれている場合で、それらの
物質により光が吸収され、光が散乱され、螢光が放射さ
れる場合、その中から測定したい特定種類の微生物の菌
数または活性を選択的に計測することは不可能であり、
またＡＴＰやＮＡＤ（Ｐ）Ｈはすべての微生物に存在す
る生体物質であるため、メタン菌のみの菌数またはメタ
ン生成活性の測定には不適当であり、しかも微生物の細
胞外に溶存しているＡＴＰやＮＡＤ（Ｐ）Ｈさらには他
の溶存物質とその微生物の細胞内のＡＴＰやＮＡＤ（Ｐ
）Ｈの区別を連続的に行なうことは困難であるなどの問
題点があった。

この発明は上記のような問題点を解消するためになされ
たもので、多種類の微生物や異物およびメタン菌を含ん
でいる被検体を用いてもメタン菌の菌数またはメタン生
成活性を高精度で且つ高感度で計測可能にならしめるメ
タン菌の菌数またはメタン生成活性の測定方法を得るこ
とを目的とする。

〔問題点を解決するだめの手段〕

この発明に係るメタン菌の菌数またはメタン生成活性の
測定方法は、メタン菌を有する被検体から採取した第１
の被検体にメタン菌体内にあるメタン菌固有の特定螢光
物質を菌体外に抽出する添加液を加え混合して抽出処理
液とし、この抽出処理液からメタン菌を含む所定粒径以
上の固体粒子を取除く固液分離操作をして特定螢光物質
を含む抽出・分離処理液とし、この抽出・分離処理液に
第１の特定波長領域の励起光を照射することにより抽出
・分離処理液から放射される第２の特定波長領域の螢光
の強度を測定して第１の測定値を得、同じ被検体から採
取した第２の被検体に固液分離操作をして固液分離処理
液を得、この固液分離処理液に添加液を加え混合して分
離・抽出処理液を得、この分離・抽出処理液に第１の特
定波長領域の励起光を照射することにより分離・抽出処
理液から放射される第２の特定波長領域の螢光の強度を
測定して第２の測定値を得、第１および第２の測定値に
基づき所定のデータ処理を行って被検体内のメタン菌の
菌数またはメタン生成活性の計測値を得るようにデータ
処理を行うようにしたちのである。

この発明の他の発明に係るメタン菌の菌数またはメタン
生成活性の測定方法は、メタン菌を有する被検体から採
取した第１の被検体に熱を加えてメタン国体内にあるメ
タン菌固有の特定螢光物質を菌体外に抽出して抽出処理
液を得、次にこの抽出処理液からメタン菌を含む所定粒
径以上の固体粒子を取除く固液分離操作をして特定螢光
物質を含む抽出・分離処理液を得、この抽出・分離処理
液に第１の特定波長領域の励起光を照射することにより
抽出・分離処理液から放射される第２の特定波長領域の
螢光の強度を測定して第１の測定値を得、同じ被検体か
ら採取した第２の被検体に固液分離操作をして固液分離
処理液を得、この固液分離処理液に熱を加えて分離・抽
出処理液を得、この分離・抽出処理液に第１の特定波長
領域の励起光を照射することにより分離・抽出処理液か
ら放射される第２の特定波長領域の螢光の強度を測定し
て第２の測定値を得、第１および第２の測定値に基づき
所定のデータ処理を行って被検体内のメタン菌の菌数ま
たはメタン生成活性の計測値を得るデータ処理を行うよ
うにしたものである。

〔作用〕

この−発明におけるメタン菌の菌数またはメタン生成活
性の測定方法は、被検体内のメタン菌のエネルギー代謝
系に存在する電子伝達系の中で電子キャリアとして機能
する例えばＦ４□。等のようなメタン菌に固有の特定螢
光物質をメタン菌外に抽出するために用いられる添加液
を第１の被検体に加えたり又は第１の被検体を加熱した
りして得た抽出処理液では、第１の被検体中のメタン菌
体内にあった特定螢光物質がメタン菌体外に抽出されて
いるので螢光測定時における螢光強度を増加させ、この
抽出処理液からメタン菌を含む所定粒径以上の固体粒体
を取除く固液分離操作をして抽出・分離処理液を得、被
検体中の固体粒子を取除いたこの抽出・分離処理液には
、メタン菌体中からメタン菌体外に抽出された特定螢光
物質とメタン菌体外にすでにあった水溶性物質が含まれ
、第１の被検体と同じ成分を含み且つメタン菌を含む第
２の被検体を固液分離操作してメタン菌を含む所定粒径
以上の固体粒子を除去した菌体外の水溶性物質を含む固
液分離処理液を得、この固液分離処理液に添加液または
熱を加えて抽出処理することにより分離・抽出処理液を
得、この分離・抽出処理液には、先に固液分離してメタ
ン菌を取除いてあり、後に抽出処理しても実質上特定螢
光物質が抽出されていなく、これら抽出・分離処理液と
分離・抽出処理液の両液に特定波長領域の励起光を照射
することにより、それらの両液から特定波長領域の螢光
が各々放射されるので、これら各特定波長領域の螢光の
強度を測定し、これら螢光の強度測定値がメタン菌体内
にあった特定螢光物質の量と所定の関係を存するのでそ
れらの螢光の強度測定値に基づき所定のデータ処理を行
うことにより第１および第２の被検体をサンプルした被
検体中のメタン菌の菌数またはメタン生成活性を計測す
る。

〔実施例〕

以下、この発明の一実施例を図について説明する。

まず、この発明の実施例を理解し易くするためにこの発
明の原理的なことについて触れる。被検体内のメタン菌
のエネルギー代謝系に存在する電子伝達系の中で電子キ
ャリアとして機能する例えばＦ４Ｚ。等のようなメタン
菌に固有の特定螢光物質をメタン菌体外に抽出するため
に用いられる添加液（および／または熱）が被検体から
採取したメタン菌を含む第１の被検体に加えられる。こ
の抽出処理によって得られた抽出処理液は上記第１の被
検体中のメタン菌体内にあった上記特定螢光物質がメタ
ン菌体外に抽出されているので螢光の測定時における螢
光強度を増加させる。この抽出処理液をろ過作用により
ろ過して（または、それに他の固液分離操作をして固液
分離が行なわれ、メタン菌を含む所定粒径以上の固体粒
子を取除いた抽出・分離処理液が得られる。第１の被検
体中の所定の粒径以上の固体粒子を取除いたこの抽出・
分離処理液は、メタン菌体中からメタン菌体外に抽出さ
れた上記特定螢光物質と被検体の状態でメタン菌体外に
すでにあった水溶性物質を含んでいる。上記被検体から
採取したメタン菌を含む第２の被検体はろ過作用でろ過
される（または、他の固液分離操作が行なわれる）。こ
れにより上記第２の被検体中のメタン菌を含む所定粒径
以上の固体粒子を除いた菌体外の水溶性物質を含む固液
分離処理液を得ることができる。この固液分離処理液に
上記添加液（および／または、熱）が加えられて、分離
・抽出処理液が得られる。抽出・分離処理液と分離・抽
出処理液の両液に特定波長領域の励起光が照射されるこ
とにより、それらの両液から特定波長領域の螢光が各々
放射される。これら各特定波長領域の螢光の強度が測定
され、これら螢光の強度測定値がメタン菌体内にあった
特定螢光物質の量と所定の関係（例えば比例関係）を有
し、特定螢光物質の量はメタン菌の菌数またはメタン生
成活性と所定の関係を有するので、それらの螢光の強度
測定値に基づき所定のデータ処理を行うことにより第１
および第２の被検体をサンプルした被検体中のメタン菌
の菌数またはメタン生成活性を計測することができる。

ところでメタン菌は通常の微生物と異なる生理的性質を
持ち、メタン菌のエネルギー代謝に関与している電子伝
達系に関してはまだその全容は不明であるが、メタン菌
′に固有なものであることが知られている。

このメタン菌のエネルギー代謝系に存在する電子伝達系
の中にはＦ４２゜という物質が電子キャリアとして機能
していることが知られており、これはメタン菌に固有の
物質であり、他の生物系には存在していない。そこで、
このＦ４□。を中心とするメタン菌の電子伝達系に関与
する物質が、消化汚泥等の被検体中のメタン菌以外の微
生物群および異物と異なる特異的かつ計測可能な物理化
学的性質を持ち、またそれが被検体中の生菌（生きた状
態の菌）の状態で計測可能なものであるならば、メタン
菌の菌数またはパラメータ生成活性の測定における計測
パラメータとして使用できる。特に、Ｆ４□。を中心と
するメタン菌の電子伝達系に関与する特定螢光物質は、
その生理的機能において直接メタン生成機構と関連して
いるため、メタン生成活性測定においては有効な計測対
象となり得る。

次に、実施例に入る前に、この発明による一実施例を理
解し易くするために、一実施例の概念的なことを第１図
を用いて説明する。第１図において、１はメタン菌を有
する被検体を収容したメタン醗酵槽、２は例えばポンプ
等のようにメタン醗酵槽１から被検体を採取するための
サンプラ、３はサンプラ２により採取した被検体に対し
被検体中のメタン菌体内から特定螢光物質を菌体外に抽
出する抽出処理及びメタン菌を含む所定粒径以上の固体
粒子を液から取除く固液分離処理を行なうサンプラ調整
器、４はサンプラ調整器３で処理した被検体の螢光強度
を測定するための光学センサ、５はサンプラ２、サンプ
ラ調整器３および光学センサ４を制御するためおよび光
学センサ４により検出した信号を処理するためのマイク
ロコンピュータである。

次に動作について説明する。サンプラ２の作動によって
メタン醗酵槽ｌから採取された被検体は、マイクロコン
ピュータ５の指示に従って、まず、抽出処理がサンプラ
調整器３で施され、次に固液分離処理がサンプラ調整器
３で施される。こうして得られた抽出・分離処理液は励
起光を照射されてその螢光強度が光学センサ４によって
測定される。次に、マイクロコンピュータ５の指示に従
って被検体はサンプラ調整器３で固液分離処理が施され
、次に同様に抽出処理が施される。こうして得られた分
離・抽出処理液は励起光を照射されてその螢光強度が光
学センサ４によって測定される。

上記したように得られた２つの螢光信号の差がマイクロ
コンピュータ５によって演算され、この演算値により被
検体のメタン菌数またはメタン生成活性の計測が行われ
る。

第２図はこの発明の一実施例を適用したメタン菌の菌数
又はメタン生成活性の測定装置のブロック図である。同
図において、１０はメタン菌を含む被検体を収容してい
るメタン醗酵槽、１１はこのメタン醗酵槽１０から被検
体を取出すための第１のパイプ、１２は第１のパイプ１
１の経路途中に介在する送液用の第１のポンプ、１３は
メタン菌体内の特定螢光物質（例えばＦ４□。）を菌体
外に抽出するための添加液例えばＮａＯＨ水溶液を収容
している液溜、１４は液溜１３の底部に接続され添加液
を送出する第２のバイブ、１５は第２のバイブ１４の流
路を開閉するためのｔ磁弁、１６は第２のバイブ１４の
経路途中に介在する送液用の第２のポンプ、１７は抽出
処理を行うための抽出装置であり、第２のバイブ１４を
通して液溜１３内の添加液を流入し、第３のバイブ１８
を通してメタン醗酵槽１０内の被検体又はこの被検体を
後述のろ過装置２１でろ過して固液分離処理した固液分
離処理液を流入し、第２および第３のバイブ１４゜１８
から流入した両液体を混合して抽出処理を施す。１９は
抽出装置１７により抽出処理した処理液を抽出処理１７
から送出する第４のバイブ、２０は第４のバイブ１９の
経路途中に介在する送液用の第３のポンプ、２１は処理
液からメタン菌を含む所定粒径以上の固体粒子を取除く
固液分離処理を行うろ過装置、２２はろ過装置２１内に
メタン醗酵槽１０内の被検体又は抽出装置１７でこの被
検体を抽出処理した抽出処理液を導入するために用いら
れる第５のバイブ、２３はろ過装置２１で固液分離処理
した処理液をろ過装置２１から送出する第６のバイブで
ある。２４はメタン醗酵槽１０内の被検体を抽出装置１
７で抽出処理した後にろ過装置２１で固液分離処理した
抽出・分離処理液を測定用に収容したり、メタン醗酵槽
１０内の被検体をろ過装置２１で固液分離処理した後に
抽出装置１７で抽出処理した分離・抽出処理液を測定用
に収容したりする試料セル、２５は第７のバイブであり
、試料セル２４に連通し、試料セル２４内に抽出・分離
処理液や分離・抽出処理液を導入する。２６はバイブ中
継用の中継用バイブ、２７Ａは第１の電動四方コックで
あり、コックの切替わりにより、第１および第３のバイ
ブ１１，１８同士の流路を連結すると共に第５のバイブ
２２と中継用パイプ２６との流路を連結する第１のコン
ク状態となったり、第１および第５のバイブ１１゜２２
同士の流路を連結すると共に第３のバイブ１８と中継用
パイプ２６との流路を連結する第２のコック状態となる
。２７Ｂは第１の電動四方コック２７Ａに連動して切替
わる第２の電動四方コックであり、コックの切替わりに
より、第４のバイブ１９と中継用パイプ２６との流路を
連結すると共に第６および第７のバイブ２３，２５同士
の流路を連結する第３のコック状態となったり、第４お
よび第７のバイ１１９．２５同士の流路を連結すると共
に第６のバイブ２３と中継用パイプ２６との流路を連結
する第４のコック状態となる。２８は光源用電源、２９
は電ａ２Ｓに接続された光源、３０は光源２９からの光
の波長領域を限定して試料セル２４内に励起光を入光さ
せる第１の分光器、３１は光源２９からの励起光の入光
により試料セル２４内の測定用液から出る螢光の波長領
域を限定して螢光を通過させる第２の分光器である。３
２は第２の分光器３１を通過した特定波長領域の螢光を
受光する光電子増倍管、３３は光電子増倍管３２用の電
源、３４は光電子増倍管３２の光電流を検出する検出部
、３５は、検出部３４で検出した螢光の強度測定値信号
をアナログからデジタルにして記憶するメモリ機能と演
算機能等を有し、第１ないし第３のポンプ１２，１．６
．２０の駆動。

電磁弁１５の開閉、第１および第２の電動四方コック２
７Ａ、２７Ｂのコック切替えおよび第１の分光器３０を
制御するマイクロコンピュータ、３６はマイクロコンピ
ュータ３５で処理した測定結果を出力する例えばプリン
タ又はＣＲＴ等の出力装置である。

第３図は第１および第２の電動四方コック２７Ａ、２７
Ｂの各コック切替え状態を示した図である。第３図ｆａ
ｔにおいて、第１の電動四方コック２７Ａは上記第１の
コック状態又第２の電動四方コンク２７Ｂは上記第３の
コック状態となっている。

第３図（ｂ）において、第１の電動四方コック２７Ａは
上記第２のコック状態又第２の電動四方コック２７Ｂは
上記第４のコック状態となっている。

次に、か＼る装置の動作について説明する。マイクロコ
ンピュータ３５の制御により第３図（ａｌに示したよう
に第１の電動四方コック２７Ａは上記第１のコック状態
に、また、第２の電動四方コック２７Ｂは上記第３のコ
ック状態に設定される。

第１のポンプ１２の作動によりメタン醗酵槽１０内の被
検体は第１のポンプ１２を介した第１のパイプ１１−第
１の電動四方コック２７Ａ−第３のパイプ１８の流路を
辿り抽出装置１７内に所定量だけ導入される。また、電
磁弁１５のある時間だけの開動作と第２のポンプ１６の
作動により液溜１３内の添加液は第２のパイプ１４の流
路を辿って抽出装置１７内に所定量分導入される。これ
により、抽出装置１７では被検体と添加液との混合が行
なわれ、被検体中のメタン菌体内部の特定螢光物質を菌
体外に抽出した抽出処理液が得られる。

この抽出処理液は第３のポンプ２０の作動により抽出装
置１７から第３のポンプ２０を介した第４のパイプ１９
→第２の電動四方コック２７Ｂ→中継用バイブ２６−第
１の電動四方コック２７　Ａ　−第５のパイプ２２の流
路を辿ってろ過装置２１内に導入される。ろ過装置２１
内に導入された抽出処理液はろ過装置２１内でメタン菌
を含む所定粒径以上の固体粒体を分離除去する固液分離
処理が施こされ、この固液分離処理により得られた抽出
・分離処理液はろ過装置２１から第６のパイプ２３→第
２の電動四方コック２７Ｂ−第７のパイプ２５の流路を
辿って試料セル２４内に収容される。電ａ２＆により駆
動された光源２９の光はマイクロコンピュータ３５によ
り特定波長領域のみの光を通過させるように制御された
第１の分光器３０によって波長領域を限定されて試料セ
ル２４内の抽出・分離処理液を励起光として照射する。

この励起光の照射により抽出・分離処理液内にある上記
抽出された特定螢光物質が励起されて螢光を発生する。

この螢光は分光器３１を通過する際に特定波長領域に限
定されて光電子増倍管３２に入射する。光電子増倍管３
２に入射した螢光の強度に応じた光電流が発生して検出
部３４により検出される。この検出信号はマイクロコン
ピュータ３５に入力されて記憶される。このようにして
、マイクロコンピュータ３５は第１の分光器３０を制御
して試料セル２４内に入射する励起光の波長領域を順次
変化させて順次螢光の強度を測定することにより励起光
の波長に対する螢光の強度分布を得ることができる。こ
の測定後、試料セル２４内の抽出・分離処理液は試料セ
ル２４外に排出される。

次に、マイクロコンピュータ３５の制御により第１およ
び第２の電動四方コック２７Ａ、２７Ｂは第３図（ａ）
の状態から第３図（１））の状態に切替えられる。すな
わち、第１の電動コック２７Ａは上記第２のコック状態
に、第２の電動コック２７Ｂは上記第４のコック状態に
設定される。第１のポンプ１２の作動によりメタン醗酵
槽１０内の被検体は第１のポンプ１２を介した第１のパ
イプ１１−第１の電動四方コック２７Ａ→第５のパイプ
２２の流路を辿りろ過装置２１内に導入される。ろ過装
置２工で被検体の固液分離処理が施こされることにより
得られる分離処理液はろ過装置２１から第６のパイプ２
３→第２の電動四方コック２７Ｂ→中継用パイプ２６−
第１の電動四方コック２７Ａ＝第３のバイ１１８の流路
を辿り抽出装置１７内に導入される。この導入後、液溜
１３内の添加液の所定量分が電磁弁１５のある時間だけ
の開動作と第２のポンプ１６の作動により抽出装置１７
内に導入され、ろ過処理液である固液分離処理液との混
合が行なわれて抽出処理が行なわれる。この抽出処理に
より得られた分離・抽出処理液は第３のポンプ２０の作
動により第３のポンプ２０を介した第４のパイプ１９−
第２の電動四方コック２７Ｂ＝第７のパイプ２５の流路
を辿り試料セル２４内に収容される。上記した抽出・分
離処理液を用いて螢光の強度測定を行なったと同様にし
て試料セル２４内の分離・抽出処理液の螢光の強度測定
が励起光の波長領域を変化させながら順次に行なわれ、
その測定結果はマイクロコンピュータ３５内に測定毎に
記憶される。次に、マイクロコンピュータ３５は抽出・
分離処理液を用いた際に得た螢光の強度の測定結果から
分離・抽出処理液を用いた際に得た螢光の強度の測定結
果を減算した値に基づきメタン菌の菌数又はメタン生成
活性を演算等により得て出力装置３０を介して出力する
。

なお、上記動作を行なうにあたってマイクロコンピュー
タ３５は第１ないし第３のポンプ１２，１６゜２０の作
動と停止、電磁弁１５の開閉、第１および第２の電動四
方コック２７Ａ、２７Ｂのコック切替えおよび第１の分
光器３０の制御を行う。

（実験例（１））この実験例は、メタン菌の一種であるメタノサルシナ・
パルケリ　（以下、Ｍ、パルケリという）を回分培養し
、対数増殖期における培養懸濁液の螢光強度を第１図に
示した測定装置を用いて測定した例である。螢光強度の
測定としては、螢光を発生させるための励起光の波長は
４００〜４４０（ｎｍ）の波長領域内で変化させられ、
その波長領域で波長４７０　（ｎａ＋）の螢光の強度分
布が求められた。

また、ろ過装置２１には０．２２　（μｍ）の孔径を有
するアセチルセルロース製フィルタが用いられ、液溜１
３内の添加液はＮａＯＨ水溶液が用いられた。第４図Ｔ
ａ）は測定による励起光の波長に対する抽出・分離処理
液の螢光強度分布を示し、第４図中）は励起光の波長に
対する測定による分離・抽出処理液の螢光強度分布を示
している。第５図は第４図（ａ）および同図（ｂｌのデ
ータに基づきマイクロコンピュータ３５で差を求めた励
起光の波長に対する螢光強度分布を示す。なお、第４図
の螢光強度値とは螢光の強度の測定値を意味し、第５図
の螢光強度値とは螢光の強度の測定値から得た螢光の強
度値を意味し、以下の実験例においても同じである。

この実験例では被検体においてメタン菌は増殖中であり
、はとんど全てのメタン菌体がメタン生成活性を有して
いるのでメタン菌体外に漏出しているＦ４□。はほとん
どなく、第４図に示した螢光強度値の差は大きく、第５
図に示されるようにメタン菌体内にあった、Ｆ４□。に
よる螢光強度値は大きいことがわかる。

次に、このようにして測定した螢光強度値とメタン菌数
及び螢光強度値とメタン生成速度の相関関係が第６図お
よび第７図に各々示されている。

第６図および第７図は励起光の波長が４２０　（ｎｍ）
の時における螢光の波長が４７０　（ｎｍ）の螢光強度
値を横軸に示し、縦軸にメタン菌数とメタン発生量を各
々示した図である。このマイクロコンピュータ３５が第
６図又は第７図に示した直線の演算式を記憶しておけば
、この演算式と測定した螢光の強度の測定値（螢光強度
値）を用いて演算することによりこの測定装置によって
メタン菌の菌数及びメタン生成活性を正確に測定するこ
とができる。

（実験例（２））この実験例は、Ｍ、パルケリを回分培養し、死滅期にお
ける培養懸濁液の螢光強度を第１図の測定装置を用いて
測定したものである。実験例（１）と同様な処理を施し
た結果が第８図および第９図に示されている。第８図Ｔ
ａ）は励起光の波長に対する抽出・分離処理液の螢光強
度分布であり、第８図（ｂ）は励起光の波長に対する分
離・抽出液の螢光強度分布であり、第９図は第８図（ａ
）の曲線の値から第８図中）の曲線の値を差引いた曲線
である。被検体においてメタン菌がほとんど死滅してい
るので菌体外にＦ４！。が漏出していたため、第９図に
示すように第８図ｆａｔと同図（ｂ）に示した螢光強度
の差は小さく、このことからメタン生成活性が低いこと
がわかる。

（実験例（３））この例は、下水処理場のメタン醗酵槽内のスラッジの螢
光強度を第１図の測定装置で測定した例である。実験例
＋１１と同様な処理を施した結果が第１０図および第１
１図に示されている。第１Ｏ図（ａｌは抽出・分離処理
液の螢光強度分布であり、第１０図（ｂ）は分離・抽出
処理液の螢光強度分布であり、第１１図は第１０図（ａ
）の曲線から第ｉｏ図（ｂｌの曲線を差引いた曲線であ
る。スラッジには黒色物質を含むため、ろ過しない場合
には螢光はほとんど検出されない（第１２図参照）。と
ころが、この測定装置ではろ過によって黒色物質を除く
ことが可能なため、第１１図に示すようにスラッジ中の
メタン菌のもつ主にＦ４□。の螢光強度を測定すること
ができる。この結果から、下水処理場のメタン醗酵スラ
ッジのメタン生成活性は高いことがわかる。

上記実験例では、Ｍ、パルケリ及びＮ重下水処理場スラ
ッジのみの測定について述べたが、他の種のメタン菌や
他のメタン醗酵槽スラッジ中に存在するメタン菌など、
被検体はこれらに限られるものではない。

なお、上記実施例において、抽出・分離処理液を用いた
場合における螢光の強度測定が行なわれた後に、分離・
抽出処理液を用いた場合における螢光の強度測定が行な
われたが、この過程が時系列的に逆であってもよい。ま
た、上記実施例において螢光の強度測定時における第１
および第２の分光器３０．３１による特定波長領域の限
定とは特定波長の限定をも意味し、以下の実施例におい
ても同じである。

また、上記実施例において螢光の強度分布を求めたが、
励起光の波長を１波長（例えば４２０ｎｍ）に特定して
変化させず抽出・分離処理液および分離・抽出処理液か
ら特定波長領域（例えば４７０ｎｍ）における各１つの
螢光の強度測定値を得て、これらの両測定値の差を出し
この値に基づき被検体内のメタン菌の菌数又はメタン生
成活性を出してもよい。この場合、上述したように例え
ば両測定値の差を第６図または第７図に示した関係を有
する演算式に代入することにより被検体内のメタン菌の
菌数またはメタン生成活性を得ることができる。

また、上記実施例において螢光の強度測定値同士の差を
出さなくても抽出・分離処理液から得た螢光の強度測定
値（第１の測定処理における第１の測定値）を第６図ま
たは第７図の関係の演算式に代入して抽出・分離処理液
における第１のメタン菌の菌数または第１のメタン生成
活性（第１の計測値）を出してから、分離・抽出処理液
から得た螢光の強度測定値（第１の測定処理における第
２の測定値）を同様にして上記演算式に代入して分離・
抽出処理液における第２のメタン菌の菌数または第２の
メタン生成活性（第２の計測値）を出し、第１および第
２のメタン菌の菌数同士または第１および第２のメタン
生成活性同士の差を出して被検体に含まれるメタン菌の
菌数またはメタン生成活性（計測値）を得ることができ
る。このことについては以下の実施例においても同様で
あり、また、この場合、抽出・分離処理液を得て上記第
１の計測値を出し、次に、分離・抽出処理液を得て上記
第２の計測値を出し、次に、第１の計測値から第２の計
測値を差引いて上記計測値を出すことができるが、この
場合も、上記第１および第２の測定処理後における上記
第１および第２の測定値に基づ（データ処理に含まれる
ものと解釈する。

さらに、上記実施例では被検体及び抽出処理等のための
流路を変更するために、電動四方コックを用いたが、電
磁弁及び三方管等を組み合せるなど、他の方法を用いて
もよく、これらに限定されるものではない。

第１３図は抽出・分離処理液と分離・抽出処理液を並列
的に得て、これら両液の螢光の強度測定を並列的に行う
この発明の他の実施例を説明するためにメタン菌の菌数
又はメタン生成活性の測定装置の他の構成例を示してい
る。第１３図において、第２図と同符号の部分は第２図
のものと同一であり、添字ａおよび同すを取除いた第２
図と同符号の部分は第２図のものと同じものである。メ
タン醗酵槽１０．第１のパイプ１１．第１のパイプ１１
から分岐したパイプｌｌａとパイプｌｌａの経路中に設
けられたポンプ１２ａ、抽出装置１７ａ、パイプ２６ａ
とパイプ２６ａの経路中に設けられたポンプ２０ａ、　
ろ過装置２１ａ、パイプ２５ａおよび試料セル２４ａが
この順で連設されている。また、メタン醗酵槽１０．第
１のパイプ１１゜第１のパイプ１１から分岐したパイプ
ｌｌｂとパイプｌｌｂの経路中に設けられたポンプ１２
ｂ。

ろ過装置２１ｂ、パイプ２６ｂ、抽出装置１７ｂ。

パイプ２５ｂとパイプ２５ｂの経路中に設けられたポン
プ２０ｂおよび試料セル２４ｂがこの順で連設されてい
る。液溜１３は、パイプ１４．パイプ１４の経路中に設
けられたポンプ１６．パイプ１４から分岐したパイプ１
４ａおよびパイプ１４ａの流路を開閉する電磁弁１５ａ
を介して抽出装置１７ａに連通ずる。また、液溜１３は
、パイプ１４、ポンプ１６．パイプ１４から分岐したパ
イプ１４ｂおよびパイプ１４ｂの流路を開閉する電磁弁
１５ｂを介して抽出装置１７ｂに連通する。

３０Ａは励起光用の分光器であり、光源２９からの光を
入射して、その波長領域を限定して両試料セル２４ａ、
２４ｂ内に同強度の励起光を投光する。試料セル２４ａ
　〔同２４ｂ〕に対しては、分光器３１ａ　〔同３１ｂ
〕、光源３３に接続された光電子増倍管３２ａ〔同３２
ｂ〕および検出器３４ａ　〔同３４ｂ〕がこの順序で一
対にして連設されている。両検出器３４ａ、３４ｂの両
出力はマイクロコンピュータ３５に入力される構成がと
られている。マイクロコンピュータ３５は５つのポンプ
１２ａ、１２ｂ、１６．２０ａ、２０ｂ、２つの電磁弁
１５ａ、１５ｂ及び分光器３０Ａを制御可能な構成がと
られている。

メタン醗酵槽１０内の被検体の一部と液溜１３内の添加
液の一部は抽出装置１７ａで抽出処理液とされた後にろ
過装置２１ａで抽出・分離処理液とされて試料セル２４
ａ内に収容される。他方、メタン醗酵槽１０内の被検体
の一部はろ過装置２１ｂで固液分離処理液とされた後に
抽出装置１７ｂで液溜１３内の添加液の一部が加えられ
て分離・抽出処理液とされて試料セル２４ｂ内に収容さ
れる。光源２９からの励起光は分光器３０Ａを介して試
料セル２４ａ内の抽出・分離処理液に照射されると同時
に同じく試料セル２４ｂ内の分離・抽出処理・液に照射
される。上記抽出・分離処理液の螢光と上記分離・抽出
処理液の螢光は各光電子増倍管３２ａ、３２ｂ等が用い
られて強度測定される。これらの螢光の強度測定値はマ
イクロコンピュータ３５に時分割的に取込まれ、マイク
ロコンピュータ３５により被検体中のメタン菌の菌数又
はそのメタン生成活性を出す所定の演算が行なわれる。

この実施例においても第１の実施例と同じ結果が得られ
るが、同時並列的に処理が行なわれるので第１の実施例
に比較して測定速度が速くなる。

なお、コンピュータ３５は時分割的に測定値を取込んだ
が、複数同時並列データ処理が可能な時にはそれらを並
列的に取込んで処理してもよい。

上記各実施例において、固液分離を行なう方法トシては
、０．２２　（μｍ）の孔径を持つ例えばアセチルセル
ロース又はセルロース等の有機物質製フィルタを用いる
他、ａ、　０．１μｌ−１鶴の孔径を持つ有機物質製フ
ィルタを用いる。ｂ７例えばセラミックス等のような無
機物質製フィルタを用いる。

Ｃ１遠心分離器を用いる。ｄ、ゲルを用いてゲルろ過す
る＋ｅ、ａ折膜を用いて透析する等のいずれの方法も選
択的に用いることができる。

また、上記各実施例における抽出処理に用いる添加液と
しては、ＮａＯＨ水溶液の他にも、有機溶媒単独、複数
種類の有機溶媒を適当な割合で混合した有機溶媒、上記
有機溶媒と水との混合液体、上記有機溶媒とＮａＯＨ水
溶液等のアルカリ性液体との混合液体および複数種類の
アルカリ性液体の混合液体の内のいずれかを選択的に用
いることができる。上記有機溶媒としては、例えば、２
−プロパノール、アセトン、エタノール、メタノール等
が挙げられる。

さらに、上記各実施例において、抽出装置１７゜１７ａ
、１７ｂにヒータ等の加熱機能をもたせることにより上
記抽出処理時に例えば上記抽出処理液等のような抽出処
理する液体を加熱して温度を上げることによってより一
層効率のよい抽出処理を行なうことができる。

さらに、また、上記各実施例においては、抽出処理時に
上記添加液を加えたが、上記被検体や上記固液分離処理
液のような抽出処理すべき液体に上記添加液を加えずに
、その代りに加熱してその温度を上昇させることのみに
よっても抽出処理することが可能である。

また、上記各実施例において、被検体によっては、上記
抽出・分離処理液および上記分離・抽出処理液の両液か
ら得られる励起光の複数の波長に対する螢光の強度測定
値（それらをＩ　Ａｌｌ　　Ｉ　Ａｌ・・・・・・とＴ
１１＋　　Ｉ　Ｈ２，・・・・・・とする）を適当な演
算式ｆ（１）　（またはｆ（ＩＡ　　１Ｂ））に一括的
に代入して演算して得られる値ｆ（Ｉ　Ａｌｌ　　Ｉ　
Ａ２＋　・・・・・・ＩＩｌい１１１２＋’・−−−−
＞または、ｆ（ＩＡ＋　　Ｉ　Ａｌｌ　　Ｉ　Ａ２　１
　ｓｚ。

・・・・・・）を被検体中のメタン菌数またはメタン生
成活性とすることができる。

また、上記各実施例において、演算式を用いる他に第６
図又は第７図の関係をマイクロコンビュ−夕３５内のメ
モリにテーブル化しておけば、上記抽出・分離処理液お
よび分離・抽出処理液から各々得た螢光の強度測定値に
基づきテーブルを参照して極く簡単にメタン菌の菌数ま
たはメタン生成活性の計測値を得ることができる。

また、被検体を一定期間に複数回測定する場合には、必
ずしも、全ての場合に固液分離処理を行なう必要はない
。例えば、まず上記実施例の方法によって抽出・分離処
理液および分離・抽出処理液の両液の螢光の強度を測定
した後、被検体に抽出処理を施して得た抽出処理液の螢
光の強度を測定した値が上記分離・抽出処理液の螢光の
強度測定値と一定の相関関係をもつ場合には、その抽出
処理液の螢光の強度測定値を用いて、メタン菌数または
メタン生成活性を得てもよい。

また、被検体によっては、抽出処理および固液分離処理
の両方の処理を行なうことなく、被検体をそのまままた
は水で希釈して螢光強度を測定し、この測定値を用いて
メタン菌の菌数またはメタン生成活性を計測することが
できる。

〔発明の効果〕

以上のように、この発明によればメタン菌を含む被検体
に添加液を加えるかおよび／または被検体の温度を上昇
させて抽出処理してメタン菌体内部の特定螢光物質を菌
体外に抽出した抽出処理液とし、この抽出処理液からメ
タン菌を含む所定粒径以上の固体粒子を分離除去する固
液分離操作をすることにより抽出・分離処理液を得、メ
タン菌含む被検体を固液分離操作して固液分離処理液と
し、この固液分離処理液に上記抽出処理と同じ抽出処理
をして分離・抽出処理液を得、上記抽出・分離処理液お
よび上記分離・抽出処理液に特定波長領域の励起光を照
射することにより上記抽出・分離処理液および上記分離
・抽出処理液から各々放射される特定波長領域の螢光の
強度を各々測定して得られた両側定値に基づき所定のデ
ータ処理を行なって上記メタン菌の菌数またはメタン生
成活性を測定するようにしたので、上記メタン菌の菌数
又はメタン生成活性を測定感度よ（計測することが可能
となり、特にメタン醗酵槽内のような消化汚泥などの異
物を含む微生物混合系の中からでも、上記メタン菌の菌
数またはメタン生成活性の測定が可能となる効果がある
。

【図面の簡単な説明】

第１図はこの発明の一実施例を理解し易くするための測
定装置の概念図、第２図はこの発明の一実施例を説明す
るための測定装置のブロック図、第３図は第２図の電動
四方コックの各切替え状態を示す図、第４図はこの発明
の一実施例に従う第１の実験例における励起光の波長に
対する螢光強度値を示す線図、第５図は第４図ｆａｔ及
び同図（ｂ）のデータから得た励起光の波長に対する螢
光強度値を示す線図、第６図は螢光強度値に対するメタ
ン菌数の関係を示す線図、第７図は螢光強度値に対する
メタン発生量の関係を示す線図、第８図はこの発明の一
実施例に従う第２の実験例における励起光の波長に対す
る螢光強度値を示す線図、第９図は第８図（ａｌおよび
同図（ｂｌのデータから得た励起光の波長に対する螢光
強度値を示す線図、第１０図はこの発明の一実施例に従
う第３の実施例における励起光の波長に対する螢光強度
値を示す線図、第１１図は第１０図（ａｌおよび同図（
′ｂ）のデータから得た励起光の波長に対する螢光強度
値を示す線図、第１２図は上記第３の実験例において被
検体をろ過しないで螢光の強度測定を行なった場合の励
起光の波長に対する螢光強度値を示す線図、第１３図は
この発明の他の実施例を説明するための測定装置の他の
例を示すブロック図、第１４図は従来の方法を説明する
ための測定装置を示すブロック図である。図において、１，１０はメタン醗酵槽、２はサンプラ、
３はサンプラ調整器、４は光学センサ、５．３５はマイ
クロコンピュータ、１３は液溜、１７、　１７　ａ、　
　１７　ｂは抽出装置、２１，２１２゜２１ｂはろ過装
置、２７Ａ、２７Ｂは電動四方コ３２．３２ａ、３２ｂ
は光電子増倍管、３４．３４ａ、３４ｂは検出器。なお、図中、同一符号は同一、又は相当部分を示す。（外２名）第２図 ≦脩井：ま上ば：４（ａ）　　　　　　　　　　（ｂ）１直ｔ５４Ｘ遣１（イ王も単＜１＞第６図ト励ｋｌ’ｓ連長：４２０ｎｍ螢光〕庖＋：４７０ｎｍ第７図励起か液長’４２０ｎｍ望光覆長　：４７０ｎｍｙｃｇｕａ（７ｉ１ａｙ、＊ａ）１０４　二−ラｆ、ｆｉｌ　３　’ｒ＊　＠　’ｆＦ手
続手続補正向発）昭和　　（１，７□１７８

Claims

【特許請求の範囲】

（１）メタン菌を有する被検体から採取した第１の被検
体にメタン菌体内にあるメタン菌固有の特定螢光物質を
菌体外に抽出する添加液を加え混合して抽出処理液を得
る第１の抽出処理と、次に、上記抽出処理液からメタン
菌を含む所定粒径以上の固体粒子を取除く固液分離操作
をして上記特定螢光物質を含む抽出・分離処理液を得る
第１の分離処理と、次に、上記抽出・分離処理液に第１
の特定波長領域の励起光を照射することにより上記抽出
・分離処理液から放射される第２の特定波長領域の螢光
の強度を測定して第１の測定値を得る第１の測定処理と
、上記被検体から採取した第２の被検体に上記固液分離
操作と同等な条件の固液分離操作をして固液分離処理液
を得る第２の分離処理と、次に、上記固液分離処理液に
上記添加液と同じ種類の添加液を加え混合して分離・抽
出処理液を得る第２の抽出処理と、次に、上記分離・抽
出処理液に上記第１の特定波長領域の励起光を照射する
ことにより上記分離・抽出処理液から放射される上記第
２の特定波長領域の螢光の強度を測定して第２の測定値
を得る第２の測定処理と、上記第１および第２の測定処
理後、上記第１および第２の測定値に基づき所定のデー
タ処理を行なって上記被検体内のメタン菌の菌数または
メタン生成活性の計測値を得るデータ処理とを行うこと
を特徴とするメタン菌の菌数またはメタン生成活性の測
定方法。
（２）第１の抽出処理において抽出処理液を加熱し、第
２の抽出処理において分離・抽出処理液を加熱して抽出
処理を促進させることを特徴とする特許請求の範囲第１
項記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定方
法。
（３）第１の測定処理の次に第２の分離処理を行うこと
を特徴とする特許請求の範囲第１項または第２項記載の
メタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定方法。
（４）第２の測定処理の次に第１の抽出処理を行うこと
を特徴とする特許請求の範囲第１項または第２項記載の
メタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定方法。
（５）第１の抽出処理から第１の測定処理迄の第１の処
理と第２の分離処理から第２の測定処理迄の第２の処理
とを並列的に行うことを特徴とする特許請求の範囲第１
項または第２項記載のメタン薗の菌数またはメタン生成
活性の測定方法。
（６）添加液として単独の有機溶媒を用いることを特徴
とする特許請求の範囲第１項ないし第５項のいずれか１
項に記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定
方法。
（７）添加液として複数種類の有機溶媒の混合液を用い
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項ないし第５項
のいずれか１項に記載のメタン菌の菌数またはメタン生
成活性の測定方法。
（８）添加液として単独の有機溶媒と水との混合液を用
いることを特徴とする特許請求の範囲第１項ないし第５
項のいずれか１項に記載のメタン菌の菌数またはメタン
生成活性の測定方法。
（９）添加液として複数種類の有機溶媒と水との混合液
を用いることを特徴とする特許請求の範囲第１項ないし
第５項のいずれか１項に記載のメタン菌の菌数またはメ
タン生成活性の測定方法。
（１０）添加液として有機溶媒とアルカリ性液体との混
合液を用いることを特徴とする特許請求の範囲第１項な
いし第５項のいずれか１項に記載のメタン菌の菌数また
はメタン生成活性の測定方法。
（１１）アルカリ性液体としてＮａＯＨ水溶液を用いる
ことを特徴とする特許請求の範囲第１０項記載のメタン
菌の菌数またはメタン生成活性の測定方法。
（１２）有機溶媒として、２−プロパノール、アセトン
、エタノールおよびメタノールの内で任意の有機溶媒を
選択して用いることを特徴とする特許請求の範囲第６項
ないし第１１項のいずれか１項に記載のメタン菌の菌数
またはメタン生成活性の測定方法。
（１３）添加液として単独のアルカリ性液体を用いるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項ないし第５項のい
ずれか１項に記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活
性の測定方法。
（１４）アルカリ性液体としてＮａＯＨ水溶液を用いる
ことを特徴とする特許請求の範囲第１３項記載のメタン
菌の菌数またはメタン生成活性の測定方法。
（１５）添加液として複数種類のアルカリ性液体の混合
液を用いることを特徴とする特許請求の範囲第１項ない
し第５項のいずれか１項に記載のメタン菌の菌数または
メタン生成活性の測定方法。
（１６）アルカリ性液体としてＮａＯＨ水溶液を含むこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１５項記載のメタン菌
の菌数またはメタン生成活性の測定方法。
（１７）固液分離操作としてろ過を行うことを特徴とす
る特許請求の範囲第１項ないし第１６項のいずれか１項
に記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定方
法。
（１８）固液分離操作として遠心分離を行うことを特徴
とする特許請求の範囲第１項ないし第１６項のいずれか
１項に記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活性の測
定方法。
（１９）固液分離操作として透析を行うことを特徴とす
る特許請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか１項に
記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定方法
。
（２０）第１および第２の測定処理において、第１の特
定波長領域の励起光として単波長の励起光を用いて第１
および第２の測定値を得、データ処理において、上記第
１および第２の測定値を予め設定された螢光の強度測定
値を変数とする演算式に代入して計測値を得ることを特
徴とする特許請求の範囲第１項ないし第１９項のいずれ
か１項に記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活性の
測定方法。
（２１）第１および第２の測定処理において、第１の波
長領域の励起光として複数の波長の励起光を各個別に用
いて得た各複数の第１および第２の測定値を得、データ
処理において、上記複数の第１および第２の測定値を、
予め設定された上記励起光の各波長に対する各螢光の強
度測定値を各変数とする演算式に代入して計測値を得る
ことを特徴とする特許請求の範囲第１項ないし第１９項
のいずれか１項に記載のメタン菌の菌数またはメタン生
成活性の測定方法。
（２２）メタン菌を有する被検体から採取した第１の被
検体に熱を加えてメタン菌体内にあるメタン菌固有の特
定螢光物質を菌体外に抽出して抽出処理液を得る第１の
抽出処理と、次に、上記抽出処理液からメタン菌を含む
所定粒径以上の固体粒子を取除く固液分離操作をして上
記特定螢光物質を含む抽出・分離処理液を得る第１の分
離処理と、次に、上記抽出・分離処理液に第１の特定波
長領域の励起光を照射することにより上記抽出・分離処
理液から放射される第２の特定波長領域の螢光の強度を
測定して第１の測定値を得る第１の測定処理と、上記被
検体から採取した第２の被検体に上記固液分離操作と同
等な条件の固液分離操作をして固液分離処理液を得る第
２の分離処理と、次に、上記固液分離処理液に熱を加え
て分離・抽出処理液を得る第２の抽出処理と、次に、上
記分離・抽出処理液に上記第１の特定波長領域の励起光
を照射することにより上記分離・抽出処理液から放射さ
れる上記第２の特定波長領域の螢光の強度を測定して第
２の測定値を得る第２の測定処理と、上記第１および第
２の測定処理後、上記第１および第２の測定値に基づき
所定のデータ処理を行うことにより上記被検体内のメタ
ン菌の菌数またはメタン生成活性の計測値を得るデータ
処理とを行うことを特徴とするメタン菌の菌数またはメ
タン生成活性の測定方法。
（２３）第１の測定処理の次に第２の分離処理を行うこ
とを特徴とする特許請求の範囲第２２項記載のメタン菌
の菌数またはメタン生成活性の測定方法。
（２４）第２の測定処理の次に第１の抽出処理を行うこ
とを特徴とする特許請求の範囲第２２項記載のメタン菌
の菌数またはメタン生成活性の測定方法。
（２５）第１の抽出処理から第１の測定処理迄の第１の
処理と第２の分離処理から第２の測定処理迄の第２の処
理とを並列的に行うことを特徴とする特許請求の範囲第
２２項記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活性の測
定方法。
（２６）固液分離操作としてろ過を行うことを特徴とす
る特許請求の範囲第２２項ないし第２５項のいずれか１
項に記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定
方法。
（２７）固液分離操作として遠心分離を行うことを特徴
とする特許請求の範囲第２２項ないし第２５項のいずれ
か１項に記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活性の
測定方法。
（２８）固液分離操作として透析を行うことを特徴とす
る特許請求の範囲第２２項ないし第２５項のいずれか１
項に記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定
方法。
（２９）第１および第２の測定処理において、第１の特
定波長領域の励起光として１つの波長の励起光を用いて
第１および第２の測定値を得、データ処理において、上
記第１および第２の測定値を予め設定された螢光の強度
測定値を変数とする演算式に代入して計測値を得ること
を特徴とする特許請求の範囲第２２ないし第２５項のい
ずれか１項に記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活
性の測定方法。
（３０）第１および第２の測定処理において、第１の波
長領域の励起光として複数の波長の励起光を各個別に用
いて得た各複数の第１および第２の測定値を得、データ
処理において、上記複数の第１および第２の測定値を、
上記励起光の各波長に対する螢光の強度測定値を変数と
する演算式に代入して測定値を得ることを特徴とする特
許請求の範囲第２２項ないし第２５項のいずれか１項に
記載のメタン菌の菌数またはメタン生成活性の測定方法
。