JPS62265233A - インタ−フエロン−β及びインタ−ロイキン−２を含有する医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、インターフェロン−β及びインターロイキ
ン−２の組合せ、及び抗癌治療剤又は予防剤としてのこ
の組合せの使用に１′Ａする。

正常末梢血リン・９球によシ生産され÷÷−＋？ｇ吻レ
クチン、抗原又は他の刺激剤への暴為の後）抗原又はマ
イトジェンによ＃）刺激されｆｃＴ細胞の増殖１に誘！
するリンホカインであるインターロイキン−２は、Ｍｏ
ｒｇａｎ　、　Ｄ、Ａ、等、　５ｃｉｅｎｃｅ（１９７
６）。

１９３　：　１００７−１００８により最初に記載され
た。

刺激された’［’　リンパ球の増殖を誘樽するその能力
のためにＴ細胞増殖因子と呼ばれたが、現在ではこの増
殖因子としての性質に加えてインビトロ及びインビボで
免疫系細胞の櫨々の機能を調節することがル３識され、
インターロイキン−２（ＩＬ−２）と再命名されている
。

Ｉ　Ｌ−２は最初、ヒト末梢血リン・９球（ＰＢＬ　）
又は他のＩＬ−２生産性セルラインを培養することによ
υ製造された。例えば、米国特許Ａ　４，４０１，７５
６を参照のこと。組換ＤＮＡ技法はＩＬ−２の生産のた
めのＰＢＬ及びセルラインの代替物を提供した。

Ｉ　Ｌ−２遺伝子のクローニング及び微生物中でのその
発現を報告している。

米国特許Ａ４，５１８，５８４は、野性型又は天然の分
子の１２５位に存在するシスティンがセリン又はアラニ
ンのごとき中性アミノ酸で置き換えられているＩＬ−２
のミー−ティンを記載しそしてクレームしている。米国
特許４４，５３０，７８７及び／Ｌ４，５６９，７９０
は、組換天然型ＩＬ−２及びミューティンの精製方法、
並びに精製された形態のＩＬ−２を開示しそしてクレー
ムしている。

ＰＣＴ　ＷＯ８５１０４３２８は、微生物的に生産され
た酸化された組換ＩＬ−２を含んで成る、医業として許
容される水性ビヒクル中に再溶解するために適当なＩＬ
−２組成物を開示している。ＩＬ−２は、悪性疾患又は
前−悪性疾患治療における細胞毒性化学療法もしくは照
射又は外科手術との組合において直接療法的に又はアジ
ュバントとして、あるいは他の免疫調節剤、天然に存在
するリンホカイン類（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、Ｃ
３Ｆ−１及びＩＦＨ類）、又は悪性疾患の治療における
誘導性抗−細胞毒素との組合せにおいて有用であると記
載されている。

Ｓ、　Ｒｏｍｅｎｂｓｒｇ及び°共同研究者［Ｍｕｌｅ
等。

のこと］によシヒ）　ＩＬ−２の種々の療法的適用が研
究されそして報告されている。

インターフェロン（ＩＦＮ）は、抗−ウィルス、抗−癌
及び免疫調節挙動を示すことが知られている天然蛋白質
の一群を構成する。ＩＦＨの２つのタイプ、すなわちＩ
型及び■型が、それらの観察された生物学的性質及び分
子構造の差異に基いて同定されている。β−インターフ
ェロン（ＩＦＮ−β）は、ウィルスのチャレンジにより
繊維芽細胞中で誘導され得、そして約１６５個のアミノ
ｒＲを含有するＩ型インターフェロンである。ＩＦＮ−
βは白血球中で誘導される■型ＩＦＮであり、そしてＩ
ＦＮ−ｒは特異的マイトジェン刺激に反応してリン・平
原中で誘導されそして１４６個のアミノ酸を含有する■
型ＩＦＮである。

ヒトＩＦＮ−βは、例えばＳｕｇａｎｏ等の１９８１年
６月６日に公開されたＥＰ２８，０３３、及びＲｅｖｅ
ｌ等の１９８１年６月１０日に公表された英国特許Ａ２
，０６３，８８２に記載されている様にして、組換ＤＮ
Ａ技法により製造することができる。

さらに、ＩＦＮ−βは、米国特許Ａ４，５８８，５８５
に記載されている様に、生物学的活性に必須でないアミ
ノ鍍が他のアミノ酸に置き換えられて安定性が増大して
いるミューティンであってもよい。

Ｐａｕｃｋｅｒ等、　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　、　１７　：
　３２４−３３４（１９６２）によりＩＦＮがマウスＬ
細胞の増殖速度を抑制することが示された後、多くの研
究者がＩＦＮによるマウスＬ［胞の処理、及びＩＦＮに
よる腫瘍細胞増殖の阻害を研究した。例えばＢｏｒｄｅ
ｎ、　Ｅ。

Ｃ，、Ａｎｎ、　Ｉｎｔｅｒｎ、　Ｍａｄ、　、　９１
　：　４７２−４７９（１９７９）を参照のこと。

ヒトの悪性腫瘍を治療するために２種類又はそれよシ多
くの抗癌剤を使用する組合せ療法が現在研究及び臨床に
おいて使用されている。抗癌剤は抗代謝剤、アルキル化
剤、抗生物質、一般毒等であることができる。はとんど
の癌、例えば８腫、黒色腫、リンパ腫及び肉腫に対する
相乗効果を得るため、並びに楽剤耐性細胞の出現を低下
せしめ又は除去するため及び各薬剤に対する副作用を減
少させるために、１つの試みとして薬剤の組合せが投与
される。

相乗的な生物学的効果を得るために■型インターフェロ
ン及び■型インターフェロンを組合わせることが知られ
ている。例えば、Ｆｌｅｉｓｈｍａｎ　。

（１９８２）　、　１５　：　２２３−２２８　　（マ
ウスＩＦＮ）、並びに１９８４年５月２日に公開された
ヨーロッパ特許出願公開１０７，４９８（ヒトＩＦＮ−
ｒ及びＩＦＮ−α又は−β）を参照のこと。Ｍａｒｋ等
（シタス・コー−レイシ、ン）の米国特許Ａ４．５１８
．５８４は、ＩＬ−２ミユーテインとｒ−インター７ェ
ロン、Ｂ細胞増殖因子、及びＩＬ−１との組合せを開示
している。さらにＩＬ−２がＩＦＮ−γと共に、腫瘍担
持宿主を治療するために、相剰的結果をもって（１９８
５年７月２４日に公開されたヨーロッパ特許出願ＡＩ　
４９，５５１　（ゼネンテック）及び１９８５年１０月
３１日に公開された独国荷許出願公開＆３４１１１８４
（プント・ロテン・クロイツェス）〕、又はナチュラル
キラー活性の増強をもって（５ｖｅｄｅｒｓｋｙ等＃Ｊ
・５：　５７１−５８１　）使用されることが開示され
ている。しかしながら、Ｌｏｐｓｚ−Ｂｏｔｅｔ等、　
Ｅｕｒ、　Ｊ。

Ｔ細胞クローンにおいてナチュラルキラ一様活性を誘導
するためにＩＬ−２及びＩＦＮ−γの組合せは十分でな
いと報告した。さらに、Ｄｅｍｐｓａｙ等。

ナチュラルキラー細胞の活性化の惹起においてＩＦＮ−
α又はＩ　Ｌ−２単独よシもＩＦＮ−α及びＩ　Ｌ−２
の組合せがよシ効果的であることが知られる０さらに、
Ｐｒ５ａｌｉｎｉｃａｌ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　Ｌａｂ
−＋ＢＲＭＰのＴａｌｍａｇｅ博士は１９８６年に、マ
ウスにおける転移疾患を治療するためにＴＮＦ及びＩＦ
Ｎ−ｒを使用する効果の増強を報告した。１９８５年１
月２３日に公開されたＥＰ１３１，７８９（スローンケ
ッタリングインスティテユート・フォア・キャンサーリ
サーチ）、及び１９８６年１月１５日に公開されたＥＰ
１６８，２１４（ゼネンテック）はマウスにおける種々
の腫瘍を治療するためのＴＮＦ及びＩＦＮ−ｒの相乗効
果を開示している。

さらに、Ｃｒｅａｓｅｙ等の１９８６年２月４日に公表
された米国法定発明登碌ＡＨ２２は、５−フルオロフラ
シル及びヒトー組換β−インターフェロンの相乗的有効
量を用いる、ある徨の乳癌及び骨髄腫セルラインの組合
せ療法の相乗細胞感性効果を示す組成物を開示している
。

本発明者の知識によれば、腫瘍担持動物に対するＩＬ−
２及びＩＦＮ−２の組合せの効果は研究されていない。

〔発明の概要〕

従って本発明は、哨乳類種由来のＩＦＮ−β及びＩ　Ｌ
−２の混合物の有効量を含んで成る、癌の予防的又は治
療的処置のためにヒトの患者に投与するのに適当な組成
物を提供する。

好ましくは、ＩＦＮ−β及びＩＬ−２は微生物的に生産
された組換ヒト蛋白質である。

ＩＦＮ−β及び！Ｌ−２の組合せが黒色腫、白血病、腎
細胞癌及び肺癌のごとき棟々の形の癌の効果的な治療を
もたらす。

〔具体的な説明〕

この明細書において使用する場合、“治療的”処置なる
語は１．思考が癌を有するとなんらかの手段により決定
された後の、ＩＦＮ−β及びＩＬ−２の患者への投与に
関する。処置の後に腫瘍が現われるか、又は存在する腫
瘍負荷が低下もしくは除去されない場合、その処置は療
法的でないと考えられる。１予防的１処置なる語は、癌
の再発を防止するために患者が処置された後の、ＩＦＮ
−β及びＩＬ−２の患者への投与に関する。

この明細書において使用する場合、癌”なる語は、あら
ゆる新生物疾患に関し、これには細胞性疾患を包含し、
例えば腎細胞癌、カボシ（Ｋａｐｏｓｉ　）肉腫、慢性
白血病、乳癌、肉腫、卵巣癌、直腸癌、咽喉癌、黒色腫
、結腸癌、膀胱癌、肥満細胞腫、肺癌、及び胃腸又は胃
癌を包含する。

好ましくは、癌は結腸癌、黒色腫、腎細胞癌、肺癌、腺
癌、又は乳癌である。

この明細書において使用する場合、ＩＦＮ−β及びＩＬ
−２に適用される１有効ｔ”なる語は、患者の治療的処
置のために効果的な混合物の各成分の量に関する。

この明細書において使用する場合、“組換（体）″なる
語は組換ＤＮＡ技法により生産されたＩＬ−２に関し、
この技法においては一般に、既知の組換ＤＮＡ技法によ
りＩＬ−２をコードする遺伝子がクローン化される。例
えば、ヒトＩＬ−２ｃＤＮＡを鋳型として使用してと）
　ＩＬ−２ｃＤＮＡに対する相補性を示す遺伝子を適当
なりＮＡベクター、例えば細菌プラスミド、好ましくは
Ｅ、コリ（Ｅ、　Ｃｏ１１　）プラスミドに挿入して組
換プラスミドを得、そしてこのプラスミドを使用して適
当な宿主を形質転換する。遺伝子を宿主中で発現せしめ
ることによυ組換蛋白質を得る。この目的のための組換
プラスミドの例には９ＢＲ３２２、ｐｃＲｌ、ｐＭＢ９
及びｐｓｃｌが含まれる。形質転換される宿主は真核性
宿主又は原核性宿主であり、好ましくは原核性宿主であ
る。

この明Ｍ書において使用する場合、”医業として許容さ
れる”なる語は、活性成分の生物学的活性の有効性を妨
害せず、且つ投与される宿主に対して毒性でないキャリ
ヤー媒体に関する。

この発明の組成物の使用方法は、有効量のＩＦＮ−β及
びＩＬ−２をヒトの患者に投与することを含む。ＩＬ−
２及びＩＦ’Ｎ−βは投与の前にインビトロで混合する
こともでき、又は別々に任意の順序にもしくは同時に患
者に投与することもできる。

例えば、例１においてはＩＬ−２及びＩＦＮ−βが相互
に数分以内に投与される。

投与は適当が技法、例えば非経口投与により行うことが
できる。非経口投与の例には静脈内投与、動脈内投与、
筋肉内投与及び腹腔内投与が含まれ。

静脈内投与、筋肉内投与及び皮下投与が好ましく、そし
てＩＦＮ−βの皮下投与及びＩＬ−２の皮下投与又は静
脈投与が最も好ましい。

投与量及び投与方法は主としてＩ　Ｌ−２及びＩＦＮ−
βが別々に、すなわち例えば同日に交互に。

又は同時に、例えば混合物として（隔日又は隔週に）投
与されるか否か、癌のタイプ、患者、及び患者の病歴に
依存するであろう。量は腫瘍の減少又はＬＡＬ活性の増
強を達成するために効果的なものでなければならない。

投与は単一投与でも多数回投与でもよい。多数回投与が
用いられる場合、好ましくは、投与の頻度は例えば癌の
タイプ、投与量等に依存するであろう。幾つかのタイプ
の癌のためには毎日の投与が効果的であり、他方性の癌
のためには隔日投与又は３日に１度の投与が効果的であ
るが毎日の投与は効果的でない。臨床医は任意の特定の
ケースについて、いかなる投与経路及び投与頻度が最も
効果的であるかを日常の実験の後に確認することができ
よう。

この発明において最も効果的であると思われる投与量は
、例１の方法により決定される場合に、腫瘍の大きさの
退化又は腫瘍の消失もしくは非再発をもたらし、そして
患者に対して毒性を有しないか又は毒性が許容される程
度の量である。最適投与量は多くの因子、例えば癌のタ
イプ、投与の経路、スケジュール及び順序、存在する腫
瘍負荷。

ＩＬ−２及びｒＦＮ−βのタイプ、並びに毒性に依存す
るであろう。毒性は副作用の程度及びタイプ、熱、悪寒
、及びこの発明の研究のために許容されると考えられる
一般的不快感により定義され得る。

許容される力性が存在する場合、及び投与経路が分かれ
ていてＩＦＮ−β及びＩＬ−２の１週間に３回の分割投
与である場合、微生物的に生産された組換ＩＬ−２及び
ＩＦＮ−βの投与レベルは好ましくは、体表面積平方メ
ートル（Ｍ２）当シ約１０４〜１０７ユニツトのＩＬ−
２（さらに好ましくは約ｌＯ６〜１０７ユニツト／Ｍ２
）であり、そしてＭ　当り約１〜４００Ｘ１０６　ユニ
ットのＩＦＮ−β（さらに好ましくは１０６〜１０７ユ
ニノト／Ｍ２）である。

非経口投与のため、Ｉ　Ｌ−２及びＩＦＮ−βは一般に
、好ましくは本質的に非毒性でありそして非療法的であ
る医業として許容されるキャリヤー媒体中の単位投与注
射形（浴液、懸濁液、エマルジョン）に製剤化されるで
あろう。この様なビヒクルの例には、塩浴液、リンダル
溶液、ガキストロース浴液、マンニトール、及び正常血
清アルブミンが含まれる。硬化油及びオレイン酸エチル
のごとき非水性ビヒクルを使用することもできる。キャ
リヤー媒体は少量の添加剤、例えば等慢性及び化学的安
定性を増強する？ｌＪ質、例えば緩衝剤、並びに防腐剤
を含有することができる。ＩＬ−２及びＩＦＮ−βは典
型的にはこの様なキャリヤー中にそれぞれ約Ｑ、ｌ　ｍ
９／ｍＡ’　〜１００　Ｉｎ９／ＩＬｔ（Ｄ濃１Ｋ、好
ましくは各０．２〜ＩＪＲ９／ｌｉｔの濃度で配合され
る。

この方法に代シ、ＩＬ−２及びＩＦＮ−βを無菌の安定
な凍結乾燥形に製剤化することができ、この製剤中では
精製されたＩＬ−２及びＩＦＮ−βが嵩を与えるマンニ
トールのごとき水溶性キャリヤー、並びに組換ＩＬ−２
及びＩＦＮ−βの水中への溶解性を保証するのに十分な
量のドデシル硫酸ナトリウムと混合されている。この製
剤は非経口投与のための水性注射液にｈａ解するために
適轟であシ、そして安定でありそしてヒトの患者におい
てよく許容される。製剤化方法はＰＣＴ　ＷＯ８５１０
４３２８にさらに完全に記載されている。

他の態様においては、ＩＦＮ−β及びＩＬ−２の混合物
は採用される免疫療法において、医業として許容される
キャリヤー中単離されたり／ホカインで活性化されたリ
ンパ球と共に投与され、この場合リンパ球は、ＩＦＮ−
β及びＩＬ−２と共に腫瘍を有するヒトに投与された場
合、腫瘍に対して反応性である。この方法は、Ｓ、　Ｒ
ｏｓａｎｂｅｒｙ等。

Ｎｅｗ　ｇｎｇｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅ
ｄｉａｉｎｓ　（１９８５）。

３１３　：　１４８５−１４９２に記載されている。

上記のように、この発明のＩＬ−２及びＩＦＮ−βは、
組織培養から又は組換技法により、そして任意補乳類源
、例えばマウス、ラット、ラビット、霊長類、ブタ、及
びヒトから調製される任意のＩＬ−２及びＩＦＮ−βで
あることができる。好ましくはＩＦＮ−β及びＩＬ−２
はヒトに白米する。

さらに好ましくはＩＦＮ−β及びＩＬ−２は組換生産さ
れたものである。

組換ＩＬ−２は、Ｔｍｎｉｇｕｃｈｉ等、　Ｎａｔｕｒ
ｅ　。

に記載されているように、天然ヒ）ＩＬ−２遺伝子をク
ローン化し、そしてこれを形質転換された微生物中で発
現せしめることＫよ）得られる。これは、野性型又は天
然の分子の１２５位に通常存在するシスティンが除去さ
れているか又はセリンもしくはアラニンのごとき中性ア
ミノ酸によシ置き換えられている、米国特許４４，５１
８，５８４に記載のＩＬ−２ミユーテイン、あるいは野
性型又は天然の分子の１０４位に通常存在するメチオニ
ンがアラニンのごとき中性アミノ酸によシ置き換えられ
ているＩＬ−２ミユーテイ／であることができる。

好°ましくけ、ＩＬ−２は、ヒトｃ　ＤＮＡ配列により
、又は５８位及び１０５位のシスティンのジスルフィド
結合を含む天然ヒ）　Ｉ　Ｌ−２のアミノ酸配列と少な
くとも実質的に同じアミノ酸配列を有しそして天然ヒ）
ＩＬ−２と共通の生物学的活性を有する蛋白質をコード
するＩＬ−２の変形されたヒトｅＤＮＡ配列によシ形質
転換された微生物によシ生産される未グリコジル化蛋白
質でろる。アミノ酸配列の実質的に同一とは、配列が同
一であるか、又は合成蛋白質と天然ヒトＩＬ−２との間
の不都合な機能的非類似性を惹起しない１又はそれよシ
多くのアミノ酸の変化（欠失、付加、置換）により異る
ことを意味する。このような性質を有するＩＬ−２蛋白
質の例には、Ｔｍｎｉｇｕｃｈｉ等磨Ｎａｔｕｒｅ　　
（１９８３）、３０２　　：　　３０５−３１０　　：
　　Ｄｅｖｏｓ。

４３０７−４３２３　：　　ヨーロッノ母特許出願公開
屋９１．５３９及び８８，１９５：並びに米国特許屋４
．５１８，５８４、前掲、によシ記載されているものが
含まれる。最も好ましくは、ＩＬ−２は、最初の末端ア
ラニンが除去されておシそして１２５位のシスティンが
セリン残基に置き換えられているｄｏｓ−ａｌａ−ＩＬ
−２，、、＋２５ミユーテインである。

使用されるＩＬ−２においては天然ＩＬ−２の最初の５
個のＮ−末端アミノ酸の少なくとも１個が欠けていても
よい。

ＩＬ−２は１９８６年２月１１日に発行された米国特許
４４，５６９，７９０中に記載されている方法により臨
床的純度に精製することができる。

他の製剤において、ＩＬ−２は洗剤によってではなく、
ＩＬ−２’ｉポリエチレングリコール又はポリエチル化
ポリオールから選ばれた活性化されたポリマーと反応せ
しめることによってｃｉＴ　ｒ６化される。このポリマ
ーは、ＩＬ−２のアミン基又はチオール基及びホモポリ
マーのヒドロキシ基の両者と反応する末端基を有するカ
ップリング剤との接合により活性化される。このような
カップリンク剤の例Ｋ　ｉｆヒドロキシベンゼンスルホ
ン酸エステル、シアヌル酸クロリド、及びＮ−ヒドロキ
シサクシンイミドが含まれる。この修飾によシ、生理的
−においてｒＬ−２を可溶化するために洗剤全添加する
必要がない。次に、インターロイキンを水溶性キャリヤ
ー及び緩衝液と上記のように配合し、そして配合物を凍
結乾燥し、そして凍結乾燥された混合物を上記のように
再溶解する。

この発明のＩＦＮ−βは、Ｍｅｔｚ　、　Ａｄｖ、　Ｄ
ｒｕｇＲｅｓ、、　１０　：　１０１−１５６によシ教
示されるように、ウィルス又は二本鎖ポリリゲヌクレオ
チドのごときインターフェロン誘導剤に暴露された細胞
により自然に生産される。ＩＦＮ−βはまた、１９８１
年６月６日に公表されたＥＰ２８，０３３によシ開示さ
れている方法のような組換手段によっても製造される。

ＩＦＮ−βのミューティンはまた、米国特許Ａ４，５８
８，５８５に記載されているようにしても製造される。

特に、好ましいＩＦＮ−βミューティンは、グリコジル
化されておらず、Ｎ−末端メチオニンを欠き、そして天
然ＩＦＮ−βの１７位のシスティン残基が部位特異的変
異誘発によってセリンで置き換えられているＩＦＮ−β
Ｂ□１７である。ＩＦＮ−βは米国特許屋４，４６２，
９４０に記載されている方法によって製造することがで
きる。

この発明の桟々の観点を次の例によってさらに記載する
が、これによりこの発明の範囲を限定するものではない
。これらの例においては、特にことわらない限シ、固体
についてのすべての重量により、そして液体及び気体の
すべてのチは容量によシ、そしてすべての温度は℃で示
す。

例１゜ ■、患者 検討されたヒトの患者の合計類は９７であった。

各患者は特定のタイプの癌を有し、そして１８才以上の
男性及び女性であった。さらに、患者は、検討の承認の
ために適当な下記の規準のすべてを満たした。

１、標準的抗−癌療法に対して抵抗し、又は一般的に容
認された療法が存在しないｇｉ織学的に証明された固形
悪性腫瘍の一次診断； ２、患者は７０以上のＫａｒｎｏｆｓｋｙ　ｗＪ作状態
（ＥＣ０Ｇ　ＰＳ　Ｏ又は１）をもって移動性（ａｒｎ
ｂｕｌａｔｏｒｙ　）でなければならない；３　クレア
チニン２．０ダ／１００ＩＩＬ１未満；４、　ビリルビ
ン１．５’５ｉ’／１００ｄ未満；プロトロンビン時間
１．５×対照未満； ５、顆粒球１０００　／　ｘｍ　以上；皿小板５０，０
００／瓢３以上； ６３ケ月の最小生存見込み；及び ７、治療前に得なければならない記載された情報の一致
を与える可能性。

矢の患者はすべて除外した。

１、臨床的に有意な心臓疾患、すなわちニューヨーク・
ハート・アノ／ニージョン・クラス■又は■を有する患
者。

２゜抗生＄ＩＪ買治療治療法全必要る深刻な活発な感染
を有する患者。

３、妊娠中の女性又は効果的な避妊を行っていない限り
妊娠の可能性を有する授乳中の女性。

４、　この研究に入る３週間以内に他の自圧実験試行に
関与した対象。

５、　　ＣＮＳ転移、ＣＮＳ感染（網膜疾患を含む）、
脈管炎、既知の急発作、又はＴｉ胞悪性疾患を有する患
者。

６、前入院薬剤投与又は他の処置の排除：（ａ）　　化
学療法、ホルモン療法、免疫療法又は照射療法は、研究
に入る少なくとも３週間にトロソ尿素又はマイトマイシ
ンＣＫついては６週間）前に停止されているであろう。

（ｂ）　　コルチコステロイド又は非ステロイド抗炎症
剤による進行中の治療を必要とする患者は望ましくない
であろう。

（ｃ）　　患者は前の外科処置から十分に回狼している
と考えられるべきである。

７、同種器官移植片を有する患者。

以下全「］ ２、ＩＬ−２ この例において使用する組換ＩＬ−２はｄｅｓ−ａｌａ
−ＩＬ−２，、，２５であった。このＩＬ−２の７ミノ
酸配列は、天然分子の最初のアラニンを欠き、そして１
２５位のシスティンがセリンに変えられている点におい
て天然ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列と異る。このＩＬ−
２を生産するＥ、コリのサンプルはシタス・コーポレー
ションによシ、アメリカン・タイプ・カルチュア・コレ
クシ、ン。

１２３０１パークラウン・ドライブ、ロックビル。

Ｍｄ　、米国に、１９８３年９月２６日に受託番号３９
．４５２として寄託され、そして１９８４年３月６日に
ブダペスト条約のもとに＆３９，６２６として寄託され
た。

ＩＬ−２は、ＰＣＴＷＯ８５１０４３２８の明細書及び
第１図に記載されている様にして処理しそして１ｆｔ製
した。但し、酸化はＯ−ヨウドソペンゾエートによって
ではなく米国特許４４，５７２，２９８に記載されてい
る様にして塩化鋼を用いて行った。

ＩＬ−２をクロマトグラフィ一段階から回収した後、こ
れを凍結乾燥し、そしてＩ　Ｌ−２を還元状態に保つた
めに還元剤（ＤＴＴ）を含有しそしてそれを浴液状に保
つために可溶化剤を含有する中性水性緩衝液に再懸濁し
た。クロマトグラフ段階後の組換ＩＬ−２の純度は少な
くとも約９５％であり、そしてリムルスアッセイによシ
決定した場合このＩＬ−２は約Ｑ、　９２ｎｌ　７ｍ１
未満のエンドトキシンを含有していた。

精製されたＩＬ−２を５０ｍ１）／Ｉｎｌのマンニトー
ルにより０．３ｍ９７ｒｌＬｌの１１度に配合した。

３、　　ＩＦＮ−β この例において使用したＩＦＮ−βはＩＦＮ−βａｅｒ
＋７であった。このＩＦ’Ｎ−βのアミノ酸配列は１７
位のシスティンがセリンに変えられている点において天
然ヒ）ＩＦＮ−βのそれと異る。このＩＦＮ−βを生産
するＥ、コリのサンプルはシタス・コーポレーションに
よりアメリカン・タイプ・カルチュア・コレクションに
、１９８３年１１月１８日に受託番号３９，５１７とし
て寄託された。

ＩＦＮ−βは１９８６年２月４日に公表された米国法定
発明登録＆Ｈ２２の例１に記載されている様にして処理
しそして精製した。精製されたＩＦＮ−βを１２．５　
ｌｎ９７ｍ１の正常血清アルブミン及び１２．５ｔｎｙ
／ｍｅのデキストロースの溶液と０．２５１１１９７ａ
ｔの濃度で配合した。

４、治療計画 患者を１週間に３回、月曜日、水曜日及び金曜日に、Ｉ
　Ｌ−２を静脈内又は皮下投与しそしてＩＦＮ−βを？
ルス静脈内注射として同時に治療した。疾患の進行又は
許容されない毒性を伴わないで、治療を少なくとも１ケ
月間続けた。次のように、４人の患者に各投与レベルを
与え、その前に追加の患者に高投与レベルを与えた。

Ｉｆ　　　　　ｌＸＩＯ３２Ｘ１０’ １　　　　１ＸＩＯ’　　　　　　２Ｘ１０’Ｆ／　　
　　　５Ｘ１０’　　　　　　２Ｘ１０’Ｖ　　　　　
５Ｘ１０６　　　　６Ｘ１０６Ｖｌ　　　　　５Ｘ１０
６　　　１０ＸＩＯ’■　　　　５Ｘ１０６　　　２０
ＸＩＯ６ＩＬ−２の皮下投与を行った場合ＩＬ−２に対
する中和抗体が出現したので、後の研究においてはＩＬ
−２を静脈内投与した。

５、付随する治療 患者が検討対象である間、次のものを除外した。

ｌ、アスピリン ２、コルチコ　ステロイド ３、シメチジン、ラニチジン ４、パルピ　ツレート ５、−久慈性疾患の治療に向けられた免疫療法、ホルモ
ン療法、化学療法又は照射療法。

６、他の実験薬剤。

６、応答基準 応答を、すべての病変の最長直径を測定し、この直径に
直交する直径を測定し、そしてこれら２つの長さを乗す
ることにより決定した。

１、完全応答 最少４週間の間の活性な疾患の臨床的及び実、検案的徴
候の消失。

２、部分的応答 すべての測定可能な病変の直交する直径の積の最少５０
チの減少。

３、安定な疾患 すべての測定可能な病変の直交する直径の積の５０％ま
での減少ないし２５％未満の増加、又は部分的応答又は
疾患の進行として評価される測定可能な病変の変化なし
。

４、疾患の進行 すべて、の測定可能な病変の直交する直径の積の２０％
以上の増加、又は新たな病変の出現。

２つの別々の臨床研究を行った。１つはＲｏｂｅｒｔＬ
、　Ｋｒｉｇｅｌ　Ｉｃ　Ｌ　リ、７オツクス・チェス
・キャンサー畢センター（Ｆｏｘ　Ｃｈａｓｅ　Ｃａｎ
ｃｅｒ　Ｃｅｎｔｅｒ）＋フィラデルフィア、　ＰＡに
おいて４７人の患者を用いて行われ、そして他方はＢｅ
ｒｎａｒｄ　Ｐｏ１ｅｓｚによりサニー・アゲステート
・メディカル・センター（ＳＵＮＹ　Ｕｐｓｔａｔｅ　
Ｍ＠ｄｉｃａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ）　＋シラカス（５ｙｒ
ａｃｕｓｅ　）　ＮＹにおいて５０人の患者を用いて行
われた。検討された腫瘍のタイプには結腸癌、黒色腫、
腎細胞癌、肺癌、腺癌及び乳癌が含まれた。

患者のＮＫ及びＬＡＫ活性が検討された。ＮＫ活性測定
については、各患者の新鮮な単核細胞をダウディ・セル
ライン上に４時間プレートし、そしてクロム−ラベルさ
れた標的上におき、そして各各の放射能をカウントした
。特異的細胞溶解を測定した。ＬＡＫ活性測定のために
は、同じ方法に従ったが、但しダウディ・セルライン上
にプレートする前にｄｅｓ−ａｌａ　−ｒＬ−２と共に
２４時＋　　　　　　　５ｅｒ１２５ 間インキュベートした。

第１の研究のため、ＬＡＫ活性（少なくとも２５チの細
胞溶解によシ測定）と腫瘍に対するある活性との間の関
連付けを行った。黒色腫を有する１人の患者は部分的応
答を示し、そしてその患者は増加したＬＡＫ活性を有し
ていた。さらに、ＬＡＫを示すほとんどの患者はまた、
臨床的に抗−腫瘍活性のおる証拠（例えば安定な疾患）
も有していた。

Ｉ　Ｌ−２の最大許容量は容憧制限のため５Ｘ１０６ユ
ニツト／Ｍ２であり、そしてｒＦＮ−βの最大許容量は
１０×１いユニット／Ｍ２であった。

有意な不都合な効果に関して次の結果が得られた。

第　１　表 早期死　　　　　　　　６（１）　　　０　　　　６（
０）低血圧　　　６（６）　　　０　　　　６（５）　
　　１（１）熱、悪寒　４０（４０）　　２５（２５）
　　２８（２８）　　１２（１２）皮接　８（６）　　
０　　２（２）　　１（１）要約すれば、予備的なフェ
ーズＩヒト臨床研究は、ＩＦＮ−β及びＩ　Ｌ−２の組
合せ治療が抗腫瘍活性を発揮することを示した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、哨乳類種由来のインターフェロン−β （ＩＦＮ−β）及びインターロイキン−２（ＩＬ−２）
   の混合物の有効量を含んで成る、癌の治療的又は予防的
   処置のためにヒトの患者に投与するために適当な組成物
   。 ２、ＩＦＮ−β及びＩＬ−２のための医業として許容さ
   れるキャリヤー媒体をさらに含んで成る特許請求の範囲
   第１項に記載の組成物。 ３、前記ＩＦＮ−β及びＩＬ−２がヒト組換ＩＦＮ−β
   及びＩＬ−２である特許請求の範囲第１項又は第２項に
   記載の組成物。 ４、前記ＩＦＮ−βがＩＦＮ−β＿ｓ＿ｅ＿ｒ＿１＿７
   であり、そして前記ＩＬ−２がｄｅｓ−ａｌａ＿１−Ｉ
   Ｌ−２＿ｓ＿ｅ＿ｒ＿１＿２＿５である特許請求の範囲
   第１項〜第３項のいずれか１項に記載の組成物。 ５、前記癌が結腸癌、黒色腫、腎細胞癌、肺癌、腺癌又
   は乳癌である特許請求の範囲第１項〜第４項のいずれか
   １項に記載の組成物。