JPS62228020A - フルクト−ス−１，６−ジホスフエ−トを必須成分とする抗腫瘍剤毒性からの保護剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、アントラサイクリン系（ａｎｔｈｒａｃｙｃ
ｌ　１ｎｉｃ）抗腫瘍剤の連続投与による代謝および細
胞の正常性に作用する毒性に対して防護作用を有するフ
ルクトース−１，６−ジホスフェート（ＦＤＰ）を必須
成分とする医薬製剤に関するものである。

抗腫瘍活性を有する化合物中、ドキソルビシン（ＤＩＲ
）は化学的治療効果が高く、それゆえヒトにおけるいく
つかの固型病の治療および悪性リンパ腫の治療に用いら
れている。しかし、この薬物の投与の結果生じる心臓毒
性（急性であるか慢性であるかを問わない）のために、
この様な薬の使用は制限される。急性の心臓毒性は、Ｄ
ＩＲの投与直後（およびある場合には投与中）に生じる
一時的な現象であり、心電図で検出が可能である。

この心臓毒性は、ＤＩＲとの接触により刺激を受けた肥
満細胞から循環系中に放出されたヒスタミンの血漿濃度
の一時的な増加と部分的に関係があるらしい。

一方、慢性心臓毒性はＤＩＲを連続投与した結果生じる
作用であり、組織学的に検出容易な壊死性領域を伴なっ
た筋細胞溶解およびうつ血性心不全を特徴とする。これ
らの作用の生化学的メカニズムは長い間研究対象となっ
ており、細胞の形態学的パラメーターおよび代謝のパラ
メーターが変化することが力説されているが、その原因
はまだ明らかではない。

極く最近の研究により、ＤＸＲの心臓毒性はラジカル型
の）を発生するＤＩＲ自身の能力に主に起因するという
結論が導びかれた。生体内で生成したＤＩＲのセミキノ
ンラジカルは、酸素原子を電子受容体として用い、次式
： ％式％ に従って１電子性の酸化を受ける。それ故、この反応に
よりＤＩＲセミキノンラジカルおよび０２゜超酸化物ア
ニオンが生じ、他のへのラジカル型（ＯＨ’、Ｈ２Ｏ２
、単一の酸素原子など）の形成を導く一連のカスケード
反応が始まる。細胞内においてこれらの反応性の高いラ
ジカル型が増加すると細胞膜脂質の過酸化が起こり、そ
の結果その４次構造が変化し、このために細胞質の流出
および細胞の死がひき起こされる。

ＤＸＲで治療中に、ＧＳＨが個渇し、ｑラジカルを消去
する心筋の酵素（カタラーゼ、ＳＯＤ、ＧＳ　Ｈ−ペル
オキシダーゼ）の活性が低下することが、ＤＸＲが心臓
に及ぼす毒性作用の特異性の原因である。

フルクトース−１，６−ジフオスフアターゼに関する徹
底的な研究および志願者により行なわれたいくつかの試
験により、これまで知られていなかったＦＤＰの保護作
用が発見されたことは驚くべきことであり、これは後述
する実験の結果によって確認される。

フルクトース−１，６−ジホスフアターゼ（ＦＤＰ）が
細胞膜と相互作用することにより、イオン透過性を修飾
してホスホフルクＩ・キナーゼの活性化を引き起こし、
内因性のＦＤＰ濃度および細胞中のＡＴＰ濃度を増加す
ることを臨床試験により確認した。

ＦＤＰは、種々の化学促進剤（ＤＩＲを含む）により誘
導される隔離ラット肥満細胞からのヒスタミン遊離を保
護し、隔離ヒト多形核球中においてホルボールのエステ
ル類により誘導される超酸化物（ＰＭＡ）の形成を抑制
することが、行なった実験により示された。

隔離細胞系においてさらに実験が行なわれ、インキュベ
ーション溶媒中にＦＤＰが存在していても細胞内部へ透
過するＤＩＲの量は減少しないことが示された。

腫瘍にかかっている患者にアントラサイクリン系抗腫瘍
剤を連続投与した結果中じる合併症を減じることが必要
であるすべての場合において、ＤＩＲの連続投与による
心臓毒性に対する保護としてＦＤＰを使用することが非
常に有効であることがその後、明らかになった。

以下の実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本
発明はこれに限定されるものではない。

実施例 この試験は、体重１９−２１ｇのスイス（！ｌＴｌ／１
ｓｓ）マウス（チャールズ・リバー（Ｃｈａｒｌｅｓ　
Ｒ４ｖｅｒ））１００匹（雄５０匹および雌５０匹）に
対して行なった。このマウスには標準的な実験室の飼料
（（飼料登録商標ノッサン（Ｎｏｓｓａｎ））および水
を自由に与え、湿度および温度を調節した。

使用したドキソルビシンはファルミタリア・カル口・エ
ルバ（Ｆａｒｍｉｔａｌｉａ　Ｃａｒｌｏ　Ｅｒｂａ）
が原料品として製造したものである。

動物は各々８匹のマウスからなる２つの処置群に分けた
。

第１群：　０．９　％　ＮａＣ１ 第２群：　ＦＤＰ　（投与量７５０　”ＩＰ／Ｋｌｉ’
　）ＮａＣ１およびＦＤＰを週に５日間、毎日腹腔内投
与した。

ＤＩＲ（用量３■／に９）を週に２回、両方の群に腹腔
内投与した。

ＤＩＲを投与する日には、この抗腫瘍剤を注入する２０
分前に処置の投与を行った。

ＤＸＲＸ再投与後２，３．４週間後に各群ごとにそれぞ
れ２匹の動物を殺傷した。この処置のパターンを繰り返
して、各週、各処置群に対して１０匹の動物を得た。処
置を行わない残りの２０匹の動物は、調べるパラメータ
ーの基礎値を決めるために用いた。

動物は断頭して殺傷し、ヘパリンの入った試験管に血液
を集めた。心臓および肝臓を摘出し、液体窒素中で凍結
した後、冷ＫＣｌ（１，１５％）中でウルトラ・ツラツ
クス（Ｔｊｌｔｒａ　Ｔｕｒｒａｘ）　　（ジャンクお
よびクンケル（Ｊａｎ、ｋｅ　ａｎｄ　Ｋｕｎｋｅｌ）
）ホモジナイザーを用いてホモジナイズした。たん白質
を調べるためにいくらかの世を取った後、Ｘ　−１００
トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）　（登録商標）をサンプルに
加え、最終濃度を１％にした。以下に示すパラメーター
を調べた。

一還元型グルタチオン（ＧＳＨ） 一マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）により調べた脂質の過
酸化 一グルコース−６−ホスフエイトデヒドロゲナーゼ（Ｇ
−６−ＰＤＨ） −６−ホスホグルコネートデヒドロゲナーゼ（Ｇ−６−
ＰＧＨＤ） 一カタラーゼ 集めた血液を遠心分離した後、あらかじめ洗浄してパッ
クしくｐａｃｋｅｄ）、蒸留水で溶血させた赤血球に関
して、上記のパラメーターの値（脂質の過酸化を除く）
を評価した。さらに、血漿中の乳酸デヒドロゲナーゼ（
ＬＤＨ）の活性を調べた。

すべての測定はバックマン（Ｂａｃｋｍａｎ）　　Ｄ　
Ｕ　−８分光光度計を用いて分光光度測定により行った
。

すべての試験は動物を殺傷した日に行った。１匹のマウ
ス用の個別のカードにそれぞれデーターを記録した。処
置群と基礎値との間の差異値、および２つの処置群間の
差異値をウイルコソン（Ｗｉｌｃ−ｏｘｏｎ）の１サン
プル試験を用いて評価した。

選択した実験モデルにおいては、赤血球および肝臓のＧ
−６−ＰＤＨおよび６−ＰＧＤＨの変化により、また、
赤血球および心臓のカタラーゼにより、更に血漿のＬＤ
Ｈおよび心筋の脂質の過酸化により、ＤＩＲの連続投与
による毒性作用が示される。

両群（ＮａＣｌ！およびＦＤＰ　）の赤血球のＧ−６−
ＰＤＨ，Ｇ−ＰＧＤＨおよびカタラーゼの値を表１に示
す。

２つの処置群の総血ＪＬＤＨ値を表２に示す。

２つの処置群の肝代謝に関するいくつかの酵素の酵素活
性値を表３に示す。

心臓の代謝に関するいくつかのパラメーターの値を表４
に示す。

第４週目におけるＧ−６−ＰＤＨおよび６−ＰＧＤＨの
赤血球の活性、および第２．３、および４週目における
カタラーゼの活性に対して、ＤＸＲの投与が有意に作用
することが基礎値と比較してわかった。

４週すべてにおいて、血漿ＬＤＨの総活性は基礎値より
も増大した。肝のＧ−６−ＰＤＨ活性は第４週目におい
て、基礎値と比較して有意に異なることが証明された。

心臓の総脂質過酸化およびカタラーゼは、実験の最初の
週から基礎値と比べて有意に増加した。

ＦＤＰ群に関しては、第４週目においてのみ血漿ＬＤＨ
の総活性が基礎値と比較して有意に異なり、第２および
４週目における心臓の過酸化の総活性、および実験を行
った４週間のすべてにおいて心臓のカタラーゼ活性が基
礎値と比較して有意に異なるという結果になった。

２つの処置群を比較すると、第４週目の赤血球のＧ−６
−ＰＤＨ活性、第２．３．４週目の赤血球の６−ＰＧＤ
Ｈ活性および第２．３．４週目の赤血球のカタラーゼ活
性の有意差が強調された。

血漿ＬＤＨの総活性は、実験を行った４週間のすべてに
おいて２つの処置群間に有意差のあることが示された。

肝のＧ−６−ＰＨＤ活性および６−ＰＧＤＨ活性は第４
週目において２つの処理群間に有意差が生じる結果を得
た。心臓の脂質過酸化の値を２つの処理群間で比較する
と、実験を行った４週間のすべてにおいて有意差がある
ことがわかった。

心臓のカタラーゼ活性は実験の第３および４週目におい
て有意に異なる結果を得た。

上記のデーターにより、２つの明確な現象が明らかに示
される。すなわち、ＤＸＲの長期投与により障害が生じ
ること、およびＦＤＰを繰り返し処置することによる保
護作用である。

この実験モデルにおいて、ＤＸＲの毒性が血液レベルお
よび組織（肝臓、心臓）レベルの両方において示された
。

赤血球においては、ＤＸＲ投与による酸化力の増加のた
めにペントースホスフェート系路の主要な酵素の活性が
増大した。

ＤＩＲの総投与量に依存して総血９　Ｌ　Ｄ　Ｈが増大
したことにより、この抗腫瘍剤の細胞正常性に対する毒
性により生じる有害性がまぎれもなく示された。電気泳
動分析により、肝および心臓のイソ酵素（アイソザイム
）が増加することが強調され、アントラサイクリンの組
織属性が確認された。

肝臓においては、ＤＩＲは肝ミクロゾーム系を誘導する
結果、Ｇ−６−ＰＤＨ活性および６−ＰＧＩ）Ｈ活性を
増大させた。

この実験中においても、ＤＸＲの毒性により、心筋細胞
の正常性および機能に対して最大の障害が生じることが
証明された。

カタラーゼ活性が基礎値の３．５倍に増大したことは、
心筋組織にＤＸＲが高濃度に蓄積することにより生成し
た超酸化物が自然にまたは心臓のＳＯＤに触媒されて不
同変化（酸化還元同時反応）して大量のＨ２Ｏ２が生じ
たことを示している。

一方、ＤＸＲにより変化するすべてのパラメーター（赤
血球のパラメーターおよび組織のパラメーターの両方）
の挙動はＦＤＰで処置することにより明確な影響を受け
る。

赤血球においてペントースホスフェート系路（Ｇ−６−
ＰＤＨおよび６−ＰＧＤ、Ｈ）が活性化されないのは、
ＦＤＰ投与により解糖の活性化が制御される結果であり
、ＦＤＰの投与によりホスホフルクトキナーゼが明らか
に調節され、それ故、解糖系以外の糸路によりグルコー
スが酸化されることが防がれる。

また、ＦＤＰで処置すると、ＤＸＲにより誘導される組
織障害が減じることが、細胞壊死を示す血ＱＬＤＨ値に
より明白に示される。ＦＤＰ処置群においては、ＤＩＲ
投与後第３週目透口は基礎値と比べて有異な差が記録さ
れなかった。

ＦＤＰの保護作用により、肝臓におけるペントースホス
フェート系路の酵素の酵素活性は増大しなくなった。Ｆ
ＤＰがこれらのパラメーターに作用していると考えられ
るメカニズムは、細胞でのグルコース代謝促進能と常に
関連している。このＦＤＰの保護作用は、ＤＩＲの連続
投与により生ずる障害が最も顕著である心臓レベルで特
に著しく示された。ＦＤＰ群において、カタラーゼ活性
は基礎値と比べて増大したが、ＮａＣ１群で得た値の約
２倍低いという結果を得た１、細胞膜の構造の正常性、
および、それ故に機能の正常性の基本的な生化学的指標
である脂質の過酸化に関しても、類似の状態が生じた。

実際、実験の第４透口においてＦＤＰ群で得たＭＤＡ値
はＮａＣ／？群でのＭＤＡ値の半分よりも小さい。

表１ マウスにおける赤血球代謝酵素の活性化に対して、Ｄｘ
Ｒ（２ｒｎｇ／ＫＬ９、ｉ、ｐ、　）　（７）連続投与
ニヨリ生シル障害ニ対スル、ＦＤＰ　（７５０ｒｎｇ／
に？、ｉ、ｐ−）およびＮａＣｊ？　（０，９％、　　
ｉ、ｐ、）の効果。

茗μ マウスにおける血漿ＬＤＨの総括性に関する、ＤＩＲ（
２■／　Ｋ９　、　　ｉ　、　ｐ　、　）の連続投与に
より生じる障害に対スルＦＤＰ　（７５０ｍ’ｉ／に？
、ｉ、ｐ、）　オよびＮａＣ１（０，９％、１−ｐ−）
の効果。

表３ マウスにおける肝代謝酵素活性に関する、ＤＩＲ（２■
／　ＫＳＩ、ｉ、ｐ、）の連続投与により生じる障害に
対するＦＤＰ（７５０■／ＫＰ、ｉ、ｐ、）およびＮａ
Ｃ１（０，９％、ｔ−ｐ、）の効果。

■ マウスにおける心筋のいくつがのパラメーターに関する
、ＤＸＲ（２〜／敗、ｉ−ｐ、）の連続投方により生じ
る障害に対するＦ　Ｄ　Ｐ　（７５０１ｎｇ／”？、１
、ｐ、）オヨびＮａＣ１（０，９％、　　ｉ、ｐ、）ノ
効果。

この様な結果の重要性はアントラサイクリン系抗腫瘍剤
の広範な使用につながるものであり、それ故、多くの治
療行為において、フルクトース−１，６−ジホスフェー
トで処置することにより、有害な副作用が生ずるのを防
ぐことができる可能性が本発明により提供されたのであ
る。

特許出願人　　　ビオメゾイカ・フォスカマ・ファルマ
チェウテイ力・エツセ・ ピ・ア

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）フルクトース−１，６−ジホスフェートを必須成
   分とする、アントラサイクリン系抗腫瘍剤投与に起因す
   る損傷に対する保護剤。
2. （２）フルクトース−１，６−ジホスフェートがナトリ
   ウム塩である場合の第１項記載の保護剤。
3. （３）水溶液である第１項または第２項記載の保護剤。
4. （４）凍結乾燥粉末である第１項または第２項記載の保
   護剤。
5. （５）ナトリウム塩の形のフルクトース−１，６−ジホ
   スフェートの１日投与量が２５０ｍｇ／Ｋｇ体重または
   それ以上である第１項〜第３項のいずれかに記載の保護
   剤。