JPS6219536A - モノクロ−ナル抗体含有百日咳予防治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、哺乳類細胞膜複合糖質 （ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）に対して生じたモ
ノクローナル抗体の投与による、ボルデテラ・ペルツシ
スＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ　　ｅｒｔｕｓｓｉｓにより惹
起される百日咳の予防及び／又は治療の方法に関する。

以下余白 〔従来の技術〕 ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）の種は、ヒト及び
動物における繊毛を有する（ｃｉｌｉａｔｅｄ）呼吸器
粘膜に位置する感染を生じさせる。Ｂ、ペルツシス（Ｂ
、　ｅｔｕｓｓｉｓ）及びＢ、バラペルツシス（Ｂ、　
　ａｒａ　ｅｒｔｕｓｓｉｓ）はヒトにおいてのみ自然
の病気を生じさせ、他方Ｂ。

ブロンチセプティカ　−坦２１印μ功頂咀８違徂）は主
として動物、例えば１歯類又はイヌにおいて病気を生じ
させる。ボルデテラ・ペルツシスにより惹起される百日
咳は、高度に免疫されたヒトの集団においてさえ相当な
頻度の病気であり、そして未開発国における小児の死亡
率に重く寄与している。

世界保健機構は、最近、世界中のすべての子供が百日咳
からの保護を受けることを推奨している。

米国及びヨーロッパにおいて入手可能な最近の不活性化
全細胞ワクチンは７０〜９０％有効であるが、死亡を含
む、許容されない高率の毒性を有する（Ｃ１Ｖ、Ｂｒｏ
ｏｍｅ及びＢ、Ｗ、　Ｆｒａｓｅｒ＋　Ｊ、　Ｉｎｆ、
　Ｐｉｓ。

１４４　１８７（１９８１））。Ｂ、ペルツシスの抗原
画分のみを含有する、Ｖ、Ａ、Ｆｕｌｇｉｎｉｔｉ、　
Ｊ、Ｉｎｆ、　Ｄｉｓ、　１４１？＋１４６（１９８３
）により検討されているような新規なワクチンは最終的
には毒性を低下せしめるであろうが、しかしながらワク
チンは長期間にわたり免疫された者に対して１００％の
保護を提供することができず、そして病気の療法におい
て有用でないであろう。

〔発明が解決しようとする問題点〕

百日咳の治療のために現在入手可能な化学療法剤は病気
の進行を和らげることができるのみで感染に対して真に
闘うことができないから、これらの価値は限られている
。一層効果的な治療の必要性が存在する。この発明はこ
のような方法を提供するものである。

〔問題点を解決するための手段〕

哺乳類細胞膜複合糖質に対して生じたモノクローナル抗
体は、Ｂ、ペルツシスにより惹起される百日咳及びボル
デテラの他の種により惹起される気道の感染の予防及び
治療において非常に効果的である。従って、この発明は
、哺乳類におけるボルデテラ・ペルツシスにより惹起さ
れる百日咳及びボルデテラの他の種により惹起される気
道の感染の予防及び／又は治療の方法に関し、この方法
は哺乳類細胞膜複合糖質に対して特異的なモノクローナ
ル抗体又はその誘導体の有効量を処理を必要とする該哺
乳類に投与することを特徴とする。

複合糖質は、炭水化物官能を含有するバイオ分子、例え
ばグリコスフィンゴリピドのごとき糖脂質、糖蛋白質、
又はプロテオグリカンである。

膜成分として上皮細胞により生産される中性グリコスフ
ィンゴリピドに、特に悪性上皮細胞、例えば乳癌細胞、
肺癌細胞もしくは直腸結腸癌細胞により生産される中性
グリコスフィンゴリピドに、又は胎便から得られる中性
グリコスフィンゴリピドに結合するモノクローナル抗体
及びその誘導体が、この発明において特に有用である。

グリコスフィンゴリピド（ｇｌｙｃｏｓｐｈｉｎｇｏｌ
ｉｐｉｄ　ｉ　Ｇ　Ｓ　Ｌ　）は炭水化物から成り、こ
の炭水化物は長鎖アミノアルコール〔最も一般的にはス
フィンゴシン（ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ）である〕の−
級ヒドロキシ官能基にグリコシド結合しているモノサッ
カライド又は通常はオリゴサツカライドであり、このア
ミノアルコールは今度はアミド結合を介して脂肪酸に連
結されている。このようなグリコスフィンゴリピドは上
皮細胞の細胞膜に組み込まれ、又はこれらによって体液
中に放出されるであろう。

１０１８Ｓ１９．１１．１０１８Ｓ６９．４．１０２１
Ｓ１１．２８．１０２２Ｓ２５．１７及び１０２２Ｓ２
３．２４と称するモノクローナル抗体、並びにその誘導
体、例えば抗体断片、しかし特にモノクローナル抗体そ
れ自体、が好ましい。この発明のモノクローナル抗体の
断片は例えばＦａｂ、　Ｆａｂ　’又はＦ（ａｂ’）ｚ
断片であり、抗原決定基に対するその特異性を保持して
いるもの、すなわちグリコスフィンゴリピドに対する親
モノクローナル抗体の特徴的結合パターンを保持してい
るものである。

この発明のモノクローナル抗体は、種々の起源のグリコ
スフィンゴリピド（ＧＳＬ）に対するそれらの結合パタ
ーンについて検出されそして分析され、そしてそれらの
免疫グロブリンクラス又はサブクラスにより特徴付けら
れる。

ＧＳＬに対するモノクローナル抗体の結合パターンは、
いわゆるＧＳＬ−プロッティング法により決定すること
ができる。グリコスフィンゴリピドは既知の方法により
、例えば溶剤抽出、溶剤分配及びクロマトグラフ法によ
り、種々の組織から、例えば乳房、肝臓、腎臓、肺臓、
扁桃組織、さらには腫瘍組織、例えば乳癌、肺腫瘍等か
ら、赤血球及び他の細胞起源から、例えば胎便、すなわ
ち新生児の便から得られる。ＧＳＬは薄層クロマトグラ
フィーにより分離され、そして全クロマトグラフパター
ンがニトロセルロースに移される。この目的のため、薄
層プレートを適当な溶剤、例えば水性低級アルコールに
より湿し、そして多孔質ニトロセルロースのシートに押
し付ける。ニトロセルロース上に得られたレプリカを場
合によってはストリップに切断し、そしてモノクローナ
ル抗体を含有する溶液と共にインキュベートレ、そして
ニトロセルロース上に吸着されたグリコスフィンゴリピ
ドと抗体との免疫反応を、既知の方法により、例えば酵
素に接合した第２抗体及びこれに続く酵素１貰により顕
在化し、又は放射性ラベルされた第２抗体により顕在化
する。

この発明のモノクローナル抗体は、１９のヒトの個体か
らの乳癌生検材料からのＧＳＬ抽出物のほとんどにおい
て中性ＧＳＬに結合するが、ガングリオサイド、すなわ
ちシアル酸含有ＧＳＬに結合しない。これらの結果を、
抗原中性ＧＳＬの炭水化物鎖のモノサッカライドユニッ
トのおよその数と共に表に示す。

モノクローナル抗体の免疫グロブリンクラス及びサブク
ラスは、良く知られている方法により、例えばクラス特
異的第２抗体を用いる免疫拡散オークテルロニー法によ
り決定される。この発明のモノクローナル抗体は免疫グ
ロブリンＧ、、Ｇ、、。

０２□Ｇ１、又はＭのクラスに属する。

この発明のモノクローナル抗体は哺乳類の繊毛を有する
細胞（繊毛細胞）１、例えばヒト又はラビットの気管か
らの繊毛細胞に結合する。繊毛を有する細胞に結合する
この発明のモノクローナル抗体の能力は、繊毛を有する
生存細胞の新しく調製した懸濁液をモノクローナル抗体
と共にインキュベートするアッセイ法により決定される
。洗浄の後、細胞に結合したモノクローナル抗体を、試
験されるべきモノクローナル抗体上のエピトープを認識
する、フルオレソセインと接合した第２抗体により検出
する。このアッセイの結果を表に示す。

繊毛を有する細胞に結合するそれらの能力により、この
発明のモノクローナル抗体は繊毛へのＢ、ペルッシスの
付着をブロックする。これはおそらく、抗体が繊毛を有
する膜上のＢ、ペルッシスに対するレセプターと結合し
そして／又はそれを非接近性（ｉｎａｃｃｅｓｓｉｂｌ
ｅ）にするために生ずるであろう。繊毛を有する細胞へ
のＢ、ペルッシスの付着をブロックするモノクローナル
抗体の能力はＥ、　Ｉ。

Ｔｕｏｍａｎｅｎ等、Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｍｉｃｒｏ、
　２０，１６７　（１９８４）により記載されている付
着アッセイにおいて決定される。このアッセイにおいて
は、生存Ｂ、ペルッシスを試験されるべきモノクローナ
ル抗体と混合し、そして次に生存細胞の新しく調製した
懸濁液とインキュベートする。この細胞は場合によって
はアトへシン、すなわち繊維性へマグルチシン又は百日
咳毒素と前インキュベートされる。繊毛を有する細胞に
付着するＢ、ペルツシスは、該細菌には結合するが、し
かし該細胞又は試験されるべきモノクローナル抗体には
結合しない、フルオレソセイン抗合抗体により検出され
る。平行試験において、この発明において使用されるモ
ノクローナル抗体はＢ、ペルツシスに結合しないことが
示される。結果を表に集約する。

幾分は、この発明のモノクローナル抗体はヒト繊毛細胞
からＢ、ペルツシスを除去することができる。これは前
記の改変された付着アッセイにおいて決定される。

結果を表に集約する。

以下余白 ヒト及びラビットの繊毛細胞に対するＢ、ペルツシス付
着試験の表に集約された結果は、百日咳及びボルデテラ
の種により惹起される気道の関連する感染の予防及び／
又は治療にモノクローナル抗体を適用することができる
ことを示している。これらのモノクローナル抗体、又は
抗原決定基に対する特異性を維持しているその断片の、
繊毛を有する気管粘膜への直接供与はＢ、ベルツシスリ
セプターへの結合を導き、これによってこれらの特異的
宿主標的への細菌の付着を阻害する。そして、Ｂ、ペル
ツシスが繊毛エスカレータ−により除去されることがで
き、そして感染が回避される。このような予防は特に重
要である。なぜなら、この病気は実質的に１００％伝染
性であり、そして繊毛上でのＢ、ペルツシスのコロニー
形成を予防するための抗生物質療法の効果はかなり疑わ
しいからである。

さらに、百日咳及び関連疾患の確立されたケースの効果
的な療法が予想される。約６〜８週間維続する感染は、
繊毛に付着性のＢ、ペルツシスの増加及びこれに続く新
しい娘細胞の新しいりセプタ一部位への付着により永続
される。モノクローナル抗体の投与は、このような娘細
胞の付着をブロックし、そして繊毛上の結合部位につい
て確立された細胞と競争し、これによって感染を停止せ
しめそして最終的に退化せしめるであろう。

この発明に従えば、モノクローナル抗体がヒトを包含す
る哺乳類の気道に投与される。これらは吸入組成物の形
で、例えば主として約２〜５μｍの粒子サイズを有する
粉末混合物として、又は揮発性推進剤による加圧容器か
らのエーロゾルとして供与されるであろう。

粉末形の医薬組成物は、この発明のモノクローナル抗体
を、肺組織と適合性の固体担体、好ましくはラクトース
、及び場合によっては安定剤と混合することによって調
製される。粉末は篩別され、そして場合によっては推進
剤と共に、吸入される場合に所定量の粉末を放出するよ
うに調節された装置に詰められる。適当な推進剤は圧縮
ガス、例えば圧縮空気、さらには笑気又は二酸化窒素で
ある。

吸入のための医薬組成物はまた、水溶液、例えば肺組織
と適合性の等張溶液又は緩衝液である。

これらの溶液は、モノクローナル抗体を水又は水性塩溶
液に溶解し、場合によっては所望により安定剤及び防腐
剤を添加することにより調製される。

この溶液は口を通して吸入するのに適当な噴霧装置又は
ネブライザーに充填される。

エーロゾルは、モノクローナル抗体を水に溶解し、アル
コール、例えばエタノール又はベンジルアルコール及び
所望により安定剤を添加し、そしてこれを液化した揮発
性推進剤と混合することにより調製される。この混合物
は所定量のエーロゾルを放出する弁を有する圧力容器に
充填される。

適切な推進剤は非毒性であり、そして大気圧において室
温より低い沸点を有し、そして例えば低級アルカン類又
は低級アルキルハライド類である。

商標“フレオン”として知られている低級フルオロアル
カン又は低級クロロフルオロアルカン、例えはジクロロ
ジフルオロメタン（フレオン１２）、ジクロロテトラフ
ルオロエタン（フレオン１１４）等が特に好ましい。

投与されるべきモノクローナル抗体の量は、処置を必要
とする哺乳類の種、年令、及び個々の状態に依存する０
例えば体重１０ｋｇの子供の気道に投与される日用量は
約５曙〜約５００■、好ましくは約１０■〜１００■で
ある。例えば体重７０ｋｇの成人には一層高投与量、例
えば前記の投与量の３〜１０倍、好ましくは約１００■
〜１０００■を投与する。

この発明において使用されるモノクローナル抗体及びそ
の誘導体はそれ自体既知の方法により得られ、この方法
は該モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞
を、 ａ）インビトロ培養し、そしてこの培養上清からモノク
ローナル抗体を単離するか；あるいは、ｂ）適当な哺乳
類中でインビボ増殖せしめ、そして該哺乳類の体液から
モノクローナル抗体を回収し；そして所望により、 Ｃ）得られたモノクローナル抗体をその誘導体に転換す
る； ことを特徴とする。

プロセスａ）のインビトロ培養のために適当な培地は、
場合によっては哺乳類血清、例えばウシ胎児血清が補充
されている、ダルベコの改変イーグル培地又はＲＰＭ１
１６４０培地のごとき標準的培地である。モノクローナ
ル抗体の単離は、培養上清中に含有される蛋白質の硫酸
アンモニウム等による沈澱、及びそれに続＜、標準的ク
ロマトグラフ法、例えばゲル濾過、イオン交換クロマト
グラフィー、ＤＥＡＥセルロース上でのクロマトグラフ
ィー、又はイムノアフィ・ニティークロマトグラフイー
による免疫グロブリンの精製により達成される。

プロセスｂ）のハイプリドーマ細胞の増殖により多量の
所望モノクローナル抗体を得ることができる。細胞クロ
ーンを同系哺乳動物に注射し、この動物が抗体産生腫瘍
を増殖せしめる。１〜３週間後、該噛動物の体液から目
的モノクローナル抗体を回収する。例えば、Ｂａ１ｂ／
ｃマウス由来のハイプリドーマ細胞を、場合によっては
炭化水素、例えばプリスタンにより前処理されたＢａ１
ｂ／ｃマウスに腹腔的注射し、そして１〜２週間後、こ
れらのマウスの腹水を集める。目的とするモノクローナ
ル抗体を、それ自体既知の方法により、例えば硫酸アモ
ニウム等により、蛋白質を沈澱せしめ、これに続いて標
準的クロマトグラフ法、例えばゲル濾過、イオン交換ク
ロマトグラフィー、ＥＥＡＥセルロース上でのクロマト
グラフィ、−１又はイムノアフィニティークロマトグラ
フィーにより免疫グロブリンを精製することにより単離
する。

グリコスフィンゴリピドの抗原決定基に対する特異性を
維持しているモノクローナル抗体の断片、例えばＦａｂ
　、　　Ｆａｂ’又はＦ　（ａｂ’）ｚは、プロセスの
ａ）又はｂ）により調製されたモノクローナル抗体から
、それ自体既知の方法により、例えば、ペプシンもしく
はパパインのごとき酵素による消化及び／又は化学的還
元によるジスルフィド結合の開裂により得ることができ
る。

目的とする抗体を分泌するハイプリドーマセルラインの
例は、骨髄腫細胞と、グリコスフィンゴリピドにより免
疫感作されだ哺乳類の８１７８球とのバイブリドたるセ
ルラインである。好ましくは、これらのセルラインはマ
ウス骨髄腫細胞と、グリコスフィンゴリピドにより免疫
感作された同系マウスの８１７８球とのバイブリドであ
る。

１’０１８Ｓ１９．１１．１０２２Ｓ２５．１？、１０
２１Ｓ１１．２８、及び１０１８５６９．４と称し、１
９８４年８月１６日にそれぞれＮｏ　ｌ−３３１、ｌ−
３３２、ｌ−３３３、及びｌ−３３４として“Ｃｏ１１
ｅｃｔｉｏｎ　Ｎａｔｉｏｎａｌｓ　ｄｅ　Ｃｕ１ｔｕ
ｒｅｓ　ｄｅＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ　″、パ
スツール研究所、パリに寄託されていハイブリドーマセ
ルライン、並びに１０２２５２３．２４と称し１９８５
年５月３１日にＮｏ　ｌ−４５３として上記寄託樋管に
寄託されているハイブリドーマセルラインにより分泌さ
れるモノクローナル抗体が特に好ましい。これらのハイ
ブリドーマセルラインは、マウス骨髄腫セルラインＳＰ
２１０−Ａｇ１４と、グリコスフィンゴリピド　により
免疫感作されたＢａ１ｂ／ｃマウスの肺臓の８１７８球
とのハイプリドーマである。これらは安定なセルライン
であり、それぞれ１０１８Ｓ１９．１１．１０２２Ｓ２
５．１？、１０２１Ｓ１１．２８．１ｏ１８ｓ６９．４
　、及び１０２２Ｓ２３．２４と称するモノクローナル
抗体を分泌する。セルラインは深冷凍結培養物として維
持することができ、そして解凍及び再クローニングによ
り再活性化される。

中性グリコスフィンゴリピドに対するモノクローナル抗
体を分泌する上記の好ましいハイブリドーマセルライン
は、サルモネラ・ミネソタ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｍ
１ｎｅｓｏｔａ）　Ｒ５９５ラフ株細菌上に吸着された
グリコスフィンゴリピドによりＢａ１ｂ／ｃマウスを免
疫感作し、これらのマウスの抗体産生肺細胞を同系骨髄
腫細胞と融合せしめ、この融合において得られたバイブ
リド細胞をクローン化し、そして目的の抗体を分泌する
細胞クローンを選択することにより調製される。

免疫感作に使用されるグリコスフィンゴリピドはアセト
ンにより前処理されたヒト乳癌生検材料から、又はヒト
胎便から、メタノール／クロロホルム／水混合物による
抽出、水及びメタノール／クロロホルム間の溶剤分配、
並びに逆相シリカゲルクロマトグラフィーにより得られ
る。

次に、例によりこの発明を説明する。但し、これにより
この発明の範囲を限定するものではない。

例中に使用される略号は次の意味を有する。

ＢＳＡ　　　　ウシ血清アルブミン ＧＳＬ　　　　グリコスフィンゴリピドＨＡＴ　　　　
ヒポキサンチン／アミノプテリン／チミジン ＨＥＰＥＳ　　　　Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジ
ン−Ｎ′−２−エタンスルホン酸 ＨＰＴＬＣ高速薄層クロマトグラフィーＰＢＳ　　　　
リン酸緩衝化塩溶液 ＴＢＳ　　　トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメ
タン緩衝化塩溶液 Ｔｒｉｓ　　　　　）リス−（ヒドロキシメチル）−ア
ミノメタン ＶＣＢ　　　　ウィルス収集ブロス エストロゲンリセプターの決定のために採取された癌生
検組織検体由来の細胞性沈降物を、組織学的確認により
診断された多数の乳癌患者から得る。典型的な実験にお
いては、ポリスチレンチューブ中の凍結クロットとして
得られた１９０の個体のサンプルをドライアイスにより
さらに冷却し、そしてプラスチックをハンマーにより破
砕する。

集めた沈降物（湿重量１６９　ｇ　）を凍結乾燥して３
３ｇの乾物を得る。４℃にてツルパル組織ブレンダーを
用いてアセトン中でホモジナイズし次に濾過する操作を
反復することにより乾燥材料から蓄蔵脂肪を除去する。

残る固体材料はなお多量の極性脂質例えばホスホリピド
及びグリコスフィンゴリピドを含有する。これらを室温
にて２００ｍ　ｌのクロロホルム／メタノール（２：　
１．Ｖ／Ｖ）を用いて３回、及び２００ｍ　ｌのクロロ
ホルム／メタノール／水（１：　１　：０．２　　、　
Ｖ／Ｖ／Ｖ）を用イテ２回抽出する。

１．２　　フォルク　（Ｆｏ　ｌｃｈ　　＼多量のリン
脂質、及びそのオリゴサツカライド鎖中に４個未満の糖
を有するグリコスフィンゴリピドを、フォルク（Ｆｏｌ
ｃｈ）　（Ｔ、　５ａｉｔｏ　　及びＳ、　Ｈａｋｏｍ
ｏｒｉ、　Ｊ、　Ｌｉ　ｉｄ　Ｒｅｓ、　　１２．２５
７（１９７１）　）に従う改変された分配法により極性
グリコスフィンゴリピドから分離する。例１．１から集
められた抽出物を４０℃にて減圧下で蒸発せしめ、そし
て栓を有するガラスシリンダー中の９０ｍＡ’のクロロ
ホルム／メタノール（２：１、Ｖ／Ｖ）中に再溶解する
。１５１ＩＩＩｌの水を加え、そして溶液を激しく振ど
うする。１５分間放置した移相を分離する。クロロホル
ムに冨む下層をクロロホルム／メタノール１０．１％水
性ＭＣＩＩ　　（１：１０：１０．Ｖ／Ｖ／Ｖ）で３回
抽出する。

１．３゛　　　クロマトグラフィー 塩及び他の水溶性汚染物を除去するため、例１゜２から
の一緒にした上層を蒸発せしめ、水に入れ、そしてリク
ロプレップ（Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ）ＲＰ１８　　（メ
ルク、Ｆ、Ｒ，Ｇ、）の７　ｍｌを収容するガラスカラ
ムに適用する。水で十分に洗浄した後、極性グリコスフ
ィンゴリピド画分を１０ｎ１１の、そして次に１０ｍｊ
２のクロロホルム／メタノール（２：１゜Ｖ／Ｖ）によ
り溶出する。収率は約３ｏｍｇ、すなわち組織の乾燥重
量の０１１％である。

１．４　　　　クロマトグラフィー ＧＳＬ標品の純度を、シリカゲル薄層クロマトグラフィ
ー及びそれに続＜、糖含有化合物を可視化するオルシノ
ール／硫酸試薬（Ｌ、　Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ。

Ｊ、　Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、上、　４２（１９５Ｇ）又
はフォスプレー（Ｐｈｏｓｐｒａｙ）　　（商標）　　
［５ｕｐｅｌｃｏ　Ｉｎｃ、　Ｂｅ１ｌｅｆｏｎｔｅ　
。

Ｐａ、　、米国、Ｊ、Ｃ，Ｄｉ、　ｔｔｍｅｒ　　及び
Ｒ，Ｌ、Ｌｅｓｔｅｒ。

Ｊ、Ｌｉ　ｉｄ　Ｒｅｓ、　　５．１２６（１９６４）
　）のプレートへの噴霧によるリン脂質の検出により試
験する。シリカゲル６０　ＨＰＴＬＣプレート　（サイ
ズ５Ｘ５ｃｍ、吸着層の厚さ０．２４ｍｍ、メルクＦ、
Ｒ，Ｇ、）を用いる。脂質サンプルを１０〜２０μｌの
クロロホルム／メタノール（２：Ｌ　Ｖ／Ｖ）中に溶解
し、そして自動サンプルアプリケーターモデル （カマグ、スイス）を用いて４ｃｍ長のストリークとし
てプレートに適用する。溶媒系は１ｍＭＣｕＣ　１　ｚ
を含有するクロロホルム／メタノール／水（５５：４５
：１０、Ｖ／Ｖ／Ｖ）である。発色したプレ−トは、種
々のモノサンカライド含量の炭水化物残基を有する ＧＳＬ混合物の典型的なパターンを示す。非−グリコス
フィンゴリピド物質は痕跡のみ存在する。

種々の個体からの新生児の便をおしめからかきとり、そ
して例１に記載したのと正確に同じ方法より処理する。

但し、例１．１のアセトン抽出段階は省略する。収率は
約０．２％乾燥重量である。グリコスフィンゴリピド（
ＧＳＬ）混合物の組成及び純度を例１．４に記載したよ
うにして決定する。

拠−１ハイブリドーマ系　の吃゛告 ３．１．　　免１１色隈１製 例１又は２からの精製されたＧＳＬを、凍結乾燥されそ
して酸処理されたサルモネラ・ミネソタＲ−５９５細菌
（Ｃ，Ｃａ１ａｎｏｓ、　Ｏ，Ｌ’１ｉｄｅｒｉｔｚ及
び０、　Ｗｅｓｔｐｈａｌ、　Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ、　２４．１１６（１９７１）　）に吸着せし
めることにより脂質抗原の免疫原性を増強する。この目
的のため、５０■の細菌（乾燥重量）を、２５０ｍ１の
丸底フラスコ中１００ｍｊ２のクロロホルム／メタノー
ル（２：１、Ｖ／Ｖ）（１０■のＧＳＬを含有する）中
に懸濁する。最高速度で回転するロータリーエバポレー
ターを用いて室温にて溶剤を蒸発せしめる。ＧＳＬで覆
われた細菌をガラス壁からかき取り、リン酸緩衝化塩溶
液に２．４■／１ａｌｌの濃度で懸濁する。顕微鏡によ
る評価において、不規則な形の塊及び１個ずつの細菌が
観察される。

３．２　　免災患作１抜 ４頭の雌性Ｂａ１ｂ／ｃマウスに、０日目に１００μｇ
のＧＳＬ、７日目に３００μｇのＧＳＬ、及び１１日目
に４００μｇのＧＳＬを含有するＧＳＬで覆われた細菌
（２頭のマウスには乳癌からのＧＳＬ、２頭には胎便か
らのＧＳＬ）のサンプルを腹腔内注射する。１９日目に
マウスから眼窩採血し、そして例６に記載するＧＳＬ−
プロッティング系を用いて抗−〇ＳＬ血清活性について
試験する。

３６日目に、４００μｇのＧＳＬを含有するサンフ。

ルの追加免疫注射を行い、そして４日後にマウスを殺す
。

３．３　　豊血紋金 すべての融合実験はＧ、にｉ；ｈｌｅｒ及びＣ，Ｍｉｌ
ｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ　　％ルヨ４９５　（１９７
５）　）の方法に従って、非分泌性Ｓｐ　２１０−Ａｇ
　１４骨髄腫系（Ｍ、　Ｓｈｕｌｍａｎ。

Ｃ１Ｐ、Ｗｉ　Ｉｄｅ及びＧ、　Ｋ′６ｈｌｅｒ、　Ｎ
ａｔｕｒｅ、　２７６、　（１９７Ｂ）　）を用いて行
う。１０８個の肺臓細胞を１ｍｌの５０％ポリエチレン
グリコール（ＰＥＧ　１５００．セルバ）の存在下で１
０’個の骨髄腫細胞と混合する。

洗浄後、細胞を４８ｖａｌの標準ダルベコの最少必須培
地（ギプコＮｏ　０４２２５０１）に再懸濁する。１５
％のウシ胎児血清及びフィーダー細胞として融合当り３
Ｘ１０’個の正常マウス腹腔滲出細胞を加える。細胞を
４２Ｘ１　ｍｌのコスタ−ウェルに分配し、そして１週
間当り３〜４回標準）ＩＡＴ選択培地を３〜６週間にわ
たって供給する。ハイブリドーマ細胞の増殖が見えるよ
うになった時、上清をＧＳＬへの結合について試験する
（例６）。ハイブリドーマ細胞のクローニングを、ミク
ロタイタープレートでの限界稀釈により行う。上清を、
例７に記載する固相エンザイムイムノアッセイにおいて
ＧＳＬへの結合について試験する。すべてのハイブリド
ーマ系を少なくとも１回クローニングする。例７のＥＬ
ＩＳＡにおいて陽性である合計１２のハイブリドーマセ
ルラインから、さらに特徴付けるために１０１８Ｓ１９
：１１．１０１８Ｓ６９．４．１０２１Ｓ１１．２８．
１０２２５２５．１７　　及び１０２２５２３．２４を
選択する。

■−玉　モノクローナル　　の゛び　−＋１８〜１０週
令のＢａ１ｂ／ｃマウス（ティールファーム・シッセル
ン、スイス）を０．３＋＋１のブリスタン（アルドリッ
チ）により前処理する。２〜３週間後、２〜５Ｘ１０”
個のクローン化ハイブリドーマ細胞及び０．２＋１１１
のブリスタンを腹腔的接種する。８〜ｌＯ日後、腹水を
集め、８００Ｘｇで遠心し、そして−２０℃にて貯蔵す
る。

解凍した腹水を５００００ｘｇにて６０分間遠心する。

表面に浮く脂肪層を注意深く除去し、そして蛋白質濃度
を１０〜１２■／ｍｌに調製する。粗免疫グロブリンを
、０℃にて０．９容量の飽和硫酸アモニウムを滴加する
ことにより沈澱せしめ、次に２０　ｍＭ　Ｔｒｉｓ−）
ＩＣ！！／　５０　ｍＭ　Ｎａｃｊ！　　（ｐｌ＋７．
９）中に溶解し、そして同じ緩衝液に対して透析する。

免疫グロブリンＧ画分を、２０　ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣ
ｆ　／２５−４００　ｍＭ　ＮａＣ１（ｐＨ７，９）の
緩衝液グラジェント系を用いてＤＥＡＲ−０５２セルロ
ース（ワットマン）クロマトグラフィーにより得る。免
疫グロブリンＧを硫酸アンモニウムにより再度沈澱せし
め、そしてＰＢＳにｌＯ■／Ｉｌｌの濃度で溶解する。

所望により、免疫グロブリン溶液を凍結乾燥し、そして
固体の形で貯蔵する。

ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳
動（Ｓ　Ｄ　５−ＰＡＧＥ）はモノクローナル抗体１０
１８Ｓ１９．１１．１０１８Ｓ６９．４．１０２１Ｓ１
１．２Ｂ、１０２２Ｓ２５．１７、及び１０２２Ｓ２３
．２４について９５％より高い純度を示す。

クローン化ハイブリドーマ細胞により生産されるモノク
ローナル抗体のクラス及びサブクラスをエンザイムイム
ノアッセイにおいて決定する。ミクロタイタープレート
を５０μｇのＰＢＳ中１μｇ／ウェルのクラス−又はサ
ブクラス−特異的血清のラビット免疫グロブリン標品に
よりコートする。

プレートの遊離結合容量を０．２　　（Ｗ／Ｖ）のＮａ
Ｎｚを含有するＰ　Ｂ　Ｓ　（ｐＨ７，４）中に１％ウ
シ血清アルブミンを含有する緩衝液により飽和する。

モノクローナル抗体を含有する１００μｌのプローブを
ウェル中で３７℃にて１時間インキュベートする。プレ
ートをＰＢＳで洗浄し、次に３７℃にて１時間、プレー
トをコートするのに使用されたのと同じ特異性のホスフ
ァターゼ接合ラビット免疫クロフリン調製物と共にイン
キュベートスル。

固定された酵素を、酵素基質ｐ−ニトロフェニルホスフ
ェート（０，５ｍＭ　ＭｇＣｊ！　、及び０．０２Ｗ／
Ｖ％のＮａＮ、を含有するジェタノールアミン緩衝液１
０％（ｐＨ９，８）　）と共にインキュベートすること
により、発色せしめ、そして４０５ｎｍでの光学濃度を
測定する。

結果を表に集約する。

■−６．ＧＳＬに・　るモノクロ−ル　　の乳癌生検材
料からＧＳＬ抽出物を調製し、そして例１において記載
したようにしてＨＰＴＬＣプレート上での薄層クロマト
グラフィーにより分離する。

分離されたＧＳＬの全パターンをニトロセルロースに移
すことにより）ＩＰＴＬｃプレーからレプリカを調製す
る。このＧＳＬ−プロッティングアッセイはスクリーニ
ング目的のために特に便利である。

詳しくは、例１に従って調製された１００μｇのヒト乳
癌生検体ＧＳＬを１０ｃｍの長さのストリークとして５
Ｘ１０ｃｍサイズの）ＩＰＬＣプレートに適用する。例
１．４の溶剤系における分離の後、プレートを乾燥する
。軟質の鉛筆を用いて、後で行う方向付けのための線を
引く。プレートにイソプロパツール／水（２：　１）の
溶液を噴霧して、表面上の液滴を伴わないで湿りが見え
るようにする。プレートを１分間にわたり、ポリエチレ
ンのシートにより支持されたわずかに大きなニトロセル
ロースシート（ＨＡＷＰＯＯＯ，ミリボア）上に押し付
ける。

途ったニトロセルロースを切り取り、そしてレプリカを
自然乾燥する。このシートを、２０ｍＭＴｒｉｓ−Ｈ（
Ｊ　／１５０　ｍＭ　ＮａＣ１／　５　ｍＭ　ＭｇＣｊ
！　ｔ　１０．１５ｍＭ　ＣａＣｊ！　ｚを含有する緩
衝液（ｐＨ７，４、ＴＢＳ）中で再水和する。次に、シ
ートをＴＢＳ中１０％ウマ血清と共に４０℃にて１時間
インキュベートして過剰の結合容量をブロックする。

シートを切断して、分離されたＧＳＬの同じパターンを
それぞれが担持する２ｆ１幅のストリップにする。これ
らのストリップを２時間、例えば、適当なインキュベー
ショントレイとして機能するマルチピペット容器挿入部
（ダイナチック・ラボラトリーズ社、アレキサンドリア
、Ｖａｓ米国）中で、例３．３からのハイプリドーマ上
清と共にインキュベートする。ストリップをＴＢＳにて
５分間３回洗浄し、そしてＴＢＳ中１０　Ｖ／Ｖ％ウマ
血清により５００倍に稀釈された、ホースラディツシュ
パーオキシダーゼとマウスＩｇＧに対して向けられたヒ
ツジ免疫グロブリンとの接合体（カベルラボラトリーズ
社、コクランビル、米国）と共にインキュベートする。

上記のようにしてＴＢＳ中で洗浄した後、結合した接合
体を、青色不溶性沈澱への４−クロロ−１−ナフトール
のパーオキシダーゼ酸化により可視化する。基質４−ク
ロロ−１−ナフトールを、ジメチルホルムアミド中ＩＷ
／Ｖ％溶液からＴＢＳ中に５０倍に稀釈し、そして過酸
化水素を最終濃度０．００６　Ｗ／Ｖ％に加える。

２０分間の後、水で洗浄することにより反応を停止する
。陽性反復の場合１個又は複雑個のバンドが見られる。

異る染色パターンは異る抗体の存在を示唆する。

個々の抗体の特徴付けにおいて使用されるＧＳＬ−プロ
ッティングアッセイのため、１９の個々の患者の組織検
体からの５μｇのヒト乳癌生検体ＧＳＬをＨＰＴＬＣプ
レートに適用し、そして上記のようにして処理する。こ
れらの実験の結果を表に集約する。

以下余白 ｌ　　古　エンザイムリンクドイムノソｌレベ９６−ウ
ェルポリ塩化ビニルミクロタイタープレートを、例１の
ようにして調製した乳癌生検体材料からのＧＳＬ抽出物
（２５ｍｊｉ！のエタノールに？８解したもの）２００
ｎｇ／ウェルによりコートする。ウェルを乾燥し、そし
てＴＢＳ中ＩＶ／Ｖ％ウマ血？ｆｔ　（Ｔ　Ｂ　Ｓの組
織については例６を参照のこと）により完全に満たす。

１時間後、プレートをＴＢＳにより洗浄し、そしてモノ
クローナル抗体について試験すべき溶液５０μｌを加え
る。３時間後プレートを洗浄し、そして酵素リンク第２
抗体を含有する試薬５０μｌを加える。この試薬は、Ｔ
ＢＳ中Ｉ　Ｖ／Ｖ％ウマ血清中に１０００倍に稀釈され
た、マウス免疫グロブリンに対するヤギ抗体であってア
ルカリ性ホスファターゼと接合したものから成る。１時
間後、プレートを４回ＴＢＳにより洗浄し、そして例５
に記載したようにして、１０％ジェタノールアミン緩衝
液中酵素基質ｐ−ニトロフェニルホスフェートにより発
色せしめる。

Ｂ、ペルツシス、フェーダ■、例えばＢｒ株又はＢＰ３
３８株を単離し、そしてＥ、　Ｔｕｏｍａｎｅｎ　　等
、ムＣ１１ｎ、　Ｍｉｃｒｏ、　、２０．１６７（１９
８４）　、Ａ、Ｗｅｉｓｓ等、Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏ　　　１５３．３０４（１９８３）　、及びＡ、Ｗｅ
ｉｓｓ等、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉ
ｔ　１４２　、３３（１９８３）により記載されている
ようにして培養する。要約すれば、生物体をＢｏｒｄｅ
ｔ−Ｇｅｎｇｏｕ寒天上又は５ｔａｉｎｅｒ−Ｓｃｈｏ
ｌｔｅ培地中で培養し、培地１９９Ｓ（０，３％　ＢＳ
Ａ、　　２５　ｍＭ　ＨｔｉＰＥＳ、　　１０　ｍＭ　
Ｌ−グルタミン、及び０．１５％　ＮａＨＣＯ３が補充
された培地１９９、Ｍ、　Ａ、バイオプロダクツ、ウオ
ルカースビル、Ｍｄ、米国）に移し、細菌懸濁液を２１
−ゲージ針３回に通して凝集体を分散せしめ、そして１
０９〜１０Ｉ０生物体／ｍｌの所望の濃度に調製する。

８．２．［懸：２の８パ１ 気管支鏡により正常らしい気管をブラッシングすること
によりヒト繊毛細胞を得る。細胞を培地１９９Ｓに１〜
５Ｘ１０’細胞／ｍｊ！の濃度に懸濁し、そして収集し
て１２時間以内にア・ノセイ法において使用する。生ず
る懸濁液中のほとんどの細胞が単１であり、そして９０
％が繊毛を有する。

ラビット繊毛細胞は、ベンドパルビタール麻酔下で気管
を無菌的に摘出し、そして細胞を耳かきにより培地１９
９Ｓにかき出すことにより得られる。

１つの気管から、２ＸＩＯ５細胞１ｍ＆を含有する懸濁
液７〜８　ｍｌが得られる。

１１ヱヱ皇工隻 １００μｌのこの発明のモノクローナル抗体又は無関係
の抗体（１ｍｇ／＋ｎｊりを０．５ｍ７！のＢ、ベルツ
シスの懸濁液（ラビット細胞アッセイ当り１０１０個の
細菌、及びヒト細胞アッセイ当り１０℃０個又は１０９
個の細菌を含有する；生物体の数はＰｅｔｒｏｆｆ−１
１ａｕｓｅｒ計数箱を用いて算定する）に加え、シェー
カー上で３７℃にて３０分間インキュベートし、２１−
ゲージ針に３回通し、次に０．５ｍｌのラビット又はヒ
ト繊毛細胞懸濁液（１０５細胞）に加える。この混合物
をシェーカー上で３７℃にて３時間インキュベートする
。細胞を３μｍポリカーボネート膜フィルターにューク
レオホア社、プレートサントン、カリホルニア、米国）
上で培地１９９ＳとＶＣＢ　（ウィルス収集ブロス；１
％ＢＳＡを含むウシ心臓インフイユージョンブロス、デ
ィフコ）との１＝３混合物３０〜５Ｑｍｌを用いてすす
いで未付着細菌を除去し、５　ｍｌｌの１９９Ｓ／ＶＣ
Ｂ　（１：　３）に再懸濁し、２５０ｘｇにて１５分間
遠心し、０．１　ｍｌｌの１９９５／ＶＣＢ　（１：３
）に再懸濁し、顕微鏡スライド上に拡げ、そして−夜空
気乾燥する。

細胞をアセトンによりスライド上に固定し、そして繊毛
細胞には付着するＢ、ペルツシス生物体を、Ｂ、ペルツ
シスに対して特異的な蛍光抗体（ディフコ、デトロイト
、Ｍｉｃｈ、米国）の１：４０稀釈物１０μｌを加える
ことにより染色する。スライドを３７℃にして３０分間
温室に保持し、次に塩溶液で１回及び対比染色として４
滴の１％エバンスブルーを含有する塩溶液で１日東色す
る。染色されたスライドをコードし、そして位相差照明
及びエビフルオレッセンスユニットを有する顕微鏡ヲ用
いて盲検的に読み取る。繊毛細胞当りの付着細胞の平均
数をスライド当り２５個の繊毛細胞を調べることにより
計算する。

抗体が存在しない場合又は無関連の抗体の存在下では、
１０１０個の細菌及び１０５個のヒト又はラビットの繊
毛細胞を含有する調製物中で、繊毛細胞当り平均５個の
付着Ｂ、ベルッシスが見出される。“強い陽性”　（＋
＋）の抗体は付着を完全に抑制しく付着Ｂ、ペルッシス
なし）、他方“陽性”（＋）抗体は、ヒト及びラビット
の繊毛細胞を用いる３回の実験において、繊毛細胞当り
Ｏより多いが２個より少ない付着Ｂ、ペルツシスをもた
らす。

表に集約した結果は、次の資料に基く。

以下余白 なしく対照）５５ １０１ＢＳＬ９．１１　　　１．６　　　　　　　　１
．８１０１８５６９．４　　　　１８　　　　　　　　
０．３１０２１Ｓ１１．２８　　　４．３　　　　　　
　　０．８１０２２Ｓ２５．１７　　　　０　　　　　
　　　　０（ａ）３実験の平均、±０．５以内の単一実
験の結果 ■　アトへシンの　　　でのアッセイ 繊毛細胞への８８ペルツシスの付着を担当することが知
られている２種類のアトへシン、繊維性へマグルチシン
及び百日咳毒素の存在下でアッセイを繰り返す（Ｅ、　
Ｔｕｏｍａｎｅｎ及びＡ　Ｗｅｉｓｓ。

Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｐｉｓｅａｓｅｓ　　１５２　
、１１８（１９８５）　〕、繊毛細胞懸濁液（例８．２
）を５μｇ／ｍｌｌの繊維性ヘマグルチニン又は百日咳
毒素と共に３０分間インキュベートし、そして例８．３
に記載したようにモノクローナル抗体及びＢ、ベルツシ
スの混合物により処理する。

抗体の非存在下又は無関係の抗体の存在下で、いずれか
のアトへシンの存在下で、今や繊毛細胞当り１０個以上
の付着Ｂ、ペルツシスが見出される。

この発明のモノクローナル抗体を用いて次の結果が得ら
れる。

なしく対照）　　　＞１０　　　＞１０　　　　＞１０
　　　＞１０１０１８５１９．１１　　　　＞　１０　
　　＞　１０　　　　＞　１０　　　＞　ｔ。

１０２１Ｓ１１．２８　　　　＞　１０　　　＞　１０
　　　　　０　　　０１０２２Ｓ２５．１７　　　　０
　　　０　　　　　０　　　０１０２２Ｓ２３．２４　
　　　０　　　７．３　　　＞　１０　　　＞　１０（
ａ）繊維性へマグルチシンとの前インキュベーションの
後。

（ｂ）百日咳毒素との前インキュベーションの後。

アトへシンの存在下で得られた結果は、アトへシン無し
で得られた結果の一般的傾向を確認する。

モノクローナル抗体１０２２Ｓ２５．１７はヒト及びラ
ビットの繊毛細胞に対して一般的に効果的である。モノ
クローナル抗体１０２１Ｓ１１．２８はラビット繊毛細
胞へのＢ、ペルッシスの付着のみをブロックする。モノ
クローナル抗体１０２２Ｓ２３．２４は、過剰の百日咳
毒素の存在下以外では、ヒト繊毛細胞への付着のブロッ
クにおいて効果的である。

ラビット又はヒトの繊毛細胞１０’個（例８．２）の、
又はＢ、ペルッシス１０”個（例８．ｌ）の！！Ｊ濁液
０：５　ｍｊｌを１００μｌのこの発明のモノクローナ
ル抗体又は無関係の抗体（ＩＩｌ１ｇ／ｌｌ１１）と３
７℃にて３０分間インキュベートする。懸濁液を４℃に
て１０分間遠心（細菌：　３０００Ｘ　ｇ　；細胞：２
５０×ｇ）し、再懸濁及び遠心分離により１５ｍｊ２の
培地１９９Ｓ中で２回洗浄し、次に顕微鏡スライド上に
スポットし、そして空気乾燥する。細菌及び細胞をアセ
トンによりスライド上に固定し、そして結合したモノク
ローナル抗体を、例８．３に記載したようにして、適当
なフルオレッセイン接合抗−マウス免疫グロブリンＧ又
はＭ第２抗体（カペル、マルバーン、Ｐａ、米国）の１
：２０稀釈物１０ｔｔｌにより検出する。結果を表に示
す。

モノクローナル抗体を省略した例８．３の標準的アッセ
イにおいてＢ、ペルツシスをヒト繊毛細胞に結合せしめ
る。顕微鏡スライド上に細胞を拡げる代りに、これらを
０．５　ｔａｌｌの培地１９９Ｓに再懸濁車し、そして
１００μｌのこの発明のモノクローナル抗体（Ｉ　Ｉ１
ｇ／　ｍｊｌ　）と共に３７℃にて３０分間インキュベ
ートする。細胞をすすいで未付着細菌を除去し、そして
上記の標準的方法にかける。結果を表に集約する。これ
は次の資料に基く。

なしく対照）５．３ １０１８Ｓ１９．１１　　　　　　　　　５．４１０２
１５１１．２８　　　　　　　　　５．２１０２２５２
５、１７　　　　　　　　　２．６１０２２ｓ２３．２
４　　　　　　　　　２．１ａ） ｐ＜０．０１ モノクローナル抗体１０２２Ｓ２５．１７及び１０２２
Ｓ２３．１４はヒト繊毛細胞へのＢ、ペルッシスの付着
を逆転せしめることができる。

舅−■、兎ノＪ１歇 例４に従って調製したモノクローナル抗体１０２２Ｓ２
５．１７を安定剤及び防腐剤の溶液に溶解して次の組成
の吸入溶液を得る。

モノクローナル抗体１０２２５２５．１７　　　　２０
００　ｍｇエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム　　１
０　ｍｇ塩化ベンザルコニウム　　　　　　　　　１０
　ｍｇ再蒸留水　　　　　　　　　　　　　　１００　
ｍｊｌこの溶液を吸入に適するネブライザーに充填する
。

ｌ施班■、吸ノＪ飢未 例４に従って調製した２０００ｍｇのモノクローナル抗
体１０２２Ｓ２５．１７を１０ｇの微粉ラクトースと十
分に混合し、次に篩別して５μｍより大きい粒子を除去
する。この粉末を、適当な弁を有する気密容器に圧縮空
気と共に充填する。

！！、エーロゾル 例４に従って調製した５００ｍｇのモノクローナル１体
１０２２Ｓ２５．１７を２　ｖａｌの再蒸留水及び０．
５ｍｎ　（７）エタノールに十分に分散せしめる。この
懸濁液を適当なバルブを有する気密容器に５．０　ｇの
フレオン１２と共に充填する。

以下余良

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、哺乳類における、ボルデテラ・ペルツシス（Ｂｏｒ
   ｄｅｔｅｌｌａ　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）により惹起され
   る百日咳及びボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）の他
   の種により惹起される気道の感染の予防及び／又は治療
   の方法であって、哺乳類細胞膜複合糖質に対して特異的
   なモノクローナル抗体又はその誘導体の有効量を処理を
   必要とする該哺乳類に投与することを特徴とする方法。 ２、前記投与を気道に行う特許請求の範囲第１項に記載
   の方法。 ３、前記モノクローナル抗体がヒト乳癌生検材料又はヒ
   ト胎便中に存在する複合糖質に対して特異的である特許
   請求の範囲第１項に記載の方法。 ４、前記モノクローナル抗体が、１０１８Ｓ１９．１１
   、１０１８Ｓ６９．４、１０２１Ｓ１１．２８、１０２
   ２Ｓ２５．１７、又は１０２２Ｓ２３．２４と称するモ
   ノクローナル抗体から選択される特許請求の範囲第１項
   に記載の方法。 ５、１０２２Ｓ２５．１７と称する前記モノクローナル
   抗体を投与する特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ６、１０２２Ｓ２３．２４と称する前記モノクローナル
   抗体を投与する特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ７、哺乳類における、ボルデテラ・ペルツシス（Ｂｏｒ
   ｄｅｔｅｌｌａ　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）により惹起され
   る百日咳及びボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）の他
   の種により惹起される気道の感染の予防及び／又は治療
   に使用するための、哺乳類細胞膜複合糖質に対して特異
   的なモノクローナル抗体又はその誘導体。 ８、哺乳類における、ボルデテラ・ペルツシスにより惹
   起される百日咳及びボルデテラの他の種により惹起され
   る気道の感染の予防及び／又は治療に使用するための、
   １０１８Ｓ１９．１１、１０１８Ｓ６９．４、１０２１
   Ｓ１１．２８、１０２２Ｓ２５．１７、及び１０２２Ｓ
   ２３．２４と称する特許請求の範囲第７項に記載のモノ
   クローナル抗体。 ９、哺乳類における、ボルデテラ・ペルツシスにより惹
   起される百日咳及びボルデテラの他の種により惹起され
   る気道の感染の予防及び／又は治療のための医薬組成物
   の製造において使用するための、哺乳類細胞膜複合脂質
   に対して特異的なモノクローナル抗体又はその誘導体。 １０、哺乳類における、ボルデテラ・ペルツシス（Ｂｏ
   ｒｄｅｔｅｌｌａ　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）により惹起さ
   れる百日咳及びボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）の
   他の種により惹起される気道の感染の予防及び／又は治
   療に使用するための、哺乳類細胞膜複合糖質に対して特
   異的なモノクローナル抗体又はその誘導体を含んで成る
   医薬組成物。