JPS6214784A - 腫瘍遺伝子ｖ−ｍｙｃに相同な古細菌ＤＮＡ配列 - Google Patents

腫瘍遺伝子ｖ−ｍｙｃに相同な古細菌ＤＮＡ配列

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JPS6214784A
JPS6214784A JP61144709A JP14470986A JPS6214784A JP S6214784 A JPS6214784 A JP S6214784A JP 61144709 A JP61144709 A JP 61144709A JP 14470986 A JP14470986 A JP 14470986A JP S6214784 A JPS6214784 A JP S6214784A
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dna
halobacterium halobium
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マサミチ・コヒヤマ
ベルナール・ペルバル
カメル・ベン・マレ
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Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はｖ−ｍｙｃ腫瘍遺伝子と相同の古細菌（ａｒ　
−ｃｈａｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）のＤＮＡ配列、これら
配列によってコードされるタンパク質、これらの生成方
法及びこれらの免疫学的利用に係る。
古細菌の酵素に関するこれまでの研究において発明者等
は、これら細菌の特性と真核細胞の特性との類似性に注
目した。
即ち、発明者等の観察によれば、古細菌から得られたＤ
ＮＡポリメラーゼは真核細胞のＤＮＡ−ポリメラーゼと
実質的に等しい。更に、ＤＮＡポリメラーゼを画分に分
けるとレトロウィルスの場合と同様の逆転写酵素活性が
得られる。
発明者等はつぎに、骨髄芽球症で生じるｖ−ｍｙｂ腫瘍
遺伝子に相同の配列をハロバクテリウム・へロビウム（
Ｉｌａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｈａｌｏｂｉｕｍ）の
如き古細菌のゲノム中に発見した。
発明者等はこの分野での研究を発展さけハロバクテリウ
ム・ハロビウム中に骨髄球種症の原因たるｖ−ｍｙｃ腫
瘍遺伝子と相同のＤＮＡ配列の存在を追求した。
本発明は幾つかの好塩性古細菌及びメタン古細菌中での
この相同配列の存在の証明に基づく。
本発明の目的は、ｖ−ｍｙｃ腫瘍遺伝子のｉｎ　ｖｉｔ
ｒ。
での活性を検出することができるｖ−ｍｙｃ腫瘍遺伝子
に相同の古細菌ＤＮＡ配列を提供することである。
本発明の目的はまた、これら古細菌の配列によりコード
されるタンパク質を高純度で製造することである。
更に、前記配列でコードされるタンパク質の容易な精製
方法を提供することも本発明の目的の１つである。
また、ｍｙｃ族の遺伝子によってコードされるタンパク
質に対して特異的な抗血清を提供することも本発明の目
的の１つである。
本発明の古細菌のＤＮＡ配列は、該配列が古細菌ＤＮＡ
のＸｈｏ　Ｉ制限エンドヌクレアーゼによって処理され
た後にｖ−ｍｙｃプローブとハイブリダイゼーションす
ることを特徴とする。
ｖ−ｍｙｃプローブは、Ｎａｔｕｒｅ　３０４．１３５
−１３９．１９８３に記載のＰ、Ｈ，Ｉｌａｍｌｙｎ及
びＴ、Ｈ，Ｒａｂｂｉｔｓの方法によって調製される。
古細菌はハロバクテリウム・ハロビウムの如き好塩性古
細菌でもよく又はメタノバクテリウム・サーモオートフ
ィクム（Ｍａｒｂｕｒｇ菌株）の如きメタン古細菌でも
よい。ハロバクテリウム・ハロビウムは特に、Ｂｅｒｇ
ｅｙの著作ｒＭａｎｕｅｌ　ｏｆｄｅｔｅｒｍｉｎａ−
ｔｉｖｅ　ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙｊ、ｐ、２７２．
１９７４に記載されており、メタノバクテリウム・サー
モオートフィクム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
　ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｐｈｉｃｕｍ）は特に、ＭｉＣ
ｒＯｂ、ＡｒＣｈ、、１２３、＋０５−１０７．１９７
９に記載されている。
ハロバクテリウム・ハロビウムの場合、そのＤＮＡをＸ
ｈｏ　Ｉ制限エンドヌクレアーゼで処理した後に約３．
４ｋｂ及び２．３ｋｂの断片が得られる。
本発明の配列によってコードされるタンパク質の特徴は
、該タンパク質が抗ｍｙｃ抗体（ＡＢ　ｍｙｃ、ｌＴＭ
）と反応し得る塩基性タンパク質であることである。
この抗体は、０ｎｃｏｒ、Ｉｎｃ、、　Ｇａｉｔｈｅｒ
ｓｂｕｒｇ、　Ｍａｒｙ−１ａｎｄ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、２
０８７７により市販されているｏＡＢ　ｍｙｃ。
□Ｉ ＩＴＭはΔｇａｇ−ｍｙｃ　ｐ、１１０タンパク質のｍ
ｙｃ特異部分と反応する。このタンパク質はＭＣ２９ウ
ィルスによって形質転換された鳥類の細胞から得られる
ものである。
ハロバクテリウム・ハロビウムによってコードされるペ
プチドの分子量は約７０ｋＤａである。
大量精製が容易であるように、これらタンパク質が古細
菌の未精製可溶抽出物中に存在していると有利である。
本発明の目的は更に、それ自体が可溶状態で存在する対
応する精製タンパク質を堤供することである。
タンパク質の酵素機能をより容易に同定し且つより高い
効率で抗体を調製するために、かかるタンパク質が可溶
状態で存在することは極めて重要である。
本発明によれば、ｖ−ｍｙｃｐ識プローブを用いたハイ
ブリダイゼーションによって、古細菌のｖ−ｍｙｃに相
同の配列を含むプラスミドを従来公知の方法で選択する
。
ハロバクテリウム・ハロビウムの場合、λファージのゲ
ノムの一部とｐＢＲ３２２の一部及びハロバクテリウム
・ハロビウムｖ−ｍｙｃに相同の配列から構成される２
４に塩基対のプラスミドが選択される。
このプラスミドは、匹腫瘍遺伝子の活性を検出し得る標
識プローブとして使用できる。
このプラスミドは、従来の方法で増幅できるのでＤＮＡ
の量産が容易である。
これら配列によってコードされるタンパク質は、前記の
ごとく古細菌の未精製可溶抽出物中に存在する。
これら可溶抽出物に対して先ず、存在するＤＮＡを除去
するために処理する。
本発明の１つの具体例によれば、約３Ｍの塩の存在下で
従来の相分離法を用いる。
この方法は、ポリエチレングリコール６０００とデキス
トランＴ、　５００とを用いて実施するのが有利である
。
別の具体例によれば、ストレプトマイシンを用いた沈澱
又はポリエチレンイミン（ＢＡＳＦにより商ｐ　Ｐｏｌ
ｙｍｉｎ−Ｐで市販されている化合物）の水溶液によっ
てＤＮＡを取り出す。
このようにして得られたＤＮＡが除去された古細菌抽出
物を処理して、酸性タンパク質の少なくと６大部分、実
質的に全部を除去する。
このために、未精製抽出物を正電荷イオンの交換体と接
触させるのが有利である。この処理はカラム中で行うの
が好ましい。
イオン交換体による精製段階の前に抽出物中の塩を除去
する。この除去は例えば透析処理で行うのが好ましい。
少なくとも１種類の安定剤例えばグリセロールの存在下
に透析を行うのが有利である。
使用可能な正電荷イオンの交換体として、ＤＥＡＥ−セ
ルロース、ＤＥＡＥ−３ｅｐｈａｃｅｌ又はポリイミン
−セルロースかある。（ＤＥＡＥはジメチルアミノエチ
ル基に対応する）。
カラムに保持されなかった画分を回収し負電荷のイオン
交換体と接触させる。
例えばヒドロキシアパタイトの如き物質を充填したカラ
ムでのクロマトグラフィーを行うのが有利である。
より特異的には、少なくとも１種類の安定剤を存在させ
、ヒドロキノアパタイトを使用する場合には燐酸バッフ
ァを存在させてクロマトグラフィーを行う。
増加濃度勾配のバッファを用いた溶出によって所望タン
パク質を回収する。
これらの処理によって、ｖ−ｒｒ！Ｌｃに相同の配列に
よってコードされるタンパク質に対応する高純度タンパ
ク質が可溶状態で有利に得られる。
またこのタンパク質調製物は高い安定性をもつ。
所望の場合、該タンパク質を例えばＤＮＡ−セルロース
カラム又は旧ｕｅ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムで例えば
ア本発明の別の特徴によれば、得られたタンパク質の抗
原性を利用して特異的ポリクローナル又はモノクローナ
ル抗体を製造し得る。これは、タンパク質調製物を公知
の方法で動物に注射し抗血清を回収することにより得ら
れる。例えばアフィニティクロマトグラフィーによって
抗血清から該抗体を回収する。
これらの抗体の利点は、ｍｙｃ族の遺伝子の産生物に関
して広い作用スペクトルを有することである。
広い作用スペクトルは、本発明のタンパク質のＶ−ｍ７
ｃ全体を含む配列の完全性と三次構造との結果として得
られるものである。
従来はｖ−ｍｙｃによってコードされるペプチドの部分
的配列に対して特異的な抗体、あるいは遺伝子操作によ
って調製されｖ−ｍｙｃペプチドの凝集物から形成され
る抗体だけが公知であり、これらは大量精製が難しい。
これに反して、本発明の抗体は量産が可能であり、広い
作用スペクトルを有する。
本発明の抗血清と抗体は、特に貴重な診断試薬であり、
特に例えば癌細胞系の組織培養物中に存在するｍｙｃ族
腫瘍遺伝子によってコードされるタンパク質をｉｎ　ｖ
ｉｔｒｏ検出するための試薬として重要である。特にバ
ーキットリンパ腫の癌細胞又は卵巣癌細胞の検出に重要
である。
この検出は従来のＥＬＩＳＡ及び免疫Ｂｌｏｔｔｉｎｇ
タイプの従来の免疫的方法により実施し得る。
本発明の別の特徴及び利点は以下の実施例より明らかで
あろう。
実施例１ ハロバクテリウム・ハロビウムの精製ＤＮＡ’ｚ　Ｘｈ
。
Ｉ制限エンドヌクレアーゼで消化し、得られた断片を電
気泳動にかけ、ニトロセルロースにブロッティングし従
来の条件下で開裂トランスレーションにツクトランスレ
ートジョン）により３２ｐでラベルしたプローブとハイ
ブリダイゼーションさせた。第１図に示すごとく、Ｊ、
Ｖｉｒｏｌ、、４４．５８６−５９４（１９８２）にＰ
ｅｒｂａｌ等によって記載された特異的＋１　Ａ　Ｘ　
４ｍｙｂプローブとハイブリダイゼーションさせると１
２ｋｂの断片が検出され、敷プローブ（Ｐａｐａによっ
て構成されたもの、前出のＮａｔｕｒｅ　１９８３の論
文参照）とハイブリダイゼーションさせると５．３，４
及び２，９ｋｂの断片が検出された。使用したり！プロ
ーブは約１ｋｂのｇａｇレトロウィルス遺伝子を含み、
プロッティングによる転写産生物は、印刷中のＪ。
Ｖｉｒｏｌ、に記載の５ｏｒｅｔ等によるＭＡＹ　ｌプ
ロウィルスＤＮＡに由来のシ畷特異プローブとハイブリ
ダイゼーションした。ｇａｇプローブとのハイブリダイ
ゼーション後に５ｋｂｃ）ＤＮＡ断片だけが検出された
。これは、ハロバクテリウム・ハロピウム中のｍｙｃに
関連する配列は３．４及び２．９ｋｂの断片に含まれて
いたことを示す。ハロバクテリウム・ハロビウムのＤＮ
Ａ中のｍｙｃ（ｌＩ）及びｍｙｂ（Ｈ）遺伝子座の正確
な構成と、古細菌の遺伝子と真核細胞遺伝子との間に存
在する相同の程度とを更に、マツプと配列とを作成する
ことにより決定した。
ｍｙｃ（Ｉｔ）及びｍｙｂ（Ｈ）遺伝子がハロバクテリ
ウム・ハロビウム中で発現したか否かを決定するために
、対数増殖期の細胞のＲＮＡをＪ　、　Ｂ　ｉｏｃｈｅ
ｍ、　１８．５２９４−５２９９（１９７９）に記載の
Ｃｈｉｒｇｗｉｎ等の方法で精製し、ホルムアルデヒド
−アガロースゲルで電気泳動にかけニトロセルロースに
移した。得られた転写圧’ｌ物ヲｍｙｂ特異プローブ（
）ｌＡＸ４）又はｍｙｃプローブとハイブリダイゼーシ
ョンさせた。更に、ＤＩ特異プローブ（Ｂ２ＨＩ９２）
とコントロールのハイブリダイゼーシぢンを行った。得
られた結果によれば（第２図）、ハロバクテリウム・ハ
ロビウム中ではり→。
特異ＲＮＡは全く検出されないが、ｍｙｃ−配列を含む
異なる２種類のＲＮＡ（３，８及び１．９ｋｂ）がこれ
ら細胞中で発現することが判明した。これらのＲ？ｌＡ
はいずれも瓜特異的プローブとハイブリダイゼーション
しないので、ハロバクテリウム・ハロビウムのゲノム中
に存在するｍｙｃ（Ｈ）配列の発現を示すことが判明し
た。
実施例２ 対数増殖期の細胞を培養物１ｍｆ２当たり１０８個含む
古細菌抽出物を使用する。ＤＮＡを含まない抽出物を得
るために延伸分離してＰｏｔｔｅｒタイプのホモジナイ
ザーを使用しバッファとＫＣＩ　３Ｍとの存在下で細胞
を崩壊させる。
急速沈降物質を除去し従来の相分離法（デキストランＴ
５００−ポリエチレングリコール６０００）によって可
溶画分を処理する。次にＫＣＩ　３Ｍでタンパク質−Ｄ
ＮＡ複合体を解離する。このようにして得られたハロバ
クテリウム・ハロビウムのタンパク質を変性を誘発する
条件下でポリアクリルアミドゲルを用いて電気泳動によ
り分離する。ニトロセルロースに移し、前記の０ｎｃｏ
ｒ　Ｉｎｃ、により市販されているような抗ｍｙｃ抗血
ｒＩｖ又は抗四の存在下でインキュベートした後に、ペ
ルオキシダーゼ−抗−１ｇＧ抱合体によって免疫複合体
の存在を証明した。
更に、１４９の凍結ハロバクテリウム・ハロビウムを、
２５ｍＭのＩＩＥＰＥＳと０　、５ｍＭのＥＤＴＡと１
ｍＭのジチオトレイトールと３ＭのＫＣＩとを含むＬ５
ｄのバッファに懸濁させ、Ｐｏｔｔｅｒホモジナイザー
で崩壊させる。
遠心分離（１０００００ｇ、６０分）後に上清を吸引し
、１１％のポリエチレングリコール６０００と２．３％
のデキストランＴ−５００とを添加する。
１時間穏やかに攪拌後に混合物を遠心（５０００び、１
０分）し上部相を採取する。
２５０■のタンパク質に相当するサンプルをＴＣ八（ト
リクロロ酢酸）（６％）で沈澱させ、１％のＳＤＳと１
％。
のβ−メルカプトエタノールとを含む１０ｍＭの燐酸ナ
トリウムバッファｐ＋＋７で洗浄後に残渣を再懸濁させ
、次に１００℃で５分間加熱する。
サンプルを５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの電気泳動
にかける。５ＱＶで３時間の電気泳動によってゲルのタ
ンパク質をニトロセルロース膜に移す。転移用バッファ
は２５ｍＭのトリスｐｌ＋８．３と１９２ｍＭのグリシ
ンと２０％のメタノールとから成る。
転移後にＸバッファ　（５０ｍＭのトリスｐＨ７，’５
と２００ｍＭのＮａＣ］と０．１％のＴｗｅｅｎと０．
２５％のゼラチン）中で膜を３７°Ｃで２時間洗浄し、
抗体（希釈度１／２０）を含む同じバッファ中で３７°
Ｃで１時間インキメベートする。
その後、同じバッファ中で膜の洗浄を５分間ずつ３回繰
り返し、Ｘバッファ（希釈度１／１０００）中のＭｉ−
１ｅｓ　Ｐｏ血清（ペルオキシダーゼと結合した抗−１
ｇＧ）と共に３７℃で１時間インキュベートする。
３回洗浄後に、１５鬼のクロロナフトールと５ｍｌのメ
タノールと２５ｍ１の２００ｍＭ　ＮａＣ１の５０＋＋
＋Ｍ　トリスＩ）Ｈ７，５と２０７のＨ２０ｔを含むバ
ッファ中で膜を１５分間インキュベートして発現させる
。
第３図に示すごとく抗−ｍｙｃ抗血清では７３ｋＤａの
単一バンドが検出されたが、抗−リ↓抗血清では同様の
条件下でバンドは全く得られなかった。これらの観察は
、精製ＲＮＡに対して行ったハイブリダイゼーションテ
ストの結果と一致しており、対数増殖期のハロバクテリ
ウム・ハロビウム培養物中では、ｍｙｂ（Ｉｆ）配列が
発現しない条件下でもｍｙｃ（Ｈ）配列が発現すること
を示す。
この状況は鳥類由来の線維芽細胞に関して記載した状況
と同様である。この細胞中ではｍｙｂに関連する産生物
（ＲＮＡ又はタンパク質）は発現しないがｃ−ｍｙｃに
関連する産生物は全細胞サイクル中で検出できる。
実施例３ Ｖ−ｍｙｃに関連するタンパク質の精製処理の各段階は
約５℃又は室温で行う。
前記のごとく得られたＤＮＡを含まない抽出物をｌＨｍ
ＭのＭＣＩと０．５ｍＭのジチオトレイトールと３５（
容量／容量）％のグリセロールとを含む１５倍容量の２
０ｍ１ｌＩ燐酸ナトリウム（ｐｉ−１７，０）に２時間
透析する。
透析物をＤＥＡＥ−セルロースカラム（Ｗｈａｔｍａｎ
）（５ｘ１５）に通す。ｖ−ｍｙｃに関連するタンパク
質を含む非吸着画分を２Ｍ　ＫＣＩを加えることにより
直ちに安定させる。ＫＣＩ　２Ｍと１０％グリセロール
とを含む２０ｍＭ燐酸ナトリウム（ｐ＋ｔ６．ｇ）で予
め平衡化したヒドロキシアパタイトカラム（Ｂｉｏ　Ｒ
ａｄＸ４．５ｘ　１．５）に該画分を通す。平衡バッフ
ァでカラムを洗浄後、１０％グリセロールを含む０．２
Ｍの燐酸ナトリウム（ｐＨ６，８）でｖ−ｍｙｃに関連
するタンパク質を溶出する。
実施例４ 得られたｖ−ｍｙｃタイプの画分を完全フロインドアジ
ュバント又は同様のアジュバントと混合し、１別当たり
タンパク質１ｎｇの割合でウサギに直接注射する。１月
後に注射を繰り返し従来の方法によって抗血清を回収す
る。
【図面の簡単な説明】
第１図及び第２図はハロバクテリウム・ハロビウムＤＮ
Ａの特異的プローブとのハイブリダイゼーションの結果
を示す図、第３図はハロバクテリウム・ハロビウム培養
物中でのｍｙｃ（Ｈ）配列発現試験結果を示す図である
。 代理人弁理士　中　　村　　　　至 図面の浄書（内容に変更なし） 第１（支） 第　２１ 鄭− ４５に＝ ２６に−７

Claims (13)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）￥Ｘｈｏ￥Ｉ制限エンドヌクレアーゼによる処理
    後にｖ−￥ｍｙｃ￥プローブとハイブリダイゼーション
    することを特徴とする古細菌ＤＮＡ配列。
  2. （２）古細菌がハロバクテリウム・ハロビウムの如き好
    塩性古細菌であるか又はメタノバクテリウム・サーモオ
    ートフィクムの如きメタン古細菌であることを特徴とす
    る特許請求の範囲第１項に記載の配列。
  3. （３）ハロバクテリウム・ハロビウムＤＮＡの処理にお
    いて、￥Ｘｈｏ￥Ｉ制限エンドヌクレアーゼによる処理
    によって約３．４ｋｂ及び２．９ｋｂの断片が得られる
    ことを特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の配列。
  4. （４）ｖ−￥ｍｙｃ￥に相同の配列によってコードされ
    るタンパク質に対応し、ＭＣ２９ウィルスによって形質
    転換された鳥類の細胞から得られたΔｇａｇ−￥ｍｙｃ
    ￥ｐ．１１０タンパク質の￥ｍｙｃ￥の特異的部分と反
    応する抗￥ｍｙｃ￥抗体（ＡＢ　￥ｍｙｃ￥．ｌ＾Ｔ＾
    Ｍ）と反応し得る塩基性タンパク質であることを特徴と
    するタンパク質。
  5. （５）ハロバクテリウム・ハロビウムのＤＮＡ配列によ
    ってコードされる分子量約７０ｋＤａであることを特徴
    とするペプチド。
  6. （６）精製された形状で可溶状態で存在することを特徴
    とする特許請求の範囲第４項又は第５項に記載のタンパ
    ク質又はペプチド。
  7. （７）ｖ−￥ｍｙｃ￥標識プローブを用いたハイブリダ
    イゼーションを使用して古細菌ｖ−￥ｍｙｃ￥に相同の
    配列を含むプラスミドを公知の方法で選択することを特
    徴とする特許請求の範囲第１項から第３項のいずれかに
    記載の配列の製造方法。
  8. （８）ハロバクテリウム・ハロビウムの場合、λファー
    ジゲノムの一部とｐＢＲ３２２の一部及びハロバクテリ
    ウム・ハロビウムのｖ−￥ｍｙｃ￥に相同の配列から成
    る２４ｋ塩基対のプラスミドを選択することを特徴とす
    る特許請求の範囲第７項に記載の方法。
  9. （９）標識プローブとして特許請求の範囲第７項又は第
    ８項に記載の方法で選択されたプラスミドを使用するこ
    とを特徴とする￥ｍｙｃ￥腫瘍遺伝子の活性の検出方法
    。
  10. （１０）λファージゲノムの一部とｐＢＲ３２２の一部
    及びハロバクテリウム・ハロビウムのｖ−￥ｍｙｃ￥に
    相同の配列から成る２４ｋ塩基対のプラスミド。
  11. （１１）古細菌の未精製可溶抽出物に対し、約３Ｍの塩
    の存在中で好ましくはポリエチレングリコール６０００
    とデキストランＴ．５００とを用いて相分離の如き従来
    技術により存在するＤＮＡの除去処理を行い、ストレプ
    トマイシン又は商標Ｐｏｌｙｍｉｎ−Ｐなる市販化合物
    の如きポリエチレンイミンの水溶液を添加してＤＮＡを
    沈澱させ、古細菌抽出物の塩をグリセロールの如き安定
    剤の存在中で例えば透析によって予め除去してからＤＥ
    ＡＥ−セルロース、ＤＥＡＥ−Ｓｅ−ｐｈａｃｅｌ又は
    ポリイミン−セルロースの如き正電荷イオン交換体と接
    触させて酸性タンパク質の少なくとも大部分、実質的に
    全部を除去し、イオン交換体に保持されなかった画分を
    回収し、好ましくは安定剤と燐酸バッファとの存在中で
    負電荷イオン交換体、好ましくはタンパク質と共にヒド
    ロキシアパタイトと接触させ、増加濃度勾配のバッファ
    を用いて溶出させて所望のタンパク質を回収し、所望の
    場合、例えば、特にＤＮＡ−セルロースカラム又はＢｌ
    ｕｅ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム中でのアフィニティク
    ロマトグラフィーによってタンパク質を更に精製するこ
    とを特徴とする特許請求の範囲第４項から第６項のいず
    れかに記載のタンパク質の製造方法。
  12. （１２）タンパク質調製物を従来の方法で動物に注射し
    抗血清を回収して得られる特異的ポリクローナル又はモ
    ノクローナル抗体。
  13. （１３）例えば癌細胞系の組織培養物中に存在する￥ｍ
    ｙｃ￥族の腫瘍遺伝子によってコードされるタンパク質
    をｉｎ　ｖｉｔｒｏ検出するための、特許請求の範囲第
    １２項に記載の抗体及び抗血清を用いて製造された診断
    用試薬。
JP61144709A 1985-06-21 1986-06-20 腫瘍遺伝子ｖ−ｍｙｃに相同な古細菌ＤＮＡ配列 Pending JPS6214784A (ja)

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