JPS6213401A - ヘテロ多糖ｓ−１８４ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は微生物多糖類の分野に関する。この分野では、
ある微生物に共通する特質は細胞外ヘテロ多糖類の産出
にあることが知られている。ヘテロ多糖類は高分子量の
、一般的には線状の炭水化物ポリマーであシ、重合して
繰り返し単位となっている２種または多種の単糖類を含
有する。

大抵のヘテロ多糖類の有用性は水溶液の粘度およびレオ
ロジーを変更する能力を基礎とするものである。これに
加えて、ヘテロ多糖類は、乳濁化、懸濁化、安定化、凝
集、潤滑化、造膜性などのような関連する第２の機能も
有しているっ ヘテロ多糖類は食品、さく井、農芸および広汎なその他
の産業用用途に広く使用されている、これらの水溶性ガ
ムにだいする需要はこの１０年間に犬きく伸びた。さら
にまた新らしい工業技術が新らし７い諸物性をもつヘテ
ロ多糖類の需要を作り出している。こうして、産業上の
要求に見合うさまざまな機能範囲をもつヘテロ多糖類へ
の需要からみると、新らたな及びさまざまの物性をもつ
ヘテロ多糖類の発展の必要性が痛感される。

したがって本発明の目的は、新型のアルカリジェネス種
（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　５ｐｅｃｉｅｓ　）によっ
て製造される新型のヘテロ多糖の提供である。

本発明の付加目的は、この新型ヘテロ多糖の製造法の提
供である。まｈ他の目的はこの新型化合物製造用の微生
物類の提供である。なおその他の目的はこの新型ヘテロ
多糖を含有する調合物の提供である。本発明のこれらの
および他の諸口的は以後の記述から萌もかとなろう。

主要部としての炭水化物、１２％乃至１６係のタンパク
質および酢酸として計算して３．０％乃至４．５％のア
シル群から構成され、その炭水化物部分は約７％乃至１
６％のウロン酸お工び１　：３　：５の概略モル比にお
ける中性糖マンノース、グルコースおよびガラクトース
を含有する新期の多糖が選択された炭素源への新型アル
カリジェネス種の作用によって製造されることがここに
発見された。この新規化合物はまだ命名されていないア
ルカリジェネス種をもつ適当な水性滋養培地のテ蓼本ヱ
発酵によって製造される。この生物の生物学的純粋培養
のブダペスト条約に基づく寄託はアメリカンタイプカル
チャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃ
ｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　）、ロックビル
（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ　）、マリ−ランド（Ｍａ、ｒｙ
］、ａｎｄ　）、１９８５年６月１９日、受入第ＡＴＣ
Ｃ５３１６０号の下になされている。ここではヘテロ多
糖Ｓ−１８４として紹介するこのヘテロ多糖は水性系に
おいて望ましい諸性質をもっておシ、まだ食品類用にと
くに有用である。

本発明の新規の生物、カリフォルニア州（Ｃａ１ｉｆｏ
ｒｎｉａ　）、サンディエゴ（Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ　）
のパロマー山（Ｐａｌｏｍａｒ　ｍｏｕｎｔａｉｎ　ｌ
　　上のパラマクリーク（Ｐａｕｍａ　Ｃｒｅｅｋ　）
　　から採取された水サンプルから単離した。この有機
体を３０℃における４日間培養後のワイエム（ＹＭ）か
んでんプレートからのガム状コロニーとして採集した。

この単離物をつぎに滋養かんてん上において純粋培養し
た。

フラスコシードはこの単離物の滋養かんてん培養から開
始した。このシードはつぎに炭°素源としての加水分解
でんぷんをもつ滋養培地を含有する他のフラスコへの接
種に使用した。培養後、このフラスコは粘稠なビールを
含有しており、イソプロピルアルコール添加時にはセン
イ状物質が沈殿するのが見られた。

他のフラスコシードも開始し、これはガムの製造にだい
する多種の滋養培地の効果の測定およびこの微生物にだ
いする最良の生育培地および発酵条件の測定に使用した
。

発酵条件 ヘテロ多糖Ｓ−１８４は有機体ＡＴＣＣ５３１６０の培
養で接種して制御条件下適当な水性滋養培地の通気発酵
によって製造される。この培地は同化可能炭素、窒素お
よび無機塩類を含有する。

一般に炭水化物（たとえば、グルコース、フルクトース
、マルトース、キシロースなど）は滋養培地中の同化可
能炭素源として単独にまだは組み合わせて使用できる。

この培地中に利用される単数または複数の炭水化物源の
正確な量は、一部はこの培地の他の成分に依存するが、
一般に炭水化物の量は培地の約２＠量チ乃至５重量係に
わたる。これらの炭素源は培地中において単独にまたは
組み合わせて使用することができる。

通常、多くのタンパク性物質は発酵プロセスにたいする
窒素源として使用できる。適当な窒素源には、たとえば
、イースト加水分解物類、プライマリ−イースト、大豆
粉、綿実おける窒素源は好ましくは水性培地の０．０５
重量％乃至０．２重量％にわたる量として使用される。

この培地中に組入れることのできる滋養無機塩類は、ナ
トリウムカリウム、アンモニウム、カルシウム、リン酸
塩、硫酸塩、塩素化物、炭酸塩などのイオンを生成でき
る慣用の塩類である。また痕跡量のコバルト、マンガン
、鉄およびマグネシウムのような金属も含まれる。

ここに挙げた滋養培地は単に使用できる培地の広汎さを
説明するだめであって制限するつもりではない点に留意
されなければならない。

別の培地として、Ｓ−１８４を低カルシウムイオン条件
下、すなわち、脱イオン水まだは実質的にカルシウムイ
オンのない（すなわち、最終発酵ブｂ−ス中にＣａ＋＋
　がガム１％あたり約４ｐｐｍよりも少い）水性系で生
育できる。

発酵は約２５℃乃至３５℃にわたる温度において行われ
るが、最良の成果を得るためには、この発酵が約２８℃
乃至３２℃の温度で行われるのが好ましい。ＡＴＣＣ５
３１６０＾策物を生育させ、まだヘテロ多糖Ｓ−１８４
を製造する滋養培地のｐｎは約６乃至８にわたることが
できる。

Ｓ−１８４は表面及び液内培養のどちらででも製造でき
るが、液内状態でこの発酵を行うのが好ましい。

小規模発酵は、この培養物を適当な滋養培地へ接種し、
また製造用培地へ移したのち、撮とう機上において数日
間約３０℃の一定温度においてこの発酵を進めることに
よって簡便に行われる。

この発酵は培地を入れた殺菌フラスコの中で、１段階ま
たは多段階のシード展開を経て開始される。このシード
段階用の滋養培地は炭素および窒素源のどのような適当
な組み合わせでもよい。しかしながら、好ましい炭素源
はグルコースまたは加水分解でんぷんである。シードフ
ラスコは約３０℃の定温室の中で１−２日間、または生
育が果たされるまで撮とうされ、得られる生育物の若干
は第２段。

階シードまだは製造用培地への接種に使用される。中間
段階シードフラスコが使用される場合、これは本質的に
同じ方法によって進められる。すなわち、最終シード段
階からのフラスコの内容物の一部が製造用培地への接種
に使用される。接種されたフラスコは一定温度で数日間
振とうされ、この培養期間の終了時にフラスコの内容物
はイソプロパツールのような適当なアルコールによる沈
殿化によって回収される。

大規模操作にたいしては、かくはん機およびこの発酵培
地を通気する手段を具えた適当なタンクの中で発酵を行
うのが好ましい。この方法では、滋養培地はタンク中で
作成され、また約１２１℃以下の温度に加熱して殺菌さ
れる。冷却後、この殺菌された培地は製造１う培養物の
事前生育シードを接種されて、この発酵は、たとえば２
乃至４日間のような期間、この滋養培地をかきまぜなが
ら、および／まだは通気しながら、まだ温度を約３０℃
に維持しながら進められる。Ｓ−１８４を製造するこの
方法は大量の製造にとくに適している。

ＡＴＣＣ５３１６０によって製造されたベテロ多糖は、
主要部としての炭水化物、１２％乃至１６％のタンパク
質、および酢酸として計算して３．０％乃至４．５％の
アシル群から構成されており、その炭水化物部分は約７
％乃至１６係のウロン酸および１：３：５の概略モル比
における中性糖マンノース、グルコースおよびガラクト
ースを含有する。

ヘテロ多糖Ｓ−１８４の組成分析のまとめを下記の第１
表に示す。

（１）アセチル含有率は、Ｓ−１８４ガムの０．２多水
溶液のアルカリ性、ヒドロキシルアミン試薬による処理
につづく酸性塩化第２鉄による処理および測色分析によ
って測定した。

〔ニス、ヘストリン（Ｓ、　Ｈｅ５ｔｒｉｎ　）　　（
１９４９）ジエイ、バイオロ、ケム、　　（Ｊ−Ｂｉｏ
ｌ、　Ｃｈｅｍ、　）、１８０　、　２４９−２６１頁
を参照されたい〕アセチルコリンクロリドを標準品とし
て使用した。

＜２）３．１％乃至４．５％（酢酸として計算した）と
いうアシル含有率は、稀アルカリを使°用するＯ−アセ
チル連結の加水分解ののち、酵素試、嗅によって測定し
た。

（３）　　Ｓ　−１８４の中性糖類は多種の技術によっ
て測定した。その第１の方法は１ＭＨ２Ｓ０４１ゴ中の
５０ηのＳ−１８４を１００℃において４時間加水分解
を行うものである。冷却後、３■／ｎｆ！キシロース０
．５−を内部標準として添加した。飽和Ｂａ　（ＯＨ）
、　　３ゴ、つぎに２滴のコンゴーレッドおよびＢａ（
ＯＨ）ｚを色が赤変する１で添加してサンプルを中性し
た。遠心分離（３０００ＲＰＭにおいて２０分間）のの
ち、全サンプル上の上澄液を蒸発させた。乾燥サンプル
を０．１−のヒドロキシルアミン塩酸塩（乾燥ピリジン
中４０　Ｔｎｇ／ｒｎｔ　）　　中へ溶解させ、９０℃
において４５分間加熱した。冷却後、０．１−の無水酢
酸を添加し、このサンプルをふたたび９０℃において４
５分間加熱した。

この糖類はそれらのアルドノニトリルアセテート誘導体
類の気相一液相クロマトグラフィによって分離し、信頼
できる標準品と比較して同定および定量を行った。〔ジ
エイ、ケイ。

バード（Ｊ、　Ｋ、　Ｂａ１ｒｄ　）、　エム、ジエイ
、ホルロイド（Ｍ、　Ｊ、　Ｈｏ１ｒｏｙｄｅ　）、お
よびディー。

シー、エルウッド（Ｄ、　Ｃ，Ｅｌｌｗｏｏｄ　）　（
１９７３）カルボヒドロ、レス（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、
　ＲｅＳ、　　）　２７４６４−４６７頁〕 （４）サンプルを７２％Ｈ２ＳＯ４中に溶解させて前処
理を行い、前記の中性糖分析の第１の方法による稀釈お
よび加水分解のまえに０℃において１時間保持した。Ｂ
Ｄ−，７０７，ＢＤ−２１１７およびＢＤ−２１１８と
して得られた結果は平均値および範囲である。

（５）　　これらのサンプルの中性糖類もまた、およそ
２■のＳ−１８４を０．５Ｍのトリフルオ′口酢酸（２
−）の中へ溶解させる第２の方法に特徴があるっこのサ
ンプルを一晩中１００℃に保持し、蒸発乾固させ、水（
２ｄ）へ溶解させた。ナトリウム水素化ホウ素（２５ｍ
ｔ　）を添加し、２時間後にこの溶液をドウエックス５
０　（Ｈ）　ＣＤｏｗｅｘ　５０（Ｈ）　］によって処
理したのちｐｎを３．５へ落とした。濾過後、この溶液
を濃縮し、メタノールとともに共蒸留（５−にて３回）
した、残渣を無水酢酸（１ｒｎｔ）とピリジン（ｌ　ｍ
ｌ　）との混合物の中へ溶解させ、１００℃において１
時間保持し、濃縮した。トルエンとの共蒸留（５−にて
３回）ののち、この残渣を塩化メチレンへ溶解させ、気
相一液相クロマトグラフィによって分析した。ＢＤ−７
０７，ＢＤ−２１１７およびＢＤ−２１１８にだいする
結果は平均値および範囲である。

この多糖の係ウロン酸は、１７％塩酸による脱カルボキ
シル化につづく標準水酸化ナトリウム中への放出二酸化
炭素の捕獲および逆滴定によって測定した。〔ビー、エ
ル、ブローニング（Ｂ、　Ｌ、　Ｂｒｏｗｎｉｎｇ　）
、（１９６７）　　木材化学の方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ　
ｏｆ　Ｗｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）２６３２−６
３３頁〕。

ピルビン酸塩の不在は、Ｓ−１８４の２　ｒｒｑ／ｍｔ
溶液の１ゴを培養チューブへ添加し、また０、　２　Ｎ
　Ｈαの１−を添加し、１００℃において４時間加熱す
ることによって測定した。加水分解物のサンプル０．５
　ｍｔを０．１Ｈの還元ニコチンアミドアデニンジヌク
レオチド（ＮＡＤＨ）オヨヒ２．４−のトリエタノール
アミンの溶液へ添加した。吸光度変化を分光光度計によ
って測定し、ピルビン酸塩を測定した。〔ダックワード
（Ｄｕｃｌｃｗｏｒｔｈ　）　　およびヤフエ（Ｙａｐ
ｈｅ　）、化学と工業（Ｃｈｅｍ、　＆　Ｉｎｄ、　　
）（１９７０）　７４７頁〕有意量のピルビン酸塩は探
知されなかった。

窒素分析はケルダール分欝（Ｋｊｅｌｄａｈｌｄｉｇｅ
ｓｔｉｏｎ　）　　によって行い、１１．８％−１５，
８％タンパク当量に相当するおよそ１．９重量％と２．
５重量％との間として測定された。

透析および凍結乾燥後のＳ−１８４の部分的に精製した
サンプルについてメチル化分析を行った。このサンプル
はスタンフォードアンドコンラッド（５ｔａｎｆｏｒｄ
　＆　Ｃｏｎｒａｄ　）　（１９６６年）バイオケム（
Ｂｉｏｃｈｅｍ、　）　５１５０８−１５０７頁に概説
された方法にしだがってメチル化を行った。アジトール
アセテート類と°してのこの糖のＯ−メチルエーテル誘
導体類を気相クロマトグラフィによって分離し、信頼で
きる標準品とのコンピュータ照合によって同定した。同
定された主要なメチル化糖類を下記の第２表に示す。

第　　２　　表 Ｓ−１８４のメチル化糖残渣 ２、３．６　Ｍｅ　３　　ヘキシトール（ガラクタース
）１−４２、３．６　Ｍｅ　、　　ヘキシトール（マン
ノース）１−４２、３．６　Ｍｅ　３　　へキシトール
（グルコース）１−４ここに述べたヘテロ多糖の分析法
は上記組成物の探知に使用される実用法であるが、当業
者にとっては他の分析法も当然利用できることが理解さ
れる。他の分析法を利用してもこのヘテロ多糖の同じ特
性値を引き出せる筈ではあるが、わずかに異る数値が報
告されることはありうる。

ヘテロ多糖Ｓ−１８４は水溶液において顕著な性質、と
くにきわめて低濃度におけるきわめて高い粘度、良好な
表面活性、良好なタンパク質相溶性および優良な安定性
乳濁性、をもつことが分った。このだめ、増粘、懸濁、
乳濁、安定、潤滑、造膜または結合剤としてまだ多くの
用途におけるアラビアゴムの代用品として有用である。

Ｓ−１８４は表面活性およびタンパク質相溶性が望まれ
る多種の工業および食品用途に利用される。とくにこれ
は次の用途および製品として便用される：接着剤類、壁
補條セメント類、水保持グラウトおよびモルタル類、ス
パックリング（Ｓｐａｃｋｌｉｎｇ　Ｉ化合物類、かん
封止剤類、ボイラー化合物類、ラテックスクリーミング
、溶接棒フラックス類、ブレイジングペースト類、セラ
ミックうわ薬類および押し出し剤類、清浄剤類および研
磨剤類、おもちや類、乳濁液類（ラテックス、アスファ
ルト、シリコーン）、銀回収、シードコーティング、殺
虫剤類または除草剤類、乳濁化可能濃縮物類および流動
可能殺虫剤や除草剤類の噴霧制御、タバコバインダ類、
水ベースのインク類、リングラフインクつぼ溶液、皮革
仕上げ剤類、ハイドロマルチング（ｈｙｄｒｏｍｕｌｃ
ｈｉｎｇ　）　　およびハイドロシーディング（ｈｙｄ
ｒｏ−ｓｅｅｄｉｎｇ　）、織布捺染および仕上げ、ウ
ェットエンドペーパー（ｗｅｔ　−ｅｎｄｐａｐｅｒ　
ｌ添加剤類、ウェットエンドペーパー保持および成形助
剤類、すべり止めコンパウンド類、離型剤類、液状樹脂
類、スラリーおよびパッケージ化爆薬類、石油および水
井戸堀さくでいすい類、石油採収井の改修および完成流
体類、石油刺激用流体類、化粧品類、調薬上の懸濁液類
および乳濁液類。

このガムはまた、ゼリー類およびその他の多糖食品類、
クエン酸ベースのドリンク類を含む飲料類、アイスクリ
ームやヨーグルトを抱含する日用品類、サラダドレッシ
ング類、ドライミックス類（ｄｒｙ　ｍ１ｘｅｓ　）　
、砂糖ごろも類、およびころも材類、シロップ類、プラ
イン類、扮装食品類、がんづめおよびレトルト食品類お
よびパン菓子充填物のような食品系に利用される。

とくに価値のある利用は食品用途、とくにサラダドレッ
シング、飲料およ−び日用品類の分野である。ヘテロ多
糖Ｓ−１８４は、その表面活性、タンパク質相溶性およ
び安定性／乳濁化性のゆえにとくに食品類として有用で
あることが分かつた。

サラダドレッシングは、ヘテロ多糖類の重量の２乃至５
倍のオイルでヘテロ多糖Ｓ　−１８４をスラリー化し、
このＳ−１８４／オイルスラリーを水へ添加して強力な
かくはん下で水和し、他の全乾燥成分を配合して水／ス
ラリー配合物へそれらを添加し、トマトペーストを添加
して３分間混合し、オレオレジンパプリカ（ｏｌｅｏｒ
ｅｓｉｎ　ｐａｐｒｉｋａ　）を添加して３分間混合し
、オイルをゆっくりと添加しそして３分間混合し、酢を
添加して３分間混合し、コロイドミルを使用して均質化
してそしてびん詰めすることによって調製した。

Ｓ−１８４を乳濁液安定剤として約０．１０重量係と０
．４０重量多との間の量においてこのドレッシングへ添
加した。このドレッシングの粘度、ｐ■、貯蔵安定性お
よび手ざわシを測定した。下記の第３表に示す。

ヘテロ多糖Ｓ−１８４は、この多糖の顕著な特性である
種々な溶液特性の特別なプロフィールをもっており、こ
のことが他のヘテロ多糖類との区別を可能に１せている
。５−ＩＳ４は下記の諸性質をもつ。

１、粘度と剪断応力 Ａ、ブルックフィールド（Ｂｒｏｏｋｆｔｅｌｄ　１１
、１．０％６０ｒｐにおける　　１０８０　ｃｐｓ　　
　　１０３０　ｃｐｓ６ｒ−における　　６０００　ｃ
ｐｓ スピンドル　番号　　　　　　３ ２、０．１％　（ＵＬ　アダプタ ６　ｒｐｍにおけ　　　　７　ｃｐｓ　　　　　　７　
ｃｐｓる） ３、０．５％ウェルズ−ブルッ クツイールド９．６　　３３０　ｃｐｓ　　　　３２０
　ｃｐｓ気　における ４、　１．０％脱イオンＨ２０６０１４６０ｃｐｓｒｐ
ｍ　　における スピンドル　番号　　　　　　３ Ｂ、剪断応力〔ウェルズ（Ｗｅｌｌａ）−ブルックフィ
ールド〕 １、　　１．９２ｓｅｃ　　　における１　　　４１０
０　ｃｐｓ２、　　９．６ｓｅｃ　　　Ｋおける１　　
　１２７０　ｃｐｓ３、　７６．８　　ｓｅｃ　　　に
おけるη２９０　ｃｐｓＣ，４，４℃（４０下）貯蔵（
ブルックフィールド） スピンドル　３番による６　０　ｒｐｍにおいて１３２
０ｃｐ　　； ゲル化は起こらない。

＊　１０００　ｐｐｍのＮａαおよび１４７ｐｐｍのＣ
ａα２・２Ｈ２０を含有する脱イオン水。

２、　塩および染料との相溶性 Ａ、塩 １、　　Ｃａα２　（飽和）　　　　　　相溶２、　　
Ａｍｍ、多リン酸塩　　　　　沈殿３．６０％ＮＨ４Ｎ
ｏ　ｓ　　　　　　　−相溶４．１％Ａｌｔ　（８０４
）３・１８Ｈ２０相溶５．１％Ｃａα、・２Ｈ，Ｏ相溶 ６．１％にα　　　　　　　　　相溶 Ｂ、染料 １、　ミリンググリーン　　　　　相溶２、　メチレン
ブルー　　　　　　相溶菌株の説明 ヘテロ多糖Ｓ−１８４は未だ命名されていないアルカリ
ジェネス種での適当な滋養培地の発酵によって製造でき
る。本ヘテロ多糖の作成に使用された微生物の生物学的
純粋培養のブダペスト条約下の寄託はアメリカンタイプ
カルチャーコレクション、ロックビル、マリ−ランド、
１９８５年６月１９日、受入筒ＡＴＣ０５３１６０号に
よってなされている。

Ａ、コロニー形態の緒特性 滋養かんてん上に単離Ｓ−１８４は不透明な中心と半透
明の周縁をもつ円いコロニーを形成する。染色したもの
は白色乃至灰色である。

コロニーは３０℃における７２時間後には１３ｍｍとな
る。

この細胞はダラム陰性であり、空胞のある長い棒状（０
，８−２，３μｍ）のものである。

前条件下では淡紅色の染色物を生成することが観察され
た。

生理学上および生化学上の試験結果？下記の第４表に示
す。この微生物はシトクローム１１　　　　　　オキシ
ダーゼ陽性、カタラーゼ陽性であり、まだ新陳代謝では
酸化性である。クエン酸塩利用およびＨ２Ｓ生成につい
ての結果は陽性であった。これはでんぷん、ゼラチン、
カゼインおよびポリツルベイト８０．ユーエスピ＝（Ｐ
ｏ１ｙＳｏｒｂａｔｅ　８０．　ＵＳＰ　）　　Ｃディ
フコ（Ｄｉｆｃｏｌから入手できる界面活性剤〕を加水
分解する能力をもつ。これは３０℃および３７℃に−お
いて良好に生育するがより高い温度では試験を行わなか
った。これは１．５％Ｎａαは許容できるが、３％は不
可であシ、また６−１０のｐＨ範囲内で生育する。

炭水化物からの酸生成パターンを下記に示す。

酸を生成する　　　　　　酸を生成しないＬ−アラビノ
ース　　　　アドニトールフルクトース　　　　　　ダ
ルシトールガラクトース　　　　　　エタノール マルトース（弱い）　　　Ｄ−グルコースマンニトール
（弱い）Ｄ−キシロース マンノース　　　　　　　イノシトールイヌリン ラクトース メリビオース α−メチルグルコシド ラフィノース ラムノース サリシン ソルビトール スクロース トレハロース Ｄ−キシロース Ｓ−１８４は単独炭素源およびエネルギー源として下記
の４６基貞を利用できる。

Ｄ−キシロース　　　　　Ｌ−マレートＬ−アラビノー
ス　　　　ＤＬ−β−ヒドロキシブチレートＤ−グルコ
ース　　　　　ＤＬ−ラクテートＤ−マンノース　　　
　　ＤＬ−グリセレートＤ−ガラクトース　　　　シト
レート Ｄ−フルクトース　　　　α−ケトグルタレートマルト
ース　　　　　　　ピルベート セロビオース　　　　　　レブリネートイヌリン　　　
　　　　　マンニトールグルコネート　　　　　　グリ
セロールサッカレート　　　　　　Ｄ−α−アラニンム
ケート（Ｍｕｃａｔｅ　）　　　　β−アラニンアセテ
ート　　　　　　　Ｌ−トレオニンプロピオネート　　
　　　Ｌ−ロイシンブチレート　　　　　　　ＤＬ−イ
ソロイシンカプロエート　　　　　　Ｌ−７スバルテー
トヘプタノエート　　　　　し−グルタメートカプリレ
ート　　　　　　　し−リジンベラルゴネート　　　　
　ＤＬ−オルニチンカプレート　　　　　　　し−ヒス
チンマロネート　　　　　　　Ｌ−プロリンサクシネー
ト　　　　　　Ｌ−チロシンフマレート　　　　　　　
し−フェニルアラニン第　　４　　表 菌株Ｓ−１８４の生理学上および生化学上の試験結果シ
トクロームオキシダーゼ　　　　　　　″　　　　　十
カタラーゼ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１０Ｆ試験　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　酸化性嫌気性生育　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　−ＴＳＩかんてん：斜面　　　　　　　　
　　　　　　　　ＮＣインドール　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　−メチルレツド　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　−ボーグスプロスカウエル（Ｖ
ｏｇｅｓ　−Ｐｒｏｓｋａｕｅｒｌ　　　　　−シモン
のクエン酸塩（Ｓｉｍｍｏｎ’ｓ　ｃｉｔｒａｔｅ　）
　　　　　　＋亜硝酸塩還元　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　−硝酸塩還元　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　−リドマスミルク　　　　　　　
　　　　　　　　　　　ＮＣアルギニンデヒドロラーゼ
　　　　　　　　　　　　　　−リジンデカルボキシラ
ーゼ　　　　　　　　　　　　　−オルニチンデカルボ
キシラーゼ　　　　　　　　　　　−フェニルアラニン
デアミナーゼ　　　　　　　　　　　ＮＧペプトンから
のアンモニア　　　　　　　　　　　　　　−第４表つ
づき ウレアーゼ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　−（ペプトン、シスチン、および亜硫酸塩培地からの
）Ｈ２Ｓ　　　　　　　　　　　　　　　　　＋３−ケ
トラクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　−コ
ンゴーレッド吸収　　　　　　　　　　　　　　　　−
フォスファターゼ　　　　　　　　　　　　　　　　　
−溶血（羊の血液）　　　　　　　　　　　　　　　　
　　ＮＴエッグヨーク反応　　　　　　　　　　　　　
　　　　　士でんぷん加水分解　　　　　　　　　　　
　　　　　　十ゼラチン加水分解　　　　　　　　　　
　　　　　　　十カゼイン加水分解　　　　　　　　　
　　　　　　　　十ニスキュリン加水分解　　　　　　
　　　　　　　　　−ポリソルベート８０加水分解　　
　　　　　　　　　　十いろいろな温度における生育 ４℃　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　−３０℃　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　＋３７℃　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　＋いろいろなＮａＣｔ濃度における生育 第４表つづき １．５％　（Ｗ／Ｖ）　　　　　　　　　　＋３．０％
　（Ｗ／Ｖ）　　　　　　　　　　　−６，５％　（Ｗ
／Ｖ）　　　　　　　　　　　−７，５％　（Ｗ／Ｖ）
　　　　　　　　　　　−１０，０％　（Ｗ／ｖ）　　
　　　　　　　　　−いろいろなｐＨ値における生育 ６　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋８
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋１０
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋１
１　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋Ｎ
Ｇ　＝生育しない ＮＣ＝変化がない ＮＴ　＝試験を行わない ＋＝陽性 ｍ＝陰性 この微生物は厳密には好気性、ダラム陰性であり、また
混合されたべん毛発生を示すので、決定細菌学のベルゲ
イ（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｉのマニュアル（Ｍａｎｕａｌ
　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ）（１９７４年）の第８版にしたがってアル
カリジェネス種に属するものとして分類した。

このアルカリジェネス種は最新のベルゲイのマニュアル
〔系統的細菌学のベルゲイのマニュアル（Ｂｅｒｇｙ’
ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＭｉｃ
ｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　）、第１巻、第１版、１９８４年
〕において再規定されており、染色された生物はすべて
締め出されている。単離Ｓ−１８４は新らだに規定され
たこの種に符合するが、アルカリジエネスフエカＩＪス
（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｆａｅｃａｌｉｓ　）　、ア
ルカリジェネスデニトリフィカンス（Ａｌｃａｌｉｇｅ
ｎｅｓ　ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ　）　　亜種デニ
トリフィカンスおよびアルカリジェネスデニトリフィカ
ンス亜種キシロソキシダンス（ｘｙｌｏｓｏｘｙｄａｎ
ｓ　）として表示された二種のどちらにも属さない。そ
こでＳ−１８４はアルカリジエネスの新種としだ。

本発明の他の実施態様は本明細書から考えれば当業者に
は明らかであろう。しだがって本明細書および諸実施例
は例示だけであり、本発明の真の範囲および精神は特許
請求の範囲によって示されると了解されたい。

実施例１ ジャイロータリイ振とう機にかけた３０℃における４８
時間滋養かんでん培養からＹＭフラスコシードを開始し
た。およそ２４時間後、このシードをカーボン源として
３％の加水分解でんぷんをもつＥ、培地を含有するフラ
スコへの接種に使用した。この培地も３０℃においてジ
ャイロータリイ振とり機にかけた。

およそ７２時間後、このフラスコは粘稠なビールをもっ
ているのが見られ、２倍容量の６１　　　　９９％イソ
プロピルアルコールを添加するとセンイ状の沈殿が見ら
れた。

Ｅ、培地は５２のリン酸二カリウム、０．１９の硫酸マ
グネシウム、０．９９の硝酸アンモニウム、０．５ノの
ブロモソイ１００　（Ｐｒｏｍｏｓｏｙｌｏｏ）（セン
トラルソヤ農産化学部（ＣｅｎｔｒａｌＳｏｙａ　Ｃｈ
ｅｍｕｒｇｙ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ　）　　から販売され
ている大豆粉の酵素消化物Ｌ　３０９のデキスートロー
スおよび１ｔのタップ水を含有する。Ｅ１培地のｐＨは
約７．６−７．８である。

上記の方式によって他のＹＭシードフラスコを調製し、
２４時間後に種々の培地を含有する４個のフラスコへ接
種し、これらのフラスコをジャイロータリイ振とう機上
３０℃において７２時間培養し、この７２時間目におけ
るｐＨ、粘度、ガム収率および生成物粘度を測定した。

結果を下記の第５表に示す。

第　　５ ガム製造における培 培地　　　　　　　　炭素源　　　　ｐＨＥ、　　　　
　　　　　　　　　　　　　　３チグルコース　　　　
６．８７Ｆ、　（−ＮＨ４Ｎｏ、＋０．１９％Ｎ　ａ　
Ｎｏ　３）　　　３％グルコース　　　　７．６７７′ １ＮＤ：測定を行わない。

２ホール塩類（ＨｏＬｅ　５ａｌｔｓ　）は下記の諸成
分を脱イオン水ま蒸留水へ添加して調製する。

Ｈ３Ｂ０３２８５　　■ Ｍｎα２　・４　Ｈ２Ｏ１８００’？ ＦｉＳＯ４１３６０Ｔａ２ Ｃｕα２　　　　　　　　　　　　　　２６．９ＷＺｎ
α２２０．８■ Ｃｏα２　　　　　　　　　　　　　　４０．４■Ｍｇ
２ＭＯＯ４・２　Ｈ２Ｏ２５，２■地の効果 ５００　　．１．７０２　　１９００／１５　　　１１
００／７４００　　１．８４０　　　　　ＮＤ　　　　
　　　ＮＤ２００　　１．７６２　　　　　ＮＤ　　　
　　　　ＮＤ）００　　１．２６６　　　　　ＮＤ　　
　　　　　ＮＤだは この原料溶液は１ｒｒｔ／ｌ　　にて培地へ添加される
。

上記の結果から分かるように、最良の生育培地は３％の
ゲルコールをもつＥ、である。

実施例２ 大量のヘテロ多糖Ｓ−１８４を製造する発酵法を使用す
る。

１００−のＹＭスープ〔ジフコ（Ｄｉｆｃｏ　）　）１
００ｍｌを含有する５００−の三角フラスコへ４８時間
滋養かんでんプレートからの一輪のＳ−１８４の細胞を
接種した。このフラスコを４０Ｏｒｐｍに設定したジャ
イロータリイ振とう機の上で３０℃において２４時間培
養した。

つぎに１％の接種材料を作成し、各１００−のシード培
地を含有する２個の５００−三角フラスコへ分けた。こ
のシード培地は、 グルコース　　　　　３　　％ に２ＨＰ０．　　　　　　　０．５　　％ＮＨ４Ｎｏ３
０．０９％ Ｍ９ＳＯ４−７Ｈ，ＯＯ，０１％ ブロモソイ１００　　　　０．０５　％を含有していた
。

この培地はタップ水によって調製した。

４００ｒｐｍ　　におけるジャイロータリイ振と−う機
上３０℃において２４時間これらのフラスコを培養し、
この時点でそれらを３０００　ｍｌ（最終容量）の同じ
培地を含有する５ｔの発酵容器への接種に使用した。こ
の発酵は３０℃および１ｔ／分の通気速度において制御
した。かくはんは４００ｒｐｍから開始し、その後良好
な混合を確保するため増大させた。２４時間後、および
２．５６のこのシードを２０１（最終容量）の下記の培
地を含有する３０１発酵容器への接種に使用した。

グルコース　　　　　　３．０　　％ ＫｌＨＰ０．　　　　　　　　０．０５％ＮＨ４Ｎ０８
０．□ｇ％ Ｍｇ５ｏ、・７Ｈ２００，０１％ ブロモソイ１００　　　　０．０５　係ｐｇ＋＋１　　
ｐｐｍ サグ５６９１　（Ｓａｇ５６９１）　　　０．００５％
〔ユニオンカーバイド（１Ｊｎｉｏｎ Ｃａｒｂｉｄｅ　から供給されたあわ消し剤〕 温度は３０℃に維持し、また通気速度はこの発酵の２２
時間目までは５ｔ／分とし、この時点で１０ｔ／分に調
整した。この速度は発酵の残余期間中そのままとした。

ｐ■は４０％ＫＯＨの添加により、必要に応じて自動ｐ
■制御系を使用して６．３よりも上に調整した。かくは
んは初期には３００ｒｐｍに設定し、２２時間目には４
００ｒｐｍへ、４５時間目には７００ｒｐｍへ上げた。

残余の発酵期間は７００ｒｐｍのままとした。この発酵
の結果を下記の第６表に示す。

この発酵母液をおよそ７５℃に１５分間加熱してから、
およそ３０℃にまで冷却した。

この発酵母液へ３体積の９９％イソプロパツールを添加
した。多糖はせンイ状物質として沈殿し、これはふるい
を使用して容易に回収できた。このセンイ状物は粉末に
するまえに強制空気トレイ乾燥機中で６０℃（１４０下
）において２．５時乾燥された。

実施例３ １００−のＹＭスープ（ジフコ）を含有する５００−の
三角フラスコへ４８時間滋養かんてんプレートからの一
輪のＳ−１８４の細胞を接種した。このフラスコを４０
Ｏｒｐｍに設定シたジャイロータリイ振とり機の上で３
０℃において２４時間培養した。つぎに１％の接種材料
を作成し、各１００１＋＋／のシード培地を含有す、、
１．１　　　　　る５個の５００−三角フラスコへ分け
た。このシード培地は、 グルコース　　　　　　３　　％ Ｋ　２　）（ＰＯ４０，５％ ＮＨ，Ｎｏ３　　　　　　　　　　　　０．０９　　％
Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２００，０１％ ブロモソイ１００　　　　０．０５％ 、、−）＋　　　　　　　　　　　　ｌｐｐｍタップ水 を含有していた。

４００ｒｐｍにおけるジャイロータリイ振とう機上、３
０℃において２４時間これらのフラスコを培養し、この
時点でそれらを１０ｔ（最終容量）の最終培地を含有す
る１４ｔの発酵容器への接種に使用した。この発酵は３
０℃および３ｔ／分の通気速度において制御した。かく
はんは４００ｒｐｍから開始し、その後良好な混合を確
保するため増大させた。

最終培地は、 グルコース　　　　　　３．０　　％ に、ＨＰｏ、　　　　　　　　　０．０５％ＮＨ４Ｎｏ
、０．０９％ Ｋｇ　ＳＯ４・７Ｈ２００，０１％ ブロモソイ１００　　　　０．０５　％Ｆｎ″″　　　
　　　　　　　１　ｐｐｍからなっていた。

ｐＨは２５％ＫＯＨの添加により、必要に応じて自動ｐ
Ｈ制御系を使用して６．５よりも上に調整した。この発
酵の結果を下記の第７表に示す。

この発酵母液をおよそ７５℃に１５分間加熱してから、
およそ３０℃にまで冷却した。

この発酵母液へ３体積の９９係インプロパツールを添加
した。多糖はセンイ状物質として沈殿し、これはふるい
を使用して容易に回収できた。このセンイ状物は粉末に
するまえに強制空気トレイ乾燥機中で６０℃（１４０下
）において２．５時間乾燥させた。

出　願　人　：　メルク　エンド　カムパニーインコー
ポレーテツド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、主要部としての炭水化物、１２％乃至 １６％のタンパク質および酢酸として計算 して３．０％乃至４．５％のアシル群を含み、その炭水
   化物部分は約７％乃至１６％のウ ロン酸および１：３：５の概略モル比にお ける中性糖マンノース、グルコースおよび ガラクトースを含有することを特徴とする ヘテロ多糖Ｓ−１８４。 ２、アルカリジエネス微生物、ＡＴＣＣ５３１６０、の
   生物学的純粋培養。 ３、アルカリジエネス微生物、ＡＴＣＣ５３１６０、を
   含み、その培養が好気性発酵によつて回 収可能量のヘテロ多糖Ｓ−１８４を製造できることを特
   徴とする培養。 ４、同化可能炭素源の好気性発酵による水性滋養培地中
   におけるアルカリジエネス微生 物、ＡＴＣＣ５３１６０、の生育およびヘテロ多糖Ｓ−
   １８４の回収を含むことを特徴とするヘテロ多糖Ｓ−１
   ８４の製造方法。 ５、同化可能炭素源が炭水化物である特許請求の範囲第
   ４項に記載の方法。 ６、炭水化物がグルコースである特許請求の範囲第５項
   に記載の方法。 ７、滋養培地が実質的にカルシウムイオン類を含まない
   特許請求の範囲第４項に記載の 方法。 ８、特許請求の範囲第４項に記載の方法によつて製造さ
   れることを特徴とする生成物。