HU198220B - Process for producing heteropolysaccharide s-184 - Google Patents
Process for producing heteropolysaccharide s-184 Download PDFInfo
- Publication number
- HU198220B HU198220B HU862659A HU265986A HU198220B HU 198220 B HU198220 B HU 198220B HU 862659 A HU862659 A HU 862659A HU 265986 A HU265986 A HU 265986A HU 198220 B HU198220 B HU 198220B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- heteropolysaccharide
- medium
- fermentation
- glucose
- carbohydrate
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/20—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents
- A23L29/269—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents of microbial origin, e.g. xanthan or dextran
- A23L29/271—Curdlan; beta-1-3 glucan; Polysaccharides produced by agrobacterium or alcaligenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/05—Alcaligenes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Physical Or Chemical Processes And Apparatus (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás S-184 jelű heteropoliszacharid előállítására.
Ismeretes, hogy bizonyos mikroorganizmusok exocelluláris heteropoliszacharidokat képesek termelni. A heteropoliszacharidok olyan nagy molekulájú, általában lineáris szénhidrát polimerek, amelyek két vagy több monoBzacharidot tartalmaznak, amelyek ismétlődő egységet alkotva polimerizálódnak.
A legtöbb heteropoliszacharidok használhatósága azon alapszik, hogy vizes oldatok viszkozitását és reológiai tulajdonságait meg képesek változtatni. Emellett a heteropoliszacharidok másodlagos funkcióval is rendelkeznek, emulgáló, szuszpendáló, stabilizáló, flokkuláló, kenő, filmkcpző, stb. segédanyagokként használhatók.
A heteropoliszacharidokat széles körben használják élelmiszerekben, kútfúrásoknál, mezőgazdaságban és az ipar számos területén. Az utóbbi néhány évtizedben nagyon megnóvekedett az ilyen vízoidható polimerek iránti igény. Ezen kívül az új ipari technikák újfajta fizikai tulajdonságokkal rendelkező heteropoliszacharidokat kívánnak meg. Következésképpen, a kereskedelmi szükséglettel párosuló, a különböző funkciójú heteropoliszacharidok iránti igény tisztán jelezte, hogy új és különböző fizikai tulajdonságú, új heteropoliszacharidokat kell kifejleszteni.
A találmány tárgya tehát eljárás új heteropoliszacharidok előállítására egy új Alcaligenes faj segítségével.
Kísérleteink során úgy találtuk, hogy egy új Alcaligenes faj bizonyos szénforráson olyan új heteropoliszacharidot képes termelni, amely 50-80 tömegX szénhidrátból, 12-16 tömegX proteinből és 3,0-4,5 tömegX acilcsoportból (ecetsavként számítva) áll, a szénhidrátrész mintegy 7-16 tömegX uronsavból és mintegy 1:3:5 mólarányban mannóz, glükóz és galaktóz semleges cukrokból áll. Ezt az új vegyületet egy Alcaligenes faj aerob fermentációjával állitjuk elő megfelelő vizes tápközegen. A mikroorganizmus biológialag tiszta tenyészetét a Budapesti Egyezménynek megfelelően 1985. június 19-én helyeztük letétbe az American Type Culture Collection, Rookville, Maryland intézetben ATCC 53160 számon.
A találmány szerinti eljárással előállított heteropoliazacharid, amelyet a továbbiakban S-184 heteropoliszacharidként említünk, vizes rendszerekben a kívánt tulajdonságokkal rendelkezik, és különösen jól használható élelmiszerekben.
A találmány szerinti eljárásban alkalmazott mikroorganizmust Kaliforniában, San Diegoban, a Palomar-hegyen, Pauma Creéknél vett vízmintából izoláltuk. A mikroorganizmust YM agarlemezen 4 napig tartó 30 °C-on végzett inkubálás után gumiszerű kolóniák formájában gyűjtöttük. Az izolátumot ezután tápagaron történő tenyésztéssel tisztítottuk.
Az izolátum tápagaros tenyészetéből származó lombiknyi oltóanyaggal kezdtük a munkát. Az oltóanyagot egy másik, szánforrásként hidrolizált keményítőt tartalmazó lombik beoltására használtuk. Inkubálás után ez a lombik viszkózus, aörszerü anyagot tartalmazott, és izopropilalkohol hozzáadására szálas csapadék képződött. Egy másik lombik oltóanyagot a különböző tápközegeknek a polimerképzésre gyakorolt hatása meghatározására, valamint a mikroorganizmus legjobb tenyészközegének és fermentációs körülményeinek meghatározására használtunk.
Fermentációs körülmények
Az S-184 heteropoliszacharidot alkalmas vizes tápközeg aerob körülmények között végzett fermentációjával állítjuk elő, szabályozott körülmények között, az ATCC 53160 számú organizmus segítségével. A tápközeg asszimilálható szén-, nitrogén- és szervetlen sóforrást tartalmaz.
A tápközegben szénforrásként általában szénhidrátok (például glükóz, fruktóz, maltóz, xilóz, stb.) alkalmazhatók, önmagukban vagy kombinációban. A szénhidrátforrás vagy -források pontos mennyisége részben a tápközegben jelenlevő többi komponenstől függ, de általában 2 és 5 tömegX között lehet, a tápközegre számítva. Az említett szénforrások önmagukban vagy kombinációban használhatók a tápközegben.
A fermentációs eljárásban nitrogénforrásként általában proteinek használhatók. Alkalmas nitrogénforrások például élesztőhidrolizátum, élesztő, szöjaliszt, gyapotmagliszt, kazeinhidrolizátumok, kukoricalekvár, desztillációs maradékok, paradicsompüré, stb. A nitrogénforrások önmagukban vagy kombinációban alkalmazhatók, a vizes közegre számítva 0,05 és 0,2 tömegX közötti mennyiségben.
A tápközegben alkalmazható szervetlen sók bármely szokásos, nátrium-, kálium-, am- * mónium-, kalcium-, foszfát-, szulfát-, klorid-,. karbonát-iont szolgáltató sók lehetnek. Alkalmazhatók nyomelemek is, például kobalt, mangán, vas és magnézium.
A tápközeg itt ismertetett összetétele csupán illusztratív jellegű.
Az S-184 heteropoliszacharid alacsony kalciumiontartalom mellett is előállítható, azaz ionmentesltett vizben vagy más vizes rendszerben, amely kalciumiontól mentes (pl. kevesebb, mint 4 ppm CA” per IX polimer a végső fermentlében).
A fermentációt 25 és 35 °C közötti hőmérsékleten végezzük, az optimális eredmények elérése érdekében azonban előnyösebb 28 és 32 °C közötti hőmérsékleten dolgozni, az ATCC 53160 számú mikroorganizmus tenyésztéséhez és az S-184 heteropoliszacharid előállításához a tápközeg pH-ja 6 és 8 között változhat.
Bár az S-184 heteropoliszacharid mind felszíni, mind szubmerz tenyészetben előállít3
HU 198220 Β ható, előnyösebb a fermentációt szubmerz viszonyok között folytatni.
Kis méretekben a fermentációt előnyösen úgy végezzük, hogy egy alkalmas tápközeget beoltunk a tenyészettel, majd tenyésztő közegre történő átvitel utón a fermentációt 30 °C körüli állandó hőmérsékleten, rázógépen hagyjuk lefolyni néhány napig.
A fermentációt sterilezett tápközegen kezdjük, egy vagy több oltóanyagtermelési lépésen keresztül. Az oltóanyag termelési lépésben a tápközeg szén- és nitrogénforrások bármilyen alkalmas kombinációja lehet, előnyös szénforrások azonban a glükóz vagy a hidrolizált keményítő. Az oltóanyagternieló lombikot állandó hőmérsékletű kamrában, mintegy 30 °C-on 1-2 napig rázatjuk, vagy addig, amíg a növekedés megfelelő, és a kapott tenyészet egy részével vagy egy második oltóanyatermelő lombikot, vagy a termelő közeget oltjuk be. Ha közbülső oltóanyagtermelő lépéseket alkalmazunk, lényegében véve az előbbi módon tenyésztjük azokat, azaz az utolsó oltóanyagtermelési lépés lombikja tartalmának egy részét használjuk a termelő közeg beoltására. A beoltott lombikokat állandó hőmérsékleten néhány napig rázatjuk, és az inkubáiás végén a lombikok tartalmát alkalmas alkohollal, például izopropanollal kicsapjuk.
Nagy méretekben végzett tenyésztéshez előnyös, ha a fermentációt alkalmas fermentorokban végezzük, amelyek keverővei és levegőztetővei vannak felszerelve. Megfelelő mód5 szer az, ha a tenyésztőközeget a fermentorban állítjuk össze, és 121 °C-ra történő felmelegítéssel sterilezzük. Hűtés után a steril közeget beoltjuk az előzőleg tenyésztett oltóanyaggal, és a fermentációt például 2-4 na10 pig folytatjuk, mialatt a tenyésztő közeget keverjük és/vagy levegőztetjük, és a hőmérsékletét kb. 30 °C-on tartjuk. Az S-184 heteropoliszacharid ilyen módon történő előállítása különösen alkalmas nagy mennyiségben történő termelésre.
S-184 jelű heteropoliszacharid
Az ATCC 53160 sz. mikroorganizmus által termelt heteropoliszacharid 50-80 tómegX szénhidrátból, 12-16 tömegX proteinből és 3,0-4,5 tömegX acilcsoportból (écetsavként számítva) áll, a szénhidrát rész 7-16 tömegX uronsavból és mintegy 1:3:5 mólarányban mannóz, glükóz és galaktóz semleges cukrok25 ból áll.
Az S-184 heteropoliszacharid összetételének elemzési eredményét az I. táblázatban foglaltuk össze.
I. táblázat
S-184 heteropoliszacharid összetételének vizsgálati eredménye
| Vizsgálat | Minta jele | ||||
| BD-1842 | BD-1827 | BD-707 | BD-2117 | BD-2118 | |
| Protein (%) | |||||
| (N x 6,25%) | 15,8 | 12,3 | 12,6 | 11,8 | 12,4 |
| Uronsav (%) | |||||
| (mól. tömeg 176, | |||||
| dekarboxilezés) | 15,8 | 12,3 | 10,76 | 9,0 | 7,1 |
| Acilcsoport (%) | (1) | (1) | (2) | (2) | (2) |
| (ecetsavként) | 3,9 | 3,1 | 4,5 | 3.4 | 3,6 |
| Piroszőlősav (%) | <0,1' | <0,1 | _ | 0 | o, |
| Semleges cukrok: | —v | ||||
| (%-os mólarenyok) | (3) | (3) | (4) | (5) | |
| mannóz | 12 | 12 | 19,4 | 9,4 | |
| (17,9-23,8) | (9,3-9,8) | ||||
| glükóz | 35,6 | 35 | 30,1 | 29,2 | |
| (27,6-31,9) | (28,7-29,5) | ||||
| galaktóz | 52,4 | 52,5 | 50,5 | 61,4 | |
| (48,5-52,1) | (61,1-62,0) |
Megjegyzés: (1)-(5) a következőkben ismertetett analitikai módszereket jelölik.
, (1) Az acetilcsoport-tartaímat úgy határoztuk meg, hogy az S-184 polimer 0,2%-os vizes oldatát bázisos hidroxilamin reagenssel, majd savas vas-klorid reagenssel kezeltük, és az eredményt kolorimetriásan mértük (S. Hestrin, J. Bioi. Chem. 180, 249-261 /1949/). Belső standardként acetil-kolin-kloridot használtunk.
(2) A 3,1 és 4,5% közötti acilceoport-tartalmat (ecetsavként számítva) enzimes mérés60 sel határoztuk meg, miután hig bázissal hidrolizáltuk az O-acetil-kötéseket, (3) Az S-184 heteropoliszacharidban levő semleges cukrokat különböző módszerekkel határoztuk meg. Az első módszer szerint 50 mg S-184 heteropoliszacharidot 4 óra hosszat
HU 198220 Β
100 °C-on 1 mól/l-es kén savval hidrolizáltunk. Lehűtés után 0,5 ml 3 mg/ml xilózt adtunk hozzá belső standardként. A mintákat 3 ml telített bárium-hidroxiddal semlegesítettük, majd 2 csepp kongó-vörös hozzáadása után addig adagoltuk a bárium-hidroxidot, míg a Bzin vörösre nem váltott. Centrifugálás után (20 perc, 3000 ford/perc) a minták felülúszóját bepároltuk. A száraz mintákat 0,1 ml 40 mg/ml-es, száraz piridinnel készült hidroxil-amin-hidroklorid-oldatban oldottuk, és 45 percig 90 °C-on melegítettük. Lehűtés után 0,1 ml acetanhidridet adtunk hozzá, és újra 45 percig 90 °C-on melegítettük. A cukrokat 'aldonitril-acetát-származékaik gáz-folyadék-kromatográfiájával választottuk el, és autentikus mintákkal történő összehasonlítással azonosítottuk, és határoztuk meg mennyiségüket (J.K. Baird, M.J. Holroyde és D.C. Ellwood, Carbohydr. Rés. 27, 464-467 /1973/).
(4) A fenti módszerrel végzett semleges cukor meghatározás előtt a mintákat 72%-os kénsavban oldva 1 óra hosszat 0 °C-on előkezeltük. A kapott értékek átlagértékek a BD-707, BD-2117 és BD-2118 mintákra.
(5) A semleges cukrokat egy másik módszerrel is meghatároztuk. 2 mg S-184 heteropoliszacharidot feloldottunk 2 ml 0,5 mól/l-es trlfluor-ecetsavban. A mintákat éjszakán át 100 °C-on tartottuk, szárazra pároltuk, majd 2 ml vízben oldottuk. 25 mg nátrium-bór-hidridet adtunk hozzá, majd 2 óra múlva az oldatot Dowex 50 (H*)-val kezeltük, igy a pH
3,5-re csökkent. Szűrés után az oldatot koncentráltuk, és háromszor 5 ml metanollal kodesztilláltuk. A maradékot feloldottuk 1 ml acetanhidrid és 1 ml piridin elegyében, 1 óra hosszat 100 °C-on tartottuk, és betöményitettük. Háromszor 5 ml toluollal történt kodesztillálás után a maradékot metilén-kloridban oldottuk, és géz-folyadék-kromatográfiéval analizáltuk. A kapott eredmények átlagértékek a BD-707, BD-2117 és BD-2118 mintákra.
A poliszacharid uronsavtartalmát úgy határoztuk meg, hogy dekarboxilezést végeztünk 17 %-os sósavval, és a felszabaduló szén-dioxidot nétrium-hidroxid-standardban felfogtuk, és visszatitréltuk (B.L. Browning, Methode of Wood Chemistry 2, 632-633, /1967/).
A piroszőlősav hiányát úgy határoztuk meg, hogy 1 ml, 2 mg/ml-es S-184 heteropoliszacharid-oldatot mértünk egy kémcsőbe, hozzáadtunk 1 ml 0,2 n sósavat és 4 óra hosszat 100 °C-on tartottuk. A hidrolizátum 0,5 ml-ét hozzáadtuk 0,1 ml redukált nikotin-amid-adenin-dinukleotid (NADH) és 2,4 ml trietanol-amin-oldat elegyéhez. Az abszorpció változását mértük spektrofotométerrel, és a piroszőlősavat meghatároztuk (Duckworth és
Yaphe, Chem. and Ind., 747. oldal /1970/). Piroszőlősav nem volt megfigyelhető.
A nitrogénmeghatározást Kjeldahl-módszerrel végeztük, mintegy 1,9 és 2,5 tömegX közötti értékeket mértünk, amely 11,8-15,8% proteinnek felel meg.
A metilezési analízist részlegesen tiszti- . tott S-184 mintákon végeztük dialízis és fagyasztva szárítás után. A minták metilezését a Sandford és Conrad, Biochem. 5, 1508-1507 (1966) helyen ismertetett módon végeztük. A cukrok O-metil-étereit aditol-acetátjuk formájában gázkromatográfiásán választottuk el, és autentikus mintával való összehasonlítással számítógéppel azonosítottuk. A nagyobb, azonosított metilezett cukrokat a II. táblázatban foglaltuk össze.
II. táblázat
S-184 heteropoliszacharíd metilezett cukorrészei
Azonosított cukorrész Kapcsolódás
| 2,3,6 Me3 hexitoí | 1-4 | |
| (galaktóz) | ||
| 2,3,6 | Me3 hexitol | |
| (mannóz) | 1-4 | |
| 2,3,6 | Me3 hexitol | |
| (glükóz) | 1-4 |
A teljes szénhidráttartalmat a fenol-kénsavas módszerrel (Dubois és munkatársai, Anal. Chem. 28, 350 /1959/), standardként glükózt használva határoztuk meg, azaz az eredmények glükóz-egyenértékben vannak megadva. A különböző monoszacharidok különböző abszorbanciát mutatnak ebben a módszerben, mivel ismerjük az S-184 heteropoliszacharid monoszacharid-összetételét, ezeket az abszorbancia-értékeket a kővetke-
| zöképpen korrigáljuk: | ||
| Relatív abszorbancia | Monoszacharid arány (hozzá- vetőleg) | |
| Glükóz | 0,78 | 3 |
| Mannóz | 1,01 | 1 |
| Galaktóz | 0,664 | 5 |
| Glükuronát | 0,287 | 1 10 |
| A korrigált teljes | szénhid ráttartalmat |
úgy számítjuk, hogy a glükóz-egyenértékben kapott teljes szénhidráttartalmat szorozzuk a kővetkező faktorral:
HU 198220 Β
Ezek szerint a szénhidráttartalom:
| Minta jele | Teljes szénhidráttartalom glükóz-egyenértékben (%) | Korrigált teljes szénhidráttartalom (%) |
| BD-2117 | 63,9 | 79 |
| BD-2118 | 56,3 | 69,6 |
| BD-707 | 53,8 | 66,5 |
| BD-1827 | 40,6 | 50,2 |
Megjegyzendő, hogy bár az itt ismertetett heteropoliszacharid analizáló módszerek jelenleg használatos módszerek az összetétel meghatározására, szakember számára más analizáló módszerek is hozzáférhetők. Más módszerek hasonló eredményeket adnak, de a mennyiségi eredményekben némi eltérés adódhat.
Úgy találtuk, hogy az S-184 heteropoliszacharid vizes oldatban kiváló tulajdonságokkal rendelkezik, különösen azért, mert igen kis koncentrációnál is nagy a viszkozitása, jó a felületaktivitása, jól összefér proteinekkel és kiváló stabilizáló/emulgáló tulajdonságokkal rendelkezik. Ezek következtében jól használható töltőanyagként, szuszpendáló-, emulgáló-, stabilizálószerként, kenőanyagként, filmképzőként vagy kötőanyagként gumiarábikum helyett nagyon sok helyen alkalmazható. Az S-184 heteropoliszacharid nagyon sok helyen használható az iparban és az élelmiszergyártásban, ahol a felületaktivitás és a fehérjékkel való összeférhetőeég követelmény. Különösen a következő területeken alkalmazható: ragasztószerek, cementek, víz-visszatartó habarcsok, konzervdoboz tömítőanyagok, forralási segédanyagok, gumi habositó anyagok, hegesztőpálca adalékok, pároló paszták, kerámia üvegek és extrudátumok, tisztítószerek és polirozószerek, játékok, emulziók (gumi, aszfalt, szilikon), ezüstvisezanyeréB, vetőmag-bevonószerek, permetezési adalékanyagok peszticidek és herbicidek használatához, peszticidek és herbicidek emulgálható koncentrátumaihoz adalékanyagok, dohány-kötőanyagok, vizes tinták, litográfiái festékadagoló oldatok, bórkikészitószerek, talaj vizes takarása és bevetése, textilfestés és kikészítés, vizes papirkikészitóanyagok és formázóanyagok, fénytelenitő anyagok, öntőforma-kikenőanyagok, folyékony gyanták, zagyformájú és csomagolt robbanóanyagok, viz- és olajkút fúrófolyadékok, olajfeldolgozási adalékanyagok, kozmetikumok, gyógyszer szuszpenziók és emulziók.
Az S-184 heteropoliszacharid használható az élelmiszergyártás területén is, például zselék és más nagy cukortartalmú rendszerekben, italokban, igy citromsavtartalmú italokban is, tejtermékekben, igy fagylaltokban és joghurtban, saláta-dresszingekben, porkészitményekben, fagylaltporokban, mázakban, szirupokban, puddingokban, liszttartalmú élelmiszerekben, konzervekben és sütőipari töltőanyagként.
Különösen előnyösen alkalmazható saláta-dresszingekben, italokban és tejtermékekben. Úgy találtuk, hogy az S-184 heteropoliszacharid felületaktív, proteinösszeférhető és stabilizáló/emulgáló tulajdonságai következtében különösen előnyösen használható az élelmiszergyártás területén.
Saláta-dresszing például úgy készíthető, hogy az S-184 heteropoliszacharidot tömegének két-őtszőrösének megfelelő mennyiségű olajban szuszpendáljuk, ezt az zagyot vízhez adjuk, erős keverés közben hidratáljuk, ószszekeverjűk a többi száraz komponenst, és hozzáadjuk a viz-olaj-zagyhoz, paradicsompürét adunk hozzá, és 3 percig keverjük, paprikaolajat adunk hozzá, és 3 percig keverjük, további olajat adunk hozzá, és 3 percig keverjük, ecetet adunk hozzá, és 3 percig keverjük, és végül kolloid-malomban homogenizáljuk.
Az S-184 heteropoliszacharidot emulzióstabilizátorként adtuk a saláta-dresszinghez mintegy 0,10-0,40% tőmeg% mennyiségben. A saláta-dresszing viszkozitását, pH-ját, tárolási stabilitását és textúráját vizsgáltuk, az eredményeket a III. táblázatban foglaltuk össze.
III. táblázat
S-184 heteropoliszacharid saláta-dresszing ben
| Adagolt mennyiség % | Viszkozitás mPs (24 óra) | PH | Stabilitás (nap) | Textúra, folyási tulajdonságok | |
| 49 °C | ezobahőm. | ||||
| 0,10 | 1000 | 3,6 | 7 | 83 | Sima, lassan folyó |
| 0,15 | 1450 | 3,6 | 31 | 61 | |
| 0,20 | 1650 | 3,6 | 26 | 71 | Sima, krémszerú |
| 0,25 | 2700 | 3,6 | 33 | 365 fölött | Stabil, elfogadható |
HU 198220 Β
| Adagolt mennyiség % | Viszkozitás mPs (24 óra) | PH | Stabilitás (nap) 49 °C szobahőm. | Textúra, folyási tulajdonságok |
| 0,40 | 4700 | 3,6 | nem vizsgáltuk- | Gélszerű, nem fogadható el |
Az S-184 heteropoliszacharid oldatbeli tulajdonságai speciális profilt írnak le, amelyek erre a poliszacharidra különösen jellem* zők, és megkülönböztetik más poliszacharidoktól. Az S-184 heteropoliszacharid tulajdonságai a kővetkezők:
1. Viszozitási és nyírási tulajdonságok
A. Brookfield-féle viszkozitás
| Szintetikus csapvíz * | Szintetikus csapviz* + 0,1% KC1 | ||
| 1. 1,0%, | 60 ford./perc | 1080 ciklus/mp | 1030 ciklus/mp |
| 6 ford./perc | 6000 ciklus/mp | ||
| orsó | száma | 3 | |
| 2. 0,1%, | (UL adapter, 6 ford./perc) | 7 ciklus/mp | 7 ciklus/mp |
| 3. 0,5%, | Wells-Brookfield | ||
| 9,6 sec-1-nél | 330 ciklus/mp | 320 ciklus/mp | |
| 4. 1,0%, | Dl H2O, 60 ford./perc | 1460 ciklus/mp | |
| orsó | száma | 3 | |
| Megjegyzés: * ionmentes víz, amely 1000 | ppm .on, Rockville, | Maryland, Amerikai Egyesült | |
| NaCl-t és | 147 ppm CaCb.2H2O-t tartalmaz | Államok intézetnél 1985. június 19-én ATCC |
53160 számon helyeztük letétbe.
| B. | Nyírás (Wells-Brookfield) | |
| 1. | 1,92 sec_1-nél | 4100 ciklus/mp |
| 2. | 9,6 sec_1-nél | 1270 ciklus/mp |
| 3. | 76,8 sec'^nél | 290 ciklus/mp |
| 4. | 384 sec'^-nél | nagyobb mint 60 ciklus/mp (kezdeti) |
| 5. | 384 sec'L-nél | nagyobb mint 60 ciklus/mp (5 perc) |
| 6. | 9,6 sec_1-nél | 1180 ciklus/mp |
| C. | Tárolás 4,4 °C-on | (Brookfield) |
1320 cP 60 ford/percnél, 3 sz. orsóval; gélesedés nincs
| 2. Összeférhetőség sóval és festékekkel | ||
| A. 1. | Sók CaCh (telitett) | összeférhető |
| 2. | ammónium-polifoszfát | kicsapódik |
| 3. | 60%-os NH«NO3 | összeférhető |
| 4. | 1%-os ALz(SO«)3.18H2O | összeférhető |
| 5. | 1%-os CaCl2.2H2O | összeférhető |
| 6. | 1%-os KC1 | összeférhető |
| B. 1. | Festékek Milling-zöld | összeférhető |
| 2. | Metilénkék | összeférhető |
A törzs leírása
Az S-184 heteropoliszacharid egy Alcaligenes törzs alkalmas tápközegen történő fermentációjával állítható elő. Az alkalmazott mikroorganizmust a Budapesti Egyezmény értelmében az American Type Culture Collecti35 A, Kolónia-morfológiai tulajdonságok
Tápagaron az izolált telepek kerek kolóniát alkotnak, opalizáló középpel és áttetsző szélekkel. A pigmentáció fehértől szürkéig változik. A kolóniák mérete 30 °C-on 72 óra után 1-3 mm.
B. Sejt-morfológiai tulajdonságok
A sejtek Gram-negativ, hosszúkás pálcikák (0,8 -2,3 jum), vakuölumot tartalmaznak.
Ostoros fonnák mind poláris, mind laterális, mind peritrich formák megfigyelhetők. Bizonyos tenyésztési körülmények között a mikroorganizmusok rózsaszín pigmentet termelnek.
C. Fiziológiai és biokémiai jellemzők
A fiziológiai és biokémiai tesztek eredményeit a IV. táblázatban foglaltuk össze. A mikroorganizmus citokrómoxidáz pozitív, ka55 taláz pozitív és metabolizmusban oxidativ. Citrát hasznosításban és kénhidrogénfejlesztésben az eredmények pozitívak voltak. Hidrolizálja a keményítőt, zselatint, kazeint és a Polysorbat 80, USP-t (felületaktív anyag,
Difco gyártmány). 30 és 37 °C között jól növekszik, de magasabb hőmérsékleten nem vizsgáltuk. 1,5% nátrium-kloridot elvisel, de 3%-ot már nem. 6 és 10 közötti pH-nál fejlődik.
-611
Szénhidrátokból történó savtermelést a következőkben mutatjuk be:
Savtermelés
L-arabinóz
Fruktóz
Gálák tóz
Maltóz (gyenge)
Mannitol (gyenge)
Mannóz
Nincs savtermelés
Adó ni tol
Dulcitol
Etanol
D-glükóz
D-xilóz
Inozitol
Inulin
Laktóz
Melibióz
Alfa-metil-glikozid
Raffinóz
Ramnóz
Szalicin
Szerbitől
Szacharóz
Trehalóz
D-xilóz
A mikroorganizmus a kővetkező 46 szubsztrátot hasznosította egyetlen szén- és energiaforrásként:
D-xilóz
L-arabinóz
D-glükóz
D-mannóz
D- gálák tóz
D-fruktóz
Maltóz
Cellobióz
Inulin
Glukonát
Szacharát
Mukát
Acetát
Propionát
Butirát
Kaprost
Heptanoát
Kaprilát
Pelargonát
Kaprát
Malonát
Szukcinát
Fumarát
L-maiéit
DL-ű-hidroxi-butirát
DL-laktát
DL-glicerát
Citrát oC-Ketoglutarát
Piruvát
Levulinát
Mannitol
Glicerol
D-oC-alanin 0-alanin L-treonin L-leucin
DL-izoleucin
L-aszpartát L-glutamát L-lizin DL-ornitin
L-hisztin
L-prolin L-tirozin L-fenilalanin
IV. táblázat
Fiziológiai és biokémiai tesztek eredménye
Citokróm-oxidáz +
Kataláz +
OF teszt Oxidativ
Anaerob növekedés
TSI agar, ferde NC
Indol
Metilvörős
Voges-Proskauer
Simmon-féle citrát +
Nitrit redukció Nitrát-redukció
Lakmusz-tej NC
Arginin-dehidroláz
Lizin-dekarboxiláz
Ornitin-dekarboxiláz
Fenil-alanin-deamináz NG
Ammónia peptonból
Ureáz
Kénhidrogén-fejlesztés (peptonból, cisztinből és szulfit-kőzegból) +
3-Ketolaktóz
Kongóvőrös abszorpció
Foszfatáz
Hemolizis (birkavér) NT
Tojássárgája reakció ±
Keményítő hidrolízis +
Zselatin hidrolízis +
Kazein hidrolízis +
Eszkulin hidrolízis
Poliszorbát 80 hidrolízis +
Növekedés különböző hőmérsékleteken:
°C °C + °C +
Növekedés különböző NaCl koncentrációknál:
1.5 tőm/térf% +
3,0
6.5
7.5 10,0
Növekedés különböző pH-értékeknél:
+ +
+ +
-713
Megjegyzés: NG: nincs növekedés
NC: nincs változás NT: nem vizsgáltuk +: pozitív negatív 5
Mivel a mikroorganizmus szigorúan aerob, Gram-negativ, vegyes ostoros formákat mutat, az Alcaligenes nemzetségbe tartozónak találtuk a Bergey’s Manual of Determinative -10 Bacteriology (1974) 8. kiadása alapján.
Az Alcaligenes nemzetséget a legutóbbi Bergey-kézikönyv (Bergey’s Manual of Systematic Microbiology, 1. kötet, 1. kiadás, 1984) újra meghatározta, és kizárja az összes 15 pigmenttartalú organizmust. Az izolált, S-184 heteropoliszacharidot termelő mikroorganizmus beleillik ebbe az újra meghatározott nemzetségbe, de nem tartozik a felsorolt két faj, az Alcaligenes faecalis, Alcaligenes denit- 20 rificans subsp. denitrificans és Alcaligenes denitrificans subsp. xylosoxidans egyikébe sem. Az S-184 heteropoliszacharid termelő mikroorganizmus tehát egy új Alcaligenes faj. 25
A találmány szerinti eljárást a következő, nem korlátozó jellegű példákkal szemléltetjük.
1. példa 30
YM lombik oltóanyagot egy rázógépen 30 °C-on 48 óra hosszat tenyésztett tápagaros tenyészetből nyertünk. Kb. 24 órával később ezzel az oltóanyaggal beoltottunk egy lombikot, amely Ei tápközeget tartalmazott 3% 35 hidrolizált keményítővel mint szénforrással. A lombikot rázógépre helyeztük 30 °C-os hőmérsékleten. Kb. 72 óra múlva a lombik viszkózus, sörszerü anyagot tartalmazott, amelyhez 2-szeres térfogat 99%-os izopropilalko- 40 holt adva szálas csapadék képződött.
Az Ei tápközeg összetétele: 5 g dikálium-hidrogén-foszfát, 0,1 g magnézium-szulfát, 0,9 g ammónium-nitrát, 0,5 g Promosoy 100 (enzimesen emésztett szójaliszt, Central 45 Soya Chemurgy Division gyártmánya), 30 g dextróz és 1 liter csapviz, pH 7,6-7,8.
Egy másik YM oltóanyag lombikot készítettünk a fenti módon, és a 24 órás oltóanyaggal beoltottunk 4 lombikot, amelyek kü- 50 lónbózó tápkőzeget tartalmaztak, 30 °C-on 72 óra hosszat rázógépen tenyésztettük, és ezután mértük a pH-t, viszkozitást, termelt polimert és a termék viszkozitását. Az eredményeket az V. táblázatban foglaltuk össze. 55 « * cd
N (Q
S-S to
O
0, a
’C
X o
u j Ί * n o X ” X
GO CU
3 c * <u j 1 Ε n o g-g*
QQ «Φ q g 0.
Γ N φ .2 Pu >
co •cd <2 c
•φ w
to u
N o
X x
•<a to o
O)
CM
O
O
O
CD co
CD •O
Λ to
CD •O
Λ o
co
CM CO CD CO t- CM
O O O 2 CM O
CM
CD CD
N N •o -o Λ o o *5 ti ae x « co •h *r —.
ö x » o +
I J o ί X + •03
0)
4)
Ό >>
W
a) >
s c
0) ε
c o
o
X •a
4) 0
C0
C «0 ς> frJ C Φ o 3 fii ** e ® ε > s « «Ο 4 „ N Μ V .
« x c E *>
> ® < 43
Ai N
N •js «β x
ω «I I c &
gj o
X n
N ►>
to
Φ ·»» to
Φ
Σ
-815
HU 198220 Β
| H3BO3 | 285 mg |
| MnCl2.4H2O | 1800 mg |
| FeSO< | 1360 mg |
| CuCh | 26,9 mg |
| ZnCl2 | 20,8 mg |
| C0CI2 | 40,4 mg |
| Mg2Mo04.2H20 | 25,2 mg |
| Na-tartarét | 1770 mg |
Ebből a törzsoldatból a tápközeghez literenként 1 ml-t adunk.
Amint az eredmények mutatják, a legjobb növekedést a 3% glükóztartalmú Ei tápközeggel kapjuk.
2. példa
Nagy mennyiségű S-184 heteropoliszacharid fermentációs előállítását a következőképpen végezzük.
100 ml YM tápközeget (Difco) tartalmazó 500 ml-es Erlenmeyer lombikot beoltunk egy oltókacsnyi, tápagarról vett 48 órás tenyészettel. A lombikot 24 óra hosszat 30 °C-on inkubáljuk egy 400 ford/perc sebességgel mozgó rázógépen. Két 500 ml-es Erlenmeyer lombikban 1%-os inokuluinot készítünk 100 ml oltó-tápkózeggel. Az oltó-tápközeg összetétele:
| Glükóz | 3% |
| K2HPO4 | 0,5% |
| NH4NO3 | 0,09% |
| MgSO4.7H2O | 0,01% |
| Promosoy 100 | 0,05% |
A tápközeget csapvizzel készítjük. A lombikot 30 °C-on 24 óra hosszat inkubáljuk egy 400 ford/perc sebességgel mozgó rázógépen, majd egy 3000 ml (ugyanolyan összetételű) tápközeget tartalmazó 5 literes férmentor beoltására használjuk. A fermentálást
30 °C-on 1 1/perc levegőztetés: sebesség mellett végezzük. A keverést 400 ford/perc sebességgel kezdjük, és addig emeljük, amennyi a jó keveredést biztosítja. 24 óra múlva 2,5 liter kivett oltóanyaggal beoltunk egy, 20 liter következő tápkőzeget tartalmazó 30 literes fermentort:
| glükóz | 3,0% |
| K2HPO4 | 0,05% |
| NH4NO3 | 0,09% |
| Mg.SO2.7H2O | 0,01% |
| Promosoy 100 | 0,05% |
| FeM | 1 ppm |
| Ság 5691 | 0,005% |
(habzásgátló,
Union Carbide gyártmánya)
A hőmérsékletet 30 °C-on tartjuk, a levegőztetést 22 óra hosszat 5 1/perc sebességgel, majd 10 1/perc sebességgel végezzük a fermentáció befejeztéig. A pH-t 6,3 fölött tartjuk KOH (40%-os) adagolásával automatikus pH-szabályozó rendszerrel. A keverést 300 ford/perc sebességgel kezdjük, majd 22 óra múlva 400 ford/percre és a fermentréció
45. órájától 700 ford/perc sebességre emeljük, és ezt a sebességet tartjuk a fermentáció befejeztéig. A fermentáció eredményeit a VI. táblázatban foglaljuk össze.
W. táblázat
| Idő (óra) | PH | Fermentlé viszkozitása (cP) | Kitermelés (g/100 ml) | Maradék szénforrás (%) |
| 0 | 7,0 | ND | ND | 3,0 |
| 22 | 6,3 | 620 | ND | ND |
| 45 | 6,9 | 4200 | 1,26 | 0,41 |
| 68 | 7,2 | 5100 | 1,37 | kevesebb mint 0,1 |
Megjegyzés: ND = nincs adat
A fermentlét mintegy 75 °C-on tartjuk 50 15 percig, majd kb. 30 °C-ra hűtjük. A fermentlét háromszoros térfogatú 99%-os izopropanolhoz adjuk. A poliszacharid szálas csapadék formájában kiválik, amelyet könnyű leszúrni. A csapadékot 60 °C-on tálcás lég- 55 szárítóban 2,5 óra hosszat szárítjuk, majd porrá őröljük.
3. példa
Egy 100 ml YM tápkőzeget (Difco) tar- 60 talmazó 500 ml-es Erlenmeyer-lombikot beoltunk egy oltókacsnyi, tápagarról vett 48 órás tenyészettel. A lombikot 24 óra hosszat 30 °C-on inkubáljuk egy 400 ford/perc sebességgel mozgó rázógépen. Öt 500 ml-es Er- 65 lenmeyer lombikban 1%-os inokulumot készítünk 100 ml oltó-tápkózeggel. Az oltó-tépközeg összetétele:
Glükóz 3,0%
K2HPO4 0,5%
NH+NO3 0,09%
MgSO«.7H2O 0,01%
Promosoy 100 0,05%
Fe“ 1 ppm
Csap viz
A lombikokat 30 °C-on 24 óra hosszat inkubáljuk egy 400 ford/perc sebességgel mozgó rázógépen, és ekkor beoltunk velük egy 14 literes fermentort, amely 10 1 végső térfogatnak megfelelő tápkőzeget tartalmaz. A
-917
HU 198220 Β
| fermentációt 30 °C-on, | 3 1/perc levegőztetési | MgSO«.7HzO 0,01% | ||
| sebesség mellett folytatjuk. A keverést 400 | Promosoy 100 0,05% | |||
| ford/perc sebességgel | kezdjük, majd olyan | Fe | 1 ppm | |
| sebességre | emeljük, amely a jó keveredést | |||
| biztosítja. A tápközeg összetétele a követke- | 5 A pH-t | 6,5 fölött tartjuk 25%-os KOH | ||
| zó: | adagolásával | automatikus pH-szabályozó | ||
| Glükóz | 3,0% | rendszerrel. | A fermentáció eredményeit a VII. | |
| KzHPO* | 0,5% | táblázatban foglaljuk össze. | ||
| NH4NO3 | 0,09% | |||
| VII. | táblázat | |||
| Idő | pH | Fermentlé | Kitermelés | Maradék |
| (óra) | viszkozitása | szénforrás | ||
| (cP) | (g/100 ml) | (%) | ||
| 0 | 7,3 | ND | ND | 3,15 |
| 21 | 7,05 | 20 | 0,65 | 1,59 |
| 45 | 6,8 | 3450 | 1,22 | 0,48 |
| 78 | 7,1 | 2550 | 1,50 | kevesebb mint 0,1 |
Megjegyzés: ND = nincs adat
A fermentlét 15 percig mintegy 75 °C-on tartjuk, majd kb. 30 °C-ra hűtjük, és hé- 25 romszoros térfogatú 99%-os izopropanolhoz adjuk. A poliszacharid szálas csapadék formájában válik ki, amelyet könnyű leszűrni. A csapadékot 60 °C-on tálcás szárítóban levegővel 2,5 óra hosszat szárítjuk, majd porrá 30 őröljük.
Poliszacharidok fermentációs előállítása esetén a konverziós hatásfokot a következő képlet alapján számítjuk:
, , , „ , végtermék koncentrációja s 100
Konverziós hatásfok = i ·* kezdeti ezubzztrét-koncentréció
A termelési arányt a következő képlet alapján számítjuk:
termék ménnyizege (<)
Termelési arany = . ..
* fernenttció ideit (ón) x térfogat (1)
Az előző példákban ismertetett eljárások esetén a következő eredményeket kaptuk:
| Példa- szám | Kezdeti szénforrás koncentráció (%) | Végsó poliszacharid koncentráció (%) | Fermen- táció ideje (óra) | Konverziós hatásfok (%) | Termelési arány (g/l/óra) |
| 1. | 3 | 1,70 | 72 | 57 | 0,24 |
| 3 | 1,84 | 72 | 61 | 0,26 | |
| 3 | 1,76 | 72 | 59 | 0,24 | |
| 3 | 1,27 | 72 | 42 | 0,18 | |
| 2. | 3 | 1,37 | 68 | 46 | 0,20 |
| 3. | 3 | 1,5 | 78 | 50 | 0,19 |
SZABADALMI IGÉNYPONTOK
Claims (4)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás S-184 jelű heteropoliszacharid elóállitására, amely heteropoliszacharid 50-80 tömeg% szénhidrátból, 12-16 tömeg% proteinből, 3,0-4,5 tómeg% acilcsoportból (ecetsavként számítva) áll, a szénhidrát- 55 rész 7-16 tömeg% uronsavból és 1:3:5 mólarányban mannóz, glükóz és galaktóz semleges cukrokból áll, azzal jellemezve, hogy Alcaligenes nemzetségbe tartozó, ATCC 53160 számon letétbe helyezett mikroorganizmust asszimilálható szén-, nitrogén- és ásványisó forrást, tartalmazó vi50 zes tápközegen aerob körülmények között tenyésztünk, és a termelt S-184 jelű heteropoliszacharidot kinyerjük.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy asszimilálható szénforrásként szénhidrátot használunk.
- 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szénhidrátként glükózt használunk.
- 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy kalciumion-mentes tápközeget használunk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US75080685A | 1985-06-28 | 1985-06-28 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT41823A HUT41823A (en) | 1987-05-28 |
| HU198220B true HU198220B (en) | 1989-08-28 |
Family
ID=25019244
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU862659A HU198220B (en) | 1985-06-28 | 1986-06-25 | Process for producing heteropolysaccharide s-184 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0211506B1 (hu) |
| JP (1) | JPH0764882B2 (hu) |
| KR (1) | KR890002698B1 (hu) |
| CN (1) | CN1030469C (hu) |
| AT (1) | ATE51646T1 (hu) |
| CA (1) | CA1318622C (hu) |
| DE (1) | DE3670098D1 (hu) |
| DK (1) | DK305886A (hu) |
| ES (1) | ES2001748A6 (hu) |
| HU (1) | HU198220B (hu) |
| IL (1) | IL79166A0 (hu) |
| PT (1) | PT82844B (hu) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5476656A (en) * | 1993-03-18 | 1995-12-19 | Kureha Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Substance BS-3 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4269939A (en) * | 1980-06-20 | 1981-05-26 | Merck & Co., Inc. | Preparation of heteropolysaccharide S-119 |
| CA1187431A (en) * | 1981-04-23 | 1985-05-21 | Suzanna M. Steenbergen | Heteropolysaccharide s-198 |
| JPS5878595A (ja) * | 1981-11-05 | 1983-05-12 | Nakano Vinegar Co Ltd | 新規な酸性ヘテロ多糖類の製造法 |
-
1986
- 1986-06-19 IL IL79166A patent/IL79166A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1986-06-23 CA CA000512201A patent/CA1318622C/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-06-25 EP EP86304935A patent/EP0211506B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-06-25 HU HU862659A patent/HU198220B/hu not_active IP Right Cessation
- 1986-06-25 PT PT82844A patent/PT82844B/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-06-25 AT AT86304935T patent/ATE51646T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-06-25 DE DE8686304935T patent/DE3670098D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-06-27 CN CN86104370A patent/CN1030469C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1986-06-27 ES ES8600043A patent/ES2001748A6/es not_active Expired
- 1986-06-27 KR KR1019860005180A patent/KR890002698B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1986-06-27 DK DK305886A patent/DK305886A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-06-28 JP JP61150695A patent/JPH0764882B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0211506B1 (en) | 1990-04-04 |
| JPH0764882B2 (ja) | 1995-07-12 |
| HUT41823A (en) | 1987-05-28 |
| DK305886D0 (da) | 1986-06-27 |
| KR870000432A (ko) | 1987-02-18 |
| KR890002698B1 (ko) | 1989-07-24 |
| JPS6213401A (ja) | 1987-01-22 |
| IL79166A0 (en) | 1986-09-30 |
| EP0211506A1 (en) | 1987-02-25 |
| CA1318622C (en) | 1993-06-01 |
| PT82844A (en) | 1986-07-01 |
| ES2001748A6 (es) | 1988-06-16 |
| ATE51646T1 (de) | 1990-04-15 |
| DE3670098D1 (de) | 1990-05-10 |
| CN1030469C (zh) | 1995-12-06 |
| DK305886A (da) | 1987-02-17 |
| PT82844B (pt) | 1988-12-15 |
| CN86104370A (zh) | 1986-12-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5175278A (en) | Heteropolysaccharide S-657 | |
| US4529797A (en) | Heteropolysaccharide S-198 | |
| US4401760A (en) | Heteropolysaccharide S-194 | |
| CN1995326B (zh) | 一种鞘氨醇单胞菌以及采用该菌种生产微生物多糖的方法 | |
| US4304906A (en) | Heteropolysaccharide S-84 | |
| Lobas et al. | The production of gellan exopolysaccharide with Sphingomonas paucimobilis E2 (DSM 6314) | |
| CA1318621C (en) | Heteropolysaccharide s-657 | |
| EP0001895A1 (en) | Heteropolysaccharide, its preparation by fermentation, and compositions and complexes containing it | |
| GB2058107A (en) | Heteropolysaccharide S-130 | |
| EP0231585B1 (en) | Biosynthesis of heteropolysaccharides | |
| EP0230346B1 (en) | Acid stable heteropolysaccharides s-421 | |
| HU196220B (en) | Process for preparing novel antrocycline derivatives | |
| US4454316A (en) | Heteropolysaccharide S-139 | |
| CA1187431A (en) | Heteropolysaccharide s-198 | |
| HU198220B (en) | Process for producing heteropolysaccharide s-184 | |
| US5166335A (en) | Heteropolysaccharide S-184 | |
| EP0215623A2 (en) | Production of novel heteropolysaccharides | |
| EP0255405A1 (en) | Production of heat-modified heteropolysaccharides | |
| JPS62186788A (ja) | 任意メチロトロ−フ性細菌の新菌種 | |
| EP0251727A1 (en) | Novel strains of facultative methylotrophic bacteria | |
| HU183596B (hu) | Eljárás xanthan gumi előállítására xanthomonas pruni törzzsel vagy annak variánsaival |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |