JPS6210017A - トランスフエリンレセプタ−の精製方法 - Google Patents
トランスフエリンレセプタ−の精製方法Info
- Publication number
- JPS6210017A JPS6210017A JP60147360A JP14736085A JPS6210017A JP S6210017 A JPS6210017 A JP S6210017A JP 60147360 A JP60147360 A JP 60147360A JP 14736085 A JP14736085 A JP 14736085A JP S6210017 A JPS6210017 A JP S6210017A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- transferrin
- receptor
- transferrin receptor
- complex
- purifying
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
本発明は、トランスフェリンレセプターの精□
製方法に関し、精製したトランスフェリンレセ
□ブターはトランスフェリンレセプターの免疫学
□的測定に必要とする精製抗原の調製等に利用さ
□れる。
□ブターはトランスフェリンレセプターの免疫学
□的測定に必要とする精製抗原の調製等に利用さ
□れる。
〈従来の技術〉
トランスフェリンレセプターは各種細胞の表層に存在し
、鉄輸送蛋白トランスフェリンと結合して細胞の生存に
必要な鉄を細胞内に取り込む働きを有する。鉄輸送蛋白
トランスフェリン１分子は２原子の鉄と結合し、トラン
スフェリンレセプターは鉄と結合したトランスフェリン
とは結合するが、鉄と結合していないアポ・トランスフ
ェリンとは結合しない。鉄と結合したトランスフェリン
が細胞表層のトランスフェリンレセプターと結合すると
、この複合体は細胞内に取り込まれ、トランスフェリン
が鉄原子を細胞内に放出してアポ・トランスフェリンと
なる。アポ・トランスフェリンとトランスフェリンレセ
プターは解離し、アポ・トランスフェリンは細胞外へ放
出されて血清中に戻り、トランスフェリンレセプターは
細胞表層へ戻るとされている。トランスフェリンレセプ
ターのように細胞膜に組み込まれた物質を精製する場合
、その物質を人為的に可溶化する必要がある。しかし、
その可溶化の際に変性が起こり、その物質が本来力して
いる性質を消失してしまう場合がある。従って、変性し
ていないトランスフェリンレセプターを精製したい場合
、細胞表層から単離されたトランスフェリンレセプター
の精製標品も、細胞表層に存在するトランスフェリンレ
セプターと同様の特性を有していることが保証されてい
る必要がある。しかし、従来のトランスフェリンレセプ
ターの精製方法は、主にトランスフェリンレセプターに
対する抗体を用いたＩｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔ
ｉｏｎもしくは抗体アフィニティークロマトグラフィー
に基づいた精製方法であり、生理的条件下でトランスフ
ェリンレセプターが有している特性に基づいた精製方法
はなかった。また、そのような方法で精製されたトラン
スフェリンレセプター標品は、鉄と結合したトランスフ
ェリンと特異的に結合することは保証されてはいなかっ
た。
、鉄輸送蛋白トランスフェリンと結合して細胞の生存に
必要な鉄を細胞内に取り込む働きを有する。鉄輸送蛋白
トランスフェリン１分子は２原子の鉄と結合し、トラン
スフェリンレセプターは鉄と結合したトランスフェリン
とは結合するが、鉄と結合していないアポ・トランスフ
ェリンとは結合しない。鉄と結合したトランスフェリン
が細胞表層のトランスフェリンレセプターと結合すると
、この複合体は細胞内に取り込まれ、トランスフェリン
が鉄原子を細胞内に放出してアポ・トランスフェリンと
なる。アポ・トランスフェリンとトランスフェリンレセ
プターは解離し、アポ・トランスフェリンは細胞外へ放
出されて血清中に戻り、トランスフェリンレセプターは
細胞表層へ戻るとされている。トランスフェリンレセプ
ターのように細胞膜に組み込まれた物質を精製する場合
、その物質を人為的に可溶化する必要がある。しかし、
その可溶化の際に変性が起こり、その物質が本来力して
いる性質を消失してしまう場合がある。従って、変性し
ていないトランスフェリンレセプターを精製したい場合
、細胞表層から単離されたトランスフェリンレセプター
の精製標品も、細胞表層に存在するトランスフェリンレ
セプターと同様の特性を有していることが保証されてい
る必要がある。しかし、従来のトランスフェリンレセプ
ターの精製方法は、主にトランスフェリンレセプターに
対する抗体を用いたＩｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔ
ｉｏｎもしくは抗体アフィニティークロマトグラフィー
に基づいた精製方法であり、生理的条件下でトランスフ
ェリンレセプターが有している特性に基づいた精製方法
はなかった。また、そのような方法で精製されたトラン
スフェリンレセプター標品は、鉄と結合したトランスフ
ェリンと特異的に結合することは保証されてはいなかっ
た。
〈発明が解決しようとする問題点〉
本発明者は、トランスフェリンレセプターが鉄と結合し
たトランスフェリンとは結合するが、鉄と結合していな
いアポ・トランスフェリンとは結合しないという生理的
条件下で、トランスフェリンレセプターが有している性
質に基づいたトランスフェリンレセプターの精製方法の
研究を重ね、トランスフェリンレセプターとしての基本
的な機能が保証されたトランスフェリンレセプターを簡
便に、特異的に精製する方法を考案するに至った。
たトランスフェリンとは結合するが、鉄と結合していな
いアポ・トランスフェリンとは結合しないという生理的
条件下で、トランスフェリンレセプターが有している性
質に基づいたトランスフェリンレセプターの精製方法の
研究を重ね、トランスフェリンレセプターとしての基本
的な機能が保証されたトランスフェリンレセプターを簡
便に、特異的に精製する方法を考案するに至った。
く問題点を解決するための手段〉
本発明は生体組織または細胞の抽出物からトランスフェ
リンレセプターを精製するにあたり、固相に結合させて
不溶化した抗トランスフェリン抗体とトランスフェリン
およびトランスフェリンレセプターとの３者の複合体を
形成させ、その複合体中のトランスフェリンをアポ・ト
ランスフェリンとすることによりトランスフェリンレセ
プターのみを解離させることを特徴とするトランスフェ
リンレセプターの精製方法に関するものである。
リンレセプターを精製するにあたり、固相に結合させて
不溶化した抗トランスフェリン抗体とトランスフェリン
およびトランスフェリンレセプターとの３者の複合体を
形成させ、その複合体中のトランスフェリンをアポ・ト
ランスフェリンとすることによりトランスフェリンレセ
プターのみを解離させることを特徴とするトランスフェ
リンレセプターの精製方法に関するものである。
さらに本発明は生体組織または細胞の抽出物からトラン
スフェリンレセプターを精製するにあたり、固相に結合
させて不溶化したトランスフェリンとトランスフェリン
レセプターとの２者の複合体を形成させ、その複合体中
のトランスフェリンをアポ・トランスフェリンとするこ
とによりトランスフェリンレセプターのみを解離させる
ことを特徴とするトランスフェリンレセプターの精製方
法にも関するものである。
スフェリンレセプターを精製するにあたり、固相に結合
させて不溶化したトランスフェリンとトランスフェリン
レセプターとの２者の複合体を形成させ、その複合体中
のトランスフェリンをアポ・トランスフェリンとするこ
とによりトランスフェリンレセプターのみを解離させる
ことを特徴とするトランスフェリンレセプターの精製方
法にも関するものである。
この精製方法の詳細は実施例１で述べるが、この精製方
法の特徴は、（１）不溶化した抗トランスフェリン、ト
ランスフェリンおよびトランスフェリンレセプターとの
３者の複合体を形成させるか、もしくは、（２）不溶化
したトランスフェリンとトランスフェリンレセプターと
の２者の複合体を形成させ、それらの複合体中のトラン
スフェリンを７ポートランスフエリンとすることにより
トランスフェリンレセプターのみを解離させる点にある
。複合体中のトランスフェリンをアポートランスフェリ
ンとする方法としては、実施例１で述べるような弱酸性
溶液にさらすのが生理的条件下に近くまた簡便な方法で
あるが、その他、トランスフェリンから鉄原子を放出さ
せうる方法であれば足り、実施例１に限定されるもので
はない。
法の特徴は、（１）不溶化した抗トランスフェリン、ト
ランスフェリンおよびトランスフェリンレセプターとの
３者の複合体を形成させるか、もしくは、（２）不溶化
したトランスフェリンとトランスフェリンレセプターと
の２者の複合体を形成させ、それらの複合体中のトラン
スフェリンを７ポートランスフエリンとすることにより
トランスフェリンレセプターのみを解離させる点にある
。複合体中のトランスフェリンをアポートランスフェリ
ンとする方法としては、実施例１で述べるような弱酸性
溶液にさらすのが生理的条件下に近くまた簡便な方法で
あるが、その他、トランスフェリンから鉄原子を放出さ
せうる方法であれば足り、実施例１に限定されるもので
はない。
く作 用〉
本発明の精製方法を用いて精製されたトランスフェリン
レセプターは、鉄と結合したトランスフニリンとは結合
するが、鉄と結合していないアポ・トランスフェリンと
は結合しないという、生理的条件下でトランスフェリン
レセプターが有している性質を確実に保有しており。
レセプターは、鉄と結合したトランスフニリンとは結合
するが、鉄と結合していないアポ・トランスフェリンと
は結合しないという、生理的条件下でトランスフェリン
レセプターが有している性質を確実に保有しており。
本発明の精製方法はトランスフェリンレセプターの新し
い合理的な精製方法である。
い合理的な精製方法である。
実施例ニドランスフェリンレセプターの精製新鮮なヒト
胎盤組織５００ｇをポリトロンブレンダーにて、ＰＭＳ
Ｆ及びＡｐｒｏｔｉｎｉｎを含有する１０ｍＭ↑ｒｉｓ
−塩酸緩衝液（ｐ）Ｉ ７．４）中に細切、懸濁した＊
ａｏｏ Ｘ ｇ １０ ｍｔｎ 、続いて１２００
０ Ｘ ｇ２０ ｓｉｎ遠心し、その上清を得た０次に
１００１０００００Ｘ＋ｓｉｎ遠心し、その残査をｔｏ
ｍＮ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衝液（ｐＨ７，４）中に懸濁し
た。 ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を１％（Ｖ／Ｖ）添加し
、４℃８０ ｓｉｎ テ抽出した。抽出後、１００ＯＯ
ＯＸ ｇ ８０ ｇｔｉｎ遠心し、その上清に過剰量（
２■ｇ）の鉄結合型ヒ））ランスフェリンを、１１２５
−標識したヒトトランスフェリン２０ ｎｇとともに添
加して、トランスフェリン・トランスフェリンレセプタ
ー複合体を形成させた。この溶液を０．１％Ｔｒｉｔｏ
ｎ Ｘ−１００を含有するｌｈＭ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衝
液、ｐＨ７，４で平衡化した５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２
００カラム（８％９２ｃｍ）にてゲルろ過を行なった。
胎盤組織５００ｇをポリトロンブレンダーにて、ＰＭＳ
Ｆ及びＡｐｒｏｔｉｎｉｎを含有する１０ｍＭ↑ｒｉｓ
−塩酸緩衝液（ｐ）Ｉ ７．４）中に細切、懸濁した＊
ａｏｏ Ｘ ｇ １０ ｍｔｎ 、続いて１２００
０ Ｘ ｇ２０ ｓｉｎ遠心し、その上清を得た０次に
１００１０００００Ｘ＋ｓｉｎ遠心し、その残査をｔｏ
ｍＮ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衝液（ｐＨ７，４）中に懸濁し
た。 ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を１％（Ｖ／Ｖ）添加し
、４℃８０ ｓｉｎ テ抽出した。抽出後、１００ＯＯ
ＯＸ ｇ ８０ ｇｔｉｎ遠心し、その上清に過剰量（
２■ｇ）の鉄結合型ヒ））ランスフェリンを、１１２５
−標識したヒトトランスフェリン２０ ｎｇとともに添
加して、トランスフェリン・トランスフェリンレセプタ
ー複合体を形成させた。この溶液を０．１％Ｔｒｉｔｏ
ｎ Ｘ−１００を含有するｌｈＭ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衝
液、ｐＨ７，４で平衡化した５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２
００カラム（８％９２ｃｍ）にてゲルろ過を行なった。
その第１番目に溶出される放射活性のピーク分画を回収
し、０、！％Ｔｒｉｔａｎ Ｘ−１００及び１５（ｌ
ｍＷ Ｈａ（Ｉを含有する１Ｇ＋ｓＭ Ｔｒｉｇ−塩酸
緩衝液、 ＰＨ７，４で平衡化し −た抗ヒトトラン
スフェリン抗体を結合させた５ｅｐｈａｒｏｓｅカラム
（２％８ｃｍ）を用いてアフィニティークロマトグラフ
ィーを行ない、トランスフェリン・トランスフ呈リンレ
セプター複合体をこの担体上の抗トランスフェリン抗体
に結合させた。 ０．１％Ｔｒｆｔｏｎ Ｘ−１００
及び３００ｍＷ ＮａＣ１を含有する１０ｍＭ Ｔｒｉ
ｓ−塩酸緩衝液、ｐＨ７，４で不純物を十分洗浄後、０
．１％Ｔｒｉｔｏｎｘ−ｔｏｏ及び１５０ ｍＭ Ｎａ
Ｃ１を含有する１０ｍＭ５ｏｄｉｕ＋ｓ Ｃ１ｔｒａｔ
ｅ緩衝液、（ｐＨ５，０）を流し、担体上の抗トランス
フェリン抗体に結合されているトランスフェリンをアポ
Φトランスフェリンとすることによりトランスフェリン
・トランスフェリンレセプター複合体から、トランスフ
ェリンレセプターを解離溶出させトランスフェリンレセ
プターの精製標品をｌｌ１ｇを得た。
し、０、！％Ｔｒｉｔａｎ Ｘ−１００及び１５（ｌ
ｍＷ Ｈａ（Ｉを含有する１Ｇ＋ｓＭ Ｔｒｉｇ−塩酸
緩衝液、 ＰＨ７，４で平衡化し −た抗ヒトトラン
スフェリン抗体を結合させた５ｅｐｈａｒｏｓｅカラム
（２％８ｃｍ）を用いてアフィニティークロマトグラフ
ィーを行ない、トランスフェリン・トランスフ呈リンレ
セプター複合体をこの担体上の抗トランスフェリン抗体
に結合させた。 ０．１％Ｔｒｆｔｏｎ Ｘ−１００
及び３００ｍＷ ＮａＣ１を含有する１０ｍＭ Ｔｒｉ
ｓ−塩酸緩衝液、ｐＨ７，４で不純物を十分洗浄後、０
．１％Ｔｒｉｔｏｎｘ−ｔｏｏ及び１５０ ｍＭ Ｎａ
Ｃ１を含有する１０ｍＭ５ｏｄｉｕ＋ｓ Ｃ１ｔｒａｔ
ｅ緩衝液、（ｐＨ５，０）を流し、担体上の抗トランス
フェリン抗体に結合されているトランスフェリンをアポ
Φトランスフェリンとすることによりトランスフェリン
・トランスフェリンレセプター複合体から、トランスフ
ェリンレセプターを解離溶出させトランスフェリンレセ
プターの精製標品をｌｌ１ｇを得た。
Claims (2)
- （１）生体組織または細胞の抽出物からトランスフェリ
ンレセプターを精製するにあたり、固相に結合させて不
溶化した抗トランスフェリン抗体、トランスフェリンお
よびトランス フェリンレセプターとの３者の複合体を形成させ、その
複合体中のトランスフェリンをアポ・トランスフェリン
とすることによりトランスフェリンレセプターのみを解
離させることを特徴とするトランスフェリンレセプター
の精製方法。 - （２）生体組織または細胞の抽出物からトランスフェリ
ンレセプターを精製するにあたり、固相に結合させて不
溶化したトランスフェリンを不溶化した固相とトランス
フェリンレセプターとの２者の複合体を形成させ、その
複合体中のトランスフェリンをアポ・トランス フェリンとすることによりトランスフェリンレセプター
のみを解離させることを特徴とするトランスフェリンレ
セプターの精製方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60147360A JPS6210017A (ja) | 1985-07-04 | 1985-07-04 | トランスフエリンレセプタ−の精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60147360A JPS6210017A (ja) | 1985-07-04 | 1985-07-04 | トランスフエリンレセプタ−の精製方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6210017A true JPS6210017A (ja) | 1987-01-19 |
Family
ID=15428438
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60147360A Pending JPS6210017A (ja) | 1985-07-04 | 1985-07-04 | トランスフエリンレセプタ−の精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6210017A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002369687A (ja) * | 2001-03-02 | 2002-12-24 | Eiken Chem Co Ltd | 可溶化型トランスフェリンレセプターの製造法 |
| US9611323B2 (en) | 2010-11-30 | 2017-04-04 | Genentech, Inc. | Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor |
-
1985
- 1985-07-04 JP JP60147360A patent/JPS6210017A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002369687A (ja) * | 2001-03-02 | 2002-12-24 | Eiken Chem Co Ltd | 可溶化型トランスフェリンレセプターの製造法 |
| US9611323B2 (en) | 2010-11-30 | 2017-04-04 | Genentech, Inc. | Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor |
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