JPS6170994A - Production of cyclic(1-2)-beta-d-glucan - Google Patents
Production of cyclic(1-2)-beta-d-glucanInfo
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- JPS6170994A JPS6170994A JP19342984A JP19342984A JPS6170994A JP S6170994 A JPS6170994 A JP S6170994A JP 19342984 A JP19342984 A JP 19342984A JP 19342984 A JP19342984 A JP 19342984A JP S6170994 A JPS6170994 A JP S6170994A
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- glucan
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
[産業上の利用分野コ
本発明は、゛環状−(1−2)−β−D−グルカン(以
下CGと略称する。)の製法に関し、さらに詳しくはc
d生°産菌をその最高増殖率より低い増殖率に制御しな
がら培養する事により発酵法でCGを製造する方法に関
する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Field of Industrial Application] The present invention relates to a method for producing cyclic-(1-2)-β-D-glucan (hereinafter abbreviated as CG).
The present invention relates to a method for producing CG by fermentation by culturing d-producing bacteria while controlling the growth rate to be lower than its maximum growth rate.
[従来技術]
従来、微生物を用いてCGを製造する方法としでは、グ
ルコース、リン酸アンモニウム1、す□ン酸カリウム等
を含む培地にリゾビウム属またはアグロバクテリウム属
に属する微生物を培養して、培地中にCGを生成蓄積さ
せる方法[J、Gen。[Prior Art] Conventionally, a method for producing CG using microorganisms involves culturing microorganisms belonging to the genus Rhizobium or Agrobacterium in a medium containing glucose, ammonium phosphate, potassium phosphate, etc. A method for producing and accumulating CG in a culture medium [J, Gen.
Microbiol、、128.1873(1982)
およびCarbohydr、 Res、、 l 21.
31(1983) ]あるいは該方法の改良法として、
細胞外多糖類等を生産しなくなった突然変異株を培養す
る方法(特開昭59−71686号および特開昭820
92号参照)などが知られている。Microbiol, 128.1873 (1982)
and Carbohydr, Res, l 21.
31 (1983)] or as an improved method of the method,
Method for culturing mutant strains that no longer produce extracellular polysaccharides, etc. (JP-A-59-71686 and JP-A-820
92), etc. are known.
しかし、上記既知方法によるCGの製法では、CGの生
産性が必ずしも満足できるものではなかった。However, the CG manufacturing method using the above-mentioned known method does not necessarily provide satisfactory CG productivity.
本発明者は、醗酵法によるCGの製法について種々検討
した結果、微生物の増殖に最適の条件からずらせて培養
した場合に、CGの生産性が高くなることを見い出し、
本発明を完成するに至った。As a result of various studies on CG production methods using fermentation methods, the present inventor found that CG productivity increases when microorganisms are cultured under conditions that are shifted from the optimal conditions for growth.
The present invention has now been completed.
[発明の構成]
本発明の要旨は、資化し得る栄養培地において、最高増
殖率より小さい増殖率に制御しながら微生物を培養し、
この培養液より環状(1−2)−β−D−グルカンを回
収することを特徴とする環状(1→2)−β−D−グル
カンの製法に存する。[Structure of the Invention] The gist of the present invention is to cultivate microorganisms in an assimilable nutrient medium while controlling the growth rate to be lower than the maximum growth rate,
The present invention relates to a method for producing cyclic (1->2)-β-D-glucan, which comprises recovering cyclic (1-2)-β-D-glucan from this culture solution.
本発明において使用する微生物としては、リゾビウム属
またはアグロバクテリウム属に属し、CGを産生ずる能
力を有するものであれば、いずれも使用でき、例えば、
リゾビウム・メリロツテイIF013336、リゾビウ
ム・トリフオリIF013337、リゾビウム・ジャポ
ニカムIPO1333B、リゾビウム・ファッセオリA
I−I U 1133、リゾビウム・ファッセオリR
A−4(FERM BP374) 、リゾビウム・ファ
ツセオりRA−8(FERM BF279)、リゾビウ
ム・ファッセオリRA−12(FERM BF280)
、アグロバクテリウム・ラジオバクターIFO1266
5、アグロバクテリウム・ラジオバクターAl−5(F
ERM BP373)、アグロバクテリウム・ラジオバ
クターAAl−7(FERBP378)、アグロバクテ
リウム・ラジオバクターAA1−12(FERBP37
7)、アグロバクテリウム・リゾゲネスIFO1325
9、アグロバクテリウム・ツメファシェンスIF030
58などが挙げられる。As the microorganism used in the present invention, any microorganism that belongs to the genus Rhizobium or the genus Agrobacterium and has the ability to produce CG can be used, for example,
Rhizobium melilotsutei IF013336, Rhizobium trifuori IF013337, Rhizobium japonicum IPO1333B, Rhizobium fusceoli A
I-I U 1133, Rhizobium faceori R
A-4 (FERM BP374), Rhizobium fatseori RA-8 (FERM BF279), Rhizobium fatseori RA-12 (FERM BF280)
, Agrobacterium radiobacter IFO1266
5. Agrobacterium radiobacter Al-5 (F
ERM BP373), Agrobacterium radiobacter AAl-7 (FERBP378), Agrobacterium radiobacter AA1-12 (FERBP37)
7), Agrobacterium rhizogenes IFO1325
9. Agrobacterium tumefaciens IF030
58, etc.
微生物を培養するための培地組成としては、炭素源、窒
素源、有機栄養源、無機物質などを適宜含有したものが
使用される。炭素源および窒素源としては、使用菌株が
資化できる物質であれば、いずれも使用できるが、好ま
しくは、炭素源として糖類、就中、グルコース、マルト
ース、シュークロースまたは糖蜜等、窒素源として無機
窒素源、有機酸アンモニウム塩が使用できる。有機栄養
源として酵母エキス、コーンメチ−プリカー1.肉エキ
ス、ポリペプトン、ビオチン、チアミン等が使用できる
。無機物質として通常の無機塩類などが使用できる。As a medium composition for culturing microorganisms, one containing a carbon source, a nitrogen source, an organic nutrient source, an inorganic substance, etc. as appropriate is used. As the carbon source and nitrogen source, any substance can be used as long as it can be assimilated by the bacterial strain used. Preferably, sugars are used as the carbon source, particularly glucose, maltose, sucrose, or molasses, and inorganic substances are used as the nitrogen source. Nitrogen sources, organic acid ammonium salts can be used. Yeast extract and corn methane liquor as organic nutritional sources 1. Meat extract, polypeptone, biotin, thiamin, etc. can be used. Ordinary inorganic salts can be used as the inorganic substance.
培養は、バッチ式、流加式または連続式で好気的に行う
。培養全期間における平均増殖率がその微生物の最高増
殖率より小さくなるように制御する。通常、pl(は3
〜9、温度は20〜40℃である。なお、増殖率(以下
、μという。)は、各培養時間における菌体量を測定し
て次式から求める。Cultivation is carried out aerobically in a batch, fed-batch or continuous manner. The average growth rate during the entire culture period is controlled to be lower than the maximum growth rate of the microorganism. Usually, pl(is 3
~9, the temperature is 20-40°C. The growth rate (hereinafter referred to as μ) is determined from the following formula by measuring the amount of bacterial cells at each culture time.
バッチ式または流加式培養では、
[式中、Xo=始発時における菌体量、X1→ を時間
培養時におけ名菌体量、t =培養時間である。〕
連続培養では、
tC時間の抜出液中の菌体量
[式中、tc =連続培養時間である。]微生物の最高
増殖率(μmax)は0.08hr−1以上であること
が好ましい。In batch or fed-batch culture, [where Xo = amount of bacterial cells at the time of initial initiation, X1→ is the amount of bacterial cells at the time of time cultivation, and t = culture time. ] In continuous culture, the amount of bacterial cells in the extract at tC time [where tc = continuous culture time]. ] The maximum growth rate (μmax) of the microorganism is preferably 0.08 hr −1 or more.
培養全期間における平均増殖率とは、バッチ式または流
加式培養では培養開始時より終了時まで、連続培養では
連続開始時より終了時までの全期間におけるμを上式よ
り算出した値である。The average proliferation rate during the entire culture period is the value calculated from the above formula of μ during the entire period from the start of culture to the end in batch or fed-batch culture, and from the start to the end of continuous culture in continuous culture. .
μを制御する方法としては、使用する微生物が生育する
範囲内でCG生成に阻害のない条件であれば何れでしよ
い。例えば、培養条件(温度、pH等)、栄養物質(炭
素源、窒素源、燐酸源、無機塩等)の添加量、または使
用する微生物に栄養要求性のある場合にビタミン、アミ
ノ酸、核酸等の添加量を調節する。あるいは培養系に微
生物の菌体増殖を抑制し、CG生成に阻害のない薬剤を
添加する等の方法が用いられる。この薬剤として、例カ
プリン酸、クエン酸、マロン酸、コハク酸、フえば、ギ
酸、酢酸、プロピオン酸、カプリル酸、マル酸等の有機
酸またはその塩類、メタノール、エタノール、プロパツ
ール等のアルプール類が挙げられる。これらの培養温度
、pH1培地組成、増殖抑制薬剤は単独または適宜組合
せて使用できる。何れの方法でμを制御するかは、使用
する微生物の種類、炭素源の種類等により異なるが、温
度、pH等で制御する方法が有利である。増殖制御を実
施する時期は培養期間中の何れの時期でもよく、その期
間は一時的または全期間にわたってもよい。培養中、各
時におけるμは何れに変化してもよいが、最終的には全
培養期間における平均増殖率を0.05hr−1以下に
管理することが好ましい。As a method for controlling μ, any conditions may be used as long as the conditions do not inhibit CG production within the range in which the microorganisms used can grow. For example, culture conditions (temperature, pH, etc.), amounts of nutrients (carbon sources, nitrogen sources, phosphate sources, inorganic salts, etc.) added, or when the microorganisms used have nutritional requirements, vitamins, amino acids, nucleic acids, etc. Adjust the amount added. Alternatively, methods such as adding to the culture system a drug that suppresses the growth of microorganisms and does not inhibit CG production may be used. Examples of such drugs include capric acid, citric acid, malonic acid, succinic acid, organic acids such as formic acid, acetic acid, propionic acid, caprylic acid, and malic acid, or their salts, and alcoholic acids such as methanol, ethanol, propatool, etc. can be mentioned. These culture temperatures, pH1 medium compositions, and growth-inhibiting drugs can be used alone or in appropriate combinations. The method used to control μ varies depending on the type of microorganism used, the type of carbon source, etc., but methods of controlling by temperature, pH, etc. are advantageous. Growth control may be performed at any time during the culture period, and the period may be temporary or over the entire period. During culture, μ may change at any time, but ultimately it is preferable to control the average growth rate during the entire culture period to 0.05 hr−1 or less.
培養液からのCGの回収は、微生物および/または多糖
類を除いた後、活性炭カラムを使用する方法[日本農芸
化学会大会要旨集、585頁(19,!14)]等の手
段によって容易に行える。After removing microorganisms and/or polysaccharides, CG can be easily recovered from the culture solution by methods such as using an activated carbon column [Proceedings of the Japanese Society of Agricultural Chemistry, p. 585 (19,!14)]. I can do it.
[実施例コ
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。実施
例中、CGの確認および定量は、高速液体クロマトグラ
フィ法[J 、 Chromatogr、 265.
89(1983)]によった。[Example] Hereinafter, the present invention will be specifically explained with reference to Examples. In the examples, CG was confirmed and quantified using high performance liquid chromatography [J, Chromatogr, 265.
89 (1983)].
実施例1
アクロバクテリウム・ラジオバクターA1−5を下記組
成の培地C3fl/71.容ジャーファーメンタ−)に
接種し、通気量1 vvm、撹拌数60Orpmで5日
間培養した。Example 1 Acrobacterium radiobacter A1-5 was grown in a medium C3fl/71. The seeds were inoculated into a large fermenter, and cultured for 5 days at an aeration rate of 1 vvm and a stirring rate of 60 rpm.
培地組成ニゲルコース40g、(NH,)tHPo。Medium composition Nigelcose 40g, (NH,)tHPo.
1.5g、KHtPo、1.0g、Mg5O,・7H1
00,5g、CaCO55g−水道水 11.。1.5g, KHtPo, 1.0g, Mg5O, 7H1
00.5g, CaCO55g - tap water 11. .
培養時、μを測定しながら、培養温度を次の(1)〜(
3)のように変えて、はぼ一定になるようにμを制御し
た(pHは無調整であるが、いずれの場合も5〜7.5
の間で変化した。):(1)30℃、(2)33℃、(
3)培養開始後1.5日目に33℃から30℃に変更。During culture, while measuring μ, the culture temperature is adjusted to the following (1) to (
3) to control μ so that it was approximately constant (pH was not adjusted, but in both cases it was 5 to 7.5).
changed between. ): (1) 30℃, (2) 33℃, (
3) The temperature was changed from 33°C to 30°C 1.5 days after the start of culture.
培養全期間における平均増殖率とCG生産量との関係を
第1表に示す。Table 1 shows the relationship between the average proliferation rate and the CG production amount during the entire culture period.
第1表
実施例2
培地にビチオン20μg/i、およびチアミン200μ
g/4を加え、アクロバクテリウム・ラジオバクターA
l−5に代えてリゾビウム・ファッセオリRA−12を
用いる以外は実施例1を繰り返した。培養全期間におけ
る平均増殖率とCG生産量との関係を第2表に示す。Table 1 Example 2 20 μg/i of biothione and 200 μg of thiamin in the medium
g/4 and Acrobacterium radiobacter A
Example 1 was repeated except that Rhizobium faceoli RA-12 was used in place of 1-5. Table 2 shows the relationship between the average proliferation rate and the CG production amount during the entire culture period.
第2表
手続補装置(自発)
昭和59年11月 7日
1、事件の表示
昭和59年特許願第 193429 ’5’2、
発明の名称
環状(1→2)−β−D−グルカンの製法3、補正をす
る者
事件との関係 特許出願人
住所 大阪府大阪市北区侮I]111丁目12石39号
新版急ヒル名称 (285) ダイキン工業株式会
社代表者 山 1) 稔
4、代理人
5、補正命令の日付 :自 発
7、補正の内容
明細書の発明の詳細な説明の欄中、次の箇所を補正しま
す。Table 2 Procedure Auxiliary Device (Spontaneous) November 7, 1980 1, Case Indication 1988 Patent Application No. 193429 '5'2,
Name of the invention Process for producing cyclic (1→2)-β-D-glucan 3, Relationship with the case of the person making the amendment Patent applicant address: 111-chome, 12 stones, 39, Kita-ku, Osaka-shi, Osaka Prefecture, New Edition Kyuhill name (285) Daikin Industries, Ltd. Representative Yama 1) Minoru 4, Agent 5, Date of amendment order: Voluntary 7, The following parts are amended in the detailed explanation of the invention column of the statement of contents of the amendment. .
(1)2頁末1行、「特開昭82092 Jとあるを、
[特開−昭59−82092Jと訂正。(1) 1st line at the end of page 2, “Unexamined Japanese Patent Publication No. 82092 J”
[Corrected as JP-A-59-82092J.
(2)4頁10〜11行、rAl−124とあるをl”
A−12」と訂正。(2) Page 4, lines 10-11, “rAl-124”
A-12” was corrected.
以上that's all
Claims (5)
さい増殖率に制御しながら微生物を培養し、この培養液
より環状(1→2)−β−D−グルカンを回収すること
を特徴とする環状(1→2)−β−D−グルカンの製法
。(1) A method characterized by culturing microorganisms in an assimilable nutrient medium while controlling the growth rate to be lower than the maximum growth rate, and recovering cyclic (1→2)-β-D-glucan from this culture solution. Method for producing cyclic (1→2)-β-D-glucan.
属に属する細菌である特許請求の範囲第1項記載の製法
。(2) The production method according to claim 1, wherein the microorganism is a bacterium belonging to the genus Rhizobium or the genus Agrobacterium.
であり、培養全期間における平均増殖率か0.05hr
^−^1以下である特許請求の範囲第1項記載の製法。(3) The maximum growth rate of microorganisms is 0.08hr^-^1 or more, and the average growth rate during the entire culture period is 0.05hr.
^-^1 or less. The manufacturing method according to claim 1.
は使用する細菌の栄養要求物質の量を調節することであ
る特許請求の範囲第1項記載の製法。(4) The production method according to claim 1, wherein the growth control method is to adjust the temperature, pH, the amount of inorganic salt in the culture medium, or the amount of auxotrophic substance of the bacteria used.
類を添加することである特許請求の範囲第1項記載の製
法。(5) The production method according to claim 1, wherein the growth control method is to add an organic acid, a salt thereof, or an alcohol.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP19342984A JPS6170994A (en) | 1984-09-14 | 1984-09-14 | Production of cyclic(1-2)-beta-d-glucan |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP19342984A JPS6170994A (en) | 1984-09-14 | 1984-09-14 | Production of cyclic(1-2)-beta-d-glucan |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6170994A true JPS6170994A (en) | 1986-04-11 |
Family
ID=16307824
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP19342984A Pending JPS6170994A (en) | 1984-09-14 | 1984-09-14 | Production of cyclic(1-2)-beta-d-glucan |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6170994A (en) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5786343A (en) * | 1997-03-05 | 1998-07-28 | Immudyne, Inc. | Phagocytosis activator compositions and their use |
JP2010521972A (en) * | 2007-03-23 | 2010-07-01 | ワイス エルエルシー | A shortened purification process for the production of capsular Streptococcus pneumoniae polysaccharides |
WO2011151471A1 (en) | 2010-06-04 | 2011-12-08 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Novel immunoadjuvant compounds and uses thereof |
-
1984
- 1984-09-14 JP JP19342984A patent/JPS6170994A/en active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5786343A (en) * | 1997-03-05 | 1998-07-28 | Immudyne, Inc. | Phagocytosis activator compositions and their use |
JP2010521972A (en) * | 2007-03-23 | 2010-07-01 | ワイス エルエルシー | A shortened purification process for the production of capsular Streptococcus pneumoniae polysaccharides |
WO2011151471A1 (en) | 2010-06-04 | 2011-12-08 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Novel immunoadjuvant compounds and uses thereof |
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