JPS6163288A - Ａｔｐシンターゼのサブユニットｃ用の大腸菌のエー・ティー・ピー・オペロンのインターシストロン性ｄｎａ配列を含むｄｎａ、それを有する発現ベクター及びバクテリア - Google Patents
Ａｔｐシンターゼのサブユニットｃ用の大腸菌のエー・ティー・ピー・オペロンのインターシストロン性ｄｎａ配列を含むｄｎａ、それを有する発現ベクター及びバクテリアInfo
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- JPS6163288A JPS6163288A JP60157134A JP15713485A JPS6163288A JP S6163288 A JPS6163288 A JP S6163288A JP 60157134 A JP60157134 A JP 60157134A JP 15713485 A JP15713485 A JP 15713485A JP S6163288 A JPS6163288 A JP S6163288A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/565—IFN-beta
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ＤＮＡ配列を表現に使用すること、より詳し
く言うと、ＤＮＡ配列を設けた表現ベクター及びＤＮＡ
構造に関する。
く言うと、ＤＮＡ配列を設けた表現ベクター及びＤＮＡ
構造に関する。
ｍＲＮＡのどの性質が、リポゾームの最適結合、従って
、細胞内のタンパク質へ向けての最大の翻訳を可能にす
るのかということは、大部分が、依然として不明である
。鼓近の研究によれば、 ｌ１ｌｌ始コドンから正しい
距離のところに配置されなければならないＳＤ配夕＃（
シャイン−デルガノの配列、リポゾーム結合部位）の重
要性と、翻訳の開始を抑制するｍＲＮＡの２次構造の重
要性が強調されている。しかしながら、ｍＲＮＡの別の
配列’！！ｊ素（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅｌｅｍｅｎｔｓ
）が、ＢＲ始複合体の有効な形成、従って、最適な翻訳
にとって必要であることが、数多く指摘されている。し
かしながら、これらの配列要素は、まだ明らかにされて
いない。
、細胞内のタンパク質へ向けての最大の翻訳を可能にす
るのかということは、大部分が、依然として不明である
。鼓近の研究によれば、 ｌ１ｌｌ始コドンから正しい
距離のところに配置されなければならないＳＤ配夕＃（
シャイン−デルガノの配列、リポゾーム結合部位）の重
要性と、翻訳の開始を抑制するｍＲＮＡの２次構造の重
要性が強調されている。しかしながら、ｍＲＮＡの別の
配列’！！ｊ素（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅｌｅｍｅｎｔｓ
）が、ＢＲ始複合体の有効な形成、従って、最適な翻訳
にとって必要であることが、数多く指摘されている。し
かしながら、これらの配列要素は、まだ明らかにされて
いない。
大ｌｌ＆Ｉｍ ＣＥｓｃｈｅｒＩｃｂｒａ ｃｏｌｉ）
ノｘ−−ティー９ピー０オペロン（ａｔｐ ｏｐｅｒｏ
ｎ）は、ＡＴＰシンターゼ（ＡτＰ ５ｌｎｔｈａｓｅ
） （アデノシン三リン酸シンターゼ）の８つのサブユ
ニット（ｓｕｂｕ＋＋ｉｔ） （ａ、ｂ、ｃ、 デルタ
、アルファ、ガンマ、ベータ及びイプシロン）をコード
化する８つの遺伝子からなることが知られている。ニー
・ティｍ−ピーーオペロンは、サブユニットが翻訳即ち
異なったモル量で合成される単一の多シストロン性のｍ
ＲＮＡに転写される。ｆｉｉ大の翻訳速度（ｔｒａｎＳ
ｌａｔｉｏｎｒａｔｓ）は、サブユニットＣの場合に観
察することができる。
ノｘ−−ティー９ピー０オペロン（ａｔｐ ｏｐｅｒｏ
ｎ）は、ＡＴＰシンターゼ（ＡτＰ ５ｌｎｔｈａｓｅ
） （アデノシン三リン酸シンターゼ）の８つのサブユ
ニット（ｓｕｂｕ＋＋ｉｔ） （ａ、ｂ、ｃ、 デルタ
、アルファ、ガンマ、ベータ及びイプシロン）をコード
化する８つの遺伝子からなることが知られている。ニー
・ティｍ−ピーーオペロンは、サブユニットが翻訳即ち
異なったモル量で合成される単一の多シストロン性のｍ
ＲＮＡに転写される。ｆｉｉ大の翻訳速度（ｔｒａｎＳ
ｌａｔｉｏｎｒａｔｓ）は、サブユニットＣの場合に観
察することができる。
本発明の基礎をなす実験においては、サブユニットＣの
遺伝子が単離され、表現ベクターにおいてクローンされ
た。最大の翻訳速度は、シャイン−デルガノ配列の前に
ある約４０の塩基対のＤＮＡ配列もクローンされた場合
にだけ、維持できることがわかった。
遺伝子が単離され、表現ベクターにおいてクローンされ
た。最大の翻訳速度は、シャイン−デルガノ配列の前に
ある約４０の塩基対のＤＮＡ配列もクローンされた場合
にだけ、維持できることがわかった。
本発明によれば、技術的に培養することがでるバクテリ
アにおける構造遺伝子に関する表現速度は、大１１＆！
菌のエー・ティー・ピー・オペロンノ下記のインターシ
ストロン性（１ｎｔｅｒｃｉｓｔｒｏｎｉｃ）ＤＮＡ配
列が、ＡＴＰシンターゼのサブユニットＣに使用される
場合に、大きくなる。このインターシストロン性のＤＮ
Ａ配列は。
アにおける構造遺伝子に関する表現速度は、大１１＆！
菌のエー・ティー・ピー・オペロンノ下記のインターシ
ストロン性（１ｎｔｅｒｃｉｓｔｒｏｎｉｃ）ＤＮＡ配
列が、ＡＴＰシンターゼのサブユニットＣに使用される
場合に、大きくなる。このインターシストロン性のＤＮ
Ａ配列は。
ＴＡＡ サブユニットａ用の任意Ａ
ＴＴ の停止コドンＴＴＴＡＣＣＡ
ＡＣＡｆｌ：ＴＡＣＴＡＣＧＴＴ インターンストロ
ン性配ＡＡＡＴＧＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＴＧＣＡＡ
ｙｑ エ、 ティー、 ヒ（ａ）−ニーΦティー・ビー
Ｃｃ、） ＴＴＡＡＣＴＧＡＡＡＣＡＡＡＣＴ ＡＡＴＴＧＡＣＴＴＴＧＴＴＴＧ＾ ＧＧＡ（ｉ 任意のシャインーデル
ガＣＣＴＣ）の配列 ＡＣＴＧＴＣＡＴＧ サブユニットＣ用の
任意ＴＧＡＣＡＧ丁＾Ｃの開始。ド。
ＴＴ の停止コドンＴＴＴＡＣＣＡ
ＡＣＡｆｌ：ＴＡＣＴＡＣＧＴＴ インターンストロ
ン性配ＡＡＡＴＧＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＴＧＣＡＡ
ｙｑ エ、 ティー、 ヒ（ａ）−ニーΦティー・ビー
Ｃｃ、） ＴＴＡＡＣＴＧＡＡＡＣＡＡＡＣＴ ＡＡＴＴＧＡＣＴＴＴＧＴＴＴＧ＾ ＧＧＡ（ｉ 任意のシャインーデル
ガＣＣＴＣ）の配列 ＡＣＴＧＴＣＡＴＧ サブユニットＣ用の
任意ＴＧＡＣＡＧ丁＾Ｃの開始。ド。
によって表わされ、（上記配列において、１１！基トリ
プレツト（ｂａｓｅ ｔｒｉｐｌｅｔ）は、 コレラノ
Ｉｉ’ｉｌｉ？ｉｊＡによって置き換えることが〒さ）
ＡＴＰシンターゼのサブユニ７トａ用でかつＡＴＰシン
ターゼのサブユニー） トａの直前に挿入された停止コ
ドンを任意に有し、前記ＤＮＡ配列の直後に挿入された
シャイン−デルガノの配列を任ａに有し、かつ。
プレツト（ｂａｓｅ ｔｒｉｐｌｅｔ）は、 コレラノ
Ｉｉ’ｉｌｉ？ｉｊＡによって置き換えることが〒さ）
ＡＴＰシンターゼのサブユニ７トａ用でかつＡＴＰシン
ターゼのサブユニー） トａの直前に挿入された停止コ
ドンを任意に有し、前記ＤＮＡ配列の直後に挿入された
シャイン−デルガノの配列を任ａに有し、かつ。
ＡＴＰシンターゼのサブユニー／ トＣ用でかつシャイ
ン−デルガノ配列の直後に挿入された開始コドンを任意
に有し、又は−重鎖（ｓｉｎｇｌｅ ５ｔｒａｎｄｓ）
がインターシストロン性配列の一重鎖と（好ましくは、
少なくとも２０℃の温度で、特にＬＭＮａＣｕの濃度で
、かつ、少なくとも２５℃の温度で）混成形成されるこ
とができるＤＮＡ配列が使用される。
ン−デルガノ配列の直後に挿入された開始コドンを任意
に有し、又は−重鎖（ｓｉｎｇｌｅ ５ｔｒａｎｄｓ）
がインターシストロン性配列の一重鎖と（好ましくは、
少なくとも２０℃の温度で、特にＬＭＮａＣｕの濃度で
、かつ、少なくとも２５℃の温度で）混成形成されるこ
とができるＤＮＡ配列が使用される。
本発明によれば、ＤＮＡａ逍の直前に挿入された。この
ような末端ＤＮＡを有するＤＮＡ４ＪＩｉ造もまた。こ
の［」的のために提供される。
ような末端ＤＮＡを有するＤＮＡ４ＪＩｉ造もまた。こ
の［」的のために提供される。
本発明によれば、前記したＤＮＡ配列に特徴がある表現
ベクターもまた提供されている。
ベクターもまた提供されている。
実施例
次に本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明する。
実施例１
インターシストロン性のＤＮＡ配列のニー・ティｍ−ビ
ー（ａ）−ニー會ティーーピー（ｃ）を、インターロイ
キン−２用のｃＤＮＡと再結合させた０表現へフタ−へ
の組込みと大Ｕａの形質転換後に、このタンパク質の翻
訳は著しく増加していることがわかった。
ー（ａ）−ニー會ティーーピー（ｃ）を、インターロイ
キン−２用のｃＤＮＡと再結合させた０表現へフタ−へ
の組込みと大Ｕａの形質転換後に、このタンパク質の翻
訳は著しく増加していることがわかった。
実施例２
インターシストロン性のＤＮＡ配列のニー・ティー・ビ
ー（ａ）−ニー・ティー−ピー（ｃ）をβ−インターフ
ェロン用のｃＤＮＡと再結合させた０表現ベクターへの
組込みと大腸菌の形質転換後は、β〜インターフェロン
の収率は増加していた。
ー（ａ）−ニー・ティー−ピー（ｃ）をβ−インターフ
ェロン用のｃＤＮＡと再結合させた０表現ベクターへの
組込みと大腸菌の形質転換後は、β〜インターフェロン
の収率は増加していた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ＡＴＰシンターゼのサブユニット用の大腸菌のエー・テ
ィー・ピー・オペロンのインターシストロン性ＤＮＡ配
列であって 【ＤＮＡ配列があります】 （上記配列において塩基トリプレットはそれらの同義語
によって置き換えることができる）によって表わされ ＡＴＰシンターゼのサブユニットａ用でかつ該ＤＮＡ配
列の直前に挿入された停止コドンを任意に有し、 該ＤＮＡ配列の直後に挿入されたシャイン−デルガノの
配列を任意に有し、かつ ＡＴＰシンターゼのサブユニットｃ用でかつシャイン−
デルガノの配列の直後の挿入される開始コドンを任意に
有し、又は 一重鎖が前記インターシストロン性ＤＮＡ配列の一重鎖
と混成形成されることができるＤＮＡ配列であることを
特徴とするＡＴＰシンターゼのサブユニットｃ用の大腸
菌のエー・ティー・ピー・オペロンのインターシストロ
ン性ＤＮＡ配列。 （２）特許請求の範囲第１項に記載のＤＮＡ配列を有す
ることを特徴とするＤＮＡ構造。 （３）前記ＤＮＡ配列が構造遺伝子又はタンパク質の遺
伝情報を支持するＤＮＡ配列の直前に挿入された特許請
求の範囲第１項記載のＤＮＡ配列。 （４）特許請求の範囲第１項に記載のＤＮＡ配列を特徴
とする表現ベクター。 （５）技術的に培養することができるバクテリアにおけ
る構造遺伝子を表現するための特許請求の範囲第１項に
記載のＤＮＡ配列の使用。 （６）特許請求の範囲第４項に記載の表現ベクターを有
するバクテリアを培養し、かつ、タンパク質を回収する
工程（ｃ）を備え、しかも該工程（ｃ）に先立って表現
ベクターをバクテリアに組込む工程（ｂ）を任意に有し
、さらに前記工程（ｂ）に先立って特許請求の範囲第１
項に記載のＤＮＡ配列をタンパク質の構造遺伝子と再結
合させ、かつ、再結合させたＤＮＡをベクターと再結合
させ表現ベクターを得る工程（ａ）を任意に備えること
を特徴とするタンパク質の構造方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3426532A DE3426532A1 (de) | 1984-07-18 | 1984-07-18 | Verwendung einer dna-sequenz zur expression sowie dna-struktur und expressionsvektor mit der dna-sequenz |
| DE3426532.5 | 1984-07-18 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6163288A true JPS6163288A (ja) | 1986-04-01 |
| JPH0644868B2 JPH0644868B2 (ja) | 1994-06-15 |
Family
ID=6240985
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60157134A Expired - Lifetime JPH0644868B2 (ja) | 1984-07-18 | 1985-07-18 | Ａｔｐシンターゼのサブユニットｃ用の大腸菌のエー・ティー・ピー・オペロンのインターシストロン性ｄｎａ配列を含むｄｎａ、それを有する発現ベクター及びバクテリア |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4826764A (ja) |
| EP (1) | EP0169504B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0644868B2 (ja) |
| AU (1) | AU591457B2 (ja) |
| DE (2) | DE3426532A1 (ja) |
| DK (1) | DK326285A (ja) |
| ES (1) | ES8607393A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BG49718A3 (en) * | 1983-07-15 | 1992-01-15 | Bio- Technology General Corp | Method for preparing of polypeptid with superoxiddismutasne activitty |
| AU780887B2 (en) * | 1999-04-09 | 2005-04-21 | Zoetis Services Llc | Anti-bacterial vaccine compositions |
-
1984
- 1984-07-18 DE DE3426532A patent/DE3426532A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-07-17 DK DK326285A patent/DK326285A/da not_active Application Discontinuation
- 1985-07-17 US US06/756,136 patent/US4826764A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-07-18 DE DE8585108980T patent/DE3570248D1/de not_active Expired
- 1985-07-18 EP EP85108980A patent/EP0169504B1/de not_active Expired
- 1985-07-18 JP JP60157134A patent/JPH0644868B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-07-18 AU AU45223/85A patent/AU591457B2/en not_active Ceased
- 1985-07-18 ES ES545354A patent/ES8607393A1/es not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0644868B2 (ja) | 1994-06-15 |
| DE3426532A1 (de) | 1986-01-30 |
| DK326285A (da) | 1986-01-19 |
| ES8607393A1 (es) | 1986-06-01 |
| US4826764A (en) | 1989-05-02 |
| DK326285D0 (da) | 1985-07-17 |
| AU4522385A (en) | 1986-02-20 |
| DE3570248D1 (en) | 1989-06-22 |
| EP0169504A1 (de) | 1986-01-29 |
| EP0169504B1 (de) | 1989-05-17 |
| ES545354A0 (es) | 1986-06-01 |
| AU591457B2 (en) | 1989-12-07 |
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