JPS61243025A - 殺菌性ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野］ 宿主に対して不都合な効果を有しないがしかし不所望の
病原性微生物又は他の微生物に対して高い活性を有する
新規な殺菌剤の開発に絶えない関心が寄せられている。

殺菌活性を有する化合物の関心が寄せられている１つの
分野は、宿主がその自然の防御において使用する天然化
合物である。

宿主の防御におけるマクロファージ及び顆粒球、例えば
好中球の機能はよく証明されている。細胞性抗菌効果を
記載する多（の報告が存在する。例えば、ラビット肺胞
マクロファージの役割を記載するＨｏｏｋｉ２１ｇ及び
Ｇｏｗｎｓ、　Ｎ、Ｋｎｇｌ、　、Ｔ、　Ｍ＠ｔ。

（１９７９）　３０１　：　５８０−５８７、並びにヒ
ト−好中球及びヒト−多形核好中球の抗菌活性を記載す
るＬｅｈｒ＠ｒ、　Ｔ、　０１ｉｎ、　Ｉｚｉｖｅｓｔ
、　（１９７２）　５１　：２５６６−２５７２及びＭ
ａｎ＋１ａｌｌ、　Ｉｎｆｅｏｔ、工ｍｍｕｎ。

（１９７４）９　：３３７−３４１　　を参照のこと。

微生物に対する顆粒抽出物の効果の研究が、Ｒ＠ｓｔ等
、工ｎｔ＠Ｏｔ、工ｍｍｕｎ、　（１９７８）　１９　
：１３１−１５７；Ｒｅ５ｔ等、前掲（１９７７）１ｔ
５　：　１４５−１５１、及びＭｏｄｒｇ＆ｋｏｗｓｋ
ｉ等、前掲（１９７９）２３：５８９−５９１に見られ
る。ざらに、霧粒から単離され収縮菌活性を有する分子
量３０ＫＤａ１以上のカチオン性蛋白質を報告するＭｏ
ｄｒｇａｋｏｖｓｋｉ及び８ｐｉｔｉｎａｇｅｌ、前掲
（１９７９）２５：５９７−６０２、並びに５ｈａｆｅ
ｒ等、前掲（１９８４）４５　：８５４−８３８を参照
のこと。顆粒球及びマクロファージは共通の幹細胞から
生ずると考えられ、そしてこれらの細胞は幾つかの成分
（例えばリゾチーム）を共通に含有するので、マクロ７
アージ及び好中球は殺菌活性を有する化合物の潜在的な
入手源のようである。

天然化合物が有用であるためには多くの規準が存在する
。オリゴペプチドを合成しようとする場合、アミノ酸二
二、トの数が比較的少ないことが望ましい。殺菌性蛋白
質に関心が持たれる場合、バイブリドＩＩＮＡ技法は大
きな蛋白質を生産する機会を提供するが、生産細胞に対
する生成物の毒性効果がその経済的合成における困難さ
を生じさせる。第２に、抗菌性化合物は、独立して活性
であるべきであり、そしてその活性のために多くの他の
物質を必要とすべきでない。物質の混合物のみが殺菌活
性を有する場合、製剤化の゛問題が深刻になるかもしれ
ない。第３に、その中で天然化合物が活性である環境、
すなわち、天然化合物が、微生物の侵入から保護される
べき宿主に許容されるように製剤化され得るか否かに関
連する。さらに、アミノ酸組成及び特異的な配列を決定
することによって、分解に対する安定性、殺生物活性、
活性スペクトル等の性質を強化するようにペプチドを変
えることが可能である。宿主に対して不都合な効果を有
さす、広範囲の種類の微生物に対して殺生物活性を有す
る化合物が特に！ｉ要である。

（従来の技術］ Ｚａｙａ及び８ｐｉｔｚｎａｇｅｌ、　　ＩＴ、　Ｂａ
ｏｔｓｒｉｏｌｏｇｙ（１９５６）９１　：　７５５−
７６２はモルモットからの多形核白血球リソシームのカ
チオン性蛋白質を記載している６　Ｚｅｙａ及びｇｐｉ
ｔｚｎａｇｅｌ。

ｌｌｌＩ球リンシームカチオン性蛋白質の抗微生物特異
性を記載している。Ｚａｙａ及び＄ｐｉｔｇｎａｇ＊ｌ
、　、ｒ。

ｏｆ　ｌｌ１ｘｐ、Ｍｅｉ（１９６８）　１２７　：　
９２７−９４１は、ラビットからの多形核白血球リソシ
ームのアルギニン−リッチ蛋白質ご記載している。ｐａ
ｔｔ＠ｒｓｏｎ−Ｄｓｌａｆｉｅ１４等、工ｎｆｅａｔ
ｉｏｎ　＊ｎｌ工ｍｍｕｎｉｔｙ（１９８０ン３０：１
８０−１９２は、ラビット−肺胞マクロ７アージからの
不純な殺菌性カチオン性蛋白質を報告している６　Ｐａ
ｔｔｓｒｓｏｎ−Ｄｅｌ’ａｆｉｓｌ＋１等１　工ｎｆ
＠ｏｔｉｏｎ　　ａｎＬ　　工ｍｍｕｎｉｔｙ　　（１
９８１ン３１　ニア２３−７３１　（１９８１年１月２
３日発行〕は、ラビット肺胞マクロファージからの不純
な殺菌性カチオン性蛋白質のアミノ酸組成及び機能的属
性を報告している。さらに、この明細書中に引用する参
照文献を参考のこと。３ｅｌｓｔｏ４等、γ、　ｏｒＢ
ｉｏｌ、Ｏｈ＠ｍ、（１９８３）２５８　：　１４４８
５−１４４８９はＭＯＰ−１及びＭＯＰ−２を記載して
いる。ざらにＬｅｈｒｓｒ等、工ｎｆ＠ｏｔｉｏｎ　＆
！１（Ｌ工ｍｍｕｎｉｔ７（１９８３）４２　：　１０
−１４を参照のこと。ＩＰＯ出願階００８５２５０’Ｂ
参照のこと。

（発明の概要） 霊長類白血球中に見出されるカチオン性オリゴペプチド
に匹適する配列を有する新規な殺菌性オリジヌクレオチ
ドが提供される。特に、この殺菌性化合物は、システィ
ン、芳香族アミノ酸及び塩基性アミノ酸を多く含有し、
特にアルギニンを多く含有する。

（具体的な説明） システィン、芳香族アミノ酸及びアルギニンの含量が高
く、そしてマクロファージ及び顆粒球に由来するカチオ
ン性蛋白質から成る霊長類、特にヒトの殺菌性カチオン
性蛋白質、殺菌活性を有する断片、及び１個又はＩＪ！
類個のアミノ酸がマクロファージ及び顆粒球において見
出されるそれとは異るアミノ酷により置換されている変
形されたオリゴペプチドが提供される。天然オリゴペプ
チドは６個のシスナイン及び４個のアルギニン（これら
は実質的に保存される）を有することにより特、微付け
られる。システィン及びアルギニンはオリゴペプチド全
体にわたって分布しており、その結果システィンは広範
な架橋の機会を提供し、そしてアルギニンは広範囲のＩ
）Ｈにおいて分子全体に陽電荷なもたらし、従って分子
をカチオン性にしている。この発明の化合物は、１又は
複数の硫黄連結又はペプチド連結を介して、ポリアミノ
酸及び非蛋白質性化合物を包含する広範囲の種類の他の
化合物に容易に結合する。

システィンフレームワーク構造は保存され、そして肉性
アミノ酸に対して塩基性アミノ酸（特にアルギニンンは
過剰であるが、介在オリゴヌクレオチドについては入手
源に依存して実質的な差異が存在するようである。

霊長類、特にヒトのオリゴペプチドは非霊長類のそれよ
りも一層芳香族性であり、一般に４個以上の芳香族アミ
ノ酸を有し、４０％（個数ン以上、特に５０％以上がチ
ロシンである。

はとんどの場合、この発明の化合物は約３０００〜４０
００、一般に３１００〜５９００、さらに一般には３１
００〜３５００ダルトンの範囲の分子量を有する。この
発明の化合物はウィルス、細菌及び菌類を含む広範囲の
生物に対して抗菌活性を示す。

フレームワークポリペプチドは、はとんどの場合法の式
： （式中、２は末端アミノに結合しており、そしてアシル
基、通常炭素原子数１〜６個のアシル基、特にアミノ置
換基特にα−アミノを有するもの、例えばアミノ酸；炭
素原子数１〜３個のアルキル、通常メチル；又は保護基
、例えばｔ−ブチルオキシカルボニルであり； Ｗは末端ヒト四キシル基、アミ７基、又は１〜６個、通
常１〜５個、ざらに一般には１〜２個のアミノ酸から成
るペプチドであり； ａは０又は１であり； アミノ酸１は結合であり； アミノ酸７，１１，２１及び２６は炭素原子数５〜６の
脂肪族中性炭化水素アミノ酸、すなわちマａｌ、ｌ＠猛
及び±１・であり； アミ］ｍ９．１２．１３及び２８は、炭素原子２〜３個
の脂肪族中性炭化水素アミノ酸、すなわちｇｌｙ及びａ
ｈａでありニ アミノｅ！１９は炭素原子数３〜４個のヒドロキシ置換
された中性脂肪族アミノ隣、すなわちセリン又はスレオ
ニンであり； アミノ酸２３は炭素原子数４〜５個のカルボキサミド置
換された中性脂肪族アミノ酸、丁なわちａｓｎ又はｇｉ
ｍであり；そして アミノ＃２は炭素原子数２〜３個の中性脂肪族炭化水素
アミノ酸、すなわちｇｌｙもしくは＆１ａ１又は脂肪族
醗性アミノ酸、すなわちａｓｐもしくはｇｌｕであるン で表わされる。

中性アミノ酸は、非置換芳香族アミノ酸グリシン；炭素
原子数１〜５個のアルキル基を有するアルキル置換グリ
シン、すなわちアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリ
ン、バリン、ロイシン及びインロイシン；並びにオキシ
又はメルカプト置換基、特にメチルチオを有するカルコ
ゲン置換アミノ酸、すなわちセリン、スレオニン、シス
ティン及びメチオニン（通常システィンはこのブルーム
に含まれないであろうンである。

肉性アミノ酸はアスパラギン酸及びグルタミン醗である
。

塩素性７文）酸は脂肪族アミノ酸アルギニン及びリジン
である。

極性アミノ酸はアスパラギン及びグルタミンである。

芳香族アミノ酸はフェニルアラニン、チロシン及びトリ
プトフアンである。

芳香族複素環アミノ酸はヒスチジンである。

種々のアミノ酸が次のように分類される。

脂肪族 中性 非極性　　Ｇ、　Ａ、　Ｐ、　Ｖ、工、Ｌ極性　Ｓ＊　
Ｔｅ　Ｏ＋　’Ｌ　Ｌ　Ｑ酸性　　　　Ｄ、　］！１ 塩基性　　　Ｋ、　Ｒ 芳香族　　　　ＩＦ、　Ｈ，Ｗ、　Ｙ 特ニ興味あるオリゴペプチドは次の構造：（＆＆２）１
．−０７８−ｔｙｒ−６７ｇ−＆ｒｇ−１ユｅ−ｐｒｏ
−ａｌａ−ａｙｍ　−１１ｅ−ａｌａ−ｇｌｙ−ｇｌ、
ｕ−＆ｒｇ−ａｒｇ−ｔｙｒ−ｇｌｙ−ｔｈｒ−ａｙｓ
−１１ｅ−ｔｙｒ−ｇｉｎ−ｇｌｙ−ａｒｇ−１ｓｕ−
ｔｒｐ−ａｌｔ−ｐｈｅ−ａｙｓ−ａｙｓ （式中、ｂは０又は１であり、＆ａ２は脂肪族アミノ酸
、特に炭素原子数２〜３個の中性非極性アミノ酸又は重
性アミノ酸、さらに特定丁ればアラニン又はアスパラギ
ン酸である０ 全く明らかなことに、オリゴペプチドの生物活性に不都
合な影響を与えることなく、種々のアミノ酸の１個又は
複数個を他のアミノ酸と交換することができる。、ざら
に、抗菌活性をもたらすため及び２９個又は３０個のア
ミノ酸を構造する必要性を回避するために断片を用いる
ことができる。

さらに、天然アミノ醐はＬ−立体異性体であるが、１又
は？ＩＩ数個のグリシン又はアラニンを非天然ｐ−アラ
エンで置き換えることにより分解に対して抵抗するとい
う利点を得ることができる。

他の変形は、利用可能なカルボン醜基をアンモニア、又
は低分子量アミン、例えば炭素原子数１〜３個のアルキ
ルアミン、特にメチルアミンによるアミド化により変形
することである。さらに、末端アミン基を、アシル化、
例えばア七チル化、アルキル化、特に炭素原子数１〜３
個の低級アルキル基、特にメチル基によるアルキル化、
又は蛋白質もしくは非蛋白質性分子に連結する連結基に
より変形することができる。便利な連結基はジアルデヒ
ド、ジカルボン削等である。他の利用可能なアミノ基も
また連結のための部位であり得る。

他の変形は、１個又は複数個のアルギニンをリジンで置
き換えること、及びグルタミン醗をアスパラギン酸で置
き換えること、並びにこれらの逆を包含する◎ 化合物は、広範囲の微生物、例えばグラム−陽性細菌及
びダラム陰性細菌の両者を包含す゛る細菌、菌類、原生
動物、並びにウィルスに対して活性を有することが示さ
れる０異る組成物は異る微生物に対して異る程度の活性
を有する。組成物はオプソニン活性を有し、侵入する病
原体の食作用において助けとなる。

オリゴペプチドは、その目的に応じて種々の組成物とし
て使用することができる。例えば、少量のオリゴペプチ
ドを他の蛋白質と混合して、該蛋白質を細菌による分解
に対して保護するための防腐剤として作用させることが
できる。他方、この発明の組成物は、種々の製剤、例え
ばコンタクトレンズ溶液、軟膏、シャンプー、医薬、食
品等における防腐剤又は殺菌剤として使用することがで
きる。使用されるオリゴペプチドの量は他の成分の性質
、所望される保護の程度、及び組成分の用途等に依存し
て異ることができる。通常、濃度は約α０１〜約５重量
％である。

このオリゴペプチドを抗菌剤として使用すべき場合、こ
れらを種々の塩及び緩衝剤を包有する緩衝化された水性
媒体中に製剤化することができる。

この塩は、はとんどの場合、アルカリ金属又はアルカリ
土類金属のハロゲン化物、リン酸塩、又は硫酸塩、例え
ば塩化ナトリウム、塩化カリウム又は硫酸す）　ＩＪウ
ムである。種々の緩衝剤、例えばクエン酸塩、リン酸塩
、ＨＨＰＥ８．Ｔｒｉｍ等を、オリゴペプチドにより処
！されるべき宿主に生理的に許容される程度に使用する
ことができる。

塩は一般に約１０　〜約５Ｘ１０　　Ｍで存在する０イ
オン強度は１般に約１０　〜約α０１であり、そして通
常１０　〜約５Ｘ１０−’　　であろうｏｉ）Ｈは一般
に約６５〜８．０、さらに通常は約６．５〜Ｚ５であり
、効果はｐＨが低下するに従って低下する。ある用途に
おいては、オリゴペプチドを生理的緩衝液中に溶解する
。

化合物を凍結乾燥粉末として製剤化し、次に、溶液とし
て使用するために種々の賦形剤又は他の添加剤を使用す
ることができる。賦形剤には種々のポリオール、不活性
粉末又は他の増量剤が含まれる。

製剤の種類及び宿主に依存してこの発明の化合物を種々
の方法で使用することができる。製剤は、局所的に、注
射により、例えば静脈内に、腹腔内に、又は鼻咽頭内投
与等により適用することができる。

この発明のオリゴペプチドは合成により、肺胞マクロフ
ァージから、及び多形核白血球リソシームから得ること
ができる。この発明のカチオン性オリゴペプチドはまた
他の食細胞中にも存在する。

その天然環境中に存在する他の物質を含有しない化合物
を得ることができ、そして独立して又は任意の比率で組
合わせて使用することができる。

この発明の化合物は、この化合物の意図される使用にお
いて不都合な細胞片及び宿主細胞成分を含有しない約９
９重量％以上の純度で得ることができる。製造方法に依
存して、通常５重量％を超えない少量の汚染物が存在す
るかもしれない。多くの用途において純度は重要な要素
ではない０ポリペプチドが合成的手段により製造される
場合、ポリペプチドの一部分は目的とする配列より短か
く、そして残留するプロ、キング基を異にするであろう
。バイブリドＤＮＡ技法が使用される場合、下等単細胞
微生物の破片又は該微生物の成分が一般に１重量％未満
、通常約α０１重量％未満の量で存在するであろう。

霊長類好中球は血小板及び赤血球を実質上含有しない状
態で得られる。好中球をホモジナイズし、細胞片を除去
し、そして顆粒に富む上清を遠心して顆粒を含有するペ
レットを得る。ペレットを酢酸水溶液（５〜２０％）で
抽出し、抽出物を濃縮し、そして次にゲル透過クロマト
グラフィーを用い酢酸水溶液（１〜１０％゛］で客員す
ることによりクロマトグラフ処理する。抗微生物性物質
に富む両分を、トリクロロ酢酸α１％水溶液中アセトニ
トリルのグラジェントを用いて逆相Ｔ（ＰＬＯにより直
接精製するか、又はイオン交換ＨＰＬＯにより精製する
。

次に例によりこの発明をさらに詳細に説明する。

しかしこれによりこの発明の範囲を限定するものではな
い。

実験 材料及び方法 と十−好中球ペプチドの精製 ヒト−好中球を商業的供給者（ヘマケア、バンヌイス、
カリホルエアンから１人の供血者のロイコ７ルシスバ、
りから得、そして収得後２時間以内に処理した。細ａを
低速遠心分離により（２００１７，１０分間）２回洗浄
して血小板を除去し、モして４Ｃにてドルベコのりン市
緩衝化塩溶液に再懸濁した。４５秒間の冷低張細胞溶解
及びそれに続く低速遠心分離により汚染赤血球を除去し
た。こうして１〜３×１０　個の白血球を含有するペレ
ットが残り、その９０％が好中球であり、そして残りは
けとんどりンバ球及び単球から成る。細胞の９０％以上
がトリバンプルー排除により生存していた。

白血球ｔ−３０ゴのα３４Ｍシ、−クロースＣｐＨ７，
４）５０ｘｌ中に再懸濁し、そして位相差顕微鏡の下で
ほとんどの細胞が破壊されたように見えるまでガラス−
テフロンホモジナイザー中でホモジナイズした。細胞片
及び未破砕細胞を２００ｘ１にて１０分間の低速遠心に
より除去し、顆粒に富む上清を得た。残留する細胞ペレ
ットを、０．３４Ｍシ、シタ−クロース中ホモジネーシ
、ン及び遠心分離のさらに３回のサイクルにかけ、追加
の顆粒に富む上清を得た。これらの上清を一緒にし、２
″７，０００Ｘｐにて３０分間、４Ｃで遠心分離した。

得られたベレアトをプールし、そして１００■の１０％
酢酸中で４Ｃにて一夜抽出した。

この抽出物を２″７，０００Ｘ５Ｆにて３０分間遠心し
て浩明にし、そして真空遠心機（スピードーパ。

り、サバント・インストルメンツ社、ヒックスビル、二
、−目−り）中で約１０ｒｎｌに濃縮した。

ｍ縮された顆粒抽出物の最初の分画を、１５７ＧＩＸ５
．８ｅのＰ−１０ビオゲルカラム（ビオラド、す、チモ
ンド、カリホルニア）上で１５４を用いてゲル透過クロ
マトグラフィーにより行った。最初の検索基準を満たす
３種のペプチドが、ＨＮＰｊ−３として、２８０ｎｍに
おいてモニターした場合遅くそして不完全に分離した一
連のピークとして一緒に溶出した。これらを、酸尿素−
ポリアクリルアミドゲル電気泳動（Ａ１７−ＰＡＧＥ）
上でのそれらの相対カチオン性移動度に従って、ヒト好
中球ペプチドＨＮＰ−１（最も大きな移動度）、ＨＮＸ
’−２（中間移動度２、及びＨＮｐ−３（ｆｉも小さい
移動度）と命名した。ＨＩＰ−１及び−２からのＨＮＰ
−３の分離を、５０ｍＭ（０，０５Ｍ）リン増ナトリウ
ム／１０％アセトニトリル（ｐＨ７，０）中、カルボキ
シメチルシリカカラム（ビオシルｒＢＫ　　ＩｌＸＸ−
５３５ＣＪ、１５０！ＩＩＸ（ＳｌｉｍＢｉｏ−Ｒａｄ
　、リフチモンド、カリホルニア）上での高速液体イオ
ン交換クロマトグラフィーにより、塩化ナトリウムグラ
ジェントで溶出し、２８０ｕｍの吸光によってモニター
することにより行った。（グラジェントは、示された級
衝液を０〜４０％の１ＭＮａｏｌと共に用いた。ン　こ
の次に、０．１％トリフルオロ酢酔中０−１８アルキル
シリカカラム（バイダ、り、ライニンインストルメント
社、ウーパーン、ＭＡ）上でのアセトニトリルグラジェ
ントを用いる逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ　
−ＨＰＬＯ）により脱塩及び精製を行った。ＨＮｐ−１
及びＨｍｐ−２の混合物を１５０慮長のビオゲルＰ−１
０／１％酢酸ゲル透過系に再循還し、次に前記のように
ＢＰ−Ｈｌ”ＩｉＯを行うことによりＨｆｆＰ−１をＨ
ＮＰ−２から分離した。ＡＵ及び５Ｄ８−ＰＡＧｌｌｌ
により分画をモニターしそして各ペプチドの純度を評価
した。

抗細菌性ア、セイ ヒトー好中球ペプチドの殺菌活性をスタフイロコツカス
・アウレウス（８ｔａｐｈｙｌｏａｏａｏｕｇａｕｒｅ
ｕｓ　５０２ム、シュートモナス・アエルギノーＡ’Ｘ
’（７０２９６４Ｂ　　に対して試験した。微生物をト
リブチカーゼ・ソイ・アガー・プレート上に維持し、そ
して単コロニーからの生物を５０ｍＪのトリブチカーゼ
・ソイ・プロス（ディ７コ、ブトロイ）、Ｍ工）中に導
入し、そして３７Ｃにて一夜培養した。１１１ｉｌのこ
の中間培養物を４９−の新鮮な二、トリエンド・プロス
で稀釈し、そしてさらに３７Ｃにて１８時間インキュベ
ートした。この定常期培養物の一部分を１Ｄ　ｒｎＭ　
’Ｊン酸ｍ衝液（ｐＨ７、４）で稀釈し、そして６２０
寓■におけるその吸収を測定しあらかじめ決定された０
ＩＦＵ／光学濃度測定と比較することにより０１ジ４７
の濃度を定量した。インキ、ベージ、ン混合物はＩ　Ｘ
　１０’の細菌σ１σ及び５μｍ０ＨＨ２１−５を１０
０μノの１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，４
）中に含有した。対照混合物はＨＮＰｌ−３を欠くが少
量の酢や（最終濃度０．０８ｍＭン（これはＩＮＦスト
、り溶液のためのビヒクルとして使用した］を含有した
。この基本インキ、ベージ、ン混合物に種々の栄養を補
充した。３７Ｃにて２時間ＨＮＰ１−３と共にインキ、
ベートした後、サンプルを取り出し、段階的に稀釈し、
二、トリエンド・アガー・プレート上に拡げ、そして４
８〜７４時間インキ、ベートして十分なコロニーの形成
を可能にした。

抗菌性（ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　）アッセイトリプトコ
ツカス・ネオホルマンス （０ｒｙｐｔｏｏｏｏｏｕｓ　ｎ＠ｏｆｏｒｍａｎｓ　
）　Ｏ−３８４（タイプ０）をサブローの２％デキスト
ロース寒天プレート上に維持した。１０−のサブロー２
％デキストロースプロスに単一コロニーからの１ループ
の微生物を接種しそしてこの培養物を３７Ｃにて１８時
間インキ、ベートすることにより試験生物を調製した。

この中間培養物から１４を取り出し、そして５０４の新
鮮なサブロープロスに添加し、これを３７０にてざらに
１８時間インキュベートした。試験生物を１０ｍＭリン
酸ナトリウム緩衝液中で遠心外１％ｉすることにより２
回洗浄し、ヘマチトメーターで計数し、そして１０ｍＭ
リン酸ナトリウム緩衝液中所望の濃度に調製した。イン
キ二ベーシ、ン混合物は、１００ＩＬｅの最終容量中に
Ｉ　Ｘ　１０　０７Ｔ１〜及び５μ？のＨＮＰｌ−３を
含有した。これらの混合物を３７Ｃにて２０〜２４０分
間インキ、ベートし、そしてサンプルを取り出し、段階
的に稀釈し、そしてサブロー２％デキストロース寒天ペ
トリ皿プレート上に拡ケ、５〜５日置装て十分なコロニ
ーｊし成を保証した。

抗ウイルス性アッセイ ヘルペス・シンプレ、クス・ウィルス、タイプ１　（Ｈ
ＢＶ−１，Ｍｏ工ｎｔｙｒ＠株）に対するヒトー好中球
ペプチドの活性を２種類の系において試験した。

第１の系は定性的であった。これらの試験において、）
！ＰＬＯ精製され凍結乾燥された画分のそれぞれを１０
０４の０．０１％酢酸中に溶解した。この溶液の部分（
４０μｍｅ）を、２％ウシ胎児血清２０　ｍＭ　Ｈ１！
ｔＰｌ！Ｓ緩衝液（ｐＨ７，３）　、抗生物質（１００
υ／ｄのペニシリン及び１００μ？〜のストレプトマイ
シン）及びＨＥＪＶ−１（Ｉ　Ｘ　１０５ｐ　Ｉ　Ｕ／
ｍｌ　）　　を含有するイーグル最少必須培地（グラン
ドアイランドビオケミカルス、グランドアイランド、工
、−ヨークン３６０μ形と混合した。

この混合物の最終ｐＨはｚ２５であった。室温にて３０
分間の後、この混合物を２４−ウェル組織培養プレート
中ベロ細胞単層上に置き、そして到立顕微鏡で定期的に
モニターしなから５７Ｃにて２４〜４８時間インキュベ
ートした。保護されない感染された単層は２４時間まで
に特徴的な中程度の０ＰＩＩｔを生じさせた（ポリカオ
リン形成及び穏和な細胞の円形化、これは４８時間まで
に顕著に発達したン。ＨＮＰｌ−３を含有する両分を最
初に検出し、そしてそれらの精製を、それらがもたらす
ウィルス−誘導されるＯＰＩ！！　からの顕著な保護に
より追跡した。

第２のア、七イは定量的であり、そしてペプチドによる
！！３Ｖ−１の直接中和により測定した。この試験のた
め、１８０μＪの食塩溶液中種々の濃度のＨ’ｌ’Ｘ５
Ｏ−精製したペプチドを２０μのタイターを測定したＨ
８ｖ−１＃Ｊ製物（２％のウシ胎児血清及び抗生物質を
含有するイーグルの最少必須培地巾約４Ｘ１０’Ｐアυ
／−）と混合し、そして３７Ｃにて６０分間インキ、ベ
ートした。リン酸緩衝化塩溶液中Ｃｕ５ｖ−ｉ及び稀酢
＠（１（ＮＰｌ−３のビヒクルンのみを含有する対照混
合物を３７Ｃにて平行してイン午、ベートした。このイ
ンキ為ベージ、ンの終りにおいて混合物を段階的に稀釈
し、そしてウィルスＰＩＦＵのタイターを標準的技法に
より、べｐ細胞単層上で３連で測定した。

４回の代表的な実験において、このアッセイ法の変動の
平均係数（標準偏差／平均２は２０．９％であった。

イムノパーオキシダーゼ染色 ＨｌｆＰ　１−３をグルタルアルデヒド（〜１６）を用
いてオボアルプミン（シグマ、セントルイス。

ＭＯ）に接合せしめ、完全７０インドアジ、バント（デ
ィ７コ、デトｐイト、Ｍ工］と混合し、そしてラビット
・を免疫感作するために使用した。血清をｌ１１ｅＡ１
１１セルロース上で分画して、次の染色に使用するため
の１ｇＧ　画分を得た。免疫感作前の血清を同様に分画
し、対照として使用した。正常なヒト−好中球を含むス
ライドを、１０％ホルマリンを含有するリン酸緩衝化塩
溶液中で１０分間固定し、そしてＴＢ８　（２０ｍＭ　
Ｔｒｉｍ、　ｐ）！　７．５１５００　ｍＭ　Ｎａ１ｌ
　）　　により洗浄した。内因性のパーオキシダーゼ活
性を不活性化するため、スライドをα１Ｍ過目９素酸で
５分間処理し、蒸留水でＴＴぎ、モして０，０２％ナト
リウムボロハイドレートで２分間処理した。スライドを
ＴＢＳで洗浄し、そして０．０５％トウィーン２０，０
．０１％チメロサール及び１％ゼラチンを’Ｉ’ＢＳ中
に含む抗体緩衝液（ＡＰ）中ラビット抗−ＨＮＰ−工ｇ
Ｇ　　又は免疫感作前工ｇａ＜対照）の１　：５００稀
釈物と共にインキ、ベートした。この第１インキユベー
ジ、ンの後、これらを、α０５％トゥイーンを含有する
ＴＢＳで洗浄し、そしてさらに４８時間、バニオキシダ
ーゼラベルされたヤギー抗−ラビ。

トエｇＧ（カッベルラボラトリーズ、コクランスビ／に
、　Ｐ人）の１　：２０００稀釈物と共にインキ。

ベートした。まず’ｒＢｓ１０．０５％トゥイーンに上
り、そして次にＴＢＳにより十分に洗浄した後、スライ
ドをＴＢＳ／α０１５％’　ａ２ｏ２／　０．０５％ト
ク四ロナ、フトール（ビオ−ラド、す、チモンド、ＯＡ
）中に１０分間置くことにより、イムノパーオキシダー
ゼ染色を発色せしめた。スライドを水で洗浄し、そして
Ｑ、０１％アクリジンオレンジでカウンター染色して核
形態を調べた。

抗細菌活性 スタフィロコッカス・アウレウス５０２ＡをＨＮＰｌ−
３（ディフェンシン）に暴露する効果を第２表に示す。

細菌は１０ｍＭリン醗緩衝液中でディフェンシンにより
影響されなかったが、５ｍＭ　リン厳塩又は１％ニュト
リエント（トリブチカーゼ・ソイ）プレスの添加が細菌
をペプチドに対して感受性にした。他の実験において、
Ｓ。アウレウスをＨＮＰｌ−３に２時間暴露感受性にす
るためにαＱ５ｍＭグルコースが５ｍＭグルコースと同
様に効果的であること、及び５　ｍＭ　グルコースの感
受性化効果は２０分間のインキ、ページ、ンで十分であ
ることが観察された。５ｍＭピルビン酸及び６種類のア
之ノ醗の混合物のいずれも、ＨＮＰｌ−５に対するスタ
フィロコッカスの感受性化においてグルコース又はトリ
ブチカーゼ・ソイ・プロスを代替しなかった。

ＨＮＰｌ−３に対する２種類のグラム−陰性細菌の感受
性を第３表に示す。Ｓ、アウレウスについての観察と一
致して、Ｐ、アエルギノーサ及びＥ。

スリのいずれも１０　ｍＭ　リン酸緩衝液中５０μ？／
ｄのＨＮＰｌ−３への暴露の後死滅せず、そして両者は
インキ、ベージ、ン混合物が１％トリブチカーゼ・ソイ
・プロスを含有する場合に感受性であった。Ｓ、アウレ
ウスを用いる実験の場合と異り、グルコースの添加はペ
プチドに対する感受性の誘導にほとんど又は全く効果を
有しなかった。

抗菌（ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　）活性 ＨＭＰ　１　＝３の活性ごクリプトコ、カス−ネオホル
マンス０−５８４に対して試験した。前記の細菌と異り
、この生物は栄養不含緩衝液中でＨｗｐ　ｉ−２に対し
て非常に感受性であった。殺滅は顕著で且つ時間依存的
であり、４時間のインキュページ、ンの後、対照に対す
る減少１０ｇ１　ｏｏ１！Ｕ／ｗＪは〉５であった。４
時間のインキュベージ、ン期間の間、対照のフロニー数
は実質上変化しないままであつた口 抗ウイルス効果 ＨＮＰｌ−３によるヘルペス・シンプレ、クス・ウィル
ス、タイプ１の直接不活性化を観察した。

ウィルスの不活性化は２相的であった。ウィルスＰ　Ｉ
ＦＴｌｌＩｌｌの最初の急速な低下に続き、実験期間（
４時間］にわたり続く一層緩慢な低下が生じた。

精製された個々のディフェンシンの抗微生物効果 第４表に示すように、精製された個々のオリゴペプチド
ＨＮＰ−１，ＨＮＰ−２及びａｙｐ−５の抗微生物活性
を混合物ＨＮＰ１−３のそれと比較した。

ＨＮＰ−１及び１１ｔＮＰ−２はＨＩＰｌ−３と同様に
活性であった。ＨＩＰ−３は、Ｏ，ネオホルマンス０−
３８４％ｍ、コリＭ′Ｌ−５５、及びＳ、アウレウス５
０２人に対して、他のオリゴペプチドよりも低い抗微生
物性を示した。ＨｆｆＶ−１（Ｍｅ工ｎｔｙｒｅ　）及
びｘ、コリＡＴＯＯ２９６４８に対するＨＮＰ−３の活
性はＨＮＰ−１及びＨｌｆＰ−２のそれと同様であった
０ 免疫ｍ胞化学 ＨＩＰｌ−３に対する抗体を用いてイムノパーオキシダ
ーゼ法により染色された正常ヒトＰＭＮは、細胞質性で
顆粒性の反応生成物をもたらし、ＨＩＰが細胞の顆粒に
局在することが示唆された。霊長類血清を用いて又は抗
血清を用いないで行われた対照実験はパーオキシダーゼ
染色を示さなかった。

上記の結果から、この発明の化合物は、ウィルス、細菌
及び菌類（ｆｕｎｇｉ　）を含む広範囲の生物に対する
広範囲の効果を有する抗微生物剤として使用され得るこ
とが明らかである。さらに、この発明の化合物は天然物
であり、且つ比較的小さいオリゴペプチドであるため、
これらは長期持続が好ましくない広範囲の用途に使用す
ることができる。この発明の化合物は水容性であるから
、防腐活性及び消毒活性をもたらすために、種々の方法
で多くの組成物と共に製剤化することができる。

ざらに、このオリゴペプチドは、免疫原性の問題を＠１
ｌｌするために、特定の宿主のアミノ酸配列と同一か又
は実質上同一なアミノ酸配列を有するように調製するこ
とができる。相対的に小さいサイズのオリゴヌクレオチ
ドは、組換ＤＭ人によるか又は機械的自動合成機を用い
るそれらの容易な合成を可能にする。さらに、保護され
たフレームワークは、選択された生物に対する抗微生物
活性をなお保持しながら化合物の実質的な変化を許容す
る０ 以上、この発明を説明するために例示的に詳細に記載し
たが、これによってこの発明の範囲′ｆｒ：限定するも
のではない。　　　　　　　　　ＪＪ７余白第１表 ＨＩＰ−１ａｌａ　ａｙｓ　ｆｙｒ　ａｙｓ　ａｒｇ　
ｉｌｅ　ｐｒ。

ＨＩＰ−２ｅｙ＠ｔｙｒ　ａｙｓ　ａｒｇ　ｉｌｅ　ｐ
ｒ。

ＨＩＰ−３ａｓｐ　ａｙｓ　ｔｙｒ　０７８　ａｒｇ　
ｉｌｓ　ｐｒ。

）ＩＮＦ−１ａｌａ　ａｙｓ　ｉｌｅ　ａｌａ　ｇｌｙ
　ｇｌｕ　ｈｒｇ　＆ｒｇ１（ＭＰ−２ａｌａ　ａｙｓ
　ｉｌ＠ａｌａ　ｇｌｙ　ｇｌｕ　ａｒｇ　ａｒｇＨＩ
Ｐ−３ａｉ＆０７！Ｉ　ｉｌｅ　ａｌａ　ｇｌｙ　ｇｌ
ｕ　ａｒｇ　ａｒｇＨＮＰ−１ｔｙｒ　ｇｌｙ　ｔｈｒ
　ａｙｓ　ｉｌｅ　ｔｙｒ　ｇｉｎ　ｇｌｙＨＮＰ−２
ｔｙｒ　ｇｌｙ　ｔｈｒ　ａｙｓ　ｉｌｅ　ｔｙｒ　ｇ
ｉｎ　ｇｌｙＨＮＰ−３ｔｙｒ　ｇｌｙ　ｔｈｒ　ａｙ
ｓ　ｉｌｓ　ｔｙｒ　ｇｉｎ　ｇｌｙＨＩＰ−１ａｒｇ
　ｌ＠ｕ　ｔｒｐ　ａｈａ　ｐｈｅ　ａｙｓ　ａｙｓＨ
ＩＰ−２ａｒｇ　ｌｓｕ　ｔｒｐ　ａｌａ　ｐｈｅ　０
７！Ｉ　ａｙｇＨＩＰ−３ａｒｇ　ｌｓｕ　ｔｒｐ　ａ
ｌａ　ｐｈｅ　ａｙｓ　ａｙｓＨＮＰに対するＳ６アウ
レウムの感受性に対する基質の効果 実験　添加物　　濃　度　　対照　　　十ＨＩＰ　　　
１０ｇ、。

１　無添加　　　　　　４．９Ｘ１０５５．０Ｘ１０５
−α０１グルフース　５ｍＭ　　　　４．９ｘ１０５２
．５ｘ１０３　２．２９ピルビンｒ！ｓ　５ｍＭ　　　
　１０×１０５２．２×１０’　　−ａ３４Ｔ、　Ｓ、
　Ｂ、　　１：１００　　ｔ５Ｘ１０’　　ｔＩＸ１０
’　　３．１５２　無添加　　　　　　ｔＩＸ１０’　
ｔＩＸＩＱ’　　α００グルフース　５１１１Ｍ　　　
　Ｂ、！ｌＸ１０５　！１．３ｘ１０’　　　ｔ４０３
　無添加　　　　　　７．７Ｘ１０　７．７ＸＩＱ　　
　０．００グルコース　５ｍＭ　　　　７．４Ｘ１０５
　＆２×１０’　　　１．！＋７Ｔ、　３．１．　　１
　：１００　２．１翼１０’　　２．５Ｘ１０３　２．
９０　　　　゛ＴＳＢ＋グル　　１：１００＋　　２．
８Ｘ１０’　　３．８Ｘ１０５　２．８７コース　　　
５ｍＭ 基礎インキ、ベージ、ン媒体は示された添加物が補充さ
れた１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）であった。イ
ンキ、ベージ、ンは、３７Ｃにて２時間、Ｔ、　Ｓ、　
Ｂ、　（）リプティカーゼ−ソイ−プロス）中に１８時
間増殖したＳ、アウレウス培養物と共に行った。インプ
ット濃度（平均上Ｂ、Ｒｔ、　Ｍ、　Ｘ１０’０１Ｆ１
７〜月ま１１２±α１７Ｘ１０　　（実験１ン、１５２
±ＣＬ１３Ｘ１０’　（実験２）、及ヒ９．３±（Ｌ２
Ｘ１０’（実験３）であったＯ混合アミノ酸はアラニン
、グルタ之ン、ヒスチジン、ロイシン、メチオニン、及
びトリプト７テン（各２．５ｍＭ）を含有したＯデータ
は２時間後の０７υ／ｄ１及び対照に対するＨＩＰ−処
理細菌の減少１０　ｇ　１゜を示す。グルコスの感受性
効果は２０分間以内に達成される（データは示してない
）。

ＨＭＰは、５０μ？／コの最終濃度で試験されたヒトー
好中球ペプチド（ＨＩＰ−１，ＨＨＸ’−２及びＨ１ｉ
ｌ’−３）　の混合物を意味する。

第３表 １１ＭＰ　　に対するシュードモナスーアエルギノサ及
びニジエリシャーコリの感受性に対する基質の効果 以下余白 実験　添加物　　　濃度　　　対照　　　十ＨＩＰ　　
」ユ引１１　無添加　　　−ｔＯＸ１０’　　ｔＩＸ１
０’−α０４グルコ−Ｘ　　５ｍＭ　　　　１３Ｘ１０
’　　７．７ｘ１０’　　０．２５τ、　Ｂ、　Ｂ、　
　１：１００　　１．ｌＸ１０’　　ｔ７ｘ１０’　　
１８１ＴＢＢ÷グル　　１：１００＋　　１，８Ｘ１０
’　　２．５１１０’　　１．８９コース　　　５ｍＭ ２ｆＩ＃添加　　　−ｔ２Ｘ１０’　　ｔＯＸ１０’　
　０．０８グルコース　５ｍＭ　　　　１１１０’　　
７．４１０’　　ＣＬ１７’Ｉ”、３．Ｂ、　　１：１
００＋　　５．０Ｘ１０　　５．５Ｘ１０　　０．９６
ｍＭ ３　無添加　　　　　　　ｔ４Ｘ１０　　ｔ２Ｘ１０　
０．０７グルコース　　５ｍＭ　　　　　ｉ、２ｘ１０
　　　　ｔ３ＸＩＱ　　−０，０３Ｔ、８．Ｂ　　　１
：１００　６．１１０’　　１．４Ｘ１０’　　＆６４
ピルビン１１！　　　５ｍＭ　　　　　ｉ、５×１０’
　　　１．１Ｘ１０’　　　８．１５４　無添加　　　
−１２）１１０　１．０Ｘ１０　　α０８グルコース　
５！ＩＩＭ　　　　’ＬＩＸ１０’　　ｔ２ｘ１０’−
１１０４−Ｔ、　Ｂ、　Ｂ　　　１：１００　　　＆４
Ｘ１０　　１．０）１１０　　３．８１基礎インキ、ペ
ージ、ン媒地は示された添加物が補充された１０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐａｚ４）であった。インキュベージ、ン
を、トリブチカーゼ９ソイ−プロス（Ｔｉ２Ｂ）中に一
夜（１８時間）増殖した細菌培養物と共に行った。イン
プット濃度（平均士Ｂ、Ｅ、Ｍ、Ｘ１Ｄ　　ＯＦＵ／ｌ
１１１）は１６５±（１１（実験１）、１４９±０．０
５（実験２）、１４８±α０２（実験３）、及び１２５
±００３（実験４）であった。データは、２時間のイン
キュページ、ン後の平均生存０　？　’ｆｆ　７ｍ　ｓ
及びＨＩＰなして２時間インキ、ベートされた対照に対
するＣＩＵ以下余白 ／ｒｎｌの減少１ｏｇ、。を示す。

第４表 試験生物に対する精製されたＨＰＮ−１，ＨＰＮ〜２及
びＨｐＮ−３の効果 インプットに対する試験生物の濃度の低下（ｌｏｇ、。

二二、トン ０、ネオホルマンス　０−３８４ １　６２５　　０．０１　　３．０８　　３，２１　　
　３．００　　１．０８２　６．０４　　０．０４　　
１６Ｂ　　　２４１　　　１７２　　　α５２Ｆ、コリ
ＡＴＯＯ２９６４Ｂ １　　α１５　−α７９　　３５２　　３，２２　　３
．４３　　３．６１２　６．２３　　−０．７９　　３
．５５　　　凹４　　易０　　３．４７１、コリ　ＭＴ
、−５５ １６２８−０，６５ｕ７　　２Ａ０　　２７５　　０．
６４２　６２０　　−０．８４　　１４６　　　１．９
１　　　１３０　　　α１０２４アエルギノサＰＡＯ５
７９ １α２４　　α３１　　１．１６　　１２０　　１Ｊ９
　　１．０７２　６．４５　　　α２２　　α４７　　
α６４　　　（１９１α３５Ｓ、アウレウス５０２Ａ １　５９７　−α７２　　１．６５　　２．１４　　　
１．６３　　　α２３２　　ｔｓ２２　　−Ｑ、３７　
　２．１３　　２２７　　１９５　　０．５５Ｈ８ｖ−
１（Ｍｏ　工ｎｔｙｒｅ） ｊ　　６．７９　　　α１８　　２Ａ２　　２２７　　
２７２　　２３６２、　６．６２　　　　ＮＴ　　　２
５６　　２．１７　　　１９０　　２２８３６７６　　
α０２　　１．７５　　　ｔ７７　　　１７４　　　ｔ
３４デタは工Ｏｇ１゜ユニ、トで示す。インプットの列
は、細菌及び菌類については０ＩＦＵ〆ａとして、そし
てｌｌ３Ｖ−１についてはＰ］Ｐｔｒ／Ｒ１トして、イ
ンキ晶ベージ、ンの初めにおける絶対濃度を示Ｔ０その
他のデータは、細菌又は菌類を３ｙ１類のディフェンシ
ン（ＨＮＩ’１−３　）の混合物５０μｆ／ｍｌ又は個
々のペプチド５０μｐ／ｍｌ　　と２時間インキ、ベー
トした後の、インプラ１トに対する０７１Ｔ／ｍ／の減
少を示Ｔ００．ネオホルマンスは栄養を含有しない１０
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）中でインキ。

ベートし、他方細菌はＩ　Ｖ／ｆｆ％のトリブチカーゼ
・ソイ・プロスを補充した１０ｍＭ　　リン醸緩衝液（
ｐＨ７，４）中でインキ、ベートした。マイナス記号は
、２時間目の０ＩＰＴＩ／ｒｔｔｌがインプットより高
いこと（すなわち増殖が生じたことンを示す。

！ｌ５Ｖ−１を用いる実験は、ドルベコのリン酸緩衝化
塩溶液中で、示された濃度のウィルスを２５μｔ／ｍｌ
のＩＮＦｌ−３又は個々のペプチドに３７Ｃにて分間暴
露することにより行った。この研究において使用したＨ
ＮＰｌ−３は、精製された個々のペプチドを１：１：α
５　（ＨＮＰＩ、ＨＨＰ−２：ＨＩＰ−３）の比率で混
合することにより再構成されたものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、微生物の増殖に対して感受性の環境において微生物
   の増殖を阻害する方法であって、次のアミノ酸配列： 【アミノ酸配列があります】 （式中、Ｚは末端アミノに結合しており、そしてアシル
   基、炭素原子数１〜６個のアルキル基、又は保護基であ
   り； Ｗは末端ヒドロキシ基、アミノ基、又は１〜６個のアミ
   ノ酸から成るペプチドであり； ａは０又は１であり； ａａ＾１は結合であり； ａａ＾１＾１、ａａ＾１＾１、ａａ＾２＾１及びａａ＾
   ２＾６はｖａｌ、ｌｅｕ又はｉｌｅであり； ａａ＾９、ａａ＾１＾２、ａａ＾１＾３及びａａ＾２＾
   ８はｇｌｙ又はａｌａでり； ａａ＾１＾９はｓｅｒ又はｔｈｒであり； ａａ＾２＾３はａｓｎ又はｇｌｎであり；そしてａａ＾
   ２はｇｌｙ、ａｌａ、ａｓｐ又はｇｌｕである）を有す
   るカチオン性オリゴペプチドの微生物増殖阻害量を前記
   環境に適用することを含んで成る方法。 ２、前記カチオン性オリゴヌクレオチドが次の式： 【アミノ酸配列があります】 （式中、ａｌａ、−、及びａｓｐは、アミノ酸が存在し
   ないか、又は示されたアミノ酸のいずれかを意味する）
   で表わされるものである特許請求の範囲第１項に記載の
   方法。 ３、次のアミノ酸配列： 【アミノ酸配列があります】 （式中、Ｚは末端アミノに結合しており、そしてアシル
   基、炭素原子数１〜３個のアルキル基、又は保護基であ
   り； Ｗは末端ヒドロキシル基、アミノ基、又は１〜６個のア
   ミノ酸から成るペプチドであり； ａは０又は１であり； ａａ＾１は結合であり； ａａ＾７、ａａ＾１＾１、ａａ＾２＾１及びａａ＾２＾
   ６はｖａｌ、ｌｅｕ又はｉｌｅであり； ａａ＾９、ａａ＾１＾２、ａａ＾１＾３及びａａ＾２＾
   ８はｇｌｙ又はａｌａであり； ａａ＾１＾９はｓｅｒ又はｔｈｒであり； ａａ＾２＾３はａｓｎ又はｇｌｎであり；そしてａａ＾
   ２はｇｌｙ、ａｌａ、ａｓｐ又はｇｌｕである）を有し
   、細胞性成分及び断片を実質上含有しないカチオン性オ
   リゴペプチド。 ４、次の式： 【アミノ酸配列があります】 （式中、ａｌａ、−、及びａｓｐはアミノ酸が存在しな
   いか、又は示されたアミノ酸のいずれかを意味する）で
   表わされる特許請求の範囲第３項に記載の陽イオン性オ
   リゴペプチド。 ５、不所望の微生物増殖を支持することができる製剤に
   おける、特許請求の範囲第３項に記載のカチオン性オリ
   ゴヌクレオチドを微生物の増殖を阻害するのに十分な量
   において該製剤に含有せしめることから成る改良。 ６、約３０００〜４０００ダルトンの分子量を有し、そ
   して次の性質： ０．５ｍＭ以上のグルコース存在下でスタフィロコッカ
   ス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒ
   ｅｕｓ）の増殖阻害を示すがしかし１０ｍＭリン酸緩衝
   液又は５ｍＭピルビン酸の存在下ではそれを示さず； １０％トリプチカーゼ・ソイ・ブロス中でシュードモナ
   ス・アエルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕ
   ｇｉｎｏｓａ）及びエシェリシャ・コリ（Ｅｓｃｈｅｒ
   ｉｃｈｉａ　ｃｏｉｌ）を阻害するがしかし１０ｍＭリ
   ン酸緩衝液又は０．５ｍＭグルコースの存在下では阻害
   せず；そして 栄養を含有しない緩衝液中でヘルペス・シンプレックス
   ・ウィルスを不活性化する； を示す少なくとも１種類の陽イオン性ポリペプチドを含
   んで成る抗微生物活性を示す組成物。 ７、免疫原性ポリペプチドと共有結合した特許請求の範
   囲第４項に記載のカチオン性オリゴペプチドを含んで成
   る免疫原。 ８、免疫原性ポリペプチドと共有結合した特許請求の範
   囲第５項に記載のカチオン性オリゴペプチドを含んで成
   る免疫原。 ９、特許請求の範囲第７項に記載の免疫原に対する免疫
   原反応において調製された抗体。