JPS6122A

JPS6122A - 尿路感染症のための化学的に規定されたワクチン

Info

Publication number: JPS6122A
Application number: JP60094545A
Authority: JP
Inventors: ピーター・オアンレー; ゲイリー・ケイ・スクールニク; デビツド・ラーク; スタンレイ・フオルコウ
Original assignee: Leland Stanford Junior University
Current assignee: Leland Stanford Junior University
Priority date: 1984-04-30
Filing date: 1985-04-30
Publication date: 1986-01-06
Also published as: AU582578B2; US4736017A; CA1261550A; EP0161095A2; AU4185185A; EP0161095A3

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は、ヒトまたは動物における、感染症に対する免
疫処置に関するものであ７ｉ！−、さらに詳しくは、そ
の様な対象内で尿路感染症の病原菌に対する抗体を生成
させることができるアミノ酸配列を予防接種することに
関する。特に本発明は、そのアミノ酸配列が、上記病原
菌の線毛タンノくり質に関連する部分と対応している様
なワクチン類を使用することに関するものである。

技術的背景尿路感染症はアメリカ国内においてかなり深刻な問題で
あり、さらに世界的に蔓延している。アメリカ国民の約
１〜５％が再発性の尿路感染症に罹病していることが報
告されている。これらの症例巾約０．１％は壊死性腎孟
炎である。再発性の感染症にかかつていなくとも、実質
的にはより多くの人々が、固有の医学上の条件によって
、唯一回の腎１孟腎炎でさえ重篤となる、合併症の危険
にさらされている。その様な危機にさらされている人々
の中には、糖尿病患者（アメリカ国内に１００．０００
，０００人存在）、高令者、腎不全症患者、多量の鎮痛
剤を使用している人々、および免疫系の抑制を来してい
る人々（例えば、腫瘍に対する化学療法を適用されてい
る患者）が含まれる。これらの人々は全て、尿路感染の
重篤な合併症、恒久的な不能、あるいは該尿路感染症に
起因する死の危険にさえ、直面している。

相当数の人々を尿路感ｌ？４ｐから保護するのに有効な
ワクチンが提供されることが望まれる。このことは、現
実に感染することによって若起される苦痛や衰弱を防止
するのみならず、この症状を治療するために必要な抗生
物質の投与を回避させることにもなる。その様な回避に
より、過剰の抗生物質の使用によってもたらされる。感
染患者集団に選択的に課せられる負担が減少され、さら
には、耐性菌の出現が遅延されることになる。

標的感染症は、通常、切迫した。生命の危険を伴なわな
いと考えられており、従って、殆んど、または全（、危
険性を有しないワクチンを与える必要がある。その様な
ワクチンとしてこれまでに入手し得たものは、病原性を
弱毒化された微生物および不純物を含有するタンパク質
製剤に限られており、これらは、不必要な免疫原性の応
答を引き起こし、さらに／まだは望ましくない副作用を
もたらした。本発明は化学的に明確にされた、精製タン
パク質である、ワクチンを提供するものである。従って
、このものは非−感染性である。それは、感染症の第１
段階とみなされている尿路の転移増殖に関与する大腸菌
ウロパトゲンの細胞器官に対する特異抗体を生成させる
。

発明の開示大多数のウロパトゲン大腸菌が有する特殊な型の線毛か
ら導かれるペプチドの７ラグメントを表すアミノ酸配列
は、ヒトの尿路感染症に対するワクチンの活性成分とし
て作用するのに好ましい性質を有していることが発見さ
れた。大腸菌の、ウロバトゲン性を有する菌株が有する
’Ｇａｌ−Ｇａｌ’線毛は、標的感染症と高度の関連性
を有している。

その他の線毛サブタイプは関連性を有していない。

すなわち、ＧａＪ−ＧａＪ　　線毛タンパク質の抗原性
領域は、尿路感染症の病原菌に対する抗体を極めて効果
的かつ特異的に生成させると共に、それらの性質が明ら
かにされている上、そのサイズが比較的小さいので、実
用的な量のものを純粋な形で得ることができる。

従って、本発明は、ヒトにおける尿路感染症の予防に有
効であって、少（とも１個のＧａｌ−Ｇａｌ線毛タンパ
ク質の抗原決定因子を含有するワクチンを提供するもの
である。本発明はまた、上記抗原決定因子の精製された
アミノ酸配列、および線毛タンパク質の精製された１６
３個のアミノ酸配列を提供するものである。さらにまた
本発明は、本発明に係るワクチンをヒトに投与すること
により、尿路感染症を予防する方法を提供するものであ
る。さらにまた本発明は％Ｇａｌ−Ｇａｌ線毛タンパク
質を単離し、加水分解した後、所望の配列を精製するこ
とにより、上記ワクチンの活性成分を得る方法を提供す
るものである。

図面についての簡単な記述第１図はＨＵ８４９（７）Ｇａｌ−Ｇａｌ　９：／バク
質のアミノ酸配列およびその抗原決定基を示す模式図で
ある。

第２図はＨＵ８４９　　から導かれるＧａｌ−Ｇａｐミ
ル結合ピリンび５Ｈ４１３からのＭＳピリンのＮ−末端
配列を比較して示した模式図である。

Ａ、定義本明細書中、’　Ｇａ　ｌ−、Ｇａ−１線毛タンパク質
の抗原決定因子に相当する′という語句は、それは。

Ｇａ／−Ｇａｌ　　ｆ１１毛タンパク質の類似部分とホ
モローガスであるか、または実質的に同等の機能を有す
るものであることを意味する。Ｇａｌ−Ｇａｌ線毛の性
質およびそれと通常の線毛とを区別している特徴につい
ては後述する。

ゞ抗原決定因子′という語句は、ペプチド配列中、抗体
を生成させ得ると共に、それら抗体と結合することので
きる部分を指す。

関係は、細菌のタンパク性表面の線維状構造（フィラメント
構造）と関係があると思われる。これらのフィラメント
は凝集して適度の配列長さを有する所望のサブユニット
（ピリン〕を与える。尿路感染症に関与すると考えられ
ている大腸菌は、少なくとも３種類の、線毛を暗号化し
ている染色体型を有している：即ち、１通常′またはＩ
　Ｍｓ　Ｉ、’　Ｇ　ａｌｌ−Ｇ”　ｌ　’　ｂ　オよ
び１）ｃ　＃Ｆ　する。これラバ、その結合における特
異性に基いて分類される。

通常型（即ちタイプＩ、またはマンノース結合、または
ＭＳと称する）の線毛は、モルモットの赤血球細胞およ
び酵母細胞を凝集し、さらに、全ての胎盤性哺乳類動物
の腎臓から分泌される高度にマンノシル化された糖タン
パク質である、タム−ホースフォール（ＴａｆＩｌｆｒ
＆−Ｈｏｒｓｆａ／ｄ）ウロムコイドと結合する。マン
ノース含有糖類、例えば、マンノース自身、メチルマン
ノジッド、および酵母マンナンはこの結合を阻害する。

ＭＳ線毛は、起源の如何に係りなく、全大腸菌株の８５
俤に認められている。

Ｇａｌ−Ｇａｌ　　線毛は、Ｄ−マンノースの存在下、
ヒト赤血球の血球凝集反応を促し、空の尿路上皮組織に
結合させる様１作用する。これらの菌株の大多数は、通
常、ヒト赤血球および尿路上皮細胞に存在している、２
個の中性の構造上関連のあるグリコースフインゴリピツ
ド、グロポテトラオシル拳セラミ゛ンドおよびトリヘキ
ンシル・セラミツドと結合する。その様な線毛は、糞性
犬腸菌の約３０％中に見出されているが、子供の急性で
非閉塞性の腎孟腎炎、または健常な婦人対象の尿路から
単離される菌株の９０〜１００％を占めている。

二部類α−Ｇａｌ（１−４，）β−Ｇａｌ（Ｇａｌ−Ｇ
ａｌ）は、これらの線毛によって認識される活性は、最
小の受容体であることが示された。

残るタンパク質であるｘ３の線毛タンパク質は上記のグ
ループのいずれにも属さず、それらの受容体の性質は未
知である。

多くの大腸菌の菌株は前記の全ての型の線毛を含有して
いる。例えば、ヒト腎孟腎炎から単離された大腸菌Ｊ９
６株は、線毛を暗号化している２個の明瞭な染色体遺伝
子を含有している。これらの配列は、制限消化と単離に
よって得られた。１個の遺伝子はＭ５線毛を、他の遺伝
子はＧ　ａ　ｌ　−Ｇａｌ　　線毛を暗号化している。

これらのフラグメントを用いて細胞を形質転換し、ＭＳ
線毛の遺伝子のみを発現する組換え体（Ｓｌ−１４８）
およびＧａｅ−Ｇａｌ線毛の遺伝子のみを発現する組換
え体（ｉ（、（、”８４９）が、Ｈｕｌｌら　（インフ
エクション・アンドーイムニテイー（Ｉｎｆｅｃｔ　　
Ｉｒｒｍｕｎ　）　１９８１３３：９３３）によって調
製された。これらの菌株を、以下の実施例における線毛
タンパク質の供給源として用いた。しかしながら、同様
の方法によって他の適当な組換え菌株を調製し、線毛の
供給源として使用することも可能であり；さらに、実際
、所望のピリンを生産するならば、非−組換え性の、野
生型または突然変異型菌株をも用い得る。

定置子の構造以下に詳述するように、典型的な尿路病原体と合体した
Ｇａｌ−Ｇａ／線毛蛋白を精製し、その配列を決定した
。その結果を第１図に示す。そのＮ末端配列を、第２図
に示した、同様に精製したＭＳ線毛蛋白の配列と比較す
る。システィン残基を含めば、最初の２６位までは約２
７外が類似している。しかしながら、これら゛の蛋白の
精製品で免疫させた家兎に生じる抗体はわずか約５俤の
交叉反応性しか示さない〇コｔｙ））Ｇａｌ−Ｇａｌ　　合体線毛は１６３個のア
ミノ酸および少なくとも４つの抗原特異性領域：ヒドロ
キシルアミン■フラグメントとして単離さし得る１５〜
７０８基からなる配列、ＣＮＢ　ｒ　−１１ＦＢＡ■フ
ラグメントとして単離されるアミノ酸１３３〜１６３．
アミノ酸７９〜１１０からなるトリブチイック上フラグ
メントに相当する配列、およびアミノ酸配列１．１１〜
１２５で表わされるトリブチイックＸフラグメントに相
当する配列からなっている。これらの領域は第１図で下
線を付している。

抗原決定因子を表わす配列は、精製蛋白を消化させて単
離するか、遺伝子組換え技法または化学合成技法により
調製することができる。ここで云う決定因子とは、当該
抗原領域にはソ相当するものを意味するが、その機能が
残っている限り、付加的アミノ酸を含んでいてもよいし
、アミノ酸が若干少ない場合も意味する。これらの抗原
決定因子は５個々のペプチド、ペプチドの組合せ、線毛
フラグメントまたは精製線毛蛋白として、ワクチンの調
製に用いられる。そのワクチンに感応して生成される抗
体は、尿路感染症を惹起する大腸菌の二次感染を防御す
る作用を有する。

Ｂ、３　　ポリペプチド活性成分の調製本発明のワクチ
ンにおける活性成分である目的のポリペプチドは、その
サイズに応じて、３つの基本的な方法の１つにより、最
も簡便に調製される。

所望の配列が短かい場合、すなわち、大腸菌１１Ｕ３４
９Ｇａｅ−Ｇａｌ線毛（７）１１１〜１２５位量をなす
アミノ酸配列に相当するものである場合には、当該分野
で一般的に用いられている化学的合成法が便利である。

そのような方法は、例えば、マルゴリンら（Ｍａｒｇｏ
ｌｉｎ、　Ａ、ｅｔ　ａｌ　）、アン・し・ブ・バイオ
ケム（Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｂｅｍ、）（１９
７０）３９．８４］、に記載されている。これらの方法
では、はとんど、Ｃ末端アミノ酸を固形支持体に結合さ
せ、自己縮合を防ぐようにアミノ基を保護したアミノ酸
と順次反応させる。最初のカップリング後、そのＮＴ−
Ｉ２　保護基を離脱させ。

次のアミノ酸とのカップリングを行ない、これを順次繰
返す。この方法により、所望の鎖長さを有するポリペプ
チドが合成される。唯一の要件は所望のアミノ酸配列が
わかっていることである。

本発明のポリペプチドおよび蛋白は、線毛のより長い配
列の一部として、あるいはバクテリアの線毛蛋白として
得られるため１発酵培養物から定量的に得ることができ
る。それらは、線毛蛋白の精製、所望により、さらに各
種加水分解番どよるフラグメントの生成、さらにその所
望のフラグメントの精製により調製される。線毛蛋白の
精製、加水分解およびフラグメントの精製は常法により
行なわれる。

所望のポリペプチドまたは蛋白は合成法の代りに組換え
Ｄ　Ｎ’Ａ手法によっても得られる。所望のポリペプチ
ドまたは蛋白のＤＮＡ暗号配列を、遺伝子を発現しその
蛋白を生産し得る受容株を形質転換するのに適した発現
ベクターに結紮する。そのＤＮＡ暗号配列が充分短かい
場合には、当該分野で知られている方法により合成する
ことができる。より長い配列の場合はＣＤＮＡまたはゲ
ノム消化が用いられる。そのアミノ酸配列はここに開示
されているため、Ｇａｐ−ＧａＪ線毛蛋白産生株のｍ　
ＲＮ　Ａから調製されるｃＤＮＡ　ライブラリィをプロ
ーブするための適当な一本線ＤＮＡプローブを構築する
ことができる。別法として、ゲノムライブラリィをＧａ
ｐ−Ｇａ７１＋　線毛蛋白産生笑腸菌からの染色体を制
限酵素で消化して創生させ、それをＤＮＡのプローブに
用いる方法と同様にしてプローブさせるか、あるいは、
そのフラグメントを受容株への形質転換用発現ベクター
に直接挿入することができ、この場合、成功した形質転
換体はＧａｐ−Ｇａｐ　　レセプターに結合する蛋白の
生成でスクリーニングされる。この方法は、ハルら（Ｈ
ｕｌｌ　　ｅｔ　　ａＪ）　　（前掲〕により８０８４
９株の調製に用いられている− ゲノムまたはｃＤＮＡ　ライブラリィから導かれる場合
も、化学的方法によるオリゴヌクレオチド合成の場合も
、いずれも、その暗号配列は、所望の暗号配列の挿入の
ために便利な制限部位を含むプラスミドにおいて、バク
テリア宿主と適合するプロモーター配列の制御下にある
。そのような、プラスミドの典型例は、たとえ暢１．ミ
ネソタ大学のメツシングから入手し得るＰＣＯ２および
ＰＣＯ１３〔メツシングら（Ｍｅｓｓｉｎｇ　　ｅｔ　
ａＪ）　、ヌクレイツク・アシド・レス（Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ　　Ａｃ１ｄＲｅｓ　）（１９８１）、９，３０９を
参照〕、または二１−イングランド・バイオラプス、（
Ｎｅｗ　ＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ、）から入手し
得るｐ　ＢＮ２２２　　である。

好適なプロモーターは、たとえば、β−５ラクタマーゼ
（ペニシリナーゼ）およびラクトース（Ｉａｃ）プロモ
ーター系〔チャングら（Ｃｈａｎｇ　ｅｔ　ａｌ　）、
ネイチュ７（Ｎａｔｕｒｅ　）（１９７７）Ｌｕ、１０
５６）およびトリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系
〔ケデルら（Ｇｏｅｄｄｅｌ　、、Ｄ、　ｅｔ　ａｌ　
）　、、ヌクレイツク・アシド・レス（Ｎｕｃｌｅｉｃ
　　Ａｃ１ｄ　　Ｒｅｃ　）（１９８０）王。

４０５７）　　が含まれる。得られた発現ベクターをコ
ーエンら（、Ｃ：ｏｈｅｎ、　Ｓ、　Ｎ、　ｅｔ　ａＪ
　）　ｏ）塩化カルシウム法〔ブロック・ナトル・アカ
ド・サイ（Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ）　（１９
７２）１豆、２１１０）を用いて適当なバクテリア宿主
に形質転換させる。

″成功した形質転換体は、Ｇａｌ−’Ｇａｌ線毛を普通
に産生ずる組換え体やネガティブ株におけるよりもより
高濃度に所望のポリペプチドフラグメントを産生じ得る
。

Ｂ、　４　　ワクチン製剤活性・成分としてペプチド配列を含むワクチンの製剤は
、当該分野でよく知られているものである。

典型的な例は＝溶液または懸濁液のいずれかの注射剤で
あり、注射前に溶液または懸濁液に調製し得る固形製剤
としてもよい。また乳剤であってもよい。活性免疫成分
は、しばしば、その活性成分と適合する医薬上許容し得
る賦形薬と混合して用いる。好ましい賦形薬は、たとえ
ば、水、食塩水、デキストロース、グリセリン、エタノ
ールなど。

またはそれらの混合物である。さらに、所望により、そ
のワクチンは、少量の補助物質、たとえば湿潤剤、乳化
剤％ｐＨ緩衝剤、あるいはワクチンの効果を高めるだめ
のアジュバントを含んでいてもよい。このワクチンは、
通常、皮下注射または静脈注射などにより非経口的に投
与される。投与に適した他の製剤形としては、坐薬があ
り、また−合によっては経口投与形態の処方も含まれる
。

坐薬には、古くから用いられている結合剤、担体が用い
られ、たとえば、ポリアルカレンゲリコール類やトリグ
リセライド類が含まれる。そのような坐薬は活性成分を
０．５〜１０％、好ましくは１〜２％含む混合物から調
製される。経口投与用処方では、通常用いられている賦
形薬、たとえば。

医薬用マンニット、ラクトース、殿粉、ステアリン酸マ
グネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸
マグネシウムなどが含まれる。これらの組成物は、溶液
、懸濁液１錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性製剤、粉末
剤の形で用０られ、活性成分を１０〜９５％、好ましく
は２５〜７０％含有する。

当該分野でよく知られているように、本発明の蛋白は１
周囲の媒体あるいは沈殿または結晶化用媒体のｐＨによ
り中性または塩の形で存在する。

したがって１本発明のアミノ酸配列は、医薬上許容され
る塩、たとえば酸付加塩（ペプチドの遊離アミノ基とで
形成）を含み、それらは、塩酸、燐酸などの無機酸、ま
たは酢酸、修酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸にて
形成される。また、ナトリウム、カリウム、アンモニウ
ム、カルシウムまたは鉄の水酸化物などの無機塩基、あ
るいはインプロピルアミン、トリメチルアミン、１２−
エチルアミンエタノール、ヒスチジン、プロ力インなど
の有機塩基から導かれる遊離カルボキシル基で形成され
る塩も含む。

このワクチンは治療効果および免疫効果を達成する用量
にて、処方に適合した方法で投与される。

投与量は処置すべき患者、そげ患者の免疫系の抗体合成
能、希望する防護程度などに依存する。活性成分の正確
な投与量は実施者の判断にまかせられ５個々の個体によ
って異なる。しかしながら。

皮下注射または筋肉注射の好ましい投与量は５０〜５０
０μ！活性成分／個体の範囲である。経口用剤、直腸内
生薬、尿道まだは膣内投与製剤ではより大量、約１００
μｇ−１〜が用いられる。最初の投与には好ましい食餌
療法やブースターショットも用いられ得るが、最初の投
与後、１〜２週間してから第２回目以降の投与を行なう
のが最も一般的である。

Ｃ０実施例以下の記載は本発明を説明するものであって、これを限
定するものではない。６．１項にはＧａＪ　−Ｇａｌ線
毛蛋白質と尿路感染症の関連性を述べる。

ｃ、２項には有効成分の製造法を記載する。ｃ、３項に
は、抗体の惹起および宿主生物の保護を目的とする精製
Ｇａ（１−Ｇａｌ蛋白質および特異的抗原決定基含有ペ
プチド類の使用を記載する。

ｃ、Ｉ　　Ｇａ／−Ｇａｌ線毛蛋白質と尿路感染症培養
菌の相関性尿路感染症は一般的に腎孟腎炎によって代表させること
ができる。この疾患の過程では、細菌が尿路に侵入し、
粘膜に付着してそこにコロニーを作り、結局宿主に感染
を起す。

尿路のコロニー化の仲介に際し、Ｇａｌ−Ｇａｌ線毛が
もつ役割が、下記２種の方法、すなわち１〕種々の線毛
型を含む株を膀胱内（１ｎｔｒａｖｅｓｉｃｕｌａｒ〕
投与し、その後宿主内における存否を測定すること、お
よび２〕結合阻害剤の測定と組合わせて尿路中の線毛レ
セプター炭水化物の分布を測定することにより確証され
た。

ｃ、１．１　　膀胱内投与１６週令のＢａ１ｂ−ｃ系雌性マウスを用いた。

マウスを当初病原体不含の環境で飼育し、非病原性規定
胃腸内線菌叢を投与した。このマウスを用いた予備実験
は、腎が無菌であり、尿をコロニー化するダラム陰性菌
が存在しないことを示した。

エシェリヒア・コリ（Ｅ、　Ｃｏ１１）のＪ９６株。

８０８４９株、５Ｈ４３株またはＨ，８１０１株（組換
えベクターの受容体として用いられた非ピリ・エシェリ
ヒア・コリに１２の誘導株）の種々の数のコロニー形成
単位（ＣＦＵ）を含む接種物を、カテーテルを経て膀胱
内に投与し、カテーテルを除去した。最初の実験では、
トリブチカーゼ・ソイ・ブロス（ＴＳＢ）中３７℃で１
８時間−夜培養した菌から得た１０６ＣＦＵ（Ｊ９６に
ついては１０５ＣＦＵを１００μｌに製剤して用いた。

次の実験では、次第にＣＦＵレベルを増加させて投与し
た。

１０８以上のＣＦＵでは２５０μｅ容蝋を用い。

急性尿管還流をもたらした。

２日後、長期エーテル麻酔によりマウスを殺し、尿およ
び腎組織について細菌生長の有無を測定した。尿の測定
に際しては、膀胱領域をマツサージして尿をしぼり出し
、無菌の１０μａループをトリブチカーゼ・ンイ・アガ
ール（ＴＳＡ）または抗生物質添加ＴＳＡの接種に用い
た。プレートを３７℃で１８−２４時間インキュベート
し、視認できる増殖を等級づけして読み取った。観察さ
れた増殖物と投与株との同一性は１次のようにして確認
した。ＴＳＡプレート上に発育した生物のダラム陰性が
支配的であり、スライド凝集アッセイで家兎抗−Ｊ９６
．・Ｇ）、［ｌｌ［ｌ清（ＰＢＳ中１：１０００希釈）
により凝集するなら、培養菌はエシェリヒア・コリＪ９
６陽性である。クロラムフェニコール（２５μｇ　／　
ｍｌ　）添加ＴＳＡ上の生物のダラム陰性が支配的であ
り、スライド凝集アッセイでラテツクスヒーズ（Ｃｈｅ
ｍ　　Ｂｉｏｍｅｄ　）に吸着したＳｙｎＭａ　ｎ　−
Ｍａｎに凝集能をもち、家兎抗−５ｎ４Ｂ　線毛血清（
ＰＢＳ中１　：　１０００希釈）により凝集するなら、
培養菌は５Ｈ４８陽性と確認される。テトラサイクリン
（２０μｇ／ｄ）ＭＳ加ＴＳＡ上の生物のダラム陰性が
支配的であり、Ｇａｌ−Ｇａ／凝集能を有し、家兎抗−
ＨＵ３４Ｈ！毛血清（ＰＢＳ中１＋　１０００希釈）に
より凝集するなら、培養菌はＨＵ８４９　陽性と確認さ
れる。ＴＳＡ上の生物のダラム陰性が支配的であり、　
Ｓｙｎ　Ｍａｎ−ＭａｎまたはＧａ／−Ｇａｌ凝集能を
もたず、抗線毛血清で凝集しないなら、培養物はＨＢＩ
ＯＩ陽性と確認される。

腎を無菌的に摘出し、中骨盤を通る縦切片にし、切断面
をＴＳＡまたは抗生物質添加ＴＳＡ上に走らせた。アッ
セイの残りは前項の尿検体に関する記載と同様に行なっ
た。

結果を、摘記組織接種物に用いた株の存在について陽性
を示す動物数と試験動物数の比として。

下表に示す。

エシェリヒア・コリ腎孟腎炎のＢａｊｂ−Ｃマウス・モデル実験コロニー化株　　　線毛型　　接種物　　尿　　右腎　腎侵入Ｊ９
６　　　ＭＳｂよび　　ｉｏ５　４／７　　５／７　　
Ｎ０Ｇａｌ−Ｃａｌ　　１０’　　８／８　　９／９　
９／９ＳＨ４８ＭＳ　　　　１０６４／８　０／８０／
８１０８　ＮＤ　　　Ｏ／７　　ＮＤｌｏｌｏ　ＮＤ　　　５／７　　Ｎ０１０１２Ｎｌ）　　　６／６　０／３ＨＵ８４９　ＧａＪ−ＧａＪ　　１０６８／９　１０／
Ｉ）０／１０ＨＢＩＯＩ　ｆａ’Ｌ　　　　　１０６０
／１１　０１５０１５１０１２０１５　　０１５　　Ｎ
ＤＬ記の結果は、Ｇａｌ−Ｇａｌ　　線毛を含む株のみが
妥当なレベルの接種で腎のコロニー化に有効であること
を示す。

上記の表の末欄に示した腎浸入は、ヘマトキシリン／エ
オシンまたはギームザ染色により染色した切片の光学顕
微鏡検査により評価した。また、Ｊ９６を投与したマウ
スの腎侵入確認には、中益イムノペルオキシダーゼ組織
学的了ツセイを用いり〔エル・スターンバーガー、イム
ノサイトケミストリー（Ｉｍｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍ）　
、　１９７９年、第２版、ウィリー・アンド・サンズに
ューヨーク）発行〕。ＨＵ８４９株（Ｇａｐ−Ｇ’ａｌ
線毛含有）は腎１７）Ｄロ二−化に有効であるが、腎侵
入能はもたない。

実際は、腎侵入は野生型株（Ｊ９６）のみで成効した。

勿論、組換え株は指定線毛蛋白質のコード配列により形
質転換した非ビルレント性エシェリヒア・コリを表わす
のであるから、これは当然予期されるところである。他
のビルレンス因子は、この株から失なわれたと思われる
。

ＢＡＬＢ／ｃマウスの尿路を、ＭＳ線毛およびＧａｌ−
Ｇａｌ　　線毛の受容体、およびそれらと結合し得る可
溶性の尿中因子類に関して評価した。受容体上の線毛の
存在を評価するために、アビジン−ビオチン−パーオキ
サイド・コンプレックス・アッセイ法を用いた免疫組織
学的な染色法を採用した。この方法にはホルマリン固定
、パラフィン切片を用いた。

切片をキジロールで脱ロウ処理し５装量を変えたアルコ
ールで洗浄した後、スライド・ガラス上に置いた。この
スライド・ガラス上に１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡを含有する
ＰＢＳ（ＰＢＳＡ）で希釈した（ｌ：１０）健常なりギ
の血清（ＤＡＫＯアキュレート・ケミカル・コーホレー
テッド（ＤＡＫＯＡｃｃｕｒａｔｅ　　Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ　　Ｃｏｒｐ、）Ｉ−１ｉｃｋｓｕｉＪｌｅ　％Ｎ。

Ｙ、）を３０分間あふれさせることにより、非特異的な
抗血清の結合を減じた。プロッティングによって過剰の
血清を除去し、次いで、切片をウサギの抗−８ｙｎ　Ｇ
ａｌ−Ｇａｐまたは抗−５ｙｎＭａｎ−Ｍａｎ　　（Ｐ
Ｂ　ＳＡで１＝５０に希釈）のいずれかと−緒に室温で
１時間インキュベートした。スライドをＰＢＳ中で洗浄
した後、切片を、ビオチニル化（ｂｉｏｔｙｎｙｌａｔ
ｅｄルたヤギの抗−ウサギ抗体（ベクター・ラボラトリ
イズ（ＶｅｃｔｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　）　Ｂ
ｕｒｌｉｎｇａｍｅ、　ＣＡ）　ト共に室温で３０分間
インキュベートした。スライドをＰＢＳ中で繰返し洗浄
した後、ベクタスタイン（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ）１Ｍ
ＡＢＣ試薬を室温で６０分間作用させた後。

ＰＢＳ中で洗い流した。これらのスライドを％０．０１
％（■／ｖ）過酸化水素オヨび０．０５　％　（Ｗ／Ｖ
）ジアミノベンゼン四塩酸塩（シグマ）の０．０５Ｍト
リス緩衝液（ｐＨ７，２）中溶液に入れ、室温で５分間
展開させた。このスライドを蒸留水で完全に洗浄し、ヘ
マトキシリンによって対比染色した後、マウントした。

切片を光学顕微鏡の下で観察し、茶色の反応生成物の等
吸付けを行った。−欠航血清に代えて健常なウサギの抗
血清を用いて負対照とした。抗体特異性を、（１）−欠
航血清のホモローガス（１０％Ｗ／Ｖ　）ハプテンへの
吸収、および（２）ビオチニル化した抗体およびＡ　Ｂ
　Ｃ試薬と、ＰＢＳＡとの置換に基いて確認した。

受容体の分布を、膀胱、尿路および腎臓の各組織につい
て評価した。尿路中のと皮細胞および関連細胞は％ＭＳ
およびＧａ／−Ｇａｌ線毛の両者に対応する受容体を高
密度に示していた。これらの画線毛の型は同様であった
。

可能な尿可溶性の線毛受容体の測定は、ＥＬＩＳＡ阻害
法に従い、線毛の、それ自身の特異的な炭水化物受容体
に対する結合の阻害作用を調べることにより、行った。

その様な可溶性因子の存在は、ＭＳ線毛については確認
されたが、Ｇａ　１−Ｇａ　ｌ線毛については存在しな
いことがわかった。

これらの結果は、大腸菌による転移増殖がＧａｌ−Ｇａ
ｊ線毛によって媒介されること、そして、その理由は、
ＭＳ受容体が存在しないからではなく、それらの尿路上
皮細胞への付着能力がウロムコイド〔多分、高度にマン
ノシル化されたｒ　ａ　ｍｍ　−Ｈｏｒｓｆａｌｌ　　
タンパク質であろう〕によって阻害されることにある。

との観点と一致している。

尿路感染症に対するＧａｌ−Ｇａｌタンパク質の保護活
性を、以下の如くにして評価した二線上タンパク質を精
製し、ワクチンとして製剤化した後、このワクチンを一
群のＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスに接種した。血清中
の抗体生成を分析し、次いで野生型の感染源、大腸菌Ｊ
９６に対するチャレンジ試験により、その応答性を確認
した。

ｃ、２　　線毛蛋白の精製５Ｈ４８およびＨＵ８４９　株からの線毛を、プリント
ン、シー、トランス・ニューヨーク・アカデミ−畢オブ
ー１イｘ　、／　ｘ　（Ｂｒ１ｎｔｏｎ、　Ｃ８，Ｔｒ
ａｎｓ。

ＮＹ　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、）（１９６５）２７：１００
３の方法に基本的に従って、ＴＳＡ上、３７℃で１８時
間増殖させた生物から精製した。要約すると、菌体を水
冷０．００５Ｍ　　）ＩＪス緩衝液←ト＝←幹鮪（Ｔ−
緩衝液、ＰＨ８，３）　　中に収集した。線毛をツルバ
ルーオムニミキサー（５ｏｒｖａｌ　　Ｑｎｍｉｍｉｘ
ｅｒ％４℃、４００Ｏｒ、ｐ、ｍ、％３０分間）中で細
菌表面から刈りとり、脱線上された生物および破片を遠
心分離により除去した。Ｍｇ　Ｃｌ　２　を０．１Ｍ（
ＴＳＭ緩衝液）まで添加して、線毛を０．５Ｍト！Ｊス
緩衝液および０．１５　Ｍ　ＮａＣ＃　（ｐＨ７，０）
　中テ沈澱すせた。ついで、凝集した線毛フラグメント
を遠心分離して集め、このペレットをＴ−緩衝液に溶解
し、不溶性不純物を遠心分離により除去した。

線毛をＴＳＭ緩衝液中で再沈澱させ、遠心分離により可
溶性不純物から分離した。各々、ＴＳＭおよびＴ−緩衝
液中での沈澱および可溶化の６サイクル後、線毛調製物
を二回蒸留脱イオン水に対して充分に透析した。

得られた蛋白の純度を電子鏡検法、５ＤＳ−ＰＡＧＥ、
アミノ末端配列分析・およびリポ多糖類（ＬＰＳ）混入
レベルの評価により確認した。

電子鏡検のために、試料を、ホルムパル（Ｆｏｒｍｖａ
ｒ　）　　および炭素で被覆した銅グリッド上。

２％（Ｗ／Ｖ）　水性酢酸ウラニルでネガに染色した。

５ＤＳ−ＰＡＧＥはＬ／Ａす、ネイチ−ｙ　　Ｌａｅｍ
ｎｌｉ＋Ｎａｔｕｒｅ　）（１９７０）２２７：６８０
　　の方法に従って行なったｔ１ＭＳ線毛は、この条件
下、堆積ゲル中に入らないため、マクミカエル、ジエイ
・シイら、ジャーナル・オブ・バタテリオロジー（Ｍｃ
Ｍｉｃｈａｅｌ、　Ｊ、　Ｃ，、ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ　
、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、）（１９７９）１３８：９６
９　　の方法に従い、電気泳動前に、ＫＣｌ１の添加（
ｐＨ１，８）により解重合させた。ゲルを、蛋白検出の
ために米国ミズーリ州。

セントルイスのシグマ化学社製、コーマッシー・ブリリ
アント−ブルー／ｌ／　Ｒ２５Ｑ　（Ｃｏｏｍａｓｓ　
１ｅｂｒｉｌｌｉａｎｔ　　ｂｌｕｅ　　Ｒ２５Ｑ　（
Ｓｉｇｍａ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、。

Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　Ｍｏ、　）　　または銀〔モリ
ッセイ、ジエイ、アナリテイカル・バイオケミストリー
（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ、　　Ｊ、、Ａｎａｌ、　　Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、）（１９８２）１１７：３０７）で染色し
、また、ＬＰＳ混入の検出のため、過ヨウ素酸で酸化し
、ついで、銀染色〔ツアイ、ジー・エムら、アナリテイ
カル・バイオケミストリー（Ｔｓａｉ、　Ｇ、Ｍ、　、
　ｅｔ　ａｌ　、　、　Ａｎａｌ。

Ｂｉｏｃｈａｎ、）（１９８２）１１９：１１５）した
。

また、ワラブデカー・ブイら、ジャーナル・オブΦバイ
オロジカルφケミストリー（Ｖ％’ａｒａｖｄｅｋａｒ
　。

Ｖ、ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　
）　（１９５９）２３４：１９４５　　の方法を用い、
イー・コリ（Ｅ、ｃｏｌｉ）ＨＢＩＯＩおよびＪ９６株
から、ウエストファル。

オーら、メソッド・オブ・カーボハイドレート・ケミス
トリー（ＷｅｓｐｈａＪ　、　Ｏ，、ｅｔ、　ａｌ　、
　、　Ｍｅｔｈ。

Ｃａｒｂｏｈｙｄ、　Ｃｈｅｍ、　）＜　１９６５　）
ＪＬ　’　８０のフエノーール抽出法により調製された
ＬＰＳから導かれた標準曲線に対する５、４３ｎｍにお
ける光学的密度を比較することにより、５００〜１００
０／ｚｇの試料の２−ケト−３−デオキシオクタノエー
ト含量を測定することによ・す、ＬＰＳも評価した。

Ｎ−末端配列決定は、０．１Ｍクアドロール（Ｑｕａｄ
ｒａリプログラムを用い、米国カリフォルニア州、パロ
・アルドのベックマン・インストルーメンツ社（Ｂｅｃ
ｋｍａｎ　　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、　　Ｐａ１ｏ　
　Ａｌｔｏ。

Ｃａ　）　　のベックマン８９０Ｃ液相シーケンサ−（
Ｂｅｃｋｍａｎ　　８９ＱＣ１ｉｑｕｉｄ−ｐｂａｓｅ
　　５ｅｑｕｅｎｃｅｒ　）によル自動エドマン（Ｅｄ
ｔ＋ｍｎ　）分解によって行なった。各アミノ酸フェニ
ルチオヒダントイン（ＰＴＨ）誘導体を逆相高圧液体ク
ロマトグラフィーにより同定し、定量し、ガスー液体ク
ロマトグラフィーおよび／または薄層クロマトグラフィ
ーにより確認した。ＨＵ８４９より由来したＧａｌ−Ｇ
ａｌ線毛の完全な配列を、前記と同様にして配列を決定
した重複フラグメントを含有する複数の氷解物を用いて
決定した。

該精製線毛蛋白調製物は、ＲＮＡおよびＤＮＡの両方を
含まず、５ＤＳ−ＰＡＧＥによると、９７〜９９％均質
である。これらの調製物は、電子鏡検により、非線状構
造のほとんどない相同の糸状体からなることが確認され
た。ＬＰＳ含置装、２−ケト−３−デオキオクタノエー
ト（ＫＤＯ）検定によると０．１％以下、ゲル上のＬＰ
Ｓに相当する銀染色のないことによる評価から、０．０
１％以下であった。

Ｎ−末端アミノ酸配列は第２図に示すごとく、明瞭に決
定された。ＨＵ８４９線毛の完全なアミノ酸配列を第１
図に示す。

ｃ、３　　免疫法テストワクチンは前記のごとく調製した精製線毛を用い
、対照ワクチンはＨＢＩＯＩ　　およびＪ９６からの体
細胞〇−抗原から調製した。緩衝液対照も用いた。

５Ｈ４ｆ３　またはＨＵ８４９　　からの線毛ワクチン
ハ、完全フロイントのアジュバント１ｌＩｊで乳化した
１ｇ／ＰＢＳ（ＰＨ１，４）中％５０μｇの蛋白を用い
て調製した。得られた２ｔｎｌのワクチンを重複皮下お
よび筋肉内注射で投与した。Ｊ９６およびＨＢ１０１株
からの体細胞〇−抗原接種物は１０８個の加熱殺菌菌体
を１＠１ＰＢＳに懸濁し、得られた懸濁液を同容量のア
ジュバントで乳化１７て調製した。

Ｃ０３，ａ、　　チャレンジに対する抵抗６．１に記載
のように尿道内カテーテル挿入により、２週間後、動物
に１００ｊ（？中、１０６個ｃＦＵイー・コリＪ９６を
投与してチャレンジした。

２日後、マウスから瀉血し、抗体力価測定用の血清を得
、腎臓を摘出し、中央部を通して尖状に切断し、前記と
同様につＪ９６、集落形成を詳細に評価した。侵入を検
定するために、腎骨盤切片も。

前記と同様に、ヘマトキシリン／エオシンおよびギムザ
染色による染色ならびにイムノペルオキシダーゼ染色に
より、標準、的な光゛学的鏡検用に処理した。

結果を以下の表に示す。表１中には、マウス数に対する
、Ｊ９６集落形成または侵入の陽性を示す動物数の割合
を示しである。

イー・コリ腎孟腎炎の予防における種々の免疫原による
ワクチン投与試験このように、Ｇａｌ−Ｇａｌ　　＠１毛以外の蛋白を用
いたＪ９６惑染症ワクチン投与に対するチャレンジから
マウスを１防護する。試みは、テストした各基準に右い
て一様に失敗した。　（ｙａ　ｉ　−Ｇａ　ｌ　ｆ１１
毛ワクチン投与動物のみがＪ９６集落形成および腎侵入
から防護された。

ｃ、３．ｔ、免疫原性ＨＵ８４９　　からの線毛調製物で免疫したマウスの血
清におけるＧａｌ−Ｇａｌ線毛蛋白に対する抗体の存在
を、Ｇａｌ−Ｇａｌｌ　線毛に特異的なＩ　ｇＧ抗体に
ついての直接エライザ（ＥＬＩＳＡ）検定によって確認
した。この方法はツルマーク、エスラ、インフエクショ
ン・イムノロジー（Ｎｏｒｍａｒｋ、　Ｓ、　、　ｅｔ
ａｌ、、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｒｒｍｕｎ、　）（１９
８３）４１　：９４２により記載されている。該線毛を
投与したマウスにおいて、〉１　：　１００００　　の
抗Ｇａｌ−Ｇａｅ力価が得られ、防護と相関した。Ｊ９
６の集落形成のあった２匹のマウスにおいて、力価はわ
ずかにｌ：１００であった。

０．４　　抗原決定因子を使った別のワクチンＣ，２に
記載した様にして純化したＨ　ｔＪ　８９４タンパクの
オーバラップしているフラグメントを、例えばシトＤ　
コニル化（Ｃ１ｔｒｏｃｏｎｙｌａｔｉｏｎ　）により
修飾した線毛のトリプシン消化、部分的酸加水分解、カ
ルボキシペプチダーゼを使った酵素的および化学的消化
、および臭化シアン−〇ＦＢＡにより得た。得られた７
ラグメントの純化および分析にも、常法、例えばアフィ
ニティークロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー
、並びにイオン交換クロマトグラフィー、ゲル沖過およ
び電気泳動を使用した。

個々の７ラグメントの典型的な純化に於いては消化物を
Ｃ−１８逆相ＨＰＬＣカラムに入れ、０−８０％のアセ
トニトリル・リニアーグラジェントを使って、０，１％
トリフルオロ酢酸緩衝液で溶出した。タンパク含有画分
を、ピリジン／酢酸エステル緩衝液（ｐＨ６，４）中、
高圧を紙電気泳動法により更に精製した。

上記の方法で得たフラグメントを、Ｇａｌ−Ｇａｌ線毛
に対して生成せしめたウサギの抗血清を使用し、ウェス
タンプロット法またはＥＬＩＳＡ　分析法に基いて、抗
原決定因子として機能するか否かを分析した。

ＥＬＩＳＡ分析は、ノーマーク（Ｎｏｒｍａｒｋ）ら（
前記）によって記載されているものと実質的に同じであ
った。簡単のため、使い捨てミクロタイタープレート（
コーク・ポリスチレン（Ｃｏｏｋｅ　Ｐｏ１ｙ−３ｔｙ
ｒｅｎｅ　）　、　　９５　Ｕウェル）を使つ′た。こ
のウエルヲ、　０．　Ｉ　Ｎｐ酸ナナトリウム緩衝液ｐ
Ｈ９，６）中の１Ｉｇｌｕｔ被験フラグメント溶液１０
０μｌを用い、室温で１２時間増感（ｇ作〕させ、次い
でとのウェルを％Ｎａ（Ｊ／Ｂｒ１ｊ　中で３回洗浄し
た。

１：１０．０００　　に希釈したウサギの抗−Ｇａｌ！
−Ｇａｌｌ血清１００μｌを、このウェル中、３７℃で
３時間インキュベートした。次いでウェルをＮａＣ１／
Ｂｒ１ｊで３回洗浄し、ＮａＣ４／　Ｂｉｒｊで１：１
０００に希釈り、たｘｏｏμｌのアルカリホスファター
ゼ複合ヤギ抗−ウサギＩｇＧ（マイルスラボラトリー、
（ＭＨｅｓ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　）　、ヘ−
ｋ　スダ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ）、マリ−ランド（Ｍａｒ
ｙｌａｎｄ）　）を各ウェルに加え、３７℃で１時間イ
ンキュベートした。このプレートを再びＮａ（Ｊ／Ｂｒ
１ｊで洗浄し、０．１Ｍジェタノールアミン緩衝液（Ｐ
Ｈ１，８）中の１ｌｊｆ／／ｍｌのＰ−ニトロフェニル
ホスフェート（Ｓｉｇｍａ）を各ウェルに添加し、プレ
ートを３７℃で１０分間インキュベートした。ウェル当
り１０μｌの２　Ｎ　ＮａＯＨを加えて反応を停止させ
％ＭＲ５８０マイクローＥＬＩＳＡ　オートリーダー（
Ｄｙｎａｔｅｋ　）を使ッテ４０５０ｍに於ける吸光度
を測定した。

トーヴイン、エッチ（Ｔｏｗｂｉｎ、　Ｈ）ら（プロナ
ス（Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｊ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　）（ＵＳ
Ａ）　（１９７９）。

７６　！　４３５０）またはスワンンン、ジｘ　　（Ｓ
ｗａｎｓｏｎ。

Ｊ）ら（インフエクト　イミ：ｘ　ｙ　（Ｉｎｆｅｃｔ
　　Ｉｎｍｕｎ）（１９８２）３８１６８）により記載
されている様にしてウェスタン・プロットを行なった。

これらの分析で、４個の７ラグメントが陽性の結果を与
えた。即ち、ヒドロキシアミンによる消化によって得ら
れる１５位から７０位（それらを含む〕までの残基を含
んでいるアミノ酸配列：ＣＮＢｒ／ＨＦＢＡ消化によっ
て得られる１３３位から１６３位（それらを含む）まで
のアミノ酸配列、およびトリプシン消化によって得られ
る２つのフラグメント、即ち、７９−１１０位〔それら
を含ム〕間のアミノ酸配列（トリプシンフラグメント■
）並びに１１１位と１２５位（それらを含む）間のアミ
ノ酸配列（トリプシンフラグメントＸ）である。第１図
に於いて、これらの７ラグメントの配列には下線を施し
た。

従って、Ｃ３に記載した方法に従い、ただし、Ｇａｌ−
Ｇａｌ純化線毛タンパクの代りに上記のフラグメントの
いずれかを使って、尿路病原体に対して有効なワクチン
を製造し、投与することができる。

以上要約すると、尿路感染症は、この感染の原因となる
大腸菌に関連するＧａｌＩ−Ｇａ７？線毛によって特異
的に媒介されることがわかった。線毛ワクチンは、ヒト
の尿路感染症を引き起すことが知られている野生型感染
性細菌によって、対象哺乳動物がチャレンジ（対抗）さ
れることから、これらの動物を保護するのに有効である
。この１６３アミノ酸蛋白質のある部分が、この蛋白質
の抗原活性に関与していることがわかったので、これら
のフラグメントまたは純化タンパクを含んでいるワクチ
ンは、尿路感染の危険がある生物を免疫するのに使用す
ることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図はＨＵ８４９のＧａｐ−Ｇａｐミル線毛タンハク
ミノ酸配列および抗原決定因子を示す模式図であり、第
２図はＨＵ８４９から導かれたＧａｌ−Ｇａｌ　　結合
ピリンおよび５Ｈ４８からのＭＳピリンのＮ末端配列の
比較を示すアミノ酸配列の模式図であり、下線は保存部
位を表わす。特許出願人　ザ・ボード・オブ・トラステイーズ・オヴ
・ザーレランド・スタンフォード・ジュニア・ユニヴアーシティ代理人　弁理士前　山　　葆（外１名））ＩＵ１１４９
　　　Ｃ，ｌ−６ａｌ　　　　　　　Ａｌａ　　　Ｐｒ
ｏＴｈｒ　　　ｆｆ１ｓ　　　Ｐｒ６　　０１０８耳４
８　７η−ス　　　　　　　−　　　Ａｌａ　　　Ａｌ
ａＴｈｒ　　　Ｔｈｒ　　　ＶａｔＨＵ８４９　　　１
’ｒｏ　　Ｇｉｎ　　ｃｔｙ　　（ｌｌｎ　　ｌ　　Ｌ
７ｍ　　Ｖａｔ　　Ｔｈｒ　　Ｐｈａ　　Ａｓｎ　　ｆ
ｉ　　Ｔｈｒ　　Ｖａｔ　　ＶＡＮ　　＾１ｐ８Ｈ４８
τＩ＋ｒＶａｌｉｓｎＧｌｙ、９１χ、Ｔｈｒ’／ａｌ
ｌｌｌｓｌ’ｈｅＬｙｓ５」」−ＧｌｕＶａｌＶｉＬＡ
ｓ。２０　２１　２２　２］　　２４　２５　２６　２７　
２ｇ　　２９　３０　３１ＨＵ８４９　　ｕｓ　Ｐｃｏ
　Ｃｙｚ　Ｓ＠ｔ　Ｉｌａ　Ｓｅｒ　ＧＬｎ　Ｌ７露！
ｓｒ＾ｌａ　独Ｃ１ｎ８Ｍ４ａ　　Ａ１１ｌ　ＡＬａ迦
Ａ１ｍ　１ｌａｌ　Ａｍｐ　Ａｌｅ　Ｇｌｙ　（Ｔｈｒ
）ｖａｌ總畳匹３２３〕コ４コ５３６．７３８３９．４
０４１６２４３４４．４５６６ＨＵ８４９　　Ｓａｔ　
Ｉｌａ　Ａｓｐ　Ｐｈａ　虫ＧＬａ　ｔａｕ　Ｓａｒ　
Ｌｙｍ　Ｓａｔ　Ｐｈｅ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｇ
ｌｙ８Ｈ４８ＴｈｒＶａｔＧｉｎＬａｕ旦１ｔＧＡ！３
Ｖａｎ人ｙ客Ｔｈｒム１８ＴｈｒＩｍｕ人ＬａＧ１ｎＣ
１ｕＦＩＧ、　２

Claims

【特許請求の範囲】

（１）Ｇａｌ−Ｇａｌ線毛タンパクの少なくとも１個の
抗原決定因子に相当するアミノ酸配列の免疫保護的に有
効な量を含んでいる哺乳動物の尿路感染症の処置に有効
な線毛ワクチン。
（２）抗原決定因子が実質的に大腸菌ＨＵ８４９Ｇａｌ
−Ｇａｌ線毛タンパクの７９位から１１０位まで（７９
位と１１０位を含む）のアミノ酸配列からなる第（１）
項に記載のワクチン。
（３）抗原決定因子が実質的に大腸菌ＨＵ８４９Ｇａｌ
−Ｇａｌ線毛タンパクの１５位から７０位まで（１５位
と７０位を含む）のアミノ酸配列からなる第（１）項に
記載のワクチン。
（４）抗原決定因子が実質的に大腸菌ＨＵ８４９Ｇａｌ
−Ｇａｌ線毛タンパクの１３３位から１６３位まで（１
３３位と１６３位を含む）のアミノ酸配列からなる第（
１）項に記載のワクチン。
（５）抗原決定因子が実質的に大腸菌ＨＵ８４９Ｇａｌ
−Ｇａｌ線毛タンパクの１１１位から１２５位まで（１
１１位と１２５位を含む）のアミノ酸配列からなる第（
１）項に記載のワクチン。
（６）アミノ酸配列が大腸菌ＨＵ８４９Ｇａｌ−Ｇａｌ
線毛タンパクのアミノ酸配列からなる第（１）項に記載
のワクチン。
（７）アミノ酸配列が実質的に下記の式：【アミノ酸配列があります】で示される１６３アミノ酸ペプチドからなる第１項に記
載のワクチン。
（８）実質的に不純物を含んでいない大腸菌ＨＵ８４９
Ｇａｌ−Ｇａｌ線毛タンパク。
（９）実質的に第（７）項に示した１６３アミノ酸ペプ
チドを含んでいる組成物。
（１０）実質的に不純物を含んでいない、大腸菌ＨＵ８
４９Ｇａｌ−Ｇａｌ線毛タンパクの約７９位から１１０
位までのアミノ酸配列を含んでいる組成物。
（１１）実質的に不純物を含んでいない、大腸菌ＨＵ８
４９Ｇａｌ−Ｇａｌ線毛タンパクの約１５位から７０位
までのアミノ酸配列を含んでいる組成物。
（１２）実質的に不純物を含んでいない、大腸菌ＨＵ８
４９Ｇａｌ−Ｇａｌ線毛タンパクの約１３３位から１６
３位までのアミノ酸配列を含んでいる組成物。
（１３）実質的に不純物を含んでいない、大腸菌ＨＵ８
４９Ｇａｌ−Ｇａｌ線毛タンパクの約１１１位から１２
５位までのアミノ酸配列を含んでいる組成物。
（１４）保護を必要とする哺乳動物に、第（１）項に記
載のワクチンの有効量を投与することからなる該動物を
尿路感染症から保護する方法。