JPS61226660A - 安定化したビリルビン標準物質 - Google Patents
安定化したビリルビン標準物質Info
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- JPS61226660A JPS61226660A JP6783385A JP6783385A JPS61226660A JP S61226660 A JPS61226660 A JP S61226660A JP 6783385 A JP6783385 A JP 6783385A JP 6783385 A JP6783385 A JP 6783385A JP S61226660 A JPS61226660 A JP S61226660A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抱合型および／または非抱合型ビリルビンを含
有する安定化したビリルビン標準物質に関する。
゛ 技術背景と産業上の利用分野 血中のビリルビンはグルクロン酸と結合した抱合型ビリ
ルビンとビリルビンが遊離の状態で存在する非抱合型ビ
リルビンとして大別される。前者は結合しているグルク
ロン酸の数によりモノグルクロナイドビリルビンとジグ
ルクロナイドビリルビンに分けられる。通常抱合型ビリ
ルビン（ビリルビンコンジュゲート）は直接型ビリルビ
ン、非抱合型（遊離）ビリルビンは間接型ビリルビンと
呼ばれている。これは従来からビリルビン測定に利用さ
れているジアゾ反応性から名付けられたものである。即
ち抱合型ビリルビンはジアゾ試薬と直接反応するのに対
し、非抱合型ビリルビンはジアゾ試薬を加えても直接反
応しにくく、通常ダイフィリン、カフェイン、メタノー
ル等いわゆる直接化剤を作用させた後ジアゾ反応をする
ものである。
有する安定化したビリルビン標準物質に関する。
゛ 技術背景と産業上の利用分野 血中のビリルビンはグルクロン酸と結合した抱合型ビリ
ルビンとビリルビンが遊離の状態で存在する非抱合型ビ
リルビンとして大別される。前者は結合しているグルク
ロン酸の数によりモノグルクロナイドビリルビンとジグ
ルクロナイドビリルビンに分けられる。通常抱合型ビリ
ルビン（ビリルビンコンジュゲート）は直接型ビリルビ
ン、非抱合型（遊離）ビリルビンは間接型ビリルビンと
呼ばれている。これは従来からビリルビン測定に利用さ
れているジアゾ反応性から名付けられたものである。即
ち抱合型ビリルビンはジアゾ試薬と直接反応するのに対
し、非抱合型ビリルビンはジアゾ試薬を加えても直接反
応しにくく、通常ダイフィリン、カフェイン、メタノー
ル等いわゆる直接化剤を作用させた後ジアゾ反応をする
ものである。
このように血中ビリルビンは単一の型では存在していな
いので全ビリルビン濃度を測定し疾患の指標とするため
に、これらの型を分別定量することでより一層詳細な情
報を診断に提供しようとする努力がなされている。この
ような観点から、ビリルビン測定の精度１．迅速性、微
量化とからみながら各種測定法が開発、改良されている
。最近ビリルビンを特異的に酸化する酵素（ビリルビン
オキシダーゼ）が発見され（特公昭５８−１１１９４号
、特開昭５７−１５９４８７号、同５８−１４１７８３
号）、本酵素によるビリルビンの酵素的測定法が種々検
討されており、本発明者らも同酵素を用いる総ビリルビ
ン、直接ビリルビンの測定法を発明し、特許出願した（
特開昭５９−１２５８９９号、同５９−１３０１９８号
）。
いので全ビリルビン濃度を測定し疾患の指標とするため
に、これらの型を分別定量することでより一層詳細な情
報を診断に提供しようとする努力がなされている。この
ような観点から、ビリルビン測定の精度１．迅速性、微
量化とからみながら各種測定法が開発、改良されている
。最近ビリルビンを特異的に酸化する酵素（ビリルビン
オキシダーゼ）が発見され（特公昭５８−１１１９４号
、特開昭５７−１５９４８７号、同５８−１４１７８３
号）、本酵素によるビリルビンの酵素的測定法が種々検
討されており、本発明者らも同酵素を用いる総ビリルビ
ン、直接ビリルビンの測定法を発明し、特許出願した（
特開昭５９−１２５８９９号、同５９−１３０１９８号
）。
一方、これら測定に用いる標準物質は一般には遊離ビリ
ルビンを既知量含有させた物質が総ビリルビン（抱合型
ビリルビンと非抱合型ビリルビン）、抱合型ビリルビン
の定量に共通して使用されている。しかし本来はそれぞ
れ定量しようとするビリルビンの型を含有する標準物質
を使用すべきであり、この方面の考慮も最近され始めて
いる。特に酵素法には抱合型ビリルビン含有の標準物質
が不可欠である。
ルビンを既知量含有させた物質が総ビリルビン（抱合型
ビリルビンと非抱合型ビリルビン）、抱合型ビリルビン
の定量に共通して使用されている。しかし本来はそれぞ
れ定量しようとするビリルビンの型を含有する標準物質
を使用すべきであり、この方面の考慮も最近され始めて
いる。特に酵素法には抱合型ビリルビン含有の標準物質
が不可欠である。
従来技術
従来の標準物質は例えば、遊離ビリルビンとアルブミン
からなる凍結乾燥品のディトビリルビンコントロール（
Ｄａｄｅ社、Ｕ、Ｓ、Ａ、）や遊離ビリルビンと界面活
性剤からなる水溶性ビリルビン標準液であるビリルビン
スタンダード２０［日本商事（株）］があるが特に前述
の酵素法を用いてビリルビンに由来する黄色の変化（減
少）を分光学的に測定しようとする場合、通常の人血清
とは吸収スペクトルが異なり、結果的に正確度のズレを
生じ酵素法には適していない。また、抱合型ビリルビン
を測定しようとする場合には、これらの標準物質は非抱
合型ビリルビンしか含有していないため使用出来ない。
からなる凍結乾燥品のディトビリルビンコントロール（
Ｄａｄｅ社、Ｕ、Ｓ、Ａ、）や遊離ビリルビンと界面活
性剤からなる水溶性ビリルビン標準液であるビリルビン
スタンダード２０［日本商事（株）］があるが特に前述
の酵素法を用いてビリルビンに由来する黄色の変化（減
少）を分光学的に測定しようとする場合、通常の人血清
とは吸収スペクトルが異なり、結果的に正確度のズレを
生じ酵素法には適していない。また、抱合型ビリルビン
を測定しようとする場合には、これらの標準物質は非抱
合型ビリルビンしか含有していないため使用出来ない。
最近、人血清のスペクトルに近いものとして抱合型ビリ
ルビンとアルブミンを含むビリルビン標準物質が開示さ
れた（特開昭５９−７３７６７号）。
ルビンとアルブミンを含むビリルビン標準物質が開示さ
れた（特開昭５９−７３７６７号）。
このものは人血清のスペクトルに近く酵素法にも使用出
来ると思われるが、商品価値として不可欠の要素である
安定性についての詳細な開示がなく不明である。一方、
ビリルビンを安定化させる技術の開示もある（特開昭５
５−２０４９３号、同５９−１２２９５２号）。これは
水とアルキレンポリオールおよびスルフヒドリル化合物
にビリルビンを溶解し、０℃以下で保存することにより
凍結を避けて安定化させようとするものであるが、粘度
が高く使用しにくい欠点を有する。
来ると思われるが、商品価値として不可欠の要素である
安定性についての詳細な開示がなく不明である。一方、
ビリルビンを安定化させる技術の開示もある（特開昭５
５−２０４９３号、同５９−１２２９５２号）。これは
水とアルキレンポリオールおよびスルフヒドリル化合物
にビリルビンを溶解し、０℃以下で保存することにより
凍結を避けて安定化させようとするものであるが、粘度
が高く使用しにくい欠点を有する。
良吸へ艮蝮
このような現状に鑑み、本発明者らは抱合型および／ま
たは非抱合型ビリルビンを含有し安定性が高くかつ濁度
の低いビリルビン標準物質について鋭意研究の結果、ビ
リルビンのマトリックスとしてβ−リボ蛋白質を除去し
た血清（以下、β−フリー血清という）を用いれば濁度
が低くなるのみならず、驚くべきことに安定性に優れた
ビリルビン標準物質が可能であることを見出し本発明を
完成した。
たは非抱合型ビリルビンを含有し安定性が高くかつ濁度
の低いビリルビン標準物質について鋭意研究の結果、ビ
リルビンのマトリックスとしてβ−リボ蛋白質を除去し
た血清（以下、β−フリー血清という）を用いれば濁度
が低くなるのみならず、驚くべきことに安定性に優れた
ビリルビン標準物質が可能であることを見出し本発明を
完成した。
すなわち、本発明はβ−フリー血清と抱合型および／ま
たは非抱合型ビリルビンを含有することを特徴とする安
危化したビリルビン標準物質を提供するものである。
たは非抱合型ビリルビンを含有することを特徴とする安
危化したビリルビン標準物質を提供するものである。
発明の構成および効果
本発明によるビリルビン標準物質はヒトプール血清から
β−リボ蛋白質を超遠心分離法や沈澱分離法等で除去し
た血清に抱合型ビリルビンおよび／または非抱合型ビリ
ルビンを溶解して調製されβ−リボ蛋白質は低密度リボ
蛋白質（ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ １ｉｐｏｐｒｏｔｅ
ｉｎ、 Ｌ Ｄ Ｌ 、比重１．００６〜１．０６３、
平均濃度３６４ ｘ９／ｄ（１）と呼ばれているもので
あり、血清中のリボ蛋白質はβ−リポ蛋白質の他にα−
リボ蛋白質（高密度リボ蛋白質、ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉ
ｔｙｌ １ｐＯｐｒｏｔｅｉｎ、 ＨＤ Ｌ 、比重１
．０６３〜１．２００、平均濃度２３９ Ｒ９／ｄ（Ｄ
、プレβ−リボ蛋白質（超低密度リボ蛋白質、ｖｅｒｙ
ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌ１ｐｏｐｒｏｔｅｉｎ、
Ｖ Ｌ Ｄ Ｌ 、比重１．００６以下、平均濃度２
６０Ｒｇ／ｄ１２）およびカイロミクロン（比重１．０
以下、平均濃度θ〜５０ ｎ／ｄ（１）がある。すなわ
ち、β−リボ蛋白質は血清中のリボ蛋白質のうち中間的
な比重をもちかつ濃度的には最も多いリボ蛋白質フラク
ションであると言える。この上うなβ−リポ蛋白質を除
去した、本発明の標準物質のマトリックスとなるβ−フ
リー血清の調製は一般的に行なわれている方法で良く、
例えば溶液の密度差による超遠心分離法、ポリアニオン
例えばデキストラン硫酸やヘパリンによる複合体を沈澱
として分別する方法などがある。
β−リボ蛋白質を超遠心分離法や沈澱分離法等で除去し
た血清に抱合型ビリルビンおよび／または非抱合型ビリ
ルビンを溶解して調製されβ−リボ蛋白質は低密度リボ
蛋白質（ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ １ｉｐｏｐｒｏｔｅ
ｉｎ、 Ｌ Ｄ Ｌ 、比重１．００６〜１．０６３、
平均濃度３６４ ｘ９／ｄ（１）と呼ばれているもので
あり、血清中のリボ蛋白質はβ−リポ蛋白質の他にα−
リボ蛋白質（高密度リボ蛋白質、ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉ
ｔｙｌ １ｐＯｐｒｏｔｅｉｎ、 ＨＤ Ｌ 、比重１
．０６３〜１．２００、平均濃度２３９ Ｒ９／ｄ（Ｄ
、プレβ−リボ蛋白質（超低密度リボ蛋白質、ｖｅｒｙ
ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌ１ｐｏｐｒｏｔｅｉｎ、
Ｖ Ｌ Ｄ Ｌ 、比重１．００６以下、平均濃度２
６０Ｒｇ／ｄ１２）およびカイロミクロン（比重１．０
以下、平均濃度θ〜５０ ｎ／ｄ（１）がある。すなわ
ち、β−リボ蛋白質は血清中のリボ蛋白質のうち中間的
な比重をもちかつ濃度的には最も多いリボ蛋白質フラク
ションであると言える。この上うなβ−リポ蛋白質を除
去した、本発明の標準物質のマトリックスとなるβ−フ
リー血清の調製は一般的に行なわれている方法で良く、
例えば溶液の密度差による超遠心分離法、ポリアニオン
例えばデキストラン硫酸やヘパリンによる複合体を沈澱
として分別する方法などがある。
用いられる非抱合型ビリルビンは一般に市販されている
ビリルビン結晶（粉末）（Ｓｉｇｍａ社、ＩＣＮ社、Ｕ
、Ｓ、Ａ、他）が用いられる。一方、抱合型ビリルビン
はヒトまたは哺乳動物の血清や胆汁から単離したもの（
特開昭５６−２７６５６号）でも良いが、原料確保や複
雑な精製行程に問題がある。
ビリルビン結晶（粉末）（Ｓｉｇｍａ社、ＩＣＮ社、Ｕ
、Ｓ、Ａ、他）が用いられる。一方、抱合型ビリルビン
はヒトまたは哺乳動物の血清や胆汁から単離したもの（
特開昭５６−２７６５６号）でも良いが、原料確保や複
雑な精製行程に問題がある。
合成により得られる抱合型ビリルビンとしてジタウロビ
リルビン［ジルサら（Ｊ １ｒｓａ Ｍ、ｅｔ ａｔ）
；ネイチｙ−（Ｎａｔｕｒｅ）、 １７７ ：８９５
（１’９５６）］がポルフィリン社（Ｐ ｏｒｐｈｙｒ
ｉｎ、 Ｕ 、 Ｓ 、 Ａ 、）より市販されており
、これを用いて検討した結果、充分使用可能なことが判
明し、かつビリルビン酵素法にても通常の人血清の抱合
型ビリルビンと吸収スペクトル等同様の挙動を示すこと
がわかった。したがって、かかる抱合型ビリルビンを用
いることにより、本発明による標準物質によるビリルビ
ン測定を行なった場合、より適格な判定が可能である。
リルビン［ジルサら（Ｊ １ｒｓａ Ｍ、ｅｔ ａｔ）
；ネイチｙ−（Ｎａｔｕｒｅ）、 １７７ ：８９５
（１’９５６）］がポルフィリン社（Ｐ ｏｒｐｈｙｒ
ｉｎ、 Ｕ 、 Ｓ 、 Ａ 、）より市販されており
、これを用いて検討した結果、充分使用可能なことが判
明し、かつビリルビン酵素法にても通常の人血清の抱合
型ビリルビンと吸収スペクトル等同様の挙動を示すこと
がわかった。したがって、かかる抱合型ビリルビンを用
いることにより、本発明による標準物質によるビリルビ
ン測定を行なった場合、より適格な判定が可能である。
なお、本発明の標準物質には抱合型および非抱合型ビリ
ルビンのいずれか一方または両方を包含し得るが、いず
れの測定法にも適用できるとの観点から両方の型のビリ
ルビンを含有させるのが好ましい。
ルビンのいずれか一方または両方を包含し得るが、いず
れの測定法にも適用できるとの観点から両方の型のビリ
ルビンを含有させるのが好ましい。
本発明のビリルビン標準物質は、上記β−フリー血清に
抱合型および／または非抱合型ビリルビンを精製水に溶
解したものを加え、所望によりこれを凍結乾燥して調製
される。この製造法を、１０１１Ｑの規模にてさらに具
体的に説明すれば、つぎのとおりである。
抱合型および／または非抱合型ビリルビンを精製水に溶
解したものを加え、所望によりこれを凍結乾燥して調製
される。この製造法を、１０１１Ｑの規模にてさらに具
体的に説明すれば、つぎのとおりである。
まず、精製水７〜９ｖｔＱ、好ましくは８ｔｎＱに、炭
酸ナトリウム１４０〜１８０巧、好ましくはｌ５９ｊＩ
９を溶解し、これにビリルビン結晶（非抱合型、粉末）
１５〜５５１９、好ましくは３５．２ｏを加えて溶解さ
せ、ついで精製水で全量ＬＯｔ（ｌとして非抱合型ビリ
ルビン水溶液を調製する。上記炭酸ナトリウムはビリル
ビンの溶解を促進するために用いられ、そのほかに炭酸
カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムなど
の無機弱塩基が用いられる。
酸ナトリウム１４０〜１８０巧、好ましくはｌ５９ｊＩ
９を溶解し、これにビリルビン結晶（非抱合型、粉末）
１５〜５５１９、好ましくは３５．２ｏを加えて溶解さ
せ、ついで精製水で全量ＬＯｔ（ｌとして非抱合型ビリ
ルビン水溶液を調製する。上記炭酸ナトリウムはビリル
ビンの溶解を促進するために用いられ、そのほかに炭酸
カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムなど
の無機弱塩基が用いられる。
別に、精製水７〜９ｒｎＱに抱合型ビリルビン（例えば
、ジタウロビリルビン）６０〜１１５Ｂ、好ましくは１
０５ａｔ９を溶解し、精製水で全ｉｉ １０ ｙＱとし
て抱合型ビリルビン水溶液を調製する。 上記非抱合型
ビリルビン水溶液１．８〜２．２ｙｔＱ、好ましくは２
靜を、β−フリー血清７０〜９０ｘＱ、好ましくは８０
酎に加え、これに上記抱合型ビリルビン水溶液１．８〜
２ 、２ ＲＱ、好ましくは２ｚ（ｌを加え、最後にβ
−フリー血清を追加して全量１００ｘＣとして、目的と
する標準物質を得る。
、ジタウロビリルビン）６０〜１１５Ｂ、好ましくは１
０５ａｔ９を溶解し、精製水で全ｉｉ １０ ｙＱとし
て抱合型ビリルビン水溶液を調製する。 上記非抱合型
ビリルビン水溶液１．８〜２．２ｙｔＱ、好ましくは２
靜を、β−フリー血清７０〜９０ｘＱ、好ましくは８０
酎に加え、これに上記抱合型ビリルビン水溶液１．８〜
２ 、２ ＲＱ、好ましくは２ｚ（ｌを加え、最後にβ
−フリー血清を追加して全量１００ｘＣとして、目的と
する標準物質を得る。
この標準物質は、そのままの形で保存して用時所望量（
例えば２ ｘＱ）を取り出して使用に供することもでき
るが、保存中の安定性をさらに高めるために、該調製液
を２ 、０１ずつバイアルに分注し、凍結乾燥すること
もでき、この場合は用時精製水２ 、０ ＲＱを加えて
復水して使用に供する。
例えば２ ｘＱ）を取り出して使用に供することもでき
るが、保存中の安定性をさらに高めるために、該調製液
を２ 、０１ずつバイアルに分注し、凍結乾燥すること
もでき、この場合は用時精製水２ 、０ ＲＱを加えて
復水して使用に供する。
なお、上記調製法は非抱合型および抱合型ビリルビンの
両方を配合した場合であるが、いずれか一方のみを含む
標準物質も同様にして調製することができる。
両方を配合した場合であるが、いずれか一方のみを含む
標準物質も同様にして調製することができる。
上記のようにして得られる本発明の標準物質の濃度の検
定はビリルビン測定用試薬であるビリルビンＮ−ＡＡＢ
［日本商事（株）］を用いて直接（抱合型）ビリルビン
及び総ビリルビンを測定し、それぞれの濃度を決定し、
その数値を表示値として各種ビリルビン測定法の標準と
して使用する。なお、本発明の標準物質は、酵素法のほ
か、アルカリアゾビリルビンブルー法、エベリンマロイ
法などのジアゾ法にも好適に使用される。
定はビリルビン測定用試薬であるビリルビンＮ−ＡＡＢ
［日本商事（株）］を用いて直接（抱合型）ビリルビン
及び総ビリルビンを測定し、それぞれの濃度を決定し、
その数値を表示値として各種ビリルビン測定法の標準と
して使用する。なお、本発明の標準物質は、酵素法のほ
か、アルカリアゾビリルビンブルー法、エベリンマロイ
法などのジアゾ法にも好適に使用される。
本発明の標準物質の濁度および安定性について、比較例
として従来の血清またはアルブミンをマトリックスとす
る製品と比較実験した。
として従来の血清またはアルブミンをマトリックスとす
る製品と比較実験した。
実験１： 濁度試験
各製品の凍結乾燥前の溶液および凍結乾燥後精製水で復
水した溶液について、ビリルビンＮ−ＡＡＢ試薬での血
清ブランクを精製水を対照に、波長６００ｎｍにおける
光学密度を測定し、凍結乾燥前後の濁度を比較した。そ
の結果を第１表に示す。
水した溶液について、ビリルビンＮ−ＡＡＢ試薬での血
清ブランクを精製水を対照に、波長６００ｎｍにおける
光学密度を測定し、凍結乾燥前後の濁度を比較した。そ
の結果を第１表に示す。
なお、試験品としては、本発明法のものは後記実施例５
と同様にして調製した製品、従来法（１）のものはプー
ル血清添加製品、従来法（２）のらのは牛アルブミン添
加製品を用いた。
と同様にして調製した製品、従来法（１）のものはプー
ル血清添加製品、従来法（２）のらのは牛アルブミン添
加製品を用いた。
第１表
実験２：凍結乾燥品の保存安定性
上記実験ｌで用いたものと同じ試験品を用い、凍結乾燥
品の保存安定性を試験した。各凍結乾燥品を２５℃、３
７℃、５０℃にて各々２１日間保存したのち、精製水に
て復水し、ビリルビン含量を測定した。測定にはビリル
ビンＮ−ＡＡＢ試薬を用いた。
品の保存安定性を試験した。各凍結乾燥品を２５℃、３
７℃、５０℃にて各々２１日間保存したのち、精製水に
て復水し、ビリルビン含量を測定した。測定にはビリル
ビンＮ−ＡＡＢ試薬を用いた。
この測定値をもとに、アレニウス（Ａ ｒｒｈｅｎ４ｕ
ｓ）式によって、４℃で安定性を約１年半まで予測した
。その結果を第２表に示す。
ｓ）式によって、４℃で安定性を約１年半まで予測した
。その結果を第２表に示す。
第２表（凍結乾燥品の保存安定性）
実験３：溶解後の保存安定性
実際の検査に際しては、凍結乾燥品を復水したのち数日
間保存したのちに用いることもあり、このような溶解後
の保存安定性を調べるため、実験！で用いたものと同じ
試験品について精製水にて復水したのち、３日間保存し
、各保存日数毎にビリルビンＮ−ＡＡＢ試薬を用いてビ
リルビン含量を測定した。その結果を第３表に示す。
間保存したのちに用いることもあり、このような溶解後
の保存安定性を調べるため、実験！で用いたものと同じ
試験品について精製水にて復水したのち、３日間保存し
、各保存日数毎にビリルビンＮ−ＡＡＢ試薬を用いてビ
リルビン含量を測定した。その結果を第３表に示す。
上記試験結果からも明らかなように、本発明の標準物質
は凍結乾燥によっても濁度の増加もなく、また凍結乾燥
品および溶解後の保存安定性も従来法による製品に比べ
て相当優れており、ビリルビン標準物質としてきわめて
優れている。
は凍結乾燥によっても濁度の増加もなく、また凍結乾燥
品および溶解後の保存安定性も従来法による製品に比べ
て相当優れており、ビリルビン標準物質としてきわめて
優れている。
つぎに実施例により本発明をさらに具体的に説明する。
実施例１（抱合型および非抱合型を含む標準物質）
（ｉ）遊離（非抱合型）ビリルビン原液：炭酸ナトリウ
ム１６０ＪＩｇを精製水８ＪＩＱに溶解し、ビリルビン
結晶（ＩＣＮ社、Ｕ、Ｓ、Ａ、）３５ｍｇを加えて溶解
し、精製水を追加して全量１０ｘＱとする。
ム１６０ＪＩｇを精製水８ＪＩＱに溶解し、ビリルビン
結晶（ＩＣＮ社、Ｕ、Ｓ、Ａ、）３５ｍｇを加えて溶解
し、精製水を追加して全量１０ｘＱとする。
（ｉｉ）抱合型ビリルビン原液：抱合型ビリルビン（ジ
タウロビリルビン、ｐ □ｒｐｈｙｒｉｎ社、Ｕ、Ｓ、
Ａ、）１０５ｊＩｇを精製水に溶解し全量１０ｘ（ｌと
する。
タウロビリルビン、ｐ □ｒｐｈｙｒｉｎ社、Ｕ、Ｓ、
Ａ、）１０５ｊＩｇを精製水に溶解し全量１０ｘ（ｌと
する。
（ｉｉｉ ）β−フリー血清：臭化カリウムで比重を１
゜０６３に調節したヒトプール血清的１００ｍ（２を超
遠沈機で１５°Ｃ，４０，００Ｏｒ、ｐ、ｍ、で２２時
間分離した後、上層（β−リボ蛋白質画分）を捨て、下
層（β−リボ蛋白質を含まない画分）を採取する（超遠
心分離法） （１ｖ）ビリルビン標準物質の調製： 遊離ビリルビン原液２ｍＱをβ−フリー血清約８０ｘＱ
に加えよく混和し、次に抱合型ビリルビン原液２ｊＩＱ
を加えβ−フリー血清を追加して全量１００πＱとする
。
゜０６３に調節したヒトプール血清的１００ｍ（２を超
遠沈機で１５°Ｃ，４０，００Ｏｒ、ｐ、ｍ、で２２時
間分離した後、上層（β−リボ蛋白質画分）を捨て、下
層（β−リボ蛋白質を含まない画分）を採取する（超遠
心分離法） （１ｖ）ビリルビン標準物質の調製： 遊離ビリルビン原液２ｍＱをβ−フリー血清約８０ｘＱ
に加えよく混和し、次に抱合型ビリルビン原液２ｊＩＱ
を加えβ−フリー血清を追加して全量１００πＱとする
。
本標準液をビリルビンＮ−ＡＡＢで測定すると直接ビリ
ルビンＩ Ｉ 、 Ｉ ｕ／ｄ（ｌ！、総ビリルビン２
１゜９巧／ｄ（ｌを示した。
ルビンＩ Ｉ 、 Ｉ ｕ／ｄ（ｌ！、総ビリルビン２
１゜９巧／ｄ（ｌを示した。
実施例２（抱合型のみを含む標準物質）（ｉ）抱合型ビ
リルビン原液：実施例１のもの（ｉｉ）β−フリー血清
：実施例１のもの（ｉｉｉ）ビリルビン標準物質の調製
：抱合型ビリルビン原液２ｍＱをβ−フリー血清約８５
１に加え、よく混和し、β−フリー血清を追加して全量
１００ＪＩσとする。
リルビン原液：実施例１のもの（ｉｉ）β−フリー血清
：実施例１のもの（ｉｉｉ）ビリルビン標準物質の調製
：抱合型ビリルビン原液２ｍＱをβ−フリー血清約８５
１に加え、よく混和し、β−フリー血清を追加して全量
１００ＪＩσとする。
ビリルビンＮ−ＡＡＢでの測定結果は直接ビリルビン１
Ｏ１９肩９／ｄＱであった。
Ｏ１９肩９／ｄＱであった。
実施例３（遊離ビリルビンのみを含む標準物質）（ｉ）
遊離ビリルビン原液：実施例１のもの（ｉｉ）β−フリ
ー血清：実施例１のもの（ｉｉｉ）ビリルビン標準物質
の調製：遊離ビリルビン原液２ｙ、Ｑをβ−フリー血清
約８０ｊ１１２に加え、よく混和し、β−フリー血清を
追加して全量１ＯＯＩＩＱとする。
遊離ビリルビン原液：実施例１のもの（ｉｉ）β−フリ
ー血清：実施例１のもの（ｉｉｉ）ビリルビン標準物質
の調製：遊離ビリルビン原液２ｙ、Ｑをβ−フリー血清
約８０ｊ１１２に加え、よく混和し、β−フリー血清を
追加して全量１ＯＯＩＩＱとする。
ビリルビンＮ−ＡＡＢでの測定結果は直接ビリルビンＯ
ｙｔｉ／ｄＱ総ビリルビン７ 、１ ｘｇ／ｃｉＱであ
った。
ｙｔｉ／ｄＱ総ビリルビン７ 、１ ｘｇ／ｃｉＱであ
った。
実施例４（抱合型および非抱合型を含みβ〜フリー血清
の分画方法を変えたもの） （ｉ）遊離ビリルビン原液：実施例１のもの（ｉｉ）抱
合型ビリルビン原液：実施例１のもの（ｉｉｉ）−一フ
リー血清：ヒトプール血清５０ｘＱに０．１５Ｍ Ｎａ
Ｃｌ２溶液５０ｘＩ２を重層し、１５℃、９．０００ｘ
りで３０分間遠心する。上層（Ｖ Ｌ ＤＬ）を除き、
下層を集める。下層５０酎に１０％デキストラン硫酸溶
液０ 、５ ｙＩＱとＬＭ ＣａＣＱ溶液２ 、５ ｘ
Ｑを加え、３０分間静置する。６，０００ｘ２で１０分
間遠心し、上層を分取する（沈澱分離法）。
の分画方法を変えたもの） （ｉ）遊離ビリルビン原液：実施例１のもの（ｉｉ）抱
合型ビリルビン原液：実施例１のもの（ｉｉｉ）−一フ
リー血清：ヒトプール血清５０ｘＱに０．１５Ｍ Ｎａ
Ｃｌ２溶液５０ｘＩ２を重層し、１５℃、９．０００ｘ
りで３０分間遠心する。上層（Ｖ Ｌ ＤＬ）を除き、
下層を集める。下層５０酎に１０％デキストラン硫酸溶
液０ 、５ ｙＩＱとＬＭ ＣａＣＱ溶液２ 、５ ｘ
Ｑを加え、３０分間静置する。６，０００ｘ２で１０分
間遠心し、上層を分取する（沈澱分離法）。
（ｉｖ）ビリルビン標準物質の調製：
遊離ビリルビン原液２酎をβ−フリー血清約８０ｚＱに
加えよく混和し、次に抱合型ビリルビン原液２酎を加え
、β−フリー血清を追加して全量１００ｘ（ｌとする。
加えよく混和し、次に抱合型ビリルビン原液２酎を加え
、β−フリー血清を追加して全量１００ｘ（ｌとする。
ビリルビンＮ−ＡＡＢでの測定結果は実施例１のそれと
ほとんど同一であった。
ほとんど同一であった。
実施例５（凍結乾燥品の場合）
実施例１で調製したものを２ 、 ＯｍＱずつバイアル
に分注し凍結乾燥して凍結乾燥品を調製する。
に分注し凍結乾燥して凍結乾燥品を調製する。
この凍結乾燥品についてビリルビンＮ−ＡＡＢにてビリ
ルビン含量を測定し、凍結乾燥前の溶液と比較した回収
率を測った。その結果を第４表に示す。
ルビン含量を測定し、凍結乾燥前の溶液と比較した回収
率を測った。その結果を第４表に示す。
第４表
［注］
Ａ：凍結乾燥前の溶液
Ｂ：凍結乾燥後、精製水２ 、０ ｔｎ（ｌを加え復水
したもの Ｃ：復水時の容量差を補正した時の凍結乾燥回収率
したもの Ｃ：復水時の容量差を補正した時の凍結乾燥回収率
Claims (2)
- （１）β−リボ蛋白質を除去した血清と抱合型および／
または非抱合型ビリルビンを含有することを特徴とする
安定化したビリルビン標準物質。 - （２）抱合型ビリルビンがジタウロビリルビンであるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記載の安定
化したビリルビン標準物質。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6783385A JPS61226660A (ja) | 1985-03-30 | 1985-03-30 | 安定化したビリルビン標準物質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6783385A JPS61226660A (ja) | 1985-03-30 | 1985-03-30 | 安定化したビリルビン標準物質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61226660A true JPS61226660A (ja) | 1986-10-08 |
| JPH052106B2 JPH052106B2 (ja) | 1993-01-11 |
Family
ID=13356340
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6783385A Granted JPS61226660A (ja) | 1985-03-30 | 1985-03-30 | 安定化したビリルビン標準物質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61226660A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06294799A (ja) * | 1991-10-26 | 1994-10-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | 臨床診断に用いる安定した液体対照および／または 較正用血清 |
-
1985
- 1985-03-30 JP JP6783385A patent/JPS61226660A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06294799A (ja) * | 1991-10-26 | 1994-10-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | 臨床診断に用いる安定した液体対照および／または 較正用血清 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH052106B2 (ja) | 1993-01-11 |
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