JPS61182577A - 免疫学的妊娠診断試薬 - Google Patents
免疫学的妊娠診断試薬Info
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- JPS61182577A JPS61182577A JP2198885A JP2198885A JPS61182577A JP S61182577 A JPS61182577 A JP S61182577A JP 2198885 A JP2198885 A JP 2198885A JP 2198885 A JP2198885 A JP 2198885A JP S61182577 A JPS61182577 A JP S61182577A
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（以下、ｈＣＧと
略称する）に特異的で高感度な免疫学的妊娠診断試薬に
関するものである。
略称する）に特異的で高感度な免疫学的妊娠診断試薬に
関するものである。
ｈＣＧは妊娠と同時に絨毛細胞より分泌される糖蛋白ホ
ルモンの一種であり、プロゲステロンの分泌を促進する
。又、絨毛性筋、非絨毛性癌、胞状奇胎のときに見出さ
れる。
ルモンの一種であり、プロゲステロンの分泌を促進する
。又、絨毛性筋、非絨毛性癌、胞状奇胎のときに見出さ
れる。
したがって、ｈＣＧの検出は妊娠の早期診断とｈＣＧ分
泌性の癌の診断に有用であることは、よく知られている
。
泌性の癌の診断に有用であることは、よく知られている
。
ｈＣＧの測定に関しては、従来の生物学的検出法に代り
、近年ではｈＣＧに対する抗体を利用した免疫学的方法
が主流である。
、近年ではｈＣＧに対する抗体を利用した免疫学的方法
が主流である。
ｈＣＧの免疫学的検出法は大別すると、赤血球凝集阻止
反応、赤血球凝集反応、ラテックスＩＩｉ集阻止反応、
並びにラテックス凝集反応の４つに分けられ、凝集阻止
反応は担体にｈＣＧを感作した感作担体と抗ｈＣＧを組
合せたものであり、凝集反応は、抗ｈＣＧを担体に感作
したものを用いる検出法である。
反応、赤血球凝集反応、ラテックスＩＩｉ集阻止反応、
並びにラテックス凝集反応の４つに分けられ、凝集阻止
反応は担体にｈＣＧを感作した感作担体と抗ｈＣＧを組
合せたものであり、凝集反応は、抗ｈＣＧを担体に感作
したものを用いる検出法である。
しかし、現在市販されている妊娠診断試薬のほとんどは
、ｈｃＧ検出感度が１．０１０／ｍｌ程度であり、妊娠
の早期診断の目的には不充分な感度であった。 これは
ｈＣＧが他の下垂体糖蛋白ホルモンであるヒト黄体形成
ホルモン（以下、ＬＨと略称する）、ヒト卵胞刺激ホル
モン（以下、ＦＳＨと略称する）及びヒト甲状腺刺激ホ
ルモン（以下、ＴＳＨ１！−略称する）とα鎖サブユニ
ットが共通であることから、ｈＣＧを動物に免疫して得
た抗血清がｈＣＧ以外の他の下垂体ホルモンと交叉反応
性を有するために、高感度にすることが出来なかったこ
とに起因する。
、ｈｃＧ検出感度が１．０１０／ｍｌ程度であり、妊娠
の早期診断の目的には不充分な感度であった。 これは
ｈＣＧが他の下垂体糖蛋白ホルモンであるヒト黄体形成
ホルモン（以下、ＬＨと略称する）、ヒト卵胞刺激ホル
モン（以下、ＦＳＨと略称する）及びヒト甲状腺刺激ホ
ルモン（以下、ＴＳＨ１！−略称する）とα鎖サブユニ
ットが共通であることから、ｈＣＧを動物に免疫して得
た抗血清がｈＣＧ以外の他の下垂体ホルモンと交叉反応
性を有するために、高感度にすることが出来なかったこ
とに起因する。
しかるに、最近になってｈＣＧをそのα鎖サブユニット
、及びβ鎖サブユニットに種々のカオトロピック剤で開
裂させる技術が開発され、容易にβ鎖サブユニットを純
粋に分離精製することが可能となった。 ［Ｍｏｒｇ
ａｎ ＆ Ｃａｎｆｉｅｌｄ 、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏ−
１ｏｇｙ 、８８ ．１０４５ ．１９７１ ］従
って凝集阻止反応においては、ラテックス担体に、ｈＣ
Ｇβ鎖サブユニット（以下、β−ｈＣＧと略称する）を
感作し、抗ｈＣＧ抗血清と組合せることで、他の下垂体
ホルモンであるＬＨ，ＴＳＨ及びＴＳＨとの交叉反応を
考慮することなく、ｈＣＧを検出することが可能となっ
た。
、及びβ鎖サブユニットに種々のカオトロピック剤で開
裂させる技術が開発され、容易にβ鎖サブユニットを純
粋に分離精製することが可能となった。 ［Ｍｏｒｇ
ａｎ ＆ Ｃａｎｆｉｅｌｄ 、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏ−
１ｏｇｙ 、８８ ．１０４５ ．１９７１ ］従
って凝集阻止反応においては、ラテックス担体に、ｈＣ
Ｇβ鎖サブユニット（以下、β−ｈＣＧと略称する）を
感作し、抗ｈＣＧ抗血清と組合せることで、他の下垂体
ホルモンであるＬＨ，ＴＳＨ及びＴＳＨとの交叉反応を
考慮することなく、ｈＣＧを検出することが可能となっ
た。
しかしながら、今だその検出感度の点に於て、充分に満
足し得るまでには至っていないのが実状である。
足し得るまでには至っていないのが実状である。
本発明者らは、上記の点を考慮しつつ鋭意研究の結果、
本発明を完成させた。
本発明を完成させた。
本発明の目的とするところは、ｈＣＧの検出に於て、他
の下垂体ホルモンであるＬＨ，ＴＳＨ及びＴＳＨとの交
叉反応を出来るだけ防ぐためにラテックス担体にβ−ｈ
ＣＧを感作し、しかもその際、ラテックスの反応性を高
める為にラテックスとβ−ｈＣＧの間にスペーサーを挿
入することにより高感度で、しかも特異性の高い免疫学
的妊娠診断試薬を提供することにある。
の下垂体ホルモンであるＬＨ，ＴＳＨ及びＴＳＨとの交
叉反応を出来るだけ防ぐためにラテックス担体にβ−ｈ
ＣＧを感作し、しかもその際、ラテックスの反応性を高
める為にラテックスとβ−ｈＣＧの間にスペーサーを挿
入することにより高感度で、しかも特異性の高い免疫学
的妊娠診断試薬を提供することにある。
すなわち、本発明の免疫学的妊娠診断試薬は、β−ｈＣ
Ｇをスペーサーを介してラテックスに化学的に結合させ
たβ−ｈＣＧ感作ラテックスと抗ｈｃＧ抗血清との組合
せからなることを特徴とする。
Ｇをスペーサーを介してラテックスに化学的に結合させ
たβ−ｈＣＧ感作ラテックスと抗ｈｃＧ抗血清との組合
せからなることを特徴とする。
本発明に用いられるラテックス担体は、免疫学的に不活
性でβ−ｈＣＧと共有結合を形成し得る活性基、例えば
カルボキシル基、あるいはアミノ基を有しているものが
用いられ、粒径０．１〜１．０ ＃Ｌｍ、好ましくは０
．Ｉ ＮＯ，５ＩＬｍであり、表面荷電０．０３〜０．
７５ ＋ｓｅｑ ０００−／ ｇであり、好ましくは
０．０５〜０．１０ ＊ｅｑ ＣＯＯ−／ ｇのもの
が用いられ、一般にこれらのラテックスは１０〜５０％
の水性ラテックス懸濁液の形で商業的に入手し得るもの
である。
性でβ−ｈＣＧと共有結合を形成し得る活性基、例えば
カルボキシル基、あるいはアミノ基を有しているものが
用いられ、粒径０．１〜１．０ ＃Ｌｍ、好ましくは０
．Ｉ ＮＯ，５ＩＬｍであり、表面荷電０．０３〜０．
７５ ＋ｓｅｑ ０００−／ ｇであり、好ましくは
０．０５〜０．１０ ＊ｅｑ ＣＯＯ−／ ｇのもの
が用いられ、一般にこれらのラテックスは１０〜５０％
の水性ラテックス懸濁液の形で商業的に入手し得るもの
である。
スペーサーとしてはｐ−７ミノベンゾエート。
ヘキサメチレンジアミン、ε−アミノカブａン酸等があ
るが、本発明のβ−ｈＣＧ感作ラテックスに用いるスペ
ーサーとして感度を高める為に用いるにはへキサメチレ
ンジアミン、ε−アミノカプロン酸が好ましく、更には
ε−アミノカプロン酸が殊に好ましい。
るが、本発明のβ−ｈＣＧ感作ラテックスに用いるスペ
ーサーとして感度を高める為に用いるにはへキサメチレ
ンジアミン、ε−アミノカプロン酸が好ましく、更には
ε−アミノカプロン酸が殊に好ましい。
感作するβ−ｈＣＧは通常、精製したｈＣＧを尿素等の
カオトロピック剤で処理することによりα鎖サブユニッ
ト（α−ｈＣＧ）、及びβ鎖サブユニー２ト（β−ｈＣ
Ｇ）に開裂せしめ、イオン交換クロマトグラフィー、ゲ
ル口過等によりｎａｔｉｖｅ −ｈＣＧ、 ａ −ｈＣ
Ｇより分離して得られ、このβ−ｈＣＧはα−ｈＣＧの
混入が１％以下であることが好ましい、このような純粋
なβ−ｈＣＧは商業的にも入手しうるもので゛ある。
カオトロピック剤で処理することによりα鎖サブユニッ
ト（α−ｈＣＧ）、及びβ鎖サブユニー２ト（β−ｈＣ
Ｇ）に開裂せしめ、イオン交換クロマトグラフィー、ゲ
ル口過等によりｎａｔｉｖｅ −ｈＣＧ、 ａ −ｈＣ
Ｇより分離して得られ、このβ−ｈＣＧはα−ｈＣＧの
混入が１％以下であることが好ましい、このような純粋
なβ−ｈＣＧは商業的にも入手しうるもので゛ある。
本発明のβ−ｈＣＧ感作ラテックスは、ラテックスに１
−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）−カ
ルボジイミドメト−ｐ−トルエンスルホネートをカップ
リング剤として用いてスペーサーとしての＠−アミンカ
プロン酸を結合し、更にｌ−シクロへキシル−３−（２
−モルホリノエチル）−力ルポジイミドメト−ｐ−トル
エンスルホネートをカップリング剤として用いてβ−ｈ
ＣＧを結合して得られる。
−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）−カ
ルボジイミドメト−ｐ−トルエンスルホネートをカップ
リング剤として用いてスペーサーとしての＠−アミンカ
プロン酸を結合し、更にｌ−シクロへキシル−３−（２
−モルホリノエチル）−力ルポジイミドメト−ｐ−トル
エンスルホネートをカップリング剤として用いてβ−ｈ
ＣＧを結合して得られる。
一方１本発明の抗ｈＣＧ抗血清は、常法により精製した
ｈＣＧを家兎に免疫して得た抗血清を尿蛋白で吸収する
ことにより、ｈＣＧに特異的な抗血清として得られる。
ｈＣＧを家兎に免疫して得た抗血清を尿蛋白で吸収する
ことにより、ｈＣＧに特異的な抗血清として得られる。
以下に、実施例及び比較例を示し、本発明を更に詳細に
説明する。
説明する。
実施例
β−ｈＣＧ感作ラテックスの調製
カルボキシル化ラテックス（粒径０．４５５ ｐＬｒａ
）の１０％懸濁液１０腸ｌに対し、ＰＨ８−２の０．
２Ｍホウ酸緩衝液（以下、ＢＢＳ溶液と略称する）に（
−アミノカプロン酸を２５膳ｇ／ｍ１の割合に溶かした
溶液ヲ５０ｍＩ、 ＢＢＳ溶液に１−シクロヘキシル＝
３−（２−モルホリノエチル）−カルボジイミドメト−
ｐ−トルエンスルホネート 割合に溶かした溶液５０１を加え、３７℃で３時間攪拌
した。
）の１０％懸濁液１０腸ｌに対し、ＰＨ８−２の０．
２Ｍホウ酸緩衝液（以下、ＢＢＳ溶液と略称する）に（
−アミノカプロン酸を２５膳ｇ／ｍ１の割合に溶かした
溶液ヲ５０ｍＩ、 ＢＢＳ溶液に１−シクロヘキシル＝
３−（２−モルホリノエチル）−カルボジイミドメト−
ｐ−トルエンスルホネート 割合に溶かした溶液５０１を加え、３７℃で３時間攪拌
した。
遠心分離により上清を除去し、ＢＢＳ溶液で３回洗浄し
、ＢＢＳ溶液中に１０％のラテックス懸濁液とした。
、ＢＢＳ溶液中に１０％のラテックス懸濁液とした。
次に、β−ｈＣＧの０．１％ＢＢＳ溶液１．０１を加え
，よく攪拌後、ＢＢＳ溶液に１−シクロヘキシル−３−
（２−モルホリノエチル）−カルボジイミドメト−ｐ−
トルエンスルホネートを２５ｍｇ／■１の割合に溶かし
た溶液５０ｍｌを加え、３７℃で５時間攪拌した。
，よく攪拌後、ＢＢＳ溶液に１−シクロヘキシル−３−
（２−モルホリノエチル）−カルボジイミドメト−ｐ−
トルエンスルホネートを２５ｍｇ／■１の割合に溶かし
た溶液５０ｍｌを加え、３７℃で５時間攪拌した。
遠心分離により反応にあずからなかったβ−ｈＣＧを除
去し、ＢＢＳ溶液で３回洗浄の後，１％ウシ血清アルブ
ミンを含有したＢＢＳ溶液中に懸濁し、１％のβーｈＣ
Ｇ感作ラテックス懸濁液を調製した。
去し、ＢＢＳ溶液で３回洗浄の後，１％ウシ血清アルブ
ミンを含有したＢＢＳ溶液中に懸濁し、１％のβーｈＣ
Ｇ感作ラテックス懸濁液を調製した。
比較例１。
実施例で調製した本発明のβ−ｈＣＧ感作ラテックス（
以下，本発明のラテックス試薬と略称する）と従来のス
ペーサーを介せずに直接β−ｈｃＧを感作したラテック
ス（以下、直接結合ラテックス試薬と略称する）並びに
ラテックスに物理的にβ−ｈＣＧを感作したラテックス
（以下、物理結合ラテックス試薬と略称する）の各々に
ついて抗β−ｈＣＧ抗血清との反応性を比較した結果を
第１表に示す。
以下，本発明のラテックス試薬と略称する）と従来のス
ペーサーを介せずに直接β−ｈｃＧを感作したラテック
ス（以下、直接結合ラテックス試薬と略称する）並びに
ラテックスに物理的にβ−ｈＣＧを感作したラテックス
（以下、物理結合ラテックス試薬と略称する）の各々に
ついて抗β−ｈＣＧ抗血清との反応性を比較した結果を
第１表に示す。
抗β−ｈＣＧ抗血清は１００〜１２００倍の間で順次希
釈した９段回（１００，２００，４００，８００、１０
Ｇ０，２０００、４０００、８０００． １２０００）
の各濃度を用い、凝集を認めたものを＋、凝集が認めら
れないものを−で表示した。
釈した９段回（１００，２００，４００，８００、１０
Ｇ０，２０００、４０００、８０００． １２０００）
の各濃度を用い、凝集を認めたものを＋、凝集が認めら
れないものを−で表示した。
以下余白
第１表に示すとおり、本発明のラテックス試薬は従来の
他のラテックス試薬に比べ、抗ｈＣＧ抗血清との反応性
は極めて鋭敏であった。
他のラテックス試薬に比べ、抗ｈＣＧ抗血清との反応性
は極めて鋭敏であった。
比較例２゜
比較例１．で用いた各々のラテックス試薬と各希釈倍数
濃度の抗ｈＣＧ抗血清とを組合せて。
濃度の抗ｈＣＧ抗血清とを組合せて。
ｈＣＧを０〜２．０１Ｕ／＋ａｌの間で１０段回（０，
０，４，０，８，０，８，１，０，ｊ、２．１．４．１
．１３．１．８，２．０）の各濃度に添加した標準液と
反応させ、凝集像の有無、並びに凝集の程度を比較した
。
０，４，０，８，０，８，１，０，ｊ、２．１．４．１
．１３．１．８，２．０）の各濃度に添加した標準液と
反応させ、凝集像の有無、並びに凝集の程度を比較した
。
表中の数字は、凝集の程度を表わし、０は非凝集、１は
極めて弱い凝集、３は中位の凝集、５は強い凝集を表わ
し、２はｌと３の中間、４は３と５の中間を表わす、又
、数字の肩に′の付いたものは、その付けられた数字に
対応する凝集に僅かに及ばない凝集を表わす。
極めて弱い凝集、３は中位の凝集、５は強い凝集を表わ
し、２はｌと３の中間、４は３と５の中間を表わす、又
、数字の肩に′の付いたものは、その付けられた数字に
対応する凝集に僅かに及ばない凝集を表わす。
以下余白
第２表に示すとおり１本発明のラテックス試薬は従来の
他のラテックス試薬に比べ、抗ｈＣＧ抗血清の高希釈液
との組み合わせに於て、ｈＣＧ標準液濃度０１Ｕ／ｍｌ
での凝集像が強い。
他のラテックス試薬に比べ、抗ｈＣＧ抗血清の高希釈液
との組み合わせに於て、ｈＣＧ標準液濃度０１Ｕ／ｍｌ
での凝集像が強い。
にもかかわらず、ｈＣＧによって凝集の阻止が極めて明
瞭に起こることが認められた。
瞭に起こることが認められた。
これは、希釈率の高い抗血清はど、微量のｈｃＧで中和
され、ラテックスに感作したｈＣＧとの反応性を失うこ
とによるものと考えられる。
され、ラテックスに感作したｈＣＧとの反応性を失うこ
とによるものと考えられる。
すなわち、凝集阻止反応の系に於て、本発明によるラテ
ックス試薬はｈＣＧ検出感度が極めて鋭敏であることが
認められた。
ックス試薬はｈＣＧ検出感度が極めて鋭敏であることが
認められた。
比較例３゜
比較例１．と同様の各々のラテックス試薬を用いて、正
常妊娠の妊娠床１００例、異常妊娠の妊娠床１０例、及
び非妊娠尿１００例を被検体として測定した結果での的
中率を第３表に示す。
常妊娠の妊娠床１００例、異常妊娠の妊娠床１０例、及
び非妊娠尿１００例を被検体として測定した結果での的
中率を第３表に示す。
なお、各々のラテックス試薬の感度は、ｈｃｃＯＩｌｌ
／■１（ｌａ性時）での凝集像がほぼ一定になるよう調
整し、表中の検出感度のとおりとした。
／■１（ｌａ性時）での凝集像がほぼ一定になるよう調
整し、表中の検出感度のとおりとした。
第３表に示すとおり、本発明のラテックス試薬は、他の
ラテックス試薬に比べ、的中率が高く、信頼性の高いも
のであることが、認められた。
ラテックス試薬に比べ、的中率が高く、信頼性の高いも
のであることが、認められた。
以上、説ＬＪＩしたように本発明の免疫学的妊娠診断試
薬は、ラテックスとβ−ｈＣＧの間にスペーサーを介入
させたβ−ｈＣＧ感作ラテックスを用いることにより、
抗ｈＣＧ抗血清との反応性が極めて鋭敏となる。
薬は、ラテックスとβ−ｈＣＧの間にスペーサーを介入
させたβ−ｈＣＧ感作ラテックスを用いることにより、
抗ｈＣＧ抗血清との反応性が極めて鋭敏となる。
すなわち、抗ｈＣＧ抗血清の高希釈液でも強い凝集を示
すことから、凝集阻止反応による凝集の阻止も極めて明
瞭となり、被検体中の微量のｈＣＧの特異的、かつ高感
度な検出を可能とするものである。
すことから、凝集阻止反応による凝集の阻止も極めて明
瞭となり、被検体中の微量のｈＣＧの特異的、かつ高感
度な検出を可能とするものである。
以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）活性基を有するラテックス担体にスペーサーを介し
て、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβ鎖サブユニットをカ
ップリング結合せしめたラテックスと抗ヒト絨毛性ゴナ
ドトロピン抗血清の組合せからなる免疫学的妊娠診断試
薬 ２）スペーサーがε−アミノカプロン酸であることを特
徴とする特許請求の範囲第１項記載の免疫学的妊娠診断
試薬 ３）活性基を有するラテックス担体がカルボキシル化ラ
テックス粒子であることを特徴とする特許請求の範囲第
１項記載の免疫学的妊娠診断試薬
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2198885A JPS61182577A (ja) | 1985-02-08 | 1985-02-08 | 免疫学的妊娠診断試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2198885A JPS61182577A (ja) | 1985-02-08 | 1985-02-08 | 免疫学的妊娠診断試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61182577A true JPS61182577A (ja) | 1986-08-15 |
Family
ID=12070404
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2198885A Pending JPS61182577A (ja) | 1985-02-08 | 1985-02-08 | 免疫学的妊娠診断試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61182577A (ja) |
-
1985
- 1985-02-08 JP JP2198885A patent/JPS61182577A/ja active Pending
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