JPS61162175A - グルタチオン−ｓ−トランスフエラ−ゼの精製法 - Google Patents
グルタチオン−ｓ−トランスフエラ−ゼの精製法Info
- Publication number
- JPS61162175A JPS61162175A JP209385A JP209385A JPS61162175A JP S61162175 A JPS61162175 A JP S61162175A JP 209385 A JP209385 A JP 209385A JP 209385 A JP209385 A JP 209385A JP S61162175 A JPS61162175 A JP S61162175A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glutathione
- chromatography
- liver
- transferase
- gst
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- Granted
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、本発明者らによって見いだされた新しい胎盤
グルタチオン−８−トランスフェラーゼの精製法に関す
る。
グルタチオン−８−トランスフェラーゼの精製法に関す
る。
（従来の技術）
グルタチオン−３−）ランスフェラーゼ（以下ｒＧｓＴ
Ｊと略記する。）は、酵素番号を、ＥＣ２，５，１，１
８とする公知の酵素である。
Ｊと略記する。）は、酵素番号を、ＥＣ２，５，１，１
８とする公知の酵素である。
グルタチオンは、哺乳動物等の肝臓に存在しメルカプト
基を有するペプチドであって、生体内に侵入した異物を
体外に排泄する作用に関与し、医薬品として有用なる物
質である。ＧＳＴは、このグルタチオンの反応を触媒す
る作用を有する酵素である。
基を有するペプチドであって、生体内に侵入した異物を
体外に排泄する作用に関与し、医薬品として有用なる物
質である。ＧＳＴは、このグルタチオンの反応を触媒す
る作用を有する酵素である。
本発明者はこれまでＧＳＴとして知られている異なる６
種の多形性（アイソザイムＩｓｏｚｙｍｅ）Ａ２型、Ａ
Ｃ型及びＣ２型の３種からなるＡＣグループと、Ｌ２型
、ＢＬ型、及びＢ２型の３種からなるＢＬグループの、
２グループのいずれにも属さないＧＳＴを見いだし、か
つこの新規ＧＳＴが癌の診断及び治療に極めて有益であ
ることに想到し、特許出願した（特願昭５９−０５６９
７９号）。
種の多形性（アイソザイムＩｓｏｚｙｍｅ）Ａ２型、Ａ
Ｃ型及びＣ２型の３種からなるＡＣグループと、Ｌ２型
、ＢＬ型、及びＢ２型の３種からなるＢＬグループの、
２グループのいずれにも属さないＧＳＴを見いだし、か
つこの新規ＧＳＴが癌の診断及び治療に極めて有益であ
ることに想到し、特許出願した（特願昭５９−０５６９
７９号）。
上記の新規ＧＳＴは、哺乳動物の胎盤から初めて見いだ
されたがゆえにＧＳＴ−Ｐと名付けられた。このＧＳＴ
−Ｐはしかし、■妊娠１５日日のラット胎盤から採った
サイトソール（ＩＩＩ胞質＝ｃｙｔｏａｏｌ ）をＣＭ
−セファデックスＣ−５０カラムにかけ、以下ハイドロ
キシアパタイトカラム、グルタチオンアフィニティーカ
ラムを用いた連続的なりロマトグラフィ・−によって精
製し、かつ、その後混入している公知のＧＳＴ （ＡＣ
グループ及びＢＬグループ）を抗ＧＳＴ抗体とカップル
させたイミュノアフィニティーカラムを用いて除去する
という極めて煩雑な操作によって漸く精製取得すること
ができるものであった。
されたがゆえにＧＳＴ−Ｐと名付けられた。このＧＳＴ
−Ｐはしかし、■妊娠１５日日のラット胎盤から採った
サイトソール（ＩＩＩ胞質＝ｃｙｔｏａｏｌ ）をＣＭ
−セファデックスＣ−５０カラムにかけ、以下ハイドロ
キシアパタイトカラム、グルタチオンアフィニティーカ
ラムを用いた連続的なりロマトグラフィ・−によって精
製し、かつ、その後混入している公知のＧＳＴ （ＡＣ
グループ及びＢＬグループ）を抗ＧＳＴ抗体とカップル
させたイミュノアフィニティーカラムを用いて除去する
という極めて煩雑な操作によって漸く精製取得すること
ができるものであった。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明の目的は、上記のようなＧＳＴ−Ｐ取得の煩雑な
操作を払拭し、極めて簡便な操作のみによって目的とす
るＧＳＴ−Ｐを取得することにあった。
操作を払拭し、極めて簡便な操作のみによって目的とす
るＧＳＴ−Ｐを取得することにあった。
（問題点を解決するための手段）
本発明者らは上記Ｃ３Ｔ−Ｐの有用性に鑑み鋭意研究を
重ねた結果、胎盤に存在するＧＳＴ−Ｐが特に化学物質
によって誘起された哺乳動物の臓器における過形成小結
節に多く存在することを見いだし、その後研究を続行し
てこの過形成小結節から極めて有効な方法によって目的
とするＧＳＴ−Ｐを極めて高収率で得ることに成功し本
発明を完成したものである。
重ねた結果、胎盤に存在するＧＳＴ−Ｐが特に化学物質
によって誘起された哺乳動物の臓器における過形成小結
節に多く存在することを見いだし、その後研究を続行し
てこの過形成小結節から極めて有効な方法によって目的
とするＧＳＴ−Ｐを極めて高収率で得ることに成功し本
発明を完成したものである。
而して、本発明の要旨は、
■哺乳動物に発癌性化学物質を投与して肝臓に過形成小
結節を形成させ、 ■該肝臓を剔取してシュークロースの存在下にホモゲナ
イズし、 ■遠心分離、透析の操作を組合せつつグルタチオンアフ
ィニティクロマトグラフィー及びセルロースクロマトグ
ラフィーを通用するという、上記■、■及び■の一連の
操作を順に行うことにある。
結節を形成させ、 ■該肝臓を剔取してシュークロースの存在下にホモゲナ
イズし、 ■遠心分離、透析の操作を組合せつつグルタチオンアフ
ィニティクロマトグラフィー及びセルロースクロマトグ
ラフィーを通用するという、上記■、■及び■の一連の
操作を順に行うことにある。
本発明に係る哺乳動物としては、例えばラット等を挙げ
ることができる。
ることができる。
本発明に係る発癌性化学物質としては、例えばＤＥＮや
ＦＡＡを挙げることができる。
ＦＡＡを挙げることができる。
本発明においては哺乳動物の臓器のうち肝臓を施用する
のが望ましいが、その他の臓器も必要に応じて施用する
ことができる。
のが望ましいが、その他の臓器も必要に応じて施用する
ことができる。
本発明においては、臓器をホモゲナイズするに当たって
シュークロースの存在下になすことが望ましいが、シュ
ークロースを欠（方法によってもすることができる。
シュークロースの存在下になすことが望ましいが、シュ
ークロースを欠（方法によってもすることができる。
本発明における遠心分離、透析等は常法に従ってするこ
とができ、また適宜組合せ又は省略して実施することが
できる。
とができ、また適宜組合せ又は省略して実施することが
できる。
本発明に係るグルタチオンアフィニティクロマトグラフ
ィーとしては、例えばＳ〜へキシルグルタチオン−セフ
ァロースクロマトグラフィー等を挙げることができる。
ィーとしては、例えばＳ〜へキシルグルタチオン−セフ
ァロースクロマトグラフィー等を挙げることができる。
また、本発明に係るセルロースクロマトグラフィーとし
ては、例えばＤＥ５２セルロースクロマトグラフィーを
挙げることができる。
ては、例えばＤＥ５２セルロースクロマトグラフィーを
挙げることができる。
（作用）
本発明の方法によってＧＳＴ−Ｐが容易に取得すること
ができるのは、ＧＳＴ−Ｐが誘起された哺乳動物の過形
成小結節に多量に存在するからであり、それらが本発明
の方法によって極めて効率よく精製することができる。
ができるのは、ＧＳＴ−Ｐが誘起された哺乳動物の過形
成小結節に多量に存在するからであり、それらが本発明
の方法によって極めて効率よく精製することができる。
（発明の効果）
本発明の方法によれば、これまで必要とされていたハイ
ドロキシアパタイトカラムクロマトグラフィーは不要で
あり、かつ、煩雑なイミュノアフィニティカラムクロマ
トグラフィーも必要のないものとなった。
ドロキシアパタイトカラムクロマトグラフィーは不要で
あり、かつ、煩雑なイミュノアフィニティカラムクロマ
トグラフィーも必要のないものとなった。
本発明によれば、癌治療及び診断上極めて有用なるＧＳ
Ｔ−Ｐがたやすい方法によって取得することができるご
とになり、医学上また国民健康維持の上で極めて有用で
ある。
Ｔ−Ｐがたやすい方法によって取得することができるご
とになり、医学上また国民健康維持の上で極めて有用で
ある。
（実施例）
以下に本発明の方法の一例を示して、本発明をより詳細
に説明する。
に説明する。
体重１５Ｑ−１６０ｇのラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａ
ｗｌｅｙ ・雄）にＤＥＮ ２００醜ｇ／ｋｇと０．０
２％のＦＡＡを投与し、更にソルトとファーベーらの提
案に係る方法（「ネイチャーＪ （Ｎａｔｕｒｅ）
２６３巻、７０１−７０３頁（１９７６） ）によっ
て過形成小結節を形成せしめる。過形成小結節はＤＥＮ
投与投与−４〜６週間成され、大きなものは６〜８週間
後には肉眼で観察しうるようになる。
ｗｌｅｙ ・雄）にＤＥＮ ２００醜ｇ／ｋｇと０．０
２％のＦＡＡを投与し、更にソルトとファーベーらの提
案に係る方法（「ネイチャーＪ （Ｎａｔｕｒｅ）
２６３巻、７０１−７０３頁（１９７６） ）によっ
て過形成小結節を形成せしめる。過形成小結節はＤＥＮ
投与投与−４〜６週間成され、大きなものは６〜８週間
後には肉眼で観察しうるようになる。
過形成小結節を形成したラットの肝臓１９．７ｇを、５
倍量の０．２５Ｍシュークロース液とともにホモゲナイ
ズし、１０５．０００Ｇで４５分間遠心分離する。上滑
液を１Ｏｎ＋Ｍ燐酸第一カリウム溶液でｐＨ６，７で一
夜透析し、その後、燐酸緩衝液中ＣＭ−セファデックス
（３，５Ｘ８ｃｍ ）カラムクロマトグラフィーに掛け
る。素通りしたフラクションを集め、Ｓ−へキシルグル
タチオン−セファロース６Ｂカラム（１，２Ｘ８ｃｍ
）に掛ける。カラムを０．２Ｍの食塩を含む２００＋ｗ
ｌの１０ｍＭ ）リスバッファ（ｐＨ７，８）で洗浄す
る。５ｍＨのＳ−へキシルグルタチオンを含むトリスバ
ッファで溶出する。活性フラクションを１０ａ＋Ｍ ）
リスでｐＨ８，１で一夜透析し、その後ＤＥ−５２セル
ロースカラム（１，５Ｘ２０ｃｍ）に掛ける。Ｏから１
００＋＊Ｍの食塩濃度勾配で溶出させると、目的とする
ＧＳＴ−Ｐが食塩濃度１０＋ｗＭ付近で溶離される。こ
のものは二次元電気泳動法で二つのサブユニットＹｐｌ
（２６／６．７ ）とＹｐ２ （２６／６．３ ）
（分子量Ｘｌ０−３／等電点）からなることが７判明
した。
倍量の０．２５Ｍシュークロース液とともにホモゲナイ
ズし、１０５．０００Ｇで４５分間遠心分離する。上滑
液を１Ｏｎ＋Ｍ燐酸第一カリウム溶液でｐＨ６，７で一
夜透析し、その後、燐酸緩衝液中ＣＭ−セファデックス
（３，５Ｘ８ｃｍ ）カラムクロマトグラフィーに掛け
る。素通りしたフラクションを集め、Ｓ−へキシルグル
タチオン−セファロース６Ｂカラム（１，２Ｘ８ｃｍ
）に掛ける。カラムを０．２Ｍの食塩を含む２００＋ｗ
ｌの１０ｍＭ ）リスバッファ（ｐＨ７，８）で洗浄す
る。５ｍＨのＳ−へキシルグルタチオンを含むトリスバ
ッファで溶出する。活性フラクションを１０ａ＋Ｍ ）
リスでｐＨ８，１で一夜透析し、その後ＤＥ−５２セル
ロースカラム（１，５Ｘ２０ｃｍ）に掛ける。Ｏから１
００＋＊Ｍの食塩濃度勾配で溶出させると、目的とする
ＧＳＴ−Ｐが食塩濃度１０＋ｗＭ付近で溶離される。こ
のものは二次元電気泳動法で二つのサブユニットＹｐｌ
（２６／６．７ ）とＹｐ２ （２６／６．３ ）
（分子量Ｘｌ０−３／等電点）からなることが７判明
した。
最終収率は、３８％であった。
このものの活性はＣＯＭＢで１６．２ユニット／１５ｇ
５ＤＣＮＢで０．０５１ユニット／ｍｇであった。
５ＤＣＮＢで０．０５１ユニット／ｍｇであった。
Claims (3)
- （１）哺乳動物に発癌性化学物質を投与して肝臓に過形
成小結節を形成させ、 - （２）該肝臓を剔取してシュークロースの存在下にホモ
ゲナイズし、 - （３）遠心分離、透析の操作を組合せつつグルタチオン
アフィニティクロマトグラフィー及びセルロースクロマ
トグラフィーを適用し、 上記（１）、（２）及び（３）をこの順になすことを特
徴とする、新規グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ
の精製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP209385A JPS61162175A (ja) | 1985-01-11 | 1985-01-11 | グルタチオン−ｓ−トランスフエラ−ゼの精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP209385A JPS61162175A (ja) | 1985-01-11 | 1985-01-11 | グルタチオン−ｓ−トランスフエラ−ゼの精製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61162175A true JPS61162175A (ja) | 1986-07-22 |
| JPH031951B2 JPH031951B2 (ja) | 1991-01-11 |
Family
ID=11519733
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP209385A Granted JPS61162175A (ja) | 1985-01-11 | 1985-01-11 | グルタチオン−ｓ−トランスフエラ−ゼの精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61162175A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0645397A1 (en) * | 1993-09-03 | 1995-03-29 | Terrapin Technologies, Inc. | Glutathione analogs and paralog panels comprising glutathione mimics |
-
1985
- 1985-01-11 JP JP209385A patent/JPS61162175A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0645397A1 (en) * | 1993-09-03 | 1995-03-29 | Terrapin Technologies, Inc. | Glutathione analogs and paralog panels comprising glutathione mimics |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH031951B2 (ja) | 1991-01-11 |
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