JPS61132867A - エストリオ−ル３−サルフエ−トのイムノアツセイ - Google Patents
エストリオ−ル３−サルフエ−トのイムノアツセイInfo
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- JPS61132867A JPS61132867A JP59254591A JP25459184A JPS61132867A JP S61132867 A JPS61132867 A JP S61132867A JP 59254591 A JP59254591 A JP 59254591A JP 25459184 A JP25459184 A JP 25459184A JP S61132867 A JPS61132867 A JP S61132867A
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- sulfate
- antibody
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/743—Steroid hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
- C07J1/0051—Estrane derivatives
- C07J1/0066—Estrane derivatives substituted in position 17 beta not substituted in position 17 alfa
- C07J1/007—Estrane derivatives substituted in position 17 beta not substituted in position 17 alfa the substituent being an OH group free esterified or etherified
- C07J1/0074—Esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
- C07J41/0005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring the nitrogen atom being directly linked to the cyclopenta(a)hydro phenanthrene skeleton
- C07J41/0016—Oximes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
- C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
- C07J41/0072—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the A ring of the steroid being aromatic
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はエストリオール３−サルフェートのイムノアッ
セイに関する。
セイに関する。
エストリオール３−サルフェートは、妊娠母胎中におい
て胎児が積極的に合成する代謝産物であると報告されて
おり、妊娠過程の胎盤の診断あるい（よ胎児の機能（発
育）の診断において、そのエストリオール３−サルフェ
ートを測定することは極めて重要な意義を有する。しか
しながら、このエストリオール３−サルフェートの測定
は、従来、加水分解、加溶媒分解、溶媒抽出、クロマト
グラフィー分離など厄介な操作を必要とし、これを直接
測定するための信頼性の高い方法は、未だに開発されて
いない。
て胎児が積極的に合成する代謝産物であると報告されて
おり、妊娠過程の胎盤の診断あるい（よ胎児の機能（発
育）の診断において、そのエストリオール３−サルフェ
ートを測定することは極めて重要な意義を有する。しか
しながら、このエストリオール３−サルフェートの測定
は、従来、加水分解、加溶媒分解、溶媒抽出、クロマト
グラフィー分離など厄介な操作を必要とし、これを直接
測定するための信頼性の高い方法は、未だに開発されて
いない。
本発明者らは、臨床化学を含む多くの分野で高感度測定
法として注目を浴びているイムノアッセイによるエスト
リオール３−サルフェートの定量を企図し、種々研究を
重ねた結果、当該定量性確立の成否を分けるキーポイン
トとも言うべきエストリオール３−サルフェートに対し
て高い特異性を示す抗体の産生に成功し、この抗体と標
識エストリオール３−サルフェートを組み合わせて使用
することにより、加水分解、加溶媒分解、溶媒抽出、ク
ロマトグラフィー分離などの厄介な操作を必ずしも必要
としない、簡便かつ感度良好なエストリオール３−サル
フェートのイムノアッセイ法を完成するに至った。
法として注目を浴びているイムノアッセイによるエスト
リオール３−サルフェートの定量を企図し、種々研究を
重ねた結果、当該定量性確立の成否を分けるキーポイン
トとも言うべきエストリオール３−サルフェートに対し
て高い特異性を示す抗体の産生に成功し、この抗体と標
識エストリオール３−サルフェートを組み合わせて使用
することにより、加水分解、加溶媒分解、溶媒抽出、ク
ロマトグラフィー分離などの厄介な操作を必ずしも必要
としない、簡便かつ感度良好なエストリオール３−サル
フェートのイムノアッセイ法を完成するに至った。
本発明において、その最も特徴とする点はエストリオー
ル３−サルフェートに対して特異性を有する抗体生産の
ために、下式で表されるエストリオール３−サルフェー
トの６位における蛋白質複合体（以下、ｒＥＳＰ複合体
」と略す。）を使用する点にある： Ａ （ＣＨｔ）ｎ Ｃ０ＮＨ−Ｐ ［式中、Ａは＝Ｎ−０−または一〇−ＣＯ−１ｎは１〜
４の整数、−ＮＨ−Ｐは蛋白質からアミノ聾水素原子ｔ
ｌを除去した残基を表す。］このＥＳＰ［合体は本発明
者らが初めて合成した新規物質であって、たとえばＡが
＝Ｎ−０−１ｎがＬ −ＮＨ−Ｐがラン血清アルブミン
残基であるＥＳＰ複合体（【）はエストリオール・１６
゜１７−ジアジレートから以下の図式に従ってこれを合
成することが可能である： （■）０ ↓ （■）ＮＯＣＨ・Ｃ０ＯＨ ↓ （■、 Ｎ０ＣＨ・Ｃｏｏ）Ｉ Ｉ （、＞ Ｎ ＯＣＨ・０００Ｈ （Ｉ）、 Ｎ０ＣＨ・Ｃ０ＮＨ−Ｐ 〔式中、Ｒはアシル基、特にアセチル、プロピオニルの
ような低級アルカノイル基を示す。］まず、］６−オキ
ソエストリオール３，１６．１７−ドリアジレート（Ｖ
［）のアシル基を炭酸カリウムで処理するこいにより部
分的に加水分解させ、６−オキソエストリオール１８．
１７−ジアジレート（Ｖ）を生成させる。次いで、この
ジアジレートを〇−カルボキシメチルヒドロキシルアミ
ンとそれ自体既知の方法で縮合させることにより、式（
ＩＶ）のカルボキンメチルオキシム誘導体を生成させる
。こうして得られた式（ＩＶ）のカルボキシメチルオキ
シム誘導体をクロルスルポン酸もしくはその反応性誘導
体と反応させ、式（ＩＩ［）の３−サルフェ〜を加水分
解することにより、式（ＩＩ）のエストーール３−サル
フェートカルボキシメチルオキ４誘導体が得られる。こ
のカルボキシメチルオノム誘導体と適宜の蛋白質たとえ
ばウシ血清アイミン（ｉ３ＳＡ）とを水溶性カルボジイ
ミドたとｆｌ−エチル−３−（３−ツメチルアミノプロ
ピル）カルボジイミドを用いて温和な条件下に反応させ
ると、式（１）で表されるＥＳＰＩ合体が得られる。
また、たとえばＡｈ４−ＯＣＯ−１ｎが２、−ＮＨ−Ｐ
がウシ血清アルブミン残基であるＥＳＰ複合体（１）は
、前記６−オキソエストリオール３．１６．１７−ドリ
アンレート（Ｖｌ）を還元して得られる６−ヒドロキシ
エストリオール３．１６．１７−ドリアジレートに無水
コハク酸を反応させてヘミサクシネートを作り、次いで
３位のアシル基を炭酸カリウムで選択的に加水分解して
６−ヒドロキソエストリオール１６．１７−ファンレー
ト６−ヘミサクシネートを生成させ、以下上記と同様に
して３位のスルフェート化、１６位および１７位の加水
分解ならびに６位におけるアミド化を順次行うことによ
りこれを合成することが出来る。
ル３−サルフェートに対して特異性を有する抗体生産の
ために、下式で表されるエストリオール３−サルフェー
トの６位における蛋白質複合体（以下、ｒＥＳＰ複合体
」と略す。）を使用する点にある： Ａ （ＣＨｔ）ｎ Ｃ０ＮＨ−Ｐ ［式中、Ａは＝Ｎ−０−または一〇−ＣＯ−１ｎは１〜
４の整数、−ＮＨ−Ｐは蛋白質からアミノ聾水素原子ｔ
ｌを除去した残基を表す。］このＥＳＰ［合体は本発明
者らが初めて合成した新規物質であって、たとえばＡが
＝Ｎ−０−１ｎがＬ −ＮＨ−Ｐがラン血清アルブミン
残基であるＥＳＰ複合体（【）はエストリオール・１６
゜１７−ジアジレートから以下の図式に従ってこれを合
成することが可能である： （■）０ ↓ （■）ＮＯＣＨ・Ｃ０ＯＨ ↓ （■、 Ｎ０ＣＨ・Ｃｏｏ）Ｉ Ｉ （、＞ Ｎ ＯＣＨ・０００Ｈ （Ｉ）、 Ｎ０ＣＨ・Ｃ０ＮＨ−Ｐ 〔式中、Ｒはアシル基、特にアセチル、プロピオニルの
ような低級アルカノイル基を示す。］まず、］６−オキ
ソエストリオール３，１６．１７−ドリアジレート（Ｖ
［）のアシル基を炭酸カリウムで処理するこいにより部
分的に加水分解させ、６−オキソエストリオール１８．
１７−ジアジレート（Ｖ）を生成させる。次いで、この
ジアジレートを〇−カルボキシメチルヒドロキシルアミ
ンとそれ自体既知の方法で縮合させることにより、式（
ＩＶ）のカルボキンメチルオキシム誘導体を生成させる
。こうして得られた式（ＩＶ）のカルボキシメチルオキ
シム誘導体をクロルスルポン酸もしくはその反応性誘導
体と反応させ、式（ＩＩ［）の３−サルフェ〜を加水分
解することにより、式（ＩＩ）のエストーール３−サル
フェートカルボキシメチルオキ４誘導体が得られる。こ
のカルボキシメチルオノム誘導体と適宜の蛋白質たとえ
ばウシ血清アイミン（ｉ３ＳＡ）とを水溶性カルボジイ
ミドたとｆｌ−エチル−３−（３−ツメチルアミノプロ
ピル）カルボジイミドを用いて温和な条件下に反応させ
ると、式（１）で表されるＥＳＰＩ合体が得られる。
また、たとえばＡｈ４−ＯＣＯ−１ｎが２、−ＮＨ−Ｐ
がウシ血清アルブミン残基であるＥＳＰ複合体（１）は
、前記６−オキソエストリオール３．１６．１７−ドリ
アンレート（Ｖｌ）を還元して得られる６−ヒドロキシ
エストリオール３．１６．１７−ドリアジレートに無水
コハク酸を反応させてヘミサクシネートを作り、次いで
３位のアシル基を炭酸カリウムで選択的に加水分解して
６−ヒドロキソエストリオール１６．１７−ファンレー
ト６−ヘミサクシネートを生成させ、以下上記と同様に
して３位のスルフェート化、１６位および１７位の加水
分解ならびに６位におけるアミド化を順次行うことによ
りこれを合成することが出来る。
なお、Ｐ ＮＨ＊で表される蛋白質は通常免疫化学の
分野でハプテンに対してキャリヤーとして使用されてい
るものであれば格別の制限はないが、普通はアルブミン
、グロブリンなどを使用する。
分野でハプテンに対してキャリヤーとして使用されてい
るものであれば格別の制限はないが、普通はアルブミン
、グロブリンなどを使用する。
特にウシ血清アルブミンやウサギ血清アルブミンの使用
が好適である。
が好適である。
ＥＳＰＩＩ合体を使用してエストリオール３−サルフェ
ートに対する抗体を産生ずるには、ＥＳＰ複合体をを椎
動物（ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、マ
ウスなど）の生体に非経口投与し、該生体内に抗体を産
生せしめる。その後、該生体から体液（たとえば血液）
を採取し、必要に応じ不純物を除去する。通常は抗体を
含む血清、すなわち抗血清の形で使用する。
ートに対する抗体を産生ずるには、ＥＳＰ複合体をを椎
動物（ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、マ
ウスなど）の生体に非経口投与し、該生体内に抗体を産
生せしめる。その後、該生体から体液（たとえば血液）
を採取し、必要に応じ不純物を除去する。通常は抗体を
含む血清、すなわち抗血清の形で使用する。
このような抗体と組み合わせて使用する標識抗原として
は、エストリオール３−サルフェートを適宜の方法で標
識化したものが使用される。標識゛化のためには放射性
物質、酵素、蛍光物質、発光物質などが使用されてよい
。これらの標識化物質のエストリオール３−サルフェー
ト内への導入位置は、得られた標識抗原の免疫活性が保
持されている限り、特に制限はない。たとえば、３Ｈや
１′Ｃで標識化する場合には、エストリオール３−サル
フェート自体を構成する元素がそれらによって置換され
るから、標識抗原の免疫活性はエストリオール３−サル
フェート自体のそれと変わるところはないが、ｌｌ５Ｉ
や１３１１で標識化する場合には適宜のカップリング試
剤を介してエストリオール３−サルフェートに導入され
るから抗体との親和性がエストリオール３−サルフェー
トとは多少とも異なることになり、従って、免疫活性の
維持に注意を払うことが必要となる。
は、エストリオール３−サルフェートを適宜の方法で標
識化したものが使用される。標識゛化のためには放射性
物質、酵素、蛍光物質、発光物質などが使用されてよい
。これらの標識化物質のエストリオール３−サルフェー
ト内への導入位置は、得られた標識抗原の免疫活性が保
持されている限り、特に制限はない。たとえば、３Ｈや
１′Ｃで標識化する場合には、エストリオール３−サル
フェート自体を構成する元素がそれらによって置換され
るから、標識抗原の免疫活性はエストリオール３−サル
フェート自体のそれと変わるところはないが、ｌｌ５Ｉ
や１３１１で標識化する場合には適宜のカップリング試
剤を介してエストリオール３−サルフェートに導入され
るから抗体との親和性がエストリオール３−サルフェー
トとは多少とも異なることになり、従って、免疫活性の
維持に注意を払うことが必要となる。
具体的な標識手段としては種々の方法があるが、たとえ
ば放射性ヨードで標識する場合には、大別して直接法と
間接法がある。前者にはクロラミンＴ、塩化ヨードなど
の酸化剤を用いる方法、ラクトペルオキシダーゼなどの
酵素をもちいる方法などがある。また、後者は予めエス
トリオール３−。
ば放射性ヨードで標識する場合には、大別して直接法と
間接法がある。前者にはクロラミンＴ、塩化ヨードなど
の酸化剤を用いる方法、ラクトペルオキシダーゼなどの
酵素をもちいる方法などがある。また、後者は予めエス
トリオール３−。
サルフェートにカルボン酸、アミン、チオールなどの官
能基を導入し、これと放射性同位体で標識したヨード化
合物（ヨー化チラミン、ヨー化チロシン、ヨー化ヒスタ
ミン、ポルトンハンター試薬など）を過当な方法で結合
させるものである。典型的な放射性ヨードによる標識法
の一例を挙げると、６−オキソエストリオール３−サル
フェート０−カルボキシメチルオキシムと予め放射性ヨ
ードで標識したヨー化ヒスタミンを水溶性カルボジイミ
ドで縮合せしめ、目的とする放射性ヨード標識抗原を得
る。なお、ヨー化ヒスタミンに代え、ベンゼン環上にお
いて放射性ヨードで標識化されたβ−（４−ヒドロキシ
フェニル）エチルアミンやβ−（４−ヒドロキシフェニ
ル）アラニンメチルエステルなどが使用されてもよい。
能基を導入し、これと放射性同位体で標識したヨード化
合物（ヨー化チラミン、ヨー化チロシン、ヨー化ヒスタ
ミン、ポルトンハンター試薬など）を過当な方法で結合
させるものである。典型的な放射性ヨードによる標識法
の一例を挙げると、６−オキソエストリオール３−サル
フェート０−カルボキシメチルオキシムと予め放射性ヨ
ードで標識したヨー化ヒスタミンを水溶性カルボジイミ
ドで縮合せしめ、目的とする放射性ヨード標識抗原を得
る。なお、ヨー化ヒスタミンに代え、ベンゼン環上にお
いて放射性ヨードで標識化されたβ−（４−ヒドロキシ
フェニル）エチルアミンやβ−（４−ヒドロキシフェニ
ル）アラニンメチルエステルなどが使用されてもよい。
本発明によるイムノアッセイを被検者から採取した血清
（未知量のエストリオール３−サルフェート含有）につ
いて実施する場合を例に挙げて説明すれば以下の通りで
ある。
（未知量のエストリオール３−サルフェート含有）につ
いて実施する場合を例に挙げて説明すれば以下の通りで
ある。
すなわち、まずエストリオール３−サルフェートを含ま
ない血清に種々の量のエストリオール３−サルフェート
を添加して標準液を作る。この標準液の各々に対し、所
定量の前記した標識抗原を加え、更に前記した抗体を加
えて所定の操作下で抗原抗体反応を行う。自体常套の方
法（電気泳動法、ゲルろ適法、塩析法、吸着法、二抗体
法、固相法など）で、抗原抗体結合体（Ｂ）と抗体を結
合していない抗原部分（Ｆ）を分離し、ＢまたはＦの標
識活性を標識抗原製造時に採用した標識化法に応じて測
定し、上記と同様に操作を進め、最終的に上記した検量
線を参考にして、被検者血清サンプル中のエストリオー
ル３−サルフェート濃度を定める。なお、上記の抗原−
抗体反応に際しグルタミンを存在せしめることは本発明
によるイムノアッセイの精度を高めるうえで好ましい。
ない血清に種々の量のエストリオール３−サルフェート
を添加して標準液を作る。この標準液の各々に対し、所
定量の前記した標識抗原を加え、更に前記した抗体を加
えて所定の操作下で抗原抗体反応を行う。自体常套の方
法（電気泳動法、ゲルろ適法、塩析法、吸着法、二抗体
法、固相法など）で、抗原抗体結合体（Ｂ）と抗体を結
合していない抗原部分（Ｆ）を分離し、ＢまたはＦの標
識活性を標識抗原製造時に採用した標識化法に応じて測
定し、上記と同様に操作を進め、最終的に上記した検量
線を参考にして、被検者血清サンプル中のエストリオー
ル３−サルフェート濃度を定める。なお、上記の抗原−
抗体反応に際しグルタミンを存在せしめることは本発明
によるイムノアッセイの精度を高めるうえで好ましい。
以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明する。
ただし、これらの実施例中で使用した遊離ステロイド類
、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）およびウシチーグロブ
リン（ＢＣＧ）はノグマ・ケミカル社から購入し、他の
試薬は牛丼化学から購入した。
、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）およびウシチーグロブ
リン（ＢＣＧ）はノグマ・ケミカル社から購入し、他の
試薬は牛丼化学から購入した。
実施例１
エストリオール３−サルフェートに対する抗体の作成ニ
ー ６−オキソエストリオール３−サルフェート〇−カルボ
キシメチルオキシムＢ５Ａｌ１合体０．５履９を殺菌し
た等張の塩類溶液０．２５ｘＱに溶解し、フロイント完
全アジュバント０．２５村で乳化する。このエマルジョ
ンをモルモットの各肩甲骨の下および各大腿部に皮下注
射する。皮下注射は、最初の注射後の１４日目および２
８日目に繰り返し、その後３０日目毎に行う。動物から
ブースター注射後ｌＯ８目に採血する。血清を３５００
ｒｐ−で２０分間遠心分離し、−２５℃で貯蔵する。
ー ６−オキソエストリオール３−サルフェート〇−カルボ
キシメチルオキシムＢ５Ａｌ１合体０．５履９を殺菌し
た等張の塩類溶液０．２５ｘＱに溶解し、フロイント完
全アジュバント０．２５村で乳化する。このエマルジョ
ンをモルモットの各肩甲骨の下および各大腿部に皮下注
射する。皮下注射は、最初の注射後の１４日目および２
８日目に繰り返し、その後３０日目毎に行う。動物から
ブースター注射後ｌＯ８目に採血する。血清を３５００
ｒｐ−で２０分間遠心分離し、−２５℃で貯蔵する。
実施例２
固定化抗体の作成ニー
抗体をハーベイらの方法により（ハーベイら：Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｒｅｓ、 ３５．３００１〜３００８（１９７５
））ＣＮＢｒ −活性化セファローズ４Ｂ（ファルマシ
ア・ファイン・ケミカル社製）に結合させた。抗−エス
トリオール３−サルフェート抗血清を硫酸アンモニウム
５００ｇ／Ｑと混合し、室温に１０分間放置した後、２
５００ｒｐ−で２０分間遠心した。沈澱物を蒸留水（１
，０ｉｅ）に溶かし、０．０５ｍｏＱ／ｅホウ酸塩緩衝
液（ｐＨ８，０）に対して透析を行った。溶液は祖グロ
プリンフラクン３ンを与えた。ＣＮＢｒ−活性化セファ
ローズ４ Ｂ（２００ｍｇ）をＩ Ｏ−’ｎｏ（１／ｅ
塩酸溶液（１００ｍので洗浄した。５００９／Ｑ硫酸ア
ンモニウムで処理した抗血清（＋、Ｏｚｌりを０Ｉａｏ
ｅ／ｅ重炭酸ナトリウム緩衝ｉ１［（ｐＨ８，０：５０
ｘＩ２；０．５ａｏｉ！／１！塩化ナトリウム含有）で
希釈し、ゲルと混合し、４℃で一夜攪はんした。非結合
物質をカップリング緩衝液で洗い、残った活性基をｌ５
ｏ１２１５ｚり／−ルアミニ／（＋）Ｈ８，０）と１時
間反応させた。非共有的に吸着した蛋白質を除去するた
め、０ 、１ ｗｏｅ／１酢酸塩緩衝液（＋）Ｈ４，０
；５．ＯＪ１＋２；１．０１０１２／＋２塩化ナトリウ
ム含有）で洗い、更に０ 、１ ｇｏ（１／Ｑホウ酸塩
緩衝液（ｐＨ８，０；１．０ｓｏｅ／Ｑ塩化ナトリウム
含有）で洗うことから成る洗浄操作を３回にわたって繰
り返した。得られた固定化抗体は４℃において頗る安定
であり、結合親和性について敢ケ月間にわたり著しい変
化は認められなかった。
ｅｒ Ｒｅｓ、 ３５．３００１〜３００８（１９７５
））ＣＮＢｒ −活性化セファローズ４Ｂ（ファルマシ
ア・ファイン・ケミカル社製）に結合させた。抗−エス
トリオール３−サルフェート抗血清を硫酸アンモニウム
５００ｇ／Ｑと混合し、室温に１０分間放置した後、２
５００ｒｐ−で２０分間遠心した。沈澱物を蒸留水（１
，０ｉｅ）に溶かし、０．０５ｍｏＱ／ｅホウ酸塩緩衝
液（ｐＨ８，０）に対して透析を行った。溶液は祖グロ
プリンフラクン３ンを与えた。ＣＮＢｒ−活性化セファ
ローズ４ Ｂ（２００ｍｇ）をＩ Ｏ−’ｎｏ（１／ｅ
塩酸溶液（１００ｍので洗浄した。５００９／Ｑ硫酸ア
ンモニウムで処理した抗血清（＋、Ｏｚｌりを０Ｉａｏ
ｅ／ｅ重炭酸ナトリウム緩衝ｉ１［（ｐＨ８，０：５０
ｘＩ２；０．５ａｏｉ！／１！塩化ナトリウム含有）で
希釈し、ゲルと混合し、４℃で一夜攪はんした。非結合
物質をカップリング緩衝液で洗い、残った活性基をｌ５
ｏ１２１５ｚり／−ルアミニ／（＋）Ｈ８，０）と１時
間反応させた。非共有的に吸着した蛋白質を除去するた
め、０ 、１ ｗｏｅ／１酢酸塩緩衝液（＋）Ｈ４，０
；５．ＯＪ１＋２；１．０１０１２／＋２塩化ナトリウ
ム含有）で洗い、更に０ 、１ ｇｏ（１／Ｑホウ酸塩
緩衝液（ｐＨ８，０；１．０ｓｏｅ／Ｑ塩化ナトリウム
含有）で洗うことから成る洗浄操作を３回にわたって繰
り返した。得られた固定化抗体は４℃において頗る安定
であり、結合親和性について敢ケ月間にわたり著しい変
化は認められなかった。
実施例３
標識抗原の作成ニー
標識抗原としての［６，７−３Ｈ］−エストリオール３
−サルフｓ −） （４５、３Ｃｉ／ｍ５ｏ１２）は［
６，７−″Ｈ］−！ストリオール（５６、４Ｃｉ／ｍ５
ｏｅ）を雄性モルモット肝臓からのスルフオドランスフ
ェラーゼにより処理して調製された。
−サルフｓ −） （４５、３Ｃｉ／ｍ５ｏ１２）は［
６，７−″Ｈ］−！ストリオール（５６、４Ｃｉ／ｍ５
ｏｅ）を雄性モルモット肝臓からのスルフオドランスフ
ェラーゼにより処理して調製された。
［６，７−’Ｈ］−ｘｘトＩＪｔ−ル（５６，４Ｃｉ／
１ｓｏｎりは二ニー・イングランド・ヌクレア社製のも
のを用い、使用に先立ってシリカゲルＧにょる薄層クロ
マトグラフィーによって精製した。
１ｓｏｎりは二ニー・イングランド・ヌクレア社製のも
のを用い、使用に先立ってシリカゲルＧにょる薄層クロ
マトグラフィーによって精製した。
実施例４
エストリオール３−サルフェートの測定法ニー０ 、０
５１０１２／１２リン酸塩緩衝液（ｐＨ７，５；０．Ｉ
ＩＱ＞に溶解させた［’Ｈ］−エストリオール３−サル
フェート（５５００ｄｐｍ）を、０ 、０５１１ｏＱ／
（ｌリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，５）で希釈した固定化抗
体の均−Ｗｋｓ液（１：５００ｖ／ｖ：０．２畦）に加
え、室温に１５分間放置した。０．１ａｏ１２／ｌ！ト
リス−塩酸緩衝液（１）Ｈ８，３； ０．１ｍｏｇ／１
２グルタミン含有）で希釈した既知量の抗原を含む試料
、あるいは未知試料を、加え、４℃で１６時間インキエ
ベートした。
５１０１２／１２リン酸塩緩衝液（ｐＨ７，５；０．Ｉ
ＩＱ＞に溶解させた［’Ｈ］−エストリオール３−サル
フェート（５５００ｄｐｍ）を、０ 、０５１１ｏＱ／
（ｌリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，５）で希釈した固定化抗
体の均−Ｗｋｓ液（１：５００ｖ／ｖ：０．２畦）に加
え、室温に１５分間放置した。０．１ａｏ１２／ｌ！ト
リス−塩酸緩衝液（１）Ｈ８，３； ０．１ｍｏｇ／１
２グルタミン含有）で希釈した既知量の抗原を含む試料
、あるいは未知試料を、加え、４℃で１６時間インキエ
ベートした。
この混合物を２０００ ｘｙで２０分間遠心した。
上澄液０．２酎をバイアルにとり、プレイのシンチレー
タ−を加え、放射能をアロカＬＳＣ＝６７３液体シンチ
レーシタンスペクトロメータで測定した。この方法によ
り得られた結果についてスキャチャードプロットするこ
とによりエストリオール３−サルフェートに対する親和
性を測定したところ、第１図に示すように結合定数（Ｋ
ａ）４．３ＸｌＯ＠１２／−ｏｄであって、高い値を与
えた。未知試料の結果については後述する。
タ−を加え、放射能をアロカＬＳＣ＝６７３液体シンチ
レーシタンスペクトロメータで測定した。この方法によ
り得られた結果についてスキャチャードプロットするこ
とによりエストリオール３−サルフェートに対する親和
性を測定したところ、第１図に示すように結合定数（Ｋ
ａ）４．３ＸｌＯ＠１２／−ｏｄであって、高い値を与
えた。未知試料の結果については後述する。
実施例５
測定試料の希釈液の検討ニー
エストリオール３−サルフェートの血漿に対する非特異
的結合を減少させるため緩衝液に溶がした種々の物質を
血漿試料を含む抗原−流体混合物に添加し、検討した。
的結合を減少させるため緩衝液に溶がした種々の物質を
血漿試料を含む抗原−流体混合物に添加し、検討した。
すなわち、実施例４で示した測定試料の希釈液である０
、１ｓｏ１２／ＩＩ）リス−塩酸緩衝液に、グルタミン
、システィンおよびグリシンを加え、実施例４と同様の
方法で既知量のエストリオール３−サルフェートの測定
を行った。
、１ｓｏ１２／ＩＩ）リス−塩酸緩衝液に、グルタミン
、システィンおよびグリシンを加え、実施例４と同様の
方法で既知量のエストリオール３−サルフェートの測定
を行った。
その結果を第２図に示す。
血漿ニストロジエンの約９８％が蛋白質に結合すること
がローゼンタールらによって見出だされているが（ロー
ゼンタールら： Ｊ Ｃ１１ｎ Ｅｎｄｏｃｒｉ−ｎ
ｏｌ Ｍｅｔａｂ、、旦、８０５〜８１３（１９７２）
）、エストリオール３−サルフェートも血漿蛋白質に対
し、殆ど結合する。抗原−抗体反応は極性の高いエスト
リオール３−サルフェートを非特異的に吸着した血漿蛋
白質により阻止された。抗原抗体反応に対する影響は緩
衝液中における種々の物質を血漿試料に加えて試験され
た。０．１ａｏ（！／Ｑ）リス−塩酸緩衝液中における
０、１ｓｏＱ／Ｑグルタミンは第２図に示すように血漿
からエストリオール３−サルフェートを遊離せしめるの
に最善の物質であつた。
がローゼンタールらによって見出だされているが（ロー
ゼンタールら： Ｊ Ｃ１１ｎ Ｅｎｄｏｃｒｉ−ｎ
ｏｌ Ｍｅｔａｂ、、旦、８０５〜８１３（１９７２）
）、エストリオール３−サルフェートも血漿蛋白質に対
し、殆ど結合する。抗原−抗体反応は極性の高いエスト
リオール３−サルフェートを非特異的に吸着した血漿蛋
白質により阻止された。抗原抗体反応に対する影響は緩
衝液中における種々の物質を血漿試料に加えて試験され
た。０．１ａｏ（！／Ｑ）リス−塩酸緩衝液中における
０、１ｓｏＱ／Ｑグルタミンは第２図に示すように血漿
からエストリオール３−サルフェートを遊離せしめるの
に最善の物質であつた。
エストリオール３−サルフェートの非特異性吸着に対す
るこの問題は大量のグルタミンを緩衝液溶液として添加
することにより、特異性の高い抗体を使用することによ
り、およびインキュベーションを充分な時間行うことに
より解決された。
るこの問題は大量のグルタミンを緩衝液溶液として添加
することにより、特異性の高い抗体を使用することによ
り、およびインキュベーションを充分な時間行うことに
より解決された。
実施例６
種々のステロイドとの交差反応試験ニー（特異性の確認
） 交差反応は抗体に対する標識エストリオール３−サルフ
ェート結合の５０％阻止を示すに必要な非標識エストリ
オール３−サルフェートの各ステロイドに対する質量比
を計算することによって決定される。結果を第１表に示
す。
） 交差反応は抗体に対する標識エストリオール３−サルフ
ェート結合の５０％阻止を示すに必要な非標識エストリ
オール３−サルフェートの各ステロイドに対する質量比
を計算することによって決定される。結果を第１表に示
す。
本抗体の特異性は、抗体の結合サイトに対する類似のス
テロイドとの競合性の試験結果を示す第１表から明らか
である。
テロイドとの競合性の試験結果を示す第１表から明らか
である。
抗体はエストリオール３−サルフェートに対し非常な特
異性を示し、セファローズ４Ｂ上に固定化されたとき他
のニストロジエンサルフェートとの交差反応性につき若
干の改善を示し、デヒドロエピアンドロステロンサルフ
ェート（０，７７％）、コレステロールサルフェート（
０，０８１％）お上びエストリオール（０，０３３％）
以外は他のステロイド複合体や遊離ステロイドに対し何
等の交差反応性も示さない。
異性を示し、セファローズ４Ｂ上に固定化されたとき他
のニストロジエンサルフェートとの交差反応性につき若
干の改善を示し、デヒドロエピアンドロステロンサルフ
ェート（０，７７％）、コレステロールサルフェート（
０，０８１％）お上びエストリオール（０，０３３％）
以外は他のステロイド複合体や遊離ステロイドに対し何
等の交差反応性も示さない。
実施例７
精度試験ニー
（感度試験）
検量曲線は固定化抗体１：５００希釈液を使用し、活性
炭で処理した健常人男性血漿に添加した種々の量のエス
トリオール３−サルフェートに対する標識エストリオー
ル３−サルフェートの結合％をプロットすることにより
得られた（第３図参照）。測定限界はｔｓｐｇであり、
エストリオール３−サルフェートは２０〜１１０００ｐ
の範囲で測定し得る。
炭で処理した健常人男性血漿に添加した種々の量のエス
トリオール３−サルフェートに対する標識エストリオー
ル３−サルフェートの結合％をプロットすることにより
得られた（第３図参照）。測定限界はｔｓｐｇであり、
エストリオール３−サルフェートは２０〜１１０００ｐ
の範囲で測定し得る。
（回収率試験）
健常人男性血漿をノーリットＡで処理し、水で希釈し、
希釈血漿０．１１７＋を非標識エストリオール３−サル
フェート０．５０．１００または４００ｐｇ含有溶液に
加えた。希釈固定化抗体および標識化合物と共にインキ
ュベージコン後、遊離および結合ステロイドを遠心法に
よって分離し、１１り記した方法に従って放射性を測定
し、回収率試験を行った。すなわち、健常人男性血漿に
添加したエストリオール３−サルフェートの既知量を回
収することにより試験された。４レベルについて評価し
た回収データは第■表に示すように満足すべきものであ
った。
希釈血漿０．１１７＋を非標識エストリオール３−サル
フェート０．５０．１００または４００ｐｇ含有溶液に
加えた。希釈固定化抗体および標識化合物と共にインキ
ュベージコン後、遊離および結合ステロイドを遠心法に
よって分離し、１１り記した方法に従って放射性を測定
し、回収率試験を行った。すなわち、健常人男性血漿に
添加したエストリオール３−サルフェートの既知量を回
収することにより試験された。４レベルについて評価し
た回収データは第■表に示すように満足すべきものであ
った。
（変動率試験）
変動率試験として妊娠被検者の血清を用いて、実施例４
の方法によりエストリオール３−サルフェートを測定し
、イントラアッセイおよびインターアッセイの変化を検
討した。イントラアッセイとインターアッセイの変化を
第■表に示す。
の方法によりエストリオール３−サルフェートを測定し
、イントラアッセイおよびインターアッセイの変化を検
討した。イントラアッセイとインターアッセイの変化を
第■表に示す。
ラジオイムノアッセイにおけるインターアッセイの変化
は検量曲線上の諸点で３種の試料について測定された。
は検量曲線上の諸点で３種の試料について測定された。
変動係数値（Ｃｖ）は各点において８．３％以下であっ
た。インターアッセイの変化は３種の試料の分析によっ
て測定された。Ｃｖ値は８．３％以下であった。
た。インターアッセイの変化は３種の試料の分析によっ
て測定された。Ｃｖ値は８．３％以下であった。
以上のごと（本発明によるエストリオール３−サルフェ
ートのイムノアッセイ測定法は非常に精度の高いことが
理解されよう。
ートのイムノアッセイ測定法は非常に精度の高いことが
理解されよう。
実施例８
臨床試験ニー
各妊＠週令におけるエストリオール３−サルフェートと
エストリオールの血中値の測定を４０例において実施し
た。エストリオール３−サルフェートの測定は実施例４
の方法に従って行った。また、エストリオールの測定は
通常行なわれている以下の方法によって行った。
エストリオールの血中値の測定を４０例において実施し
た。エストリオール３−サルフェートの測定は実施例４
の方法に従って行った。また、エストリオールの測定は
通常行なわれている以下の方法によって行った。
希釈妊娠血漿（ｏ、２ｚｅ）をニー＋ル（１，０ｘＱ）
テ抽出し、水（０，１ｍｉりで洗い、［３Ｈ］−エスト
リオール（１００００ｄｐｓ）を加え、有機層を窒素気
流下に乾燥寝せた。これに０ 、０５ ｗｏｅ／ｅホウ
酸塩緩衝液（１）Ｈ８，０；０．５ｆ／（！ＢＧＧおよ
び０．６９／１２Ｂ Ｓ Ａ含有）で希釈した抗血清（
１：６０００；０．２５ｚＱ）を加えた。室温で１時間
インキエベーションした後、５００９／Ｑ硫酸アンモニ
ウム（０゜２５１ｉりを加え、室温に１５分間放置した
。これを２０００Ｘｙで１０分間遠心し、上澄液０．２
１について測定した。結果を第４図に示す。
テ抽出し、水（０，１ｍｉりで洗い、［３Ｈ］−エスト
リオール（１００００ｄｐｓ）を加え、有機層を窒素気
流下に乾燥寝せた。これに０ 、０５ ｗｏｅ／ｅホウ
酸塩緩衝液（１）Ｈ８，０；０．５ｆ／（！ＢＧＧおよ
び０．６９／１２Ｂ Ｓ Ａ含有）で希釈した抗血清（
１：６０００；０．２５ｚＱ）を加えた。室温で１時間
インキエベーションした後、５００９／Ｑ硫酸アンモニ
ウム（０゜２５１ｉりを加え、室温に１５分間放置した
。これを２０００Ｘｙで１０分間遠心し、上澄液０．２
１について測定した。結果を第４図に示す。
ウィルソンらによって報告されたように（ウィルソンら
： Ａｃｔａ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、 ４６，５２５
〜５４３（１９６４））、エストリオール３−サルフェ
ートは定量的に胎児における主たる代謝産物である。妊
娠第３期におけるエストリオール３−サルフェートの血
漿濃度は別法によれば１７〜６６ｎ９／Ｉｇであると報
告されているが（レービッッら： Ｊ 、 Ｓ ｔｅｒ
ｏｉｄＢｉｏｃｈｅｓ、、 ｉ、６６３〜６６７（１９
７５））、本発明による平均測定値は８１．４１ｇ／ａ
ｌｅ（範囲２７〜＋６７、ｎｇ／ＩＱ）＜３６〜３８週
）である。エストリオール３−サルフェートの上昇血漿
濃度はエストリオール濃度と関連がある。妊娠後期にお
いて硫酸化エストリオールの濃度は非結合エストリオー
ルの約７倍であった。個々の試料において結合エストリ
オールの非結合エストリオールに対する比はＬトル３０
の範囲においてかなり変動していた（東４図参照）。こ
れらのデータはエストリオール３−サルフェートが妊娠
血漿中の主要形態であり、先に測定されたエストリオー
ル１６−グルクロニド（ゲーベルスマンら： Ａｃｔａ
Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、 ７４，５９２〜６Ｇ４（１
９７３））の約１．５倍であって、ゲーベルスマンらが
示したエストリオール３−サルフェートの血漿濃度はエ
ストリオールＩ６−グルクロニドの１゜７５倍であると
の報告（ウィルソンら： Ａｃｔａ Ｅｎ−ｄｏｃｒｉ
ｎｏｌ、 ４６．５２５〜５４３（１９６４））に一致
する。
： Ａｃｔａ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、 ４６，５２５
〜５４３（１９６４））、エストリオール３−サルフェ
ートは定量的に胎児における主たる代謝産物である。妊
娠第３期におけるエストリオール３−サルフェートの血
漿濃度は別法によれば１７〜６６ｎ９／Ｉｇであると報
告されているが（レービッッら： Ｊ 、 Ｓ ｔｅｒ
ｏｉｄＢｉｏｃｈｅｓ、、 ｉ、６６３〜６６７（１９
７５））、本発明による平均測定値は８１．４１ｇ／ａ
ｌｅ（範囲２７〜＋６７、ｎｇ／ＩＱ）＜３６〜３８週
）である。エストリオール３−サルフェートの上昇血漿
濃度はエストリオール濃度と関連がある。妊娠後期にお
いて硫酸化エストリオールの濃度は非結合エストリオー
ルの約７倍であった。個々の試料において結合エストリ
オールの非結合エストリオールに対する比はＬトル３０
の範囲においてかなり変動していた（東４図参照）。こ
れらのデータはエストリオール３−サルフェートが妊娠
血漿中の主要形態であり、先に測定されたエストリオー
ル１６−グルクロニド（ゲーベルスマンら： Ａｃｔａ
Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、 ７４，５９２〜６Ｇ４（１
９７３））の約１．５倍であって、ゲーベルスマンらが
示したエストリオール３−サルフェートの血漿濃度はエ
ストリオールＩ６−グルクロニドの１゜７５倍であると
の報告（ウィルソンら： Ａｃｔａ Ｅｎ−ｄｏｃｒｉ
ｎｏｌ、 ４６．５２５〜５４３（１９６４））に一致
する。
エストリオール３−サルフェートに対するこのアッセイ
は４０人の患者から採取した妊娠血漿試料の定量に宵月
であることが明らかにされた。
は４０人の患者から採取した妊娠血漿試料の定量に宵月
であることが明らかにされた。
第１表
各種ステロイドとセファローズ４Ｂ上に固定化された抗
エストリオール３−サルフェート抗体との交差反応率（
％） 第ｎ段 健常人男性血漿に添加されたエストリオール３−サルフ
ェートの測定によるアッセイの精度性１）ｎ＝５ 第ｍ表 妊娠血漿中のエストリオール３−サルフェートのラジ′
オイムノアッセ゛イのイントラアッセイおよびイントラ
アッセイ変動
エストリオール３−サルフェート抗体との交差反応率（
％） 第ｎ段 健常人男性血漿に添加されたエストリオール３−サルフ
ェートの測定によるアッセイの精度性１）ｎ＝５ 第ｍ表 妊娠血漿中のエストリオール３−サルフェートのラジ′
オイムノアッセ゛イのイントラアッセイおよびイントラ
アッセイ変動
第１図はセファローズ４Ｂ上に固定化された抗エストリ
オール３−サルフェート抗体のスキャチャードのプロッ
ト図、 第２図はエストリオール３−サルフェートの血漿蛋白質
に対する非特異的結合に及ぼす諸物質の効果を示す図（
０−０は未添加、ムームはシスティン０ 、１１ｌｌｏ
Ｑ／Ｑ添加、Δ−Δはグリノン０ 、２ ＠ｏ（１／Ｑ
添加、・−・はグルタミンＱ 、 Ｉ ５ｏ（Ｌ／Ｑ添
加）、第３図はエストリオール３−サルフェートのラジ
オイムノアプセイに対する検量曲線、 第４図は４０人の患者について測定された正常妊娠期間
におけるエストリオール３−サルフェートとエストリオ
ールの血漿濃度を示す図（ムは結合エストリオールの値
、Δは非結合エストリオールの値）である。 第１図 結合（ｎＭ） 第２図 エストリオール３−サルフェート（ｐ９）第３図 ＋０ ５０ ｔｏｏ
５００ １０００エストリ
オール３−サルフェート（＋）＜＋３第４図 抵ｖＬｗ４間 備】
オール３−サルフェート抗体のスキャチャードのプロッ
ト図、 第２図はエストリオール３−サルフェートの血漿蛋白質
に対する非特異的結合に及ぼす諸物質の効果を示す図（
０−０は未添加、ムームはシスティン０ 、１１ｌｌｏ
Ｑ／Ｑ添加、Δ−Δはグリノン０ 、２ ＠ｏ（１／Ｑ
添加、・−・はグルタミンＱ 、 Ｉ ５ｏ（Ｌ／Ｑ添
加）、第３図はエストリオール３−サルフェートのラジ
オイムノアプセイに対する検量曲線、 第４図は４０人の患者について測定された正常妊娠期間
におけるエストリオール３−サルフェートとエストリオ
ールの血漿濃度を示す図（ムは結合エストリオールの値
、Δは非結合エストリオールの値）である。 第１図 結合（ｎＭ） 第２図 エストリオール３−サルフェート（ｐ９）第３図 ＋０ ５０ ｔｏｏ
５００ １０００エストリ
オール３−サルフェート（＋）＜＋３第４図 抵ｖＬｗ４間 備】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ａは＝Ｎ−Ｏ−または−Ｏ−ＣＯ−、ｎは１〜
４の整数、−ＮＨ−Ｐは蛋白質からアミノ態水素原子１
個を除去した残基を表す。］ で示される、エストリオール３−サルフェートに対して
特異性を示す抗体産生用試剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ａは＝Ｎ−Ｏ−または−Ｏ−ＣＯ−、ｎは１〜
４の整数、−ＮＨ−Ｐは蛋白質からアミノ態水素原子１
個を除去した残基を表す。］ で示される抗体産生用試剤を脊椎動物生体に非経口投与
して該生体内にエストリオール３−サルフェートに対し
て特異性を示す抗体を生成せしめた後、該生体の体液を
採取することを特徴とする、エストリオール３−サルフ
ェートに対して特異性を示す抗体の製造方法。 ３、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ａは＝Ｎ−Ｏ−または−Ｏ−ＣＯ−、ｎは１〜
４の整数、−ＮＨ−Ｐは蛋白質からアミノ態水素原子１
個を除去した残基を表す。］ で示される抗体産生用試剤を抗原として使用することに
より製造されたエストリオール３−サルフェートに対し
て特異性を示す抗体を使用することを特徴とする、抗原
−抗体反応を利用したイムノアッセイ法により試料中の
エストリオール３−サルフェートを測定する方法。 ４、抗原−抗体反応系にグルタミンを含有せしめたこと
を特徴とする特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５、（１）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ａは＝Ｎ−Ｏ−または−Ｏ−ＣＯ−、ｎは１〜
４の整数、−ＮＨ−Ｐは蛋白質からアミノ態水素原子１
個を除去した残基を表す。］ で示される抗体産生用試剤を抗原として使用することに
より製造されたエストリオール３−サルフェートに対し
て特異性をしめす抗体と（２）標識化したエストリオー
ル３−サルフェートをそれぞれ別の包装体として含有す
る、エストリオール３−サルフェートのイムノアッセイ
用試剤キット。 ６、グルタミンを含む緩衝液をさらに別の包装体として
含有する、特許請求の範囲第５項記載のイムノアッセイ
用試剤キット。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59254591A JPS61132867A (ja) | 1984-11-30 | 1984-11-30 | エストリオ−ル３−サルフエ−トのイムノアツセイ |
| EP85113262A EP0178683B1 (en) | 1984-10-19 | 1985-10-18 | Imunoassay for estriol-3-sulfate |
| CA000493315A CA1285866C (en) | 1984-10-19 | 1985-10-18 | Immunoassay for estriol-3-sulfate |
| DE8585113262T DE3572177D1 (de) | 1984-10-19 | 1985-10-18 | Imunoassay for estriol-3-sulfate |
| KR1019850007728A KR930000057B1 (ko) | 1984-10-19 | 1985-10-19 | 6-치환-에스트리올-3-설페이트 단백질 접합체의 제조방법 |
| US06/789,977 US4740476A (en) | 1984-10-19 | 1985-10-21 | Immunoassay for estriol-3-sulfate |
| AU48884/85A AU590731B2 (en) | 1984-10-19 | 1985-10-21 | Estriol-3-sulfate protein conjugates and antibodies thereto |
| KR1019920016406A KR930000056B1 (ko) | 1984-10-19 | 1992-09-08 | 에스트리올-3-설페이트의 면역분석 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59254591A JPS61132867A (ja) | 1984-11-30 | 1984-11-30 | エストリオ−ル３−サルフエ−トのイムノアツセイ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61132867A true JPS61132867A (ja) | 1986-06-20 |
| JPH0527824B2 JPH0527824B2 (ja) | 1993-04-22 |
Family
ID=17267166
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59254591A Granted JPS61132867A (ja) | 1984-10-19 | 1984-11-30 | エストリオ−ル３−サルフエ−トのイムノアツセイ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61132867A (ja) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56133300A (en) * | 1980-03-21 | 1981-10-19 | Eiken Kagaku Kk | Novel steroid compound, its preparation, and antigen for preparing antibody for measuring estrone sulfate by immunochemical measurement comprising it |
| JPS5871495A (ja) * | 1981-10-26 | 1983-04-28 | 株式会社原子力代行 | 自走水底クリ−ナ− |
| JPS58183700A (ja) * | 1982-04-19 | 1983-10-26 | Toyo Jozo Co Ltd | ２−ヨ−ドエストリオ−ル |
| JPS6061597A (ja) * | 1983-09-16 | 1985-04-09 | Eiken Kagaku Kk | 新規ステロイド化合物，その製造方法，及びその化合物からなる免疫化学的測定方法によるエストリオ−ル−３−サルフエ−ト−１６α−グルクロナイド測定用抗原 |
-
1984
- 1984-11-30 JP JP59254591A patent/JPS61132867A/ja active Granted
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56133300A (en) * | 1980-03-21 | 1981-10-19 | Eiken Kagaku Kk | Novel steroid compound, its preparation, and antigen for preparing antibody for measuring estrone sulfate by immunochemical measurement comprising it |
| JPS5871495A (ja) * | 1981-10-26 | 1983-04-28 | 株式会社原子力代行 | 自走水底クリ−ナ− |
| JPS58183700A (ja) * | 1982-04-19 | 1983-10-26 | Toyo Jozo Co Ltd | ２−ヨ−ドエストリオ−ル |
| JPS6061597A (ja) * | 1983-09-16 | 1985-04-09 | Eiken Kagaku Kk | 新規ステロイド化合物，その製造方法，及びその化合物からなる免疫化学的測定方法によるエストリオ−ル−３−サルフエ−ト−１６α−グルクロナイド測定用抗原 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0527824B2 (ja) | 1993-04-22 |
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