JPS61130300A - ヒトモノクロ−ナル抗体 - Google Patents
ヒトモノクロ−ナル抗体Info
- Publication number
- JPS61130300A JPS61130300A JP59248844A JP24884484A JPS61130300A JP S61130300 A JPS61130300 A JP S61130300A JP 59248844 A JP59248844 A JP 59248844A JP 24884484 A JP24884484 A JP 24884484A JP S61130300 A JPS61130300 A JP S61130300A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- monoclonal antibody
- cells
- gram
- fusion
- human
- Prior art date
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- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1228—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K16/1232—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia from Escherichia (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1228—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（発明の分野）
グラム陰性敗血症は、特に火傷において、及び白血病又
は他の癌のための癌化学療法剤の多量投与により治療さ
れた患者において、細菌感染の非常に一般的なタイプで
ある。侵入するグラム陰性細菌の細胞壁中のりポポリサ
ッカライド、又はエンドトキシンが重要な死亡要因であ
ると仮定する幾つかの理由が存在する。強力な抗生物質
及び攻撃支持（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ ５ｕｐｐｏｒｔ
）技法の使用にもかかわらず、なお高頻度の死亡が存
在する。
は他の癌のための癌化学療法剤の多量投与により治療さ
れた患者において、細菌感染の非常に一般的なタイプで
ある。侵入するグラム陰性細菌の細胞壁中のりポポリサ
ッカライド、又はエンドトキシンが重要な死亡要因であ
ると仮定する幾つかの理由が存在する。強力な抗生物質
及び攻撃支持（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ ５ｕｐｐｏｒｔ
）技法の使用にもかかわらず、なお高頻度の死亡が存
在する。
リポポリサッカライドは３つの部分を有し、これらはオ
リゴサツカライド側鎖、コアポリサッカライド、及び毒
性部谷と思われるリピドＡである。
リゴサツカライド側鎖、コアポリサッカライド、及び毒
性部谷と思われるリピドＡである。
完全ポリサッカライドに対する抗体は主として側鎖に対
して向けられ、この側鎖は菌株によって大きく異る。従
って、完全ポリサッカライげに対する抗血清は、広範囲
の細菌株に対して保護活性を有しないようである。しか
しながら、側鎖における場合に比べて、コアポリサッカ
ライドーリピドＡコンプレックスにおいては菌株差が非
常に少ない。はとんどのグラム陰性細菌のコア領域は類
似のりポポリサ、カライドーコア構造を有する。従って
、このコア構造に対する抗体は一層広範囲の保護をもた
らすはずである。
して向けられ、この側鎖は菌株によって大きく異る。従
って、完全ポリサッカライげに対する抗血清は、広範囲
の細菌株に対して保護活性を有しないようである。しか
しながら、側鎖における場合に比べて、コアポリサッカ
ライドーリピドＡコンプレックスにおいては菌株差が非
常に少ない。はとんどのグラム陰性細菌のコア領域は類
似のりポポリサ、カライドーコア構造を有する。従って
、このコア構造に対する抗体は一層広範囲の保護をもた
らすはずである。
（従来の技術）
Ｚ ｉｅｇｌａｒ等、Ｎ、Ｅ、Ｊ、 ｏｆ Ｍｅｄｉａ
ｉｎｓ （１９８２） ３０７：１２２５−１２３０は
、コア決定基のみから成るＩＪ ／ポリサッカライドを
生産する変異株である旦三ユ（Ｅ、ｃａｌｌ ） ０１
１１ ： Ｂ４のＪ５変異株に対するポリクローナル抗
血清の調製を記載している。
ｉｎｓ （１９８２） ３０７：１２２５−１２３０は
、コア決定基のみから成るＩＪ ／ポリサッカライドを
生産する変異株である旦三ユ（Ｅ、ｃａｌｌ ） ０１
１１ ： Ｂ４のＪ５変異株に対するポリクローナル抗
血清の調製を記載している。
１９８３年１月１３日に出願された米国特許出願第４５
７，７９５号は、ヘテロミエローマ細胞、及び代表的な
ヘテロミエローマのＡＴＣＣへの寄託を記載している。
７，７９５号は、ヘテロミエローマ細胞、及び代表的な
ヘテロミエローマのＡＴＣＣへの寄託を記載している。
（発明の要約）
ヒトモノクローナル抗体がグラム陰性細菌のコアリポポ
リサッカライドに対して生産され、グラム陰性細菌に対
する受動免疫のために有用なヒトモノクローナル抗体が
提供される。このモノクローナル抗体は、コアリポポリ
サッカライドで感作されたリンパ球と、細菌エンドトキ
シンに対して特異的な免疫グロブリンの安定な分泌をも
たらすハイブリドーマを形成するために適当な融合の相
手細胞との融合によって達成される。
リサッカライドに対して生産され、グラム陰性細菌に対
する受動免疫のために有用なヒトモノクローナル抗体が
提供される。このモノクローナル抗体は、コアリポポリ
サッカライドで感作されたリンパ球と、細菌エンドトキ
シンに対して特異的な免疫グロブリンの安定な分泌をも
たらすハイブリドーマを形成するために適当な融合の相
手細胞との融合によって達成される。
（具体的な態様の記載）
広範囲のグラム陰性エンドトキシンに特異的なヒトモノ
クローナル抗体の製造又は使用のための方法が提供され
る。このヒトモノクローナル抗体は、受動免疫のために
、グラム陰性細菌に対して感受性の宿主に投与すること
ができる。このモノクローナル抗体は広範囲のグラム陰
性細菌株にわたって広い活性ヌベクトルを有する。なぜ
なら、この抗体はコアリポポリサッカライドに対して生
産され、このコアリポポリサッカライドはエンドトキシ
ンの側鎖と異り保存される傾向が相対的に存在するから
である。
クローナル抗体の製造又は使用のための方法が提供され
る。このヒトモノクローナル抗体は、受動免疫のために
、グラム陰性細菌に対して感受性の宿主に投与すること
ができる。このモノクローナル抗体は広範囲のグラム陰
性細菌株にわたって広い活性ヌベクトルを有する。なぜ
なら、この抗体はコアリポポリサッカライドに対して生
産され、このコアリポポリサッカライドはエンドトキシ
ンの側鎖と異り保存される傾向が相対的に存在するから
である。
この発明のモノクローナル抗体は、グラム陰性細菌由来
のコアリポポリサッカライドによシ感作されたヒドリン
・子球を用いることによって得られる。特に、Ｅ、コリ
０１１１：Ｂ４のＪ５変異株は、コア決定基のみから
成るリポポリサッカ２イドをもたらす。Ｚｉｅｇｌａｒ
（前掲）に記載されているようにして、Ｅ、コ＋）Ｊ５
細菌細胞から調製されたＪ５ワクチンによシヒト宿主を
感作することができる。
のコアリポポリサッカライドによシ感作されたヒドリン
・子球を用いることによって得られる。特に、Ｅ、コリ
０１１１：Ｂ４のＪ５変異株は、コア決定基のみから
成るリポポリサッカ２イドをもたらす。Ｚｉｅｇｌａｒ
（前掲）に記載されているようにして、Ｅ、コ＋）Ｊ５
細菌細胞から調製されたＪ５ワクチンによシヒト宿主を
感作することができる。
好ましくは牌切除術が意図されている患者を選択する。
この場合、免疫プログラムの短期間後に膵臓が摘出され
るであろう。このワクチンは、それ自体として、又は免
疫反応を強化するためにアノェパンドと組合わせて使用
することができる。便利には、０．５〜２ゴ、通常は約
１４を１ケ所又は複数ケ所に皮下注射することによシ宿
主を免疫することができ、この場合ワクチンは約１：３
２〜１：２５６の範囲の血球凝集抗体価を誘導するであ
ろう。１回又は複数回、一般には約２回の追加免疫を行
うことができ、この場合免疫処理は約４８時間〜約３週
間隔てて行うことができる。
るであろう。このワクチンは、それ自体として、又は免
疫反応を強化するためにアノェパンドと組合わせて使用
することができる。便利には、０．５〜２ゴ、通常は約
１４を１ケ所又は複数ケ所に皮下注射することによシ宿
主を免疫することができ、この場合ワクチンは約１：３
２〜１：２５６の範囲の血球凝集抗体価を誘導するであ
ろう。１回又は複数回、一般には約２回の追加免疫を行
うことができ、この場合免疫処理は約４８時間〜約３週
間隔てて行うことができる。
融合のために牌細胞を用いようとする場合、一般に最終
免疫処理から約２〜２１日後に膵臓が摘出されるであろ
う。膵臓を摘出し、そして任意の便利な方法、例えば大
量Ｅ−ロゼ、ト法によシＴ−細胞を分離する。好ましく
は、Ｂ−１７２２球をエプヌタインーパールーウイルス
（ＥＥＶ） によシ形質転換して不滅化（ｉｍｍｏｒ
ｔａｌｉｚｅ）されたリン・臂芽球様細胞を生じさせる
。この細胞は次に、融合の相手細胞との融合に使用する
ことができる。
免疫処理から約２〜２１日後に膵臓が摘出されるであろ
う。膵臓を摘出し、そして任意の便利な方法、例えば大
量Ｅ−ロゼ、ト法によシＴ−細胞を分離する。好ましく
は、Ｂ−１７２２球をエプヌタインーパールーウイルス
（ＥＥＶ） によシ形質転換して不滅化（ｉｍｍｏｒ
ｔａｌｉｚｅ）されたリン・臂芽球様細胞を生じさせる
。この細胞は次に、融合の相手細胞との融合に使用する
ことができる。
ヒト免疫グロブリンの分泌をもたらす広範囲の種類の融
合の相手細胞を用いることができる。分泌される免疫グ
ロブリンは好ましくはＩｇＭである。
合の相手細胞を用いることができる。分泌される免疫グ
ロブリンは好ましくはＩｇＭである。
但し、ＩｇＧ又はＩｇＡも用いられる。ＩｇＤ及びＩｇ
Ｅの生産は一般的ではない。融合の相手細胞はマウスミ
エローマ系、ヘテロミエローマ系（米国特許出願第４５
７，７９５号を参照のこと）、又はＰＣＴ出ｊ［Ａ ８
１１００９６７．８ｃｈｌｏｍ等： ＰＮＡＳ Ｕ３Ａ
（１９８１）７７ ： ６８４１−６８４５：及びＣｒ
ｏＣｓ等、Ｎａｔｕｒｅ （１９８０）２８８： ４８
８−４８９に記載されているようにヒトミエローマ系も
しくは他の不滅化系であってよい。
Ｅの生産は一般的ではない。融合の相手細胞はマウスミ
エローマ系、ヘテロミエローマ系（米国特許出願第４５
７，７９５号を参照のこと）、又はＰＣＴ出ｊ［Ａ ８
１１００９６７．８ｃｈｌｏｍ等： ＰＮＡＳ Ｕ３Ａ
（１９８１）７７ ： ６８４１−６８４５：及びＣｒ
ｏＣｓ等、Ｎａｔｕｒｅ （１９８０）２８８： ４８
８−４８９に記載されているようにヒトミエローマ系も
しくは他の不滅化系であってよい。
融合の相手細胞として望ましい性質は、融合の効率が高
く免疫グロブリン産生ハイツリドーマを高比率で形成す
ること、個別鎖又は注目の免疫グロブリンと関係のない
免疫グロブリンを生産しないこと、及び目的の免疫グロ
ブリンを継続的に分泌する能力を長期間にわたって維持
することである。融合の相手細胞の例にはマウスミエロ
ーマ細胞系Ｘ６．３〜Ａｇ８．６５３、Ｐ３−ＮＳＩ／
ｌＡｇ４ 及び５１９４１５．ＸＸＯ，ＢＵｌ：ヒト
融合相手細胞、例えばＵＣ７２９−６及び５ＫＯ−００
７： 並びにマウス−ヒトヘテロミエローマ系、例え
ばＳＨＭ−Ａ６及びＳＨＭ−Ｄ３３が含まれる。融合を
、非イオン性洗剤、通常はポリエチレングリコールの存
在下で短時間行い、洗剤を除去し、そして細胞を、親細
胞に対しては毒性を有するが融合し丸線種細胞に対して
は毒性を有しない選択条件、例えばシロ、ＨＡＴとウア
ペイン（ｏｕａｂａｌｎ）等にゆだねる。
く免疫グロブリン産生ハイツリドーマを高比率で形成す
ること、個別鎖又は注目の免疫グロブリンと関係のない
免疫グロブリンを生産しないこと、及び目的の免疫グロ
ブリンを継続的に分泌する能力を長期間にわたって維持
することである。融合の相手細胞の例にはマウスミエロ
ーマ細胞系Ｘ６．３〜Ａｇ８．６５３、Ｐ３−ＮＳＩ／
ｌＡｇ４ 及び５１９４１５．ＸＸＯ，ＢＵｌ：ヒト
融合相手細胞、例えばＵＣ７２９−６及び５ＫＯ−００
７： 並びにマウス−ヒトヘテロミエローマ系、例え
ばＳＨＭ−Ａ６及びＳＨＭ−Ｄ３３が含まれる。融合を
、非イオン性洗剤、通常はポリエチレングリコールの存
在下で短時間行い、洗剤を除去し、そして細胞を、親細
胞に対しては毒性を有するが融合し丸線種細胞に対して
は毒性を有しない選択条件、例えばシロ、ＨＡＴとウア
ペイン（ｏｕａｂａｌｎ）等にゆだねる。
融合のためのＢ−リンパ球標品における変化には、非分
離牌細胞対Ｂ−細胞濃縮膵細胞、マイトゲン刺激細胞対
非刺激細胞の使用、等が含まれる。
離牌細胞対Ｂ−細胞濃縮膵細胞、マイトゲン刺激細胞対
非刺激細胞の使用、等が含まれる。
特定の技法は、融合によ）達成される成功に依存して変
化するであろう。
化するであろう。
選択培地から増殖した雑種細胞を個々のウェルに接種し
、そしてそれらの上清を任意の便利な技法によプ注目の
モノクローナル抗体についてヌクリーニングする０次に
、注目のモノクローナル抗体の存在を示す細胞を限界稀
釈法によ）クローニングし、そして最高レベルの特異抗
原を生産するクローンを拡ける。次に１抗体をクラス、
サプクヲヌ及びタイプくりいてさらに特徴付ける。
、そしてそれらの上清を任意の便利な技法によプ注目の
モノクローナル抗体についてヌクリーニングする０次に
、注目のモノクローナル抗体の存在を示す細胞を限界稀
釈法によ）クローニングし、そして最高レベルの特異抗
原を生産するクローンを拡ける。次に１抗体をクラス、
サプクヲヌ及びタイプくりいてさらに特徴付ける。
抗体は任意の便利な技法、例えばクロマトグツフィー、
電気泳動、沈澱及び抽出等忙よシ精製することができる
。
電気泳動、沈澱及び抽出等忙よシ精製することができる
。
抗体は、精製した後さらに変化せしめることなく使用す
ることができ、又は還元によって種々のサイズの断片、
例えばＦ’（ａｂつ２、Ｆａｂ、Ｆマ 等に 、変形す
ることができる。これとは別に、抗体を種種の薬剤、例
えば細胞毒性剤、例えばリシンもしくはジフテリアトキ
シンのＡ鎖、抗生物質、又はこれらに類するものによシ
標識することができる。
ることができ、又は還元によって種々のサイズの断片、
例えばＦ’（ａｂつ２、Ｆａｂ、Ｆマ 等に 、変形す
ることができる。これとは別に、抗体を種種の薬剤、例
えば細胞毒性剤、例えばリシンもしくはジフテリアトキ
シンのＡ鎖、抗生物質、又はこれらに類するものによシ
標識することができる。
特に、ＩｇＧ補体補体結合ナック２ヌえば１ｇＧ３を細
菌細胞の溶解のために使用することができる。
菌細胞の溶解のために使用することができる。
ハイツリドーマは、免疫グロブリンの生産以外にも使用
することができよう。ハイツリドーマを他の細胞と融合
せしめて免疫グロブリンの発現のために備えられた遺伝
子を移転し、新しいハイツリドーマを得るこ・とができ
る。ハイブリドーマを、再配列され、活性化され九免疫
グワブリン遺伝子をコードするＤＮＡ又はｍＲＮＡの分
離源として使用することができ、これらの遺伝子を分離
し、組換ＤＮＡ技法によシクロー二ングし、そして特定
の免疫グロブリンを生産するための他の細Ｉ＠に移すこ
とができる。特に、再配列されたＤＮＡを分離すること
によ）、又はメツセンジャーＲＮＡからｅ ＤＮＡを調
製するととにより、イントロンを含有しない配列を得る
ことができる。
することができよう。ハイツリドーマを他の細胞と融合
せしめて免疫グロブリンの発現のために備えられた遺伝
子を移転し、新しいハイツリドーマを得るこ・とができ
る。ハイブリドーマを、再配列され、活性化され九免疫
グワブリン遺伝子をコードするＤＮＡ又はｍＲＮＡの分
離源として使用することができ、これらの遺伝子を分離
し、組換ＤＮＡ技法によシクロー二ングし、そして特定
の免疫グロブリンを生産するための他の細Ｉ＠に移すこ
とができる。特に、再配列されたＤＮＡを分離すること
によ）、又はメツセンジャーＲＮＡからｅ ＤＮＡを調
製するととにより、イントロンを含有しない配列を得る
ことができる。
受動免疫において使用するために、抗体を患者に注入又
は注射することができる。免疫のために使用される抗体
の量は異り、一般に約ｏ、ｏｏｓ〜Ｑ、 Ｑ ５ Ｍ７
ｋｌ の範囲の免疫グロブリン量である。 ′次に、
例によ）この発明をさらに具体的に説明する。但し、こ
れによりこの発明の範囲を限定するものではない。
は注射することができる。免疫のために使用される抗体
の量は異り、一般に約ｏ、ｏｏｓ〜Ｑ、 Ｑ ５ Ｍ７
ｋｌ の範囲の免疫グロブリン量である。 ′次に、
例によ）この発明をさらに具体的に説明する。但し、こ
れによりこの発明の範囲を限定するものではない。
実験
患者り、Ｍに、膵臓切除術を伴う開腹術のおよそ２週間
前に、Ｊ５ワクチンを１回注射した。牌細胞を懸濁し、
そしてＴ細胞及びＢ細胞の両者を含有する未分画標品と
してアリコートを調製し；大量Ｅ−ロゼ、ト法によ、９
Ｔ細胞が除去された、Ｂ細胞濃縮集団を調製し；そして
次の日に、Ｂ細胞の集団Ｋ ｇｎｖのＢ９５−８株を感
染せしめて不滅化リンパ芽球様細胞（Ｂｒｏｗｎ及びＭ
ｌｌｌｅｒ 、 Ｊ、 Ｉｍｒｎｕｎｏｌ。
前に、Ｊ５ワクチンを１回注射した。牌細胞を懸濁し、
そしてＴ細胞及びＢ細胞の両者を含有する未分画標品と
してアリコートを調製し；大量Ｅ−ロゼ、ト法によ、９
Ｔ細胞が除去された、Ｂ細胞濃縮集団を調製し；そして
次の日に、Ｂ細胞の集団Ｋ ｇｎｖのＢ９５−８株を感
染せしめて不滅化リンパ芽球様細胞（Ｂｒｏｗｎ及びＭ
ｌｌｌｅｒ 、 Ｊ、 Ｉｍｒｎｕｎｏｌ。
（１９８２）シ狙： ２４−２９） を生じさせた。
患者り、Ｍ、の牌細胞を用いる第１の融合においては、
非刺激Ｂ細胞及びＳＨＭ−Ｄ３３を１：４の比率で用い
た。細胞融合においてはＯｌ及びＨｅｒｚｅｎｂ＊ｒｇ
（１９７９） ５ｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｃｅ１ｌｕｌａｒ＄ （Ｂ、Ｂ、 Ｍｉｓｈ＠
ｌｌ及びＳ、Ｍ、 Ｓｈｉｉｇｉ編）サンフランシスコ
ニ Ｗ、Ｊ、 Ｆｙｅｅｄｍａｎノ母ツリ、シャーズ、
３５１−３７２頁に記載されている方法を次のように変
えて用いた。ヘテロミエローマ細胞（ＩＸＩＯ”）及び
リン・ぐ球（４Ｘ１０’Ｘ米国特許出願第４５７，７９
５号を参照のむと）のそれぞれを、５０ゴのカルシウム
及びマグネシウム不含ＰＢＳ（ＰＢＳ −ＣＭＦ） （
Ｓｃｈｎ＠ｉｄｅｒｍａｎ等、Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅ
１１Ｇｅｎｅｔｉｃ８（１９７９） ５ ： ２６３−
２６９）によ９２回洗浄した。次に細胞を混合し、１０
ｍのＰＢＳ−ＣＭＦで洗浄し、そして１分間ゆりくり攪
拌しながらペレットＫＰＢＳ−ＣＭＦ中４０ （ｗ／ｖ
） ％ポリエチレングリコール１５４０ （Ａ、Ｔ、Ｃ
，Ｃ，） １１ｒｌｌを加えた。
非刺激Ｂ細胞及びＳＨＭ−Ｄ３３を１：４の比率で用い
た。細胞融合においてはＯｌ及びＨｅｒｚｅｎｂ＊ｒｇ
（１９７９） ５ｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｃｅ１ｌｕｌａｒ＄ （Ｂ、Ｂ、 Ｍｉｓｈ＠
ｌｌ及びＳ、Ｍ、 Ｓｈｉｉｇｉ編）サンフランシスコ
ニ Ｗ、Ｊ、 Ｆｙｅｅｄｍａｎノ母ツリ、シャーズ、
３５１−３７２頁に記載されている方法を次のように変
えて用いた。ヘテロミエローマ細胞（ＩＸＩＯ”）及び
リン・ぐ球（４Ｘ１０’Ｘ米国特許出願第４５７，７９
５号を参照のむと）のそれぞれを、５０ゴのカルシウム
及びマグネシウム不含ＰＢＳ（ＰＢＳ −ＣＭＦ） （
Ｓｃｈｎ＠ｉｄｅｒｍａｎ等、Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅ
１１Ｇｅｎｅｔｉｃ８（１９７９） ５ ： ２６３−
２６９）によ９２回洗浄した。次に細胞を混合し、１０
ｍのＰＢＳ−ＣＭＦで洗浄し、そして１分間ゆりくり攪
拌しながらペレットＫＰＢＳ−ＣＭＦ中４０ （ｗ／ｖ
） ％ポリエチレングリコール１５４０ （Ａ、Ｔ、Ｃ
，Ｃ，） １１ｒｌｌを加えた。
さらに１分間後、１ＩＩｌｌのイスコペ（Ｉｓａｏｖｅ
）培地（クシ胎児血清を含有しない）を、ゆっ〈シ攪拌
しながら１分間にわたって加えた。さらＫ１．／の培地
を同じ速度で加えた。次に、８−のイスコペ培地（ウシ
胎児血清を含有しない）を２ ｙｎｌ ７分で加えた。
）培地（クシ胎児血清を含有しない）を、ゆっ〈シ攪拌
しながら１分間にわたって加えた。さらＫ１．／の培地
を同じ速度で加えた。次に、８−のイスコペ培地（ウシ
胎児血清を含有しない）を２ ｙｎｌ ７分で加えた。
最終ペレットを選択培地中に再懸濁し、そして９６−ウ
ェルグレートに２Ｘ１０５細胞／クエルの濃度で加え、
マウス胸腺細胞をフィーダーとして１０ ／ウェルで使
用した。選択はＨＡＴ培地（Ｌｉｔｔｌ＠ｆｉｅｌｄ、
５ｃｉｅｎｓｅ （１９６４） １４５ニア０９−
７１０〕及び５ Ｘ １０−’ Ｍクワパイン中で行っ
た。
ェルグレートに２Ｘ１０５細胞／クエルの濃度で加え、
マウス胸腺細胞をフィーダーとして１０ ／ウェルで使
用した。選択はＨＡＴ培地（Ｌｉｔｔｌ＠ｆｉｅｌｄ、
５ｃｉｅｎｓｅ （１９６４） １４５ニア０９−
７１０〕及び５ Ｘ １０−’ Ｍクワパイン中で行っ
た。
１１日までに、接種された１７０ウエルから２３の生存
雑種が得られた。１４日後、クローン２Ｇ７がＥＬＩＳ
Ａ 試験によシ特異的抗−５５抗体の分泌について陽
性であることが見出された。ＥＬＩＳＡ法においてはＥ
ｎｇｖａｌｌ、 Ｍａｄ、 Ｂｉｏｌ、 （１９７７）
５５：１９３−２００に記載されているように、第
２抗体としてパーオキシダーゼ接合やぎ抗−ヒトＩｇＭ
及ヒＩｇＧ（タブ、パーリンガム、カリホルニア）、並
びに基質として２．２′−アジノージ−（３−エチルベ
ンズチアゾリン）スルホン酸が使用されている。
雑種が得られた。１４日後、クローン２Ｇ７がＥＬＩＳ
Ａ 試験によシ特異的抗−５５抗体の分泌について陽
性であることが見出された。ＥＬＩＳＡ法においてはＥ
ｎｇｖａｌｌ、 Ｍａｄ、 Ｂｉｏｌ、 （１９７７）
５５：１９３−２００に記載されているように、第
２抗体としてパーオキシダーゼ接合やぎ抗−ヒトＩｇＭ
及ヒＩｇＧ（タブ、パーリンガム、カリホルニア）、並
びに基質として２．２′−アジノージ−（３−エチルベ
ンズチアゾリン）スルホン酸が使用されている。
Ｊ５エンドトキシンを１００〜２００μＰ〜の濃度で用
いてＥＬＩ ＳＡ のためのプレートをコートした〔
免疫グロブリン測定のためにリンノロ（Ｌｊｎｂｒｏ）
Ｋ、１．Ａ、 ｆレートを用い、そして抗−Ｊ５５抗の
ために〆イナテク（Ｄｙｎａｔｅｃｈ） ／リビニルプ
レートを使用した〕。しかしながら、このクローンは活
力を失い、そして死滅し、３８日後まで２９クローン中
２４クローンはなおヒトＩｇを生産したがいずれもＪ５
エンｒトキシンとの反応性に関して特異的でなかった。
いてＥＬＩ ＳＡ のためのプレートをコートした〔
免疫グロブリン測定のためにリンノロ（Ｌｊｎｂｒｏ）
Ｋ、１．Ａ、 ｆレートを用い、そして抗−Ｊ５５抗の
ために〆イナテク（Ｄｙｎａｔｅｃｈ） ／リビニルプ
レートを使用した〕。しかしながら、このクローンは活
力を失い、そして死滅し、３８日後まで２９クローン中
２４クローンはなおヒトＩｇを生産したがいずれもＪ５
エンｒトキシンとの反応性に関して特異的でなかった。
第２セ、ドの融合においては、ＥＢＶ＝形質転換リンツ
ヤ芽球様細胞を次のへテロミエローマ細胞系、すなわち
ＳＨＭ−Ｄ２９、−Ｄ−３３（Ｇ３）、−Ｄ３６（Ｇ７
）、−Ｄ□３９、−Ｄ４９、−Ｄ４２、−Ｄ７０、−Ａ
６（Ｈ４）、及び親マウスミエローマ系Ｘ６３−Ａｇ３
．６５３（ｒ６５３Ｊ）と融合せしめた。２２日後の測
定によシ、最良生産株はＳＨＭ−Ａ６（Ｈ４）との融合
に由来する５ ８／１２０ ウェル、ＳＨＭ−Ｄ３（Ｇ
３）との融合に由来する３８／１１２クエル、及び６５
３細胞との融合に由来する７８／１２０ ウェルであ
ることが示された。１４日後までに、反復試験によ’）
、１ｇ生産がＳＨＭ−Ｄ３３との融合に由来する生存雑
種のチックローンについては１００％、６５３との融合
に由来するそれについては９２％、セしてＡ６との融合
に由来するそれについては７７％であることが示された
。一方、生産クローンのサラクローニングを行い、これ
らの試験によ５ 、ＳＨＭ−Ｄ３３（Ｇ３）との融合に
由来するサックローン２Ｇ５及びＩ Ｂ８ ： ＳＨＭ
−Ａ６ （Ｈ４）との融合に由来するＩＦ１０１Ｃ２及
び２Ｇ９： ｍびに６５３Ｍ胞との融合に由来するＩｎ
２、ＩＦ５、ＩＧＩ、２Ｆ９．２Ｅ６及び２Ｄ７が特異
的な抗−Ｊ５エンドトキシン抗体生産株であることが示
される。これらのサブクローンを約１８日後に試験し、
そしてＪ５エンドトキシンとのみならずＥ、コリ（０５
５：Ｂ５）の他の株に由来する完全エンドトキシン（Ｌ
ＰＳ′）＋子とも特異的に反応することが見出された。
ヤ芽球様細胞を次のへテロミエローマ細胞系、すなわち
ＳＨＭ−Ｄ２９、−Ｄ−３３（Ｇ３）、−Ｄ３６（Ｇ７
）、−Ｄ□３９、−Ｄ４９、−Ｄ４２、−Ｄ７０、−Ａ
６（Ｈ４）、及び親マウスミエローマ系Ｘ６３−Ａｇ３
．６５３（ｒ６５３Ｊ）と融合せしめた。２２日後の測
定によシ、最良生産株はＳＨＭ−Ａ６（Ｈ４）との融合
に由来する５ ８／１２０ ウェル、ＳＨＭ−Ｄ３（Ｇ
３）との融合に由来する３８／１１２クエル、及び６５
３細胞との融合に由来する７８／１２０ ウェルであ
ることが示された。１４日後までに、反復試験によ’）
、１ｇ生産がＳＨＭ−Ｄ３３との融合に由来する生存雑
種のチックローンについては１００％、６５３との融合
に由来するそれについては９２％、セしてＡ６との融合
に由来するそれについては７７％であることが示された
。一方、生産クローンのサラクローニングを行い、これ
らの試験によ５ 、ＳＨＭ−Ｄ３３（Ｇ３）との融合に
由来するサックローン２Ｇ５及びＩ Ｂ８ ： ＳＨＭ
−Ａ６ （Ｈ４）との融合に由来するＩＦ１０１Ｃ２及
び２Ｇ９： ｍびに６５３Ｍ胞との融合に由来するＩｎ
２、ＩＦ５、ＩＧＩ、２Ｆ９．２Ｅ６及び２Ｄ７が特異
的な抗−Ｊ５エンドトキシン抗体生産株であることが示
される。これらのサブクローンを約１８日後に試験し、
そしてＪ５エンドトキシンとのみならずＥ、コリ（０５
５：Ｂ５）の他の株に由来する完全エンドトキシン（Ｌ
ＰＳ′）＋子とも特異的に反応することが見出された。
合計９個のクローンが５５に対するヒトモノクローナル
抗体を３ケ月間よシ長期にわたって安定に生産した。
抗体を３ケ月間よシ長期にわたって安定に生産した。
幾つかのクローンから上溝液を分離し、そして試験のた
め忙使用した。イン−ビトロ試験によシ、これらのヒト
モノクローナル抗体がＥ、コリのエンドトキシンとのみ
ならず他のグラム陰性細菌種の幾つかとも反応すること
が確認され、そしてイン−二＆Ｅ験によす、シ１−ドモ
ナヌ・エルギノーザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒ
ｕｇｉｎｏｓａ）及びＥ、コリ ０１１１Ｂ４により誘
導された致命的敗血症に対してマウスが顕著に保脛され
ることが証明された。ラピ、トヘの静脈内注射によシこ
れらのヒトモノクローナル抗体を発熱性について試験し
た場合、発熱は認められなかった。
め忙使用した。イン−ビトロ試験によシ、これらのヒト
モノクローナル抗体がＥ、コリのエンドトキシンとのみ
ならず他のグラム陰性細菌種の幾つかとも反応すること
が確認され、そしてイン−二＆Ｅ験によす、シ１−ドモ
ナヌ・エルギノーザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒ
ｕｇｉｎｏｓａ）及びＥ、コリ ０１１１Ｂ４により誘
導された致命的敗血症に対してマウスが顕著に保脛され
ることが証明された。ラピ、トヘの静脈内注射によシこ
れらのヒトモノクローナル抗体を発熱性について試験し
た場合、発熱は認められなかった。
この発明のモノクローナル抗体はグラム陰性細菌のコア
リポポリサケ力２イドについて特異的であυ、このため
一般にグラム陰性細菌に対する受動免疫のため、及び工
ンドトキシンシ１．りの治療のために有用である。これ
らのモノクローナル抗体は高度に特異的であシ、高い結
合定数を有する。
リポポリサケ力２イドについて特異的であυ、このため
一般にグラム陰性細菌に対する受動免疫のため、及び工
ンドトキシンシ１．りの治療のために有用である。これ
らのモノクローナル抗体は高度に特異的であシ、高い結
合定数を有する。
その特徴を定義することができる特異的なりローナル抗
体の安定な生産を維持する能力は非常に重要である。第
１１Ｃ１一般的用途のために有用な量においてヒトモノ
クローナル抗−５５抗体の継続的な生産を行うためにこ
の発明のノ〜イブリドーマを拡張することができる。第
２１Ｃ１この発明のモノクローナル抗体は均一に生産さ
れ得るため、これらを、適切に精製するために特徴付け
ることができる。第３１Ｃ１このモノクローナル抗体は
ヒトの抗体であるから、反復して注射した後の免疫反応
は相対的に低く、そして宿主の健康及び継続的な生存に
害を与えないはずである。第４に、この発明のモノクロ
ーナル抗体を用いる経験によシ、同じ結合特異性を有す
る同一の又は異るイデオタイプに対する宿主の反応に関
する情報を得ることができる。
体の安定な生産を維持する能力は非常に重要である。第
１１Ｃ１一般的用途のために有用な量においてヒトモノ
クローナル抗−５５抗体の継続的な生産を行うためにこ
の発明のノ〜イブリドーマを拡張することができる。第
２１Ｃ１この発明のモノクローナル抗体は均一に生産さ
れ得るため、これらを、適切に精製するために特徴付け
ることができる。第３１Ｃ１このモノクローナル抗体は
ヒトの抗体であるから、反復して注射した後の免疫反応
は相対的に低く、そして宿主の健康及び継続的な生存に
害を与えないはずである。第４に、この発明のモノクロ
ーナル抗体を用いる経験によシ、同じ結合特異性を有す
る同一の又は異るイデオタイプに対する宿主の反応に関
する情報を得ることができる。
以上、説明及び例によ）この発明をやや詳細に説明した
が、この発明の範囲内において幾つかの変化、変法を実
施することができよう。
が、この発明の範囲内において幾つかの変化、変法を実
施することができよう。
なお、ハイツリドーマＤＩＯは１９８３年１１月８日に
、Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，にＮｏ．ＨＢ８４１７として寄託さ
れた。このＤＩＯはＸ６３−Ａｇ３．６５３を用いる融
合からのサックローンである。
、Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，にＮｏ．ＨＢ８４１７として寄託さ
れた。このＤＩＯはＸ６３−Ａｇ３．６５３を用いる融
合からのサックローンである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、グラム陰性細菌のコアリポポリサッカライドに特異
的なヒトモノクローナル抗体。 ２、Ｊ５免疫原に反応して産生される特許請求の範囲第
１項記載のモノクローナル抗体。 ３、ＩｇＧＮ又はＩｇＭである特許請求の範囲第２項記
載のモノクローナル抗体。 ４、ＩｇＧ、又はＩｇＭである特許請求の範囲第１項記
載のモノクローナル抗体。 ５、不滅化された細胞系と、グラム陰性細菌のコアリポ
ポリサッカライドに対して感作され該コアリポポリサッ
カライドに対する抗体を産生することができるヒトＢ−
リンパ球とからのハイブリドーマ。 ６、前記不滅化された細胞系がマウス−ヒトヘテロミエ
ローマである特許請求の範囲第５項記載のハイブリドー
マ。 ７、前記リンパ球が融合に先立ってＥＢＶにより形質転
換される特許請求の範囲第６項記載のハイブリドーマ。 ８、致命的なグラム陰性細菌に感受性の宿主を処置する
方法であって、グラム陰性細菌のコアリポポリサッカラ
イドに特異的なヒトモノクローナル抗体を、受動免疫又
は能動治療をもたらすのに十分な量において、前記宿主
に投与することを含んで成る方法。 ９、ＡＴＣＣ標示Ｎｏ．ＨＢ８４１７を有するハイブリ
ドーマＤ１０。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP84308218A EP0183876A1 (en) | 1984-11-27 | 1984-11-27 | Monoclonal antibodies for endotoxin core and their use |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61130300A true JPS61130300A (ja) | 1986-06-18 |
Family
ID=8192823
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59248844A Pending JPS61130300A (ja) | 1984-11-27 | 1984-11-27 | ヒトモノクロ−ナル抗体 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0183876A1 (ja) |
| JP (1) | JPS61130300A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0257195A (ja) * | 1988-08-19 | 1990-02-26 | Morinaga & Co Ltd | 抗破傷風毒素ヒト型モノクローナル抗体、それを利用した破傷風毒素中和剤及びヒト型モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4918163A (en) * | 1985-09-27 | 1990-04-17 | Pfizer Inc. | Monoclonal antibodies specific for lipid-A determinants of gram negative bacteria |
| US5179001A (en) * | 1985-09-27 | 1993-01-12 | The Regents Of The University Of California | Detection and monitoring of chronic and gram-negative infection |
| ES2009365A6 (es) * | 1986-04-24 | 1989-09-16 | Univ California | Procedimiento de otencion de anticuerpos monoclonales para bacterias gram-negativas. |
| FR2606421B1 (fr) * | 1986-11-12 | 1990-01-26 | Roussel Uclaf | Anticorps monoclonaux antigram (-) procede de preparation et applications |
| JPH01197500A (ja) * | 1988-01-29 | 1989-08-09 | Sumitomo Chem Co Ltd | ヒトモノクローナル抗体 |
| CA1341375C (en) * | 1988-10-12 | 2002-07-09 | Baxter International Inc. | Compositions and methods for the treatment and prevention of gram-negative bacterial infections |
| GB9105292D0 (en) * | 1991-03-13 | 1991-04-24 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
| US6790661B1 (en) | 1999-07-16 | 2004-09-14 | Verax Biomedical, Inc. | System for detecting bacteria in blood, blood products, and fluids of tissues |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58201994A (ja) * | 1982-05-21 | 1983-11-25 | Hideaki Hagiwara | 抗原特異的ヒト免疫グロブリンの生産方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0776240B2 (ja) * | 1983-05-06 | 1995-08-16 | ベロス グル−プ | エンドトキシンコア−と反応性のモノクロ−ナル抗体 |
| US5179018A (en) * | 1983-10-14 | 1993-01-12 | Centocor, Inc. | Mamalian monoclonal antibodies against endotoxin of gram-negative bacteria |
-
1984
- 1984-11-27 EP EP84308218A patent/EP0183876A1/en not_active Withdrawn
- 1984-11-27 JP JP59248844A patent/JPS61130300A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58201994A (ja) * | 1982-05-21 | 1983-11-25 | Hideaki Hagiwara | 抗原特異的ヒト免疫グロブリンの生産方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0257195A (ja) * | 1988-08-19 | 1990-02-26 | Morinaga & Co Ltd | 抗破傷風毒素ヒト型モノクローナル抗体、それを利用した破傷風毒素中和剤及びヒト型モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0183876A1 (en) | 1986-06-11 |
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