JPS61100194A - バチルスズブチリスのグルコン酸オペロンおよびプロモ−タ− - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕ
ｂｔｉｌｉｓ　）のグルコン酸オペロンとその転写を支
配するプロモーターに関する。

本発明は特に、培地中へのグルコン酸添加により誘導的
にオペロンの転写を可能ならしめる部分をも含むＤＮＡ
塩基配列に関する。

近年の遺伝子工学の発暎により、異種遺伝子をベクター
と結合した組換え体ＤＮＡを微生物細胞へ導入すること
により、該遺伝子がコードする蛋白を宿主微生物中で産
生ずることが可能となって来た。このような技術を用い
て物質生産を企てる場合、バチルス属細菌はこれまで永
い間に亘って発酵工業で用いられてきた経験があること
、また病原性がなく発熱物質を産生じないことから、現
在遺伝子工学研究に広く用いられている大腸菌に比し宿
主微生物としてより好適であることはよく知られている
。しかしながら、バチルス属細菌を宿主として異種遺伝
子を発現させる場合はバチルス属細菌のＲＮＡポリメラ
ーゼおよびリボゾームがプロモーター領域およびリボゾ
ーム結合領域の認識に関して厳格な特異性をもつため（
堀之内末治、蛋白質　核酸　酵素且互　１４６８（１９
８３））それらの領域がバチルス属由来であることが必
要である（Ｇｏｌｄｆａｒｂ、Ｄ、Ｓ、ｅｔ　　ａｌ、
Ｎａｔｕｒｅ２９３３０９（１９８１）　）。かかる観
点から、バチルス属細菌で異種遺伝子の発現を可能なら
しめるバチルス属由来のプロモーターは、遺伝子工学に
よる物質生産上重要な鍵を握るものである。また、遺伝
子工学による物質生産の別の観点から異種遺伝子の発現
の時期に関し次の二点が従来より問題とされている。

第一の問題点は、宿主微生物細胞にとって有害である物
質を製造する場合は、宿主微生物の増殖の初期に該物質
をコードする遺伝子が発現され該物質が産生されたなら
ば宿主微生物はその時点で死滅してしまい該物質の製造
は不可能となることである。このような事態を回避する
ためには宿主微生物の増殖が終了して後に該遺伝子の発
現が開始されればよい。即ち何らかの手段により宿主微
生物の増殖終了後肢遺伝子の発現を誘導すればよい。し
かしながらバチルス属細菌において誘導による発現に関
与するプロモーターは従来抗生物質によって誘導される
ー、二の例が知られているに過ぎず（Ｋ、Ｈａｒｄｙら
Ｎａｔｕｒｅ　２９３４８１（１９８１）　。

Ｄ　、Ｍ、Ｗｉ　Ｉ　ｌ　ｉ　ａｍｓらＧｅｎｅ　１６
１９９（１９８１）　）これらの場合誘導物質として高
価な抗生物質を使用している点　また最終的に目的とす
る物質から抗生物質を除去する工程を要する点に大きな
問題があった。

他方、製造される物質が宿主微生物にとって無害な場合
は増殖の初期から該物質をコードする遺伝子が発現され
該物質が産生された方が短時間に多量に該物質が蓄積さ
れると云５？ｆｆ１点から好ましく前記の問題はない。

第二の問題は、培地中に糖源がある場合にカタボライト
リプレノシランとして知られる現象であるが、プロモー
ターの働きが抑えられその結果遺伝子の発現が抑制され
る場合のことである。物質生産上この点も大きな問題で
あり、これを回避する為には長時間培養するが或は培地
の糖源を抜くことが必要となる。

このことは余計な用役コストを必要とするか或は安価な
廃糖蜜を培地に用いることを不可とするもので工業的な
物質生産上早期の解決をせまられている点でもある。

このような点に鑑み本発明者は、安価な物質の添加によ
り任意の培養時期に誘導可能でかつ誘導以前は発現がお
こらないバチルス属の誘導酵素について検討を重ねてい
たところ遂に、グルコースから容易に得られる安価なグ
ルコン酸資化に関与するグルコン酸オペロンがグルコン
酸添加によって急速に誘導がおこることを見出し、該オ
ペロンの発現を司るプロモーターおよびそれに連らなる
該オペロンをＤＮＡ断片として単離することに成功しそ
の塩基配列を決定し本発明を完成した。

更にプロモーター検索プラスミドｐＰＬ６０３Ｂを用い
た検討の結果、該ＤＮＡ％片のプロモーター近傍の塩基
配列を該プラスミドに挿入するとその塩基配列の長さに
応じてｐ　ＰＬ６０３　Ｂのクロラムフェニコール耐性
遺伝子の発現がグルコン酸による誘導を受る場合と全く
誘導を受けずグルコース存在下でも抑制されることなく
発現される場合があることを認め本発明の実用性を確認
した。即ち本発明によって前述したバチルス唄を宿主と
した遺伝子工学の手法を用いた物質生産における二つの
問題点が一気に解決出来ることが証明された。

以下本発明の詳細な説明する。

グルコン酸オペロンおよびそのプロモーターを含むＤＮ
Ａ断片を得るためのＤＮＡ供与株としては、グルコン酸
資化性を有するバチルスズブチリスであればいかなるも
のでもよい。とは言っても該資化性に関与する酵素、即
ちグルコン酸オペロン中にコードされるグルコン酸パー
ミアーゼおよびグルコン酸キナーゼが、グルコースによ
るカタボライトリブレッジ冒ンを厳密に受け、かつグル
コースが培地中に存在しない条件下ではグルコン酸によ
り強く誘導されるものであることが本発明の目的から好
適である。また該ＤＮＡ′＠片を得るためのクローニン
グ宿主としては、いかなるバチルス属細菌も使用可能で
あるが遺伝的解析が進んでいる点からバチルスズブチリ
スが好ましく、更に選択の容易さからグルコン酸資化性
欠損昧であることが都合がよい。

尚、本発明においてオペロンとは、通常の概念と同様に
プロモーターに連なる一つの転写単位である遺伝子群を
意味する。またプロモーターとは、ＲＮＡポリメラーゼ
が結合しオペロンの転写を開始する部位を意味する。従
って本発明で云うグルコン酸オペロンおよヒフロモータ
ートハクルコン酸を資化するのに必要な酵素であるグル
コン酸キナーゼおよびグルコン酸パーミアーゼをコード
する遺伝子を含む一つの転写単位およびその転写単位の
ｍ　ＲＮ　Ａ合成のためのＲ，ＮＡポリメラーゼ結合部
位を意味する。このようなグルコン酸オペロンおよびプ
ロモーターを含むＤＮＡ断片を得るたためには、バチル
スズブチリスの通常のクローニング技術を用いればよく
何ら特別の手法を要しない。該技術については成書（Ｊ
Ａ、Ｄｕｂｎａｕ編Ｔｈｅ　　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　　
　Ｂｉｏｌｏｇｙ　　　ｏ（ｔｈｅ　　　Ｂａｃｉｌｌ
ｉ。

Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　１９８２．ＲｏＷ、Ｏ
ｌｄ、Ｓ、Ｂ、Ｐｒｉｍｒｏｓｅ著Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅ
ｓ　ｏｆ　Ｇｅｎｅ　Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ。

Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｐｕｂｌ
ｉｃａｔｉｏｎｓ１９８１）に詳しい、クローニングに
用いるベクターとしてはファージおよびプラスミドのい
ずれでも差支えない。例えばファージベクターとしては
り１１、φ１０５、φ３Ｔ等が通常よく用いられまたプ
ラスミドベクターとしてはｐＵＢｌｌｏ、ｐｃ１９４、
ρＥ１９４、ｐＢＤ６４等がよく使用されているがその
いずれもが本発明の実施に使用可能である。クローニン
グ宿主としてグルコン酸資化性欠損バチルスズブチリス
を用いた場合、目的とするグルコン酸オペロンおよびそ
のプロモーターを含むＤＮＡ断片を得ることが容易とな
る。即ちグルコン酸資化能を獲得した形質転換株を選択
すればよいからである。

このようにして得られた形質転換株から組換え体ＤＮＡ
を得るには何ら特別の方法を要せず通常のファージＤＮ
Ａ、プラスミドＤＮＡの調製法を用いればよい。これら
の方法に就いては成書（Ｔ。

ｍａｎｉａｔｉｓら著Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉ
ｎｇ　ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ　（１９８２）　）に述べられている。得
られた組換え体ＤＮＡは、制限エンドヌクレアーゼを用
いて切断した後アガロースあるいはポリアクリルアミド
ゲル電気泳動を行うことによりその切断部位を決定し切
断地図をつくることが出来る。得られた組換え体ＤＮＡ
のベクターに挿入されたＤＮＡ断片の塩基配列の決定は
通常用いられる方法のいずれでも可能であるがその様な
方法としてＭａ　ｘ　ａｍ−Ｇｉ　Ｉ　ｂ　ｅ　ｒ　ｔ
の方法（Ａ。

Ｍａｘａｍ　、　Ｗ、Ｇ１１ｂｅｒｔ、Ｐｒｏｃ、Ｎａ
ｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ。

ＵＳＡ　７４５６０（１９７７））またはファージＭ１
３を用いる方法（Ｊ、ＮＩｅｓｓｉｎｇら、Ｎｕｃｌ　
、Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、。

９　３０９（１９８１）、　　几、Ｊ、Ｚａｇｕｒｓｋ
ｙ、Ｍ、Ｌ、Ｂｅｒｍａｎ　　。

Ｇｅｎｅ　２７１８３　（１９８４）がよく知られてい
る。

本発明で得られたグルコン酸オペロンおよびそのプロモ
ーターを含むＤＮＡ断片の塩基配列は特許請求の範囲第
２項に示すとおりで、この配列を模式的に示したものが
図−１である。この配列のうちプロモーターに見出され
るＲＮＡポリメラーゼの認識および結合のための塩基配
列である一３５領域および一１０領域は本発明の場合は
それぞれＴＴＧＣＡＴ　およびＴＡＴＣＡＴ　でシ’ｆ
マー５５　ＲＮＡポリメラーゼで認識されるプロモータ
ーの共通とされる配列ＴＴＧＡＣＡおよびＴＡＴＡＡＴ
と頃似しており効率的に転写がなされる型のものである
。

また枯草菌（バチルス・ズブチリス）が異種遺伝子の発
現を許さない重要な機構として褪ＮＡから蛋白へと翻訳
する過程でのりボゾームとｍ１ＮＡの結合の問題が知ら
れており、Ｍｃ　Ｉ　ａｕｇｈ　Ｉ　ｉ　ｎら（Ｊ。

几０Ｍｃｌａｕｇｈｌ　ｉｎら、　Ｊ、Ｂｉｏｌ　、Ｃ
ｈｅｍ、２’５６１１２８３　、。

（１９８１）　）はリポソーム結合領域として知られる
プロモーター下流の塩基配列と１６８　！ＪボソームＲ
ＮＡの３末端との強い結合が発現のために重要であると
しているところである。本発明のグルコン酸オペロンの
プロモーターの下流に存在スる最初の蛋白のリポソーム
結合領域の塩基配列はＡＧＧＡＡＧＧ　であり、バチル
スズブチリスのリポソームＲＮＡの３１末端３’、）Ｉ
ＵｃＵＵＵｃｃ”　とよい相補性を持っている。従って
本発明のグルコン酸オペロンのリポソーム結合領域はバ
チルスズブチリスにおいて強い発現を行いうる型のもの
であることが肯首される。

このことはプロモーター検索ベクターに本発明のプロモ
ータ一部分を含むＤＮＡ断片を挿入した場合、そのクロ
ラムフェニコール耐性遺伝子（クロラムフェニコールア
セチルトランスフェラーセ遺伝子）を発現させ合成培地
で１００μυ完の該抗生物質に対する耐性を与えること
でも明らかである。

そして更にその場合、プロモーターを含む短いＤＮＡ断
片を挿入すると、クロラムフェニコールアセチルトラン
スフェラーゼはグルコース存在下でカタボライトリプレ
ノ７ｇンを受けることなく誘導時と同様に高いレベルで
発現し宿主バチルスズブチリスに１００μｇ／−＝ｔの
該抗生物質耐性を与える。またプロモーターを含む長い
ＤＮＡ断片な挿入スると、クロラムフェニコールアセチ
ルトランスフェラーゼは通常発現は抑えられているがグ
ルコン酸を培地に添加することにより誘導可能であり宿
主バチルスズブチリスに１００μ９／／ｌ／の該抗生物
質耐性を与え、この誘導はグルコースによるカタボライ
トリプレノクランを受けていることが示された。

上に述べたことは即ち本発明の塩基配列を使用すること
により異種遺伝子を条件に応じてカタボライトリプレノ
ンランを受けることなく構成的に発現させることも、ま
た任意の時期にグルコン酸添加により誘導的に発現させ
ることも可能であることを示すもので、遺伝子工学を用
いた物質生産上大きな意義を有するものである。

尚、本発明の塩基配列も、遺伝子に関する分子生物学の
常識に従ってその任意の部分の塩基を他のものと置換し
たり、新たに塩基を挿入したり、または削除した場合、
或は塩基配列の一部を転移させた場合に得られる誘導体
についても上に述べた本発明の効果を有する場合があり
、そのようなものは当然に本発明の範噴に入るものであ
る。

以下本発明を具体例で塾明するが本発明は何らこの例に
限定されるものではない。

実施例１（バチルスズブチリスのグルコン酸オペロンの
クローニング） バチルスズブチリスＭ　１６８　（ｔｒｐＣ２）株（オ
ハイオ大学バチルスストックセンター保存昧：保存番号
ＩＡＩ）肉汁培地（Ｄｉｆｃｏ社製ニー−トリエンドブ
ロス）２ｇを用い３７℃で１５時間培養した後集菌し、
Ｓａ　ｉ　ｔｏ−Ｍｉ　ｕｒａの方法（ＨｏＳａｉｔｏ
。

Ｋ−１０Ｍｉｕｒａ　Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ
、Ａｃｔａ　７２６１９（１９６３）　）に従い５ｆｆ
１９の精製ＤＮＡを得た。このｆｆｆｆＤＮＡを更にセ
シウムクロライド密度勾配遠心で精製し、そのうち５μ
りを１０単位の制限ヌクレアーゼＥｃｏＲＩ（宝酒造袈
）を用い３７℃６時間の反応で完全に切断した。この反
応系の組成は１００　ｍＭ　）リスＨＣＩ　（ｐＨ７、
５）　　＋　　７　ｍＭ　ＭｇＣｌ２＋５０　ｍＭ　Ｎ
ａＣ１、７ｍＭ　２−メルカプトエタノール。

０．０１　％ウシ血清アルブミンである。

反応物をフェノール抽出、エタノール沈殿で精製し、こ
のものを、他方において同様にＥｃ　ｏ　ＲＩで切断し
ておいたファージφ１０５ＤＮＡ（５μり）とＴ４リガ
ーゼ（全酒造製）による結合反応を行なわせた。この結
合反応にはＴ４リガーゼＩＱ単位を用いた。この反応系
の組成は６６ｍＭ）’Ｊスス−−ＩＣｄ（ｐＨ７，６）
　、　６．６ｍＭＭ９Ｃ１２，１０ｍＭジチオスライト
ール、　１　ｍＭＡＴＰである。反応は１５℃で４時間
行った。このようにして得られた組換え体ファージを用
いて、次にバチルスズブチリスの形質転換を行った。宿
主菌としてはグルコン酸オペロンが欠失した変異株（Ｇ
ｎｔ　　）であるバチルスズブチリス６１６５６株（Ｆ
ＥＢＭＰ−７８３４）を用いた。組換え体ファージによ
る形質転換にさきだって、まずファージφ１０５を６１
６５６株に感染させ該ファージが溶原化した６１６５６
株を得た。この溶原菌の、コンピテント細胞を５ａｉｔ
ｏらの方法（Ｈ，５ａｉｔｏらＪ、Ｇｅｎ、Ａｐｐｌ、
Ｈｉｃｒｏｂｉｏｌ、７２４３（１９６１））に従って
調製し前に述べた組み換え体ファージＤＮＡを用いて形
質転換を行った。この方法の詳細については筒材によっ
て紹介されている（筒材富士夫蛋白質　核酸　酵素　２
６４６９（１９８１））。

この形質転換によって２５０株のグルコン酸資化性株（
Ｇｎｔ＋）が得られた。この形質転換株のひとつである
６１６５６０Ｐ株（ＦＥＢＭ　Ｐ−７８３５）からマイ
トマイシンＣによりファージを誘発し該ファージを用い
て新たに該ファージが溶原化されている６１６５６株を
造成したところ全てグルコン酸資化性（Ｇｎｔ＋）　　
となった。該株（６１６５６（φ１０５Ｇｎｔ”）］の
グルコン酸キナーゼとグルコン酸パーミアーゼの活性を
表−１に示した通りである。

グルコン酸キナーゼおよびグルコン酸パーミアーゼの活
性はそれぞれＢｅｒｇｍｅｙｅｒ　　らの方法（ＨｌＵ
、Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ　ｆ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｅ
ｎｚｙｍａｔｉｃＡｎａｌｙｓｉｓ　４５７頁Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　（１９７４））およびＤｏｗｄ
ｓらの方法（Ｂ、ＤｏｗｄｓらＢｉｏｃｈｉｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ　５４１１８（１９７８）　
　）に従った。

木表から該形質転換株ではグルコン酸中ナーゼおよびグ
ルコン酸パーミアーゼ活性を誘導できていることが明ら
かである。

このことからグルコン酸キナーゼおよびグルコン酸パー
ミアーゼの構造遺伝子およびその発現調節遺伝子即ちグ
ルコン酸オペロンとそのプロモーターはここで得られた
φ１０５　Ｇｎｔ十中にクローニングされていることが
明らかである。

６１６５６（Ｇｎｔ）　　　１　　　１　　　　１　　
　　　１由活性は６１６５６（Ｇｎｔ　　）の誘導のな
い場合を１として相対値で示した。

誘導は１０　ｍＭグルコン酸添加で行った。培地は実施
例３に記したものと同じであるがグルコースは添加しな
かった。

実施例２（制限エンドヌクレアーゼてよる切断地図の作
製および塩基配列の決定） 実施例１で得られた６１６５６０Ｐ（φ１０５Ｇｎｔ＋
）力ちφ１０５　Ｇｎ　ｔ＋ファージＤＮＡを調製し、
常法に従い制限エンドヌクレアーゼＥｃｏ凡工で切断し
てアガロースゲル電気泳動でその切断パターンを調べた
。

対照としてφ１０５　ファージＤＮＡを同様にＥＣ０Ｒ
Ｉで切断したものを用いた。その結果的７　Ｋｂ　のＥ
ｃｏＲＩ断片にグルコン酸オペロンとそのプロモーター
がクローニングされていることが判明したのでその制限
エンドヌクレアーゼ切断地図を作成した。その切断地図
は第１図忙示す。更に本図中に示すＨｉｎｄ　■の約４
．５ＫｂのＤＮＡ断片ＶＣり／Ｌ／　＝ｆｆン酸オペロ
ンとそのプロモーターが存在することが明らかとなった
のでＭａ　ｘ　ａｍ−Ｇｉ　ｌ　ｂ　ｅ　ｒ　ｔの方法
に従い該ＤＮＡ断片の塩基配列を決定した。その結果は
特許請求の範囲に示すものである。この結果を模式的に
示したものが第２図である。本図かられかる通りこの塩
基配列にはプロモーターおよび蛋白質をコードする４つ
のオープンリーディングフレームが存在する。このこと
からグルコン酸オペロン中にはグルコン酸キナーゼ、グ
ルコン酸パーミアーゼの他に２つの調節のための蛋白が
コードされることが明らかとなった。

ｌＵｉ例３（グルコン酸オペロンのプロモーター近傍の
ＤＮＡ断片による異種遺伝子の発 現の検討） プロモーターを含むＤＮＡ断片を挿入することによりク
ロラムフェニコール耐性遺伝子（クロラムフェニコール
アセチルトランスフェラーゼ遺伝子）を発現させるプロ
モーター検索ベクターｐＰＬ６０３Ｂ（クローニング部
位はＢａｍＨＩ　）を用いて異種遺伝子の発現の検討を
行った。即ち制限エンドヌクレアーゼ８ａｕ３ＡＩで部
分切断したグルコン、酸オペロンおよびそのプロモータ
ーを含むＨｉｎｄＩＩＩ４．５ｋｂ断片より得られたＳ
ａｕ　３ＡＩＤ　Ｎ　Ａ断片をｐＰＬ６０３Ｂ　　のク
ローニング部位に挿入し常法によりＴ４リガーゼにより
結合した。該組換えプラスミドを用いてバチルスズブチ
リスｌＡ４２３ｉ（オ・・イオ犬学バチルスストックセ
ンター保存株）ヲＣｈａｎｇの方法（Ｓ、Ｃｈａｎｇ　
、　Ｓ、Ｎ、Ｃｏｈｅｎ　Ｍｏｌ、ＧｅｎＧｅｎｅｔｌ
　６８　１１１　（１９７８）　）に従って形質転換し
た。その結果得られた形質転換株のひとつ１８２１（Ｆ
ＥＲｆ’ｖｆＰ−７８３２）は約１．５　ｋｂ　の挿入
ＤＮＡ断片を含み、グルコン酸による誘導をかけると１
００μ９／、、／　　のクロラムフェニコール耐性を与
えるがｌＱｍＭグルコース存在下ではこの誘導がおきす
カタボライトリプレッションで制御されていることが明
らかとなった。また別に得られた形質転換株ＩＳ２２（
ＦＥＲＭ　Ｐ−７８３３）は約０．４　ｋｂの挿入ＤＮ
Ａ断片を含みこのものは１００ｍＭグルコース存在下で
も１００μか勺のクロラムフェニコール耐性を与えるも
のであることが明らかとなった。

この結果から、本発明のグルコン酸オペロンおよびその
プロモーターを用いると、異種遺伝子を誘導的にも、ま
たカタボライトリプレッションを受けない構成的なもの
としても、目的に応じて任意に発現させることが可能と
なることが明らかである。尚、このクロラムフェニコー
ルアセチルトランスフェラーゼの発現に用いた培地組成
は、１００ｍＭ　４−モルホリノプロパン硫酸カリウム
緩衝液（ｐＨ７，０）　、　１０　ｍＭ硫安、５ｍＭリ
ン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，０）　、　１　ｍ〜Ｉ　
ＭｇＣ（１２，０，７ｍＭＣａ　Ｃ１２１５０３Ｍ　Ｍ
ｎ　Ｃ１１２１１μＭＺ　ｎ　Ｃ１２１５ｐＭＦｅＣ１
１３，５９／ｌカザミノ酸（Ｄｉｒｃｏ）、５０μり／
、ｔ／Ｌ−）リプトファン、５０μ９／ｍｔＩ、−メチ
オニンでありグルコースは必要に１芯じて１０または１
００　ｍＭの濃度で添加した。また誘導物質であるグル
コン酸は１０ｍＭＩｆｌ−加した。培養は３７℃で行っ
た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、グルコン酸オペロンおよびそのプロモーター
を含むＤＮＡ断片の制限エンド ヌクレアーゼ切断地図である。約４．５ｋｂのＨｉ　ｎ
ｄｌ［断片中にグルコン酸オペロンおよびそのプロモー
ターを含む。 該部分を用いて塩基配列の決定を行っ た。 第２図は、グルコン酸オペロンおよびそのプロモーター
の模式図である。 ＡＴｒｉｃｈ：アデニン、チミンが多くみられる配列 −３５：プロモーターの一３５領域 −１０：プロモーターの一１０領域 ＳＤ　　：リポソーム結合領域 をそれぞれ示している。 なお、Ｆｒａｍｅ　Ａ、　Ｂ％Ｃ，Ｄは蛋白をフードし
ているオープン多−デイン グフレームを示す。 特許出願人　三井東圧化学株式会社 目　　面 竿　１　目 手続補正書（方式） 昭和６０年　３月ｒ日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）バチルスズブチリスのグルコン酸オペロンの転写を
   支配するプロモーターおよびその支配下にあり、カタボ
   ライトリプレッションによりその転写が調節されるグル
   コン酸オペロンを含むＤＮＡ断片。 ２）片方の鎖が以下に示す塩基配列であることを特徴と
   する特許請求の範囲第一項に記載のＤＮＡ断片。 【塩基配列があります】 ３）特許請求の範囲第二項に記載した塩基配列またはそ
   の一部を塩基の置換、挿入、削除および転移することに
   より得られることを特徴とする塩基配列。