JPS6091265A - 血清中の鉄の測定方法 - Google Patents
血清中の鉄の測定方法Info
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- JPS6091265A JPS6091265A JP19960883A JP19960883A JPS6091265A JP S6091265 A JPS6091265 A JP S6091265A JP 19960883 A JP19960883 A JP 19960883A JP 19960883 A JP19960883 A JP 19960883A JP S6091265 A JPS6091265 A JP S6091265A
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/84—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving inorganic compounds or pH
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、血清中の鉄濃度を測定する方法に関し、更に
詳しくは、三波長測定にょシ、血清中の鉄鑓度を」り定
する方法に関する。
詳しくは、三波長測定にょシ、血清中の鉄鑓度を」り定
する方法に関する。
従来、血清鉄の測定法としては、発色試薬としてバソフ
ェナンドロリン、TPTZ(2,’1,6−トリビリジ
ルーS −)リアジン)、フェロジン等を用いる比色法
が知られている。これらの発色試薬は、血清鉄と錯体を
作り、!0θ〜100習次最大吸収のある赤色を呈する
ので、とれを比色定量することによシ、血清鉄の濃度を
測定することができる。
ェナンドロリン、TPTZ(2,’1,6−トリビリジ
ルーS −)リアジン)、フェロジン等を用いる比色法
が知られている。これらの発色試薬は、血清鉄と錯体を
作り、!0θ〜100習次最大吸収のある赤色を呈する
ので、とれを比色定量することによシ、血清鉄の濃度を
測定することができる。
しかし、この従来法によれば、蛋白質、色素等の影響に
よるsoonm以下の吸収や乳ビ血清のけん濁を生じる
ため、除蛋白や対照試験などの操作を必要とする。従っ
て、操作が煩雑となシ、また、分析時間が長くなる等の
欠点がある。
よるsoonm以下の吸収や乳ビ血清のけん濁を生じる
ため、除蛋白や対照試験などの操作を必要とする。従っ
て、操作が煩雑となシ、また、分析時間が長くなる等の
欠点がある。
また、上記以外の発色試薬として、蛋白質の影響を受け
ない長波長域に吸収極大をもつ鉄錯体を形成するニトロ
ソアミノフェノール誘導体が知られている。例えば、λ
−ニトロソーター(N−プロピル−N−スルホプロピル
アミノ)フェノールを用いると、鉄錯体の吸収極大は7
Iごnmなので、血清中の蛋白質等による吸収の影響が
ほとんどなく、従って、除蛋白操作をする必要がない。
ない長波長域に吸収極大をもつ鉄錯体を形成するニトロ
ソアミノフェノール誘導体が知られている。例えば、λ
−ニトロソーター(N−プロピル−N−スルホプロピル
アミノ)フェノールを用いると、鉄錯体の吸収極大は7
Iごnmなので、血清中の蛋白質等による吸収の影響が
ほとんどなく、従って、除蛋白操作をする必要がない。
しかし、乳ビ血清の場合には、血清中にけん濁する浮遊
物の影響までは除くことができないので対照試験は免れ
ない。
物の影響までは除くことができないので対照試験は免れ
ない。
そこで、乳ビ血清等のけん濁した血清試料に対しても有
効な鉄の測定方法を見い出すべく鋭意研究を行った結果
、ニトロソアミノフェノール誘導体を発色試薬として、
特定の三波長における吸光度の差を測定すれば、対照試
験をすることなく、けん濁等由来の吸光度のもち上がり
、を補正することができ、簡単かつ精度良く血清中の鉄
濃度を測定することができることを見い出し、本発明に
到達した。
効な鉄の測定方法を見い出すべく鋭意研究を行った結果
、ニトロソアミノフェノール誘導体を発色試薬として、
特定の三波長における吸光度の差を測定すれば、対照試
験をすることなく、けん濁等由来の吸光度のもち上がり
、を補正することができ、簡単かつ精度良く血清中の鉄
濃度を測定することができることを見い出し、本発明に
到達した。
すなわち、本発明の扱旨は、ニトロンアミノフェノール
誘導体を発色試薬として血清試料と混合し、錯形成反応
にょシ生じる鉄錯体の吸光度の測定により血清中の鉄濃
度を測定する方法において、dll」定波長をに!0−
+1’矛。nm 、参照波長を2!θ〜/θ00’nm
、測定波長と参照波長の差を10nm以上として、測定
波長および参照波長における吸光度の差を測定すること
を特徴とする血清中の鉄の測定方法に存する。
誘導体を発色試薬として血清試料と混合し、錯形成反応
にょシ生じる鉄錯体の吸光度の測定により血清中の鉄濃
度を測定する方法において、dll」定波長をに!0−
+1’矛。nm 、参照波長を2!θ〜/θ00’nm
、測定波長と参照波長の差を10nm以上として、測定
波長および参照波長における吸光度の差を測定すること
を特徴とする血清中の鉄の測定方法に存する。
以下、本発明の詳細な説明する。
本発明方法による測定は、一般には三波長分光光度計の
各々の波長を、特定の三波長に設定することにより行な
うが、第一の波長(測定波長) ヲ、発色試薬にニトロ
ソアミノフェノール誘導体)によって形成される鉄錯体
の吸収極大波長に合わせ、第二波長(参照波長)は、測
定波長よシ長波長でスペクトルが安定な波長範囲から選
択する。すなわち、測定波長は乙!O〜zsθnm 、
参照波長は7.fO〜11000nから選ばれ、測定波
長と参照波長の差は/θnm以上、好捷しくけjθnm
以上である。
各々の波長を、特定の三波長に設定することにより行な
うが、第一の波長(測定波長) ヲ、発色試薬にニトロ
ソアミノフェノール誘導体)によって形成される鉄錯体
の吸収極大波長に合わせ、第二波長(参照波長)は、測
定波長よシ長波長でスペクトルが安定な波長範囲から選
択する。すなわち、測定波長は乙!O〜zsθnm 、
参照波長は7.fO〜11000nから選ばれ、測定波
長と参照波長の差は/θnm以上、好捷しくけjθnm
以上である。
本発明で使用される発色試薬のニトロソアミノフェノー
ル誘導体としては、−ユニトロン−5−(N−フロピル
ーN−スルホプロピルアミノ)フェノール(以下、「ニ
トロソ−PSAP Jト略ス。)、コーニトロソー、、
t−(N−エチル−N−スルホエチルアミノ)フェノー
ル、コーニトロ7−J−−<N−エチル−N−スルホプ
ロピルアミノ)フェノール、コー二トロンーt−(N−
ブチル−N−スルホプロピルアミノ)フェノール、コー
ニトロンー5−(N、N−ジスルホプロピルアミノ)フ
ェノール、−一ニトロソーグーメチル−!−(N−エチ
ル−N−スルホプロピルアミノ)フェノール、コーニト
ロソー!−〔N−エチル−N−スルホ(,2−ヒドロキ
シプロピル)アミン〕フェノールおよびλ−ユニトロン
−6−[N、N−ジスルホ(+2−ヒドロキシプロピル
)アミン〕フェノール等が挙げラレるが、例えば、ニト
ロソ−PSAPにょる鉄錯体の極大吸収波長は71にn
mであるから、測定波長を7jにnm Vc合わせ、参
照波長は約9!θnnl とするのがよい。
ル誘導体としては、−ユニトロン−5−(N−フロピル
ーN−スルホプロピルアミノ)フェノール(以下、「ニ
トロソ−PSAP Jト略ス。)、コーニトロソー、、
t−(N−エチル−N−スルホエチルアミノ)フェノー
ル、コーニトロ7−J−−<N−エチル−N−スルホプ
ロピルアミノ)フェノール、コー二トロンーt−(N−
ブチル−N−スルホプロピルアミノ)フェノール、コー
ニトロンー5−(N、N−ジスルホプロピルアミノ)フ
ェノール、−一ニトロソーグーメチル−!−(N−エチ
ル−N−スルホプロピルアミノ)フェノール、コーニト
ロソー!−〔N−エチル−N−スルホ(,2−ヒドロキ
シプロピル)アミン〕フェノールおよびλ−ユニトロン
−6−[N、N−ジスルホ(+2−ヒドロキシプロピル
)アミン〕フェノール等が挙げラレるが、例えば、ニト
ロソ−PSAPにょる鉄錯体の極大吸収波長は71にn
mであるから、測定波長を7jにnm Vc合わせ、参
照波長は約9!θnnl とするのがよい。
測定に供される血清試料は、血液を採取し、約30θo
rpmで/オ〜、20分間達心分離することによシ得
られる。
rpmで/オ〜、20分間達心分離することによシ得
られる。
また、測定に先だって作成される検量線も、血清試料の
測定と同様に三波長分光光度計により測定して作成する
。
測定と同様に三波長分光光度計により測定して作成する
。
なお、本発明方法において、測定セルをフロータイブセ
ルに変えて自動比色計で測定すれば、多数の血清試料を
能率よく測定できる。
ルに変えて自動比色計で測定すれば、多数の血清試料を
能率よく測定できる。
以上述べた通シ、本発明方法によれば、除蛋白や対照試
験等の操作を必要とせず簡単にかつ精度よく血清中の鉄
を測定することができ、乳ビ血清に対しても有効である
。
験等の操作を必要とせず簡単にかつ精度よく血清中の鉄
を測定することができ、乳ビ血清に対しても有効である
。
次に、本発明を実施例で更に具体的に説明するが、本発
明はその要旨を越えない限シ以下の実施例に限定される
ものではない。
明はその要旨を越えない限シ以下の実施例に限定される
ものではない。
実施例
〈検量線の作成〉
下記団成の試薬I及びrlを作り、試薬10jm7!及
び試薬11jm/を混合して、標準試料を調製する。こ
の標準試料に鉄イオン(Fe)を0.2.03、/、0
./。!及び2.θppm加えたものについて、各々7
t4nm及び9.fOnmの吸光度差を三波長分光光度
計で測定し、検量線を作成した。なお、ブランクは蒸留
水を用いた。その結果を図/に示す。
び試薬11jm/を混合して、標準試料を調製する。こ
の標準試料に鉄イオン(Fe)を0.2.03、/、0
./。!及び2.θppm加えたものについて、各々7
t4nm及び9.fOnmの吸光度差を三波長分光光度
計で測定し、検量線を作成した。なお、ブランクは蒸留
水を用いた。その結果を図/に示す。
試絡■ θ、jNHcjt
10% アスコルビン酸
試薬1 .2N NH3320dl
+2N NH,C!t FO7
10−3M ニドo7−PSAP j07蹟アンモニア
水 !− 蒸留水 グJゴ く血清鉄の測定〉 七F血清θ。jmlK上記試薬Iθ、了−を加えて充分
に混合し、試薬II ! meを加える。この血清試料
の7j4nm及び9!θnmにおける吸光度差を三波長
分光光度計でη1り定踵検量線より鉄、2.2検体の琥
血清について測定した結果を、従来法(発色試薬:パン
フェナンスロリンスルホン酸ナトリウム、波長:j3t
nm)と比較すると、図λに示すように良好な相関関係
(R=0.9第3)が得られた。
水 !− 蒸留水 グJゴ く血清鉄の測定〉 七F血清θ。jmlK上記試薬Iθ、了−を加えて充分
に混合し、試薬II ! meを加える。この血清試料
の7j4nm及び9!θnmにおける吸光度差を三波長
分光光度計でη1り定踵検量線より鉄、2.2検体の琥
血清について測定した結果を、従来法(発色試薬:パン
フェナンスロリンスルホン酸ナトリウム、波長:j3t
nm)と比較すると、図λに示すように良好な相関関係
(R=0.9第3)が得られた。
なお、ニトロソ−PSAPで発色させた血清試料の吸収
スペクトルの一例を図3に示す。
スペクトルの一例を図3に示す。
また、上記手順を自動比色計を用いて行っても、同様に
良好な結果が得られた。
良好な結果が得られた。
図/は、本発明の実施例において得られた検量線を示す
図であわ、縦軸は吸光度を示し、横軸は鉄イオンの量(
ppm)を示す。 図2は、本発明方法と従来法の相関関係を示す図である
。縦軸は、本発明方法により得られる鉄イオンの量(p
pm)を示し、横軸は、従来法により得られる鉄イオン
のi(ppm)を示す。 図3は、本発明方法における吸収スペクトルの一例を示
す図であシ、縦軸は、吸光度を示し、横軸は波長(nm
) ’e示す。図3において、Aは実血清、Bは、ニト
ロソ−PSAPで発色させたスペクトルである。 ほか7名 図 / メ、2 f6 図 ミ1 ・: /
図であわ、縦軸は吸光度を示し、横軸は鉄イオンの量(
ppm)を示す。 図2は、本発明方法と従来法の相関関係を示す図である
。縦軸は、本発明方法により得られる鉄イオンの量(p
pm)を示し、横軸は、従来法により得られる鉄イオン
のi(ppm)を示す。 図3は、本発明方法における吸収スペクトルの一例を示
す図であシ、縦軸は、吸光度を示し、横軸は波長(nm
) ’e示す。図3において、Aは実血清、Bは、ニト
ロソ−PSAPで発色させたスペクトルである。 ほか7名 図 / メ、2 f6 図 ミ1 ・: /
Claims (1)
- (・l −4Sミノフ=)−一誘導体を発色試薬と測定
する方法において、測定波長をgtθ〜g1θつ、参照
波長を7!θ〜1000%へ測定波長と参照波長の差を
70弗以上として測定波長および参照波長における吸光
度の差を測定することを特徴とする血清中の鉄の御]定
方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP19960883A JPS6091265A (ja) | 1983-10-25 | 1983-10-25 | 血清中の鉄の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP19960883A JPS6091265A (ja) | 1983-10-25 | 1983-10-25 | 血清中の鉄の測定方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6091265A true JPS6091265A (ja) | 1985-05-22 |
Family
ID=16410687
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP19960883A Pending JPS6091265A (ja) | 1983-10-25 | 1983-10-25 | 血清中の鉄の測定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6091265A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63101757A (ja) * | 1986-08-13 | 1988-05-06 | ライフスキヤン,インコ−ポレイテイド | 分析物濃度の定量方法 |
JPH04328453A (ja) * | 1991-04-30 | 1992-11-17 | Higashi Nippon Seito Kk | 微量糖分の測定方法及び装置 |
-
1983
- 1983-10-25 JP JP19960883A patent/JPS6091265A/ja active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63101757A (ja) * | 1986-08-13 | 1988-05-06 | ライフスキヤン,インコ−ポレイテイド | 分析物濃度の定量方法 |
JPH0767698A (ja) * | 1986-08-13 | 1995-03-14 | Lifescan Inc | 分析物測定用試薬試験ストリップ |
JPH04328453A (ja) * | 1991-04-30 | 1992-11-17 | Higashi Nippon Seito Kk | 微量糖分の測定方法及び装置 |
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