JPS6089757A - フロ−インジエクシヨン式免疫化学分析装置 - Google Patents

フロ−インジエクシヨン式免疫化学分析装置

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Publication number
JPS6089757A
JPS6089757A JP19755683A JP19755683A JPS6089757A JP S6089757 A JPS6089757 A JP S6089757A JP 19755683 A JP19755683 A JP 19755683A JP 19755683 A JP19755683 A JP 19755683A JP S6089757 A JPS6089757 A JP S6089757A
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JP
Japan
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column
antigen
sample
antibody
vessel
Prior art date
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Pending
Application number
JP19755683A
Other languages
English (en)
Inventor
Makoto Nakamura
誠 中村
Tokio Kano
時男 嘉納
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Olympus Corp
Original Assignee
Olympus Corp
Olympus Optical Co Ltd
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Publication date
Application filed by Olympus Corp, Olympus Optical Co Ltd filed Critical Olympus Corp
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Publication of JPS6089757A publication Critical patent/JPS6089757A/ja
Pending legal-status Critical Current

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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N35/08Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a stream of discrete samples flowing along a tube system, e.g. flow injection analysis
    • G01N35/085Flow Injection Analysis

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  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 (技 141f 分野) 本発明は、フローインジェクション式免疫化学分析装置
に関するものである。
(従来技術) 血液、体液等に含まれるグロブリン、酵素等のタンパク
質、またホルモン、細菌、ウィルス等ハ、その分子構造
が類似していたり、極く微宿であるために通常の分析方
法では同定、定1放が困難である。そこで、これらの物
質の分析には、一般に抗体(抗原)あるいはレクチン等
を利用した免疫学的な分析方法が用いられている。
このような抗原抗体反応を利用する免疫学的分析方法に
は、従来種々の方法があるが、一般には標識物質の違い
によってラジオイムノアッセイ。
エンザイムイムノアツセイ、フルオロイムノアッセイに
大別される。また、これらの免疫学的分析方法は、抗原
抗体反応系で競合法とサンドイツチ法とに分角され、測
定系においては標識物質で標識した抗体(抗原)と試薬
もしくはサンプル中の抗原(抗体)とが抗原抗体反応を
起した免疫複合体(Bound )と、抗原抗体反応に
関与しない標識抗体(抗原) (Free )とを分離
する操作、いわゆるB−F分離を必要とするヘテロジニ
アス法と、1必要としないホモジニアス法とに分類され
る。
ホモジニアス法は、B−F分離を必要としないところか
ら、操作が簡単であり1したがってそれを自動的に行な
うようにした装置も従来種々提案されているが、ヘテロ
ジニ了ス法はB−F分離を必要とするところから、分析
手順が煩雑であり、このためこれを自動的に行なう装置
の提案もホモジニアス法に比べ少ない。
第1図はへテロジニアス法を採用するラジオイムノアッ
セイによる従来の70一インジエクシヨン式免疫化学分
析装置aを示すものである。この装置は、原理的には固
定化抗体によるアフィニティクロマトグラフィーを応用
したもので、カラム1は分析すべき抗原に対する抗体を
共有結合したガラスピーズを有し、その人口はバルブ2
を経てサンプルカップ3内のサンプル4を吸引するサン
プル用ポンプ5と、バルブ2および6を経て放射性同位
元素で標識された標識抗原を吸引する試薬用ポンプ7と
、バルブ2.6および8を経てカラムされたサンプル抗
原および標識抗原をガラスピーズから解離させる解離液
を吸引する解離液用ポンプ9とにそれぞれ連結され、出
口はガンマカウンタ10に連結されていると共にバルブ
11を経てカラム1内およびガンマカウンタ10に液体
を輸送するための二個の輸送用ポンプ1za、12bに
連結されている。
第1図において、サンプルカップs内に収容されたサン
プル4中の所定の抗原を分析するにあたっては、先ずサ
ンプル4をカラム1を通して流した後、標識抗原を流し
、その標識抗原のカラム]内で捕捉されなかった鼠をガ
ンマカウンタ10で計数する。次に、カラム1を通して
解離液を流すことにより、カラムl内でガラスピーズに
捕捉されたサンプル抗原および標識抗原をガラスピーズ
から解離し、その解離された標識抗原の蛍をガンマカウ
ンタ10で計数して、ガラスピーズに捕捉されなかった
標識抗原の計数値のピーク値と、捕捉されて解彫された
標識抗原の計数値のピーク値、との比較に基いてサンプ
ル4中の所定の抗原を定置する。
しかし、第1図に示す従来装置では、サンプル用ポンプ
5、試薬用ポンプ7および解離液用ポンプ9がそれぞれ
カラム1の入口に連結されているために、サンプル4あ
るいは標識試薬をカラム1内に流す際にバルブ2を駆動
して流路の切換えを行なう必要があり、このためこの流
路の切換えによる圧力変化によってカラム1内において
サンプルあるいは標識試薬が脈流し、ガラスピーズに対
する作用が変化して、分析精度が低下する欠点がある。
また、多数のポンプをそれぞれバルブを介してカラム1
の入口および出口に連結しているため、それらのnII
J御が極めて煩雑となる欠点もある。
(発明の目的) 本発明の目的は、上述した欠点を除去し、常に高精度の
分析を簡単な制御によって行ない得るよう適切に構成し
たフローインジェクション式免疫化学分析装冒を提供し
ようとするものである。
(発明の概要) 本発明は、内部に所定の抗原または抗体と特異的に反応
する抗体または抗原を固相化したカラムを有し、このカ
ラムを通して少く共サンプルおよび試薬を流すことによ
り、サンプル中の前記所定の抗原または抗体を分析する
ようにしたフローインジェクション式免疫化学分析装置
において、前記カラムの人口に連通して開放した注入口
を設け、この注入口から少く共サンプルおよび試薬を注
入するよう構成したことを特徴とするものである。
(実 施 例) 第2図は本発明の70一インジエクシヨン式免疫化学分
析装許の一例の構成を示す勝因である。
カラム21は、分析すべき抗原(抗体)に対する抗体(
抗原)を結合させたゲルを有し、その入口はバルブ22
を経て開放した注入口23aを有する注入容器28の底
面に連結すると共に解離液24、を収容する解離液タン
ク25に連結し、出口。はディテクタ26およびポンプ
27を経て排液タンク28に連結する。注入答′a28
はその適当な位1aにおいてパイプ29を経て緩衝液3
0を収容する緩衝液タンク31の底部に連結して緩衝液
30を注入容器28内に導き得るようにする。この緩衝
液タンク81にはその適当な位置に流出口81aを形成
し、該タンク31内の緩衝液30の液面レベルおよび注
入容器23における液面レベルを流出口31aの位1a
にほぼ一定に制御する。
なお、流出口81aは補助タンク32に連結し、この補
助タンク31内の緩衝液はポンプ83によって緩衝液タ
ンク31内に導き得るようにする。
本例においては、エンザイムイムノアツセイのサンドイ
ツチ法によりサンプル中の所定の抗原(抗体)を分析す
るもので、サンプルカップ34・内のサンプル35、第
1の試薬タンク36内の酵素標識試薬37および第2の
試薬タンク38内の酵素基質39は、それぞれシリンジ
ポンプ40I4.1および4.2によりIしく制御部4
3の制御の下に、注入容器23の注入口23aから、注
入容器23・のパイプ29を連結した位置よりも下方の
部分(図において斜線を施した部分)に選択的に注入す
る。このため、好適にはサンプル””、酵素標識試薬8
7および酵素基質39に、抗原抗体反応および他の反応
に影響を及ぼさない範囲で種々のタンパク質や糖類を添
加して、それらの比重を緩衝液30の比重よりも重くし
て、各シリンジポンプのノズルを斜線部分まで侵入させ
て注入するようにする。
以下本実施例の動作を、ヒト血清中の工1を測定する場
合について説明する。カラム21にはウサギ抗ヒ) I
gE抗体を共有結合させたアガーロースゲルを充填し、
緩衝液80は0.OIMUン酸緩倫液(1)H−7,2
0、0,15MNaCj 、 0.005%Tween
 20 、0.01%チメロサール、 0.01%牛血
清アルブミン)を用いる。また、ポンプ27は1.5m
t/hの流速で液体を吸引輸送し、ポンプ33は補助タ
ンク32から緩衝液が1.5 ml /h ’よりも速
い流速で緩衝液タンク31に供給するようにそれぞれ連
続駆動する。なお、周囲温度は、25°Cに制御する。
先ス、バルブ22によりカラム21と注入容器23とを
連通させた状態で、ヒト血清であるサンプル35をシリ
ンジポンプ4oにより、注入容器23の注入D23aか
ら斜線部分に20μ!注入する。20分後、酵素標識試
薬37として、ベルオキシターゼで標識したヤギ抗ヒト
IgE抗体をシリンジポンプ41により、同様に注入容
器23の注入口23aから斜線部分に20μl注入する
更に20分後、酵素基質39としてO−フェニレンジア
ミン溶液をシリンジポンプ42により、同様に注入容器
28の注入口23aから斜線部分に20μl注入してか
ら、ディテクタ26において波長415 nmの光を用
いて吸光度を測定する。
次に、バルブ22を作動させてカラム21と解離液タン
ク25とを連通させ、解雛液24として31/Lチオシ
アン酸ナトリウムをカラム21を通して流すことにより
、カラム21を再生して次のサンプルの分析にそなえる
本実施例によれば、カラム21を再生するとき、のみ、
バルブ22を作動させて流路を切換えるだけで、分析中
はバルブ22を作動させる必要がないと共に、注入容器
23の液面レベルが常には!一定に制御され、したがっ
てポンプ27にょるカラム21内での流速かはソ一定と
なり脈流が生じることがないから、常に高精度の分析を
行なうことができる。また、1つのバルブ22をカラム
21の再生時にのみ駆動し、分析中はサンプルおよび試
薬の注入タイミングを制御するだけでよいから、制御が
簡単であると共に、装置全体も小形にできる。
第3図は本発明の70−インジェクション式免疫化学分
析装置の他の例の構成を示す線図である。
この装置は、カラム21とディテクタ26との間に更に
バルブ44を設け、このバルブ44を介して解離液タン
ク25を連結すると共に、バルブ22をポンプ27を介
して排液タンク28に連結し、分析中は溶液が注入容器
23、バルブ22、カラム21、バルブ44、ディテク
タ26およびポンプ27を経て排液タンク28に流れ、
カラム2】の再生時には解離液タンク25内の解離液2
4がバルブ4・4、カラム21、バルブ22およびポン
プ27を経て、すなわちカラム21内を分析中における
流れとは逆方向に流れて排液タンク28に流れるように
、パルプ22および44をカラム21の再生時において
駆動して流路を切換えるようにしたもので、その他の構
成および制御は第2図と同様である。
本実施例によれば、第2図におけると同様の効果を有す
る他、解離液24をカラム21内において分析中におけ
る溶液の流れの方向とは逆方向に流すことにより、抗原
抗体反応による生成物がカラム21の出口側に比較的多
く結合しても、これを有効にpJ離することができるが
ら、カラム21をより確実に再生することができる。
第4図は本発明の70−インジェクション式免疫化学分
析装置の更に他の例の構成を示す線図である。この装置
tffiは、ポンプ27をカラム21とバルブ22との
間に配置してカラム21に対し陽圧を与えて溶液を流す
ようにしたもので、その他の、構成および制御は第2図
のものと同様である。
本実施例によれば、第2図におけると同様の効果を有す
る他、カラム21に対して陽圧を与えて溶液を流すこと
により、カラム21およびその下流側のフロー糸のチュ
ーブ内における気泡の発生およびその滞留を有効に防止
できるがら、分析精度を更に向上させることができる。
第5図は本発明のフローインジェクション式免疫化学分
析装置の更に他の例の構成を示す線図である。本例では
、カラム21を流れる溶液が、カラム21内に固相化し
た抗体(抗原)の活性を低下させないように、酵素標識
試薬37および酵素基質39を選択し、標識物質の検出
には別に試薬を添加して行なうようにしたものである。
このため、本例では、酵素標識試薬37としてグルコー
スオキシターゼを標識した抗体を、酵素基質39として
グルコース溶液をそれぞれ用いると共に、カラム21と
排液タンク28との間にはセル45を設けて、このセル
45にポンプ46によって試薬タンク47および48に
それぞれ収容したフェ、リシアン化カリウム溶液49お
よびルミノール溶液50を同時に供給し得るようにし、
酵素基質39がカラム21を経てセル45に到達すると
同時にポンプ46を作動させてフェリシアン化カリ1ク
ム溶液49およびルミノール溶液50をセル4・5に供
給することにより、抗原抗体反応によりカラム21内に
捕捉されたグルフースオキシターゼによってグルコ・−
スをノ1(質として発生した過酸化水素と、フェリシア
ン化カリウムおよびルミノールとの反応による発光1f
lを7オトカウンタ51で測定して、サンプル35中の
所定の抗原を分析する。なお、その他の構成および制御
は第4図と同様である。
本実jMIi例によれば、第4図におけると同様の効果
を有する他、カラム21内に固相化した抗体を常に安定
な状態に維持できるから、長期間に亘って高い分析!1
11度を有効に細持でき、信頼性を向上させることがで
きる。
ηfお、本発明は」二連した例にのみ限定されるもので
はなく、幾多の変形または変更が可能である。
、例えば、第4図においては、カラム21とディテクタ
26との間に第3図の場合と同様にバルブな設けて解離
液タンク25を連結すると共に、パルプ22を排液タン
ク28に連結し、ポンプ27を可逆ポンプとして第3図
と同様にカラム21の再生時において、解雛液24をカ
ラム21内で逆流させるよう構成することもできる。ま
た、同様の制御は第5図においてもカラム21とセル4
5または排液タンク28との間にパルプを設けて解離液
タンク25を連結すると共に、パルプ22を排液タンク
28に連結することによって行なうことができる。更に
、第5図においてはポンプ27をカラム21とセル45
との間あるいはセル4.7と排液タンク28との間に設
けることもできる。また、解離液24も注入容器23の
注入口23aから注入してカラム21を通して流すよう
にしてもよい。更に、カラム21は抗体(抗原)を固相
化した毛細管をもって構成することもできるし、これを
使い捨てとすることもでき′る。なお、カラム21を使
い捨てとする場合には、解離液が不要と、1(るから、
構成および制御は更に簡単になる。更に、本発明は上述
したエンザイムイムノアツセイのサンドイツチ法に限ら
ず、上述したその他の免疫分析法にも有効に適用するこ
とができる。
(発[!IJの効果) 以上述べたように、本発明によれば、カラムの人口に連
通して少く共サンプルおよび試薬を注入するための開放
した注入[1を設けることによって、分析にあたって注
入するサンプルおよび試薬の各注入手段と、カラムとの
流路を分離したから、分析中においてカラムに連通ずる
流路の切換えが不要となり、したがって従来のような流
路の切換による圧力変化に基く脈流の発生がなく、常に
高精度の分析ができると共に、制御も容易にできる。
【図面の簡単な説明】
第1図は従来の70−インジェクション式免疫化学分析
装置のも5i戒を示す線図、 第2図〜第5図は本発明の実施例をそれぞれ示す線図で
ある。 、21・・・カラム 22・・・バルブ23・・・注入
容器 28a・・・注入口24・・・j’l’l’ 順
1: ’l 26・・・ディテクタ27・・・ポンプ 
28・・・排液タンク29・・・バイブ 30・・・緩
衝液 81a・・・流出口 32・・・補助タンク83・・・
ポンプ 35・・・サンプル87・・・酵素標識試薬 
39・・・酵素基質40〜4・2・・・シリンジポンプ 4・3・・・1litl 機部 4・4・・・パルプ4
.5・・・セル 46・・・ポンプ 49・・・フェリシアン化カリウム溶液50・・・ルミ
ノール溶液51・・・フォトカウンタ。 第1図 第3図 第4図

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. L 内部に所定の抗原または抗体と特異的に反応する抗
    体または抗原を固相化したカラムを有し、このカラムを
    通して少く共サンプルおよび試薬を流すことにより、サ
    ンプル中の前記所定の抗原または抗体を分析するように
    したフローインジェクション式免疫化学分析装置におい
    て、前記カラムの入口に連通して開放した注入口を設け
    、この注入口から少く共サンプルおよび試薬を注入する
    よう構成したことを特徴とするフローインジェクション
    式%式%
JP19755683A 1983-10-24 1983-10-24 フロ−インジエクシヨン式免疫化学分析装置 Pending JPS6089757A (ja)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5073344A (en) * 1987-07-17 1991-12-17 Porex Technologies Corp. Diagnostic system employing a unitary substrate to immobilize microspheres

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5073344A (en) * 1987-07-17 1991-12-17 Porex Technologies Corp. Diagnostic system employing a unitary substrate to immobilize microspheres

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