JPS6089499A - ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は血清胸腺因子（以下ＦＴＳという）と類似の機
能を有しＦＴＳの放射免疫測定法（以下ＲＩＡという）
を行なう際、放射性のヨウ素で標識化し得るペプチドに
関する。

ＦＴＳは１９７６年にＪ、−Ｆ、　Ｂａｃｈ等により、
豚の血清から抽出され、その構造は　。

Ｐｙｒ−Ｌ−Ａｌ　ａ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−８ｅｒ−Ｌ−
Ｇｌ　ｎ　−Ｇｌ　ｙ−Ｇｌ　ｙ−Ｌ−８ｅ、ｒ−Ｌ−
Ａｓｎ−ＯＨ であることが明らかにされている。

″本発明者らは既に、ＦＴＳを用いた多発性硬化症やギ
ラン・バレー症候群などの神経疾患の治療剤に関する特
許出願を行なった（公開特許公報昭５８−５２２２５）
。ＦＴＳの効力を臨床的にあるいは動物実験によシ検討
する場合には、血中のＦＴ、Ｓ濃度との相関性を知るた
めに、極微量のＦＴＳを測定することが必須である。一
般に極微量の生体物質の分析にはＲｉＡが有効であるが
、ＦＴＳｌｉその構成アミノ酸中に放射性のヨウ素で標
識しうる芳香環を有するアミノ酸およびヒスチジンを含
んでいない。それ故ＲＩＡによシＦＴＳの濃度を測定す
るためには標識化が容易な官能基をＦＴＳに導入するこ
とが必要である。

そこで本発明者らは化学的合成により研究を進めた結果
、放射性のヨウ素による標識化が容易なチロシン、リジ
ン、さらにそれらを含むペプチドがＦＴＳのＮ末端に結
合した誘導体（化合物（１）〜（３））の合成に成功し
た。

すなわち、本発明の上記ペプチドはＨ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ
−Ｇｌ　ｎ−Ｌ−Ａｌ　ａ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−８ｅｒ−
Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｙ”ＧＩ　Ｙ−Ｌ−８ｅｒ−Ｌ−
Ａｓｎ−ＯＨ（化合物（１））、Ｈ−Ｌ−Ｌｙ　ｓ　−
Ｌ−Ｔｙ　ｒ−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｌ−Ａｌ　ａ−Ｌ−Ｌｙ
ｓ−Ｌ−８ｅ　ｒ　−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｙ−Ｑｌ　
ｙ　−Ｌ−８ｅｒ−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＨ（化合物（２））
、Ｈ＝Ｌ−Ｌｙ　ｓ　−Ｌ−Ｔｙ　ｒ−Ｇｌ　ｙ−Ｇｌ
　ｙ−Ｌ−Ｔｙｒ　−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｌ−Ａｌ　ａ−Ｌ
−Ｌｙｓ−Ｌ−８ｅｒ　−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｙ−Ｇ
ｌｙ−Ｌ−８ｅ　ｒ−Ｌ−Ａｓ’ｎ７０Ｈ（化合物（３
））で示され、２コ以上のリジン又はリジン、チロシン
双方を含むことを特徴とする。

本発明のペプチドは液相法又は固相法によシ合成できる
。

液相法による合成では、Ｎ末端をベンジルオキシカルボ
ニル基により保護しさらに、Ｃ末端をアジド法にて活性
化したペプチド、およびＮ末端が遊離し、Ｃ末端および
側鎖をバラニトロベンジル基、べ／ジル基、ベンジルオ
キシカルボニル基等で保護したペプチドを縮合反応させ
たのち、保護基を脱離して目的とするペプチドを合成す
る。

固相法による合成では、１つ又はそれ以上のアミノ酸あ
るいは保護基の付いたアミノ酸を生長するペプチド鎖に
連続的に付加させることよシなる。はじめに、目的とす
るペプチドのＣ末端アミノ酸を不溶性担体、たとえばク
ロロメチル樹脂等のポリマーに結合させるが、その際、
Ｎ末端を保護したアミノ酸をセシウム塩あるいはトリエ
チルアミン等を用いて結合させる。樹脂に結合したＮ保
睡アミノ酸のＮ保護基を脱離させた後、遊離したＮ末端
に別のＮ保護アミノ酸を加えて結合させ、ついでＮ保護
基を脱離して次のアミノ酸との結合に入る。以下、同様
の操作をく９返して、順次ペプチド鎖をのばす。

全配列が合成された後、ペプチドを樹脂から切り離すこ
とにより目的とするペプチドを得ることができる。

本発明のペプチドは常法によシ放射性ヨウ素で標識する
ことができ、ｌ”　Ｔ　Ｓ類のＲ，ＩＡによる分析用試
薬として極めて有用である。

得られたペプチドの精製は通常の方法、すなわち、再結
晶、炭酸水素ナトリウム、クエン酸水溶液による洗浄、
あるいはシリカゲルカラムクロマトグラフィー等によシ
行なうことができる。更に、複数の展開溶媒を使用した
薄層クロマトグラフィーにより、単一スポットと認める
まで精製をくシ返すことによシ純品を得ることができる
。

次に、本発明を以下の実施例および実験例によってさら
に詳細に説明する。

なお以下の実施例中に記載される略号を表１に、薄層ク
ロマトグラフィーの展開液の組成を表２に示した。また
アミノ酸組成はＫＬＭ−５型日立アミノ酸分析計を用い
て測定した。

表１゜ Ｂｏｃ　−：　ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｏｘｙｃａｒｂｏ
ｎｙｌＺ−：　ｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌＺ
−ＣＩ−：　ｐ−ｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａ
ｒｂｏｎｙｌＢｚｌ　：　ｂｅｎｚｙｊｅｔｈｅｒ −ＯＢｚｌ　：　ｂｅｎｚｙｌ　ｅｓｔｅｒ’　−０Ｎ
ｂ：ｐ−ｎ１ｔｒ□ｂｅｎｚｙｌ　ｅｓｔｅｒ−ＯＮｐ
’　：　ｐ−ｎ１ｔｒｏｐｈｅｎｙｌ　ｅｓｔｅｒ−Ｏ
ＮＳｕ：　Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙ
ｌ　ｅｓｔｅｒｐＴｓ　：　ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌ
ｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄＤＣＣ、：　ｄｉｃｙｃｌｏｈｅ
ｘｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅＨＯＢｔ　：　１−ｈ
ｙｄｒｏｘｙ−ｂｅｎｚｔｒｉａｚｏｌｅ２．６−ＣＬ
　−Ｂｚｌ−：　２，６−ｄｉｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｙ
ｌＳｅｒ　：セリン Ａｓｐ：アスパラギン酸、Ａｓｎ：アスパラギンＧｌｕ
：グルタミン酸、Ｇｌｎ：グルタミンＧＩＹ　ニゲリシ
ン Ｔｙｒ：チロシン Ｌｙｓ：　リジン Ａｌａ：アラ二ン Ｐｙｒ　：　ピログルタミン酸 ＤＭＦ　：　Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドＴ）ＩＦ：
テトラヒドロフラン ＴＦＡ：）リフルオロ酢酸 ＴＥＡ：　トリエチルアミン 表２、 システム１　クロロホルム−メタノール−５＝１〃２．
　クロロホルム−メタノール−酢酸＝９５：５：１〃　
３　ｎ−ブタノール−酢酸−水−ピリジ７＝１５：３：
１２：１０実施例１　液相法による合成 ■　化合物（１）の合成 （１）　Ｂｏｃ−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｌ−Ａｓｎ”
ＯＮｂの合成りｏｃ−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＮｂ　９０ミリモ
ル（３３，０６３ｇ）に、氷冷下６Ｎ−ＨＣｊ／１，４
−ジオキサン２８８ｄおよびアニソール２９．ｊを加え
て溶解し、室温で３０分間放置した後、減圧乾固し得ら
れた残渣をエーテルで十分に洗浄する。この残渣を乾燥
した後、Ｒ８２１０−にて溶解し氷冷下ＴＥＡｘ２．．
６−ｘ、更にＢｏｃ−Ｌ−，５ｅｔ（、Ｂｚｌ）ＯＮＳ
ｕ９０ＮＳ上ル（３５，３１６Ｑ　を粉末のまま少量ず
つ加えて溶解し、室温で３時間攪拌する。次にＮ−（２
−アミノエチル）ピペラジン５−を加え室温で３０分間
攪拌した後、酢酸エチルを加えて液量を１ｔとしたもの
を４％炭酸水素す）　ＩＪウム、生理食塩水、０．２Ｍ
クエン酸、生理食塩水の順に各々５００．Ｚずつで３回
洗浄し、更に無水硫酸す）ＩＪウムにて乾燥した後、減
圧濃縮しエーテルを加えて得られた結晶を、酢酸エチル
−エーテルにて再結晶する。

収率は７５％、融点は１２１−１２２℃であった。

（２）　ＢｏｃＧＩｙ−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｌ−Ａ
ｓｎ−ＯＮｂ（７）合成りｏｃ−Ｌ−８ｅｒ（ＢｚＩ）
−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＮｂ６０ミリモム（３２，６７３１）
に氷冷下６Ｎ−ＨＣＩ／１　、４−ジオキサン１９２−
およびアニソール１９−を加えて溶解し、室温で３０分
間放置した後、減圧乾固し得られた残渣をエーテルで十
分に洗浄する。この残渣を乾燥した後、ＤＭＦ１５０−
にて溶解し水冷下Ｔ弘８４−１さらにＢｏ’ｃ−Ｇｌｙ
−ＯＮＳｕ　６０ミリモル（１６３３６ｇ）を粉末のま
ま、　・少量ずつ加えて溶解し室温で３時間攪拌する。

次にＮ−（２−アミノエチル）ピペラジン４−を加え室
温で３０分間攪拌した後、酢酸エチルを加えて液量をｌ
ｚとしたものを４％炭酸水素ナトリウム、生理食塩水、
０．２Ｍクエン酸、生理食塩水の順に各々５００−ずつ
で３回洗浄し、更に無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後
、減圧濃縮しエーテルを加えて得られた結晶を酢酸エチ
ルーエーテルニて再結晶する。収率は７５％、融点は１
４３−１４４℃、であった。

（３）　Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌの合成
Ｈ−Ｇｌｙ−ＯＢｚｉ　−ｐＴｓ　８４ミリモル（２８
，３４１Ｆ）をＤＭＦ’２００−にて溶解し、氷冷下Ｔ
Ｅ、Ａ１ｉ、８＋＋＋ｚ、更にＢｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＮｐ
　７０ミリモル（２６，３４５ｙ　）　全粉末（Ｄ　ｉ
　を加えて溶解し室温で４０時間攪拌する。次にＮ−（
２−アミノエチル）ピペラジン５−を加え室温で３０分
間攪拌し、更に生理食塩水２００−を加えた後、酢酸エ
チル５００−にて３回抽出した。酢酸エチルを合し、４
％炭酸水素ナトリウム、生理食塩水、０．２Ｍクエン酸
、生理食塩水の順に、各々５００ｄずつで３回洗浄し、
無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、減圧濃縮しエーテ
ルを加えて得られた結晶を酢酸エチル−エーテルにて再
結晶する。収率は６０％、融点は１０８−１１０℃、で
あった。

（４）　Ｂｏｃ−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ’）−Ｌ−Ｇｉｎ
−ＯＢｚｌノ合成りｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−ＯＢｚ
ｌ　５０ミリ％／Ｌ、（１９，６７ｇ）に氷冷下ＴＦＡ
５７−およびアニソール５．７．ｔを加えて溶解し、室
温で３０分間放置した後、減圧濃縮し、石油エーテルを
加えると飴状物が沈澱する。

しばらく静置した後、傾斜濾過にて上清を捨て石油エー
テルにて生成した沈澱を十分洗浄した後、減圧乾燥する
。得られた飴状残渣１ｃｌＮＦ２０−ｔおよび慣丑゛８
０−を加えて溶解し、氷冷下ＴＥＡ７．２ｍを加えてｐ
Ｈ８とした後、Ｂｏｃ−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ　）−ＯＮ
Ｓｕ６０ＮＳ上ルＣ２３，５５１）にＴＨＦ１２０＊を
加えた溶液を滴下する。その際ｐＨ８を保つように行な
う。ひきつづき室温で１８時間攪拌した後、Ｎ−（２−
アミノエチル）ピペラジン２−を加え、室温で３０分間
攪拌する。反応液を可及的に濃縮し、酢酸エチル１を更
に生理食塩水１１００ＩＩ１を加えた後、４％炭酸水素
ナトリウム、生理食塩水、０．２Ｍクエン酸、生理食塩
水の順に各々５００−ずつで３回洗浄し、更に無水硫酸
ナトリウムにて乾燥した後、減圧濃縮しエーテルを加え
て得られた結晶を酢酸エチル−エーテルにて再結晶する
。収率は８５％、融点は１１３−１１６℃であった。

（５）　Ｂｏｃ−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｌ−Ｇｉｎ−
Ｇｌｙ−ＮＨＮＨ，の合成りｏｃ−Ｌ−８ｅｒ　（Ｂｚ
ｌ　）−Ｌ−（）Ｉｎ−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌ　４０ミリモ
ル（２２，８２６ｇ）をメタノール１２０−に溶解し水
冷下抱水ヒドラジン４．Ｏ，ｊを加え、室温で４５分間
放置する。反応液を減圧濃縮し、再びメタノールを加え
減圧濃縮して過剰のヒドラジンを可及的に留去する。次
にエーテルを加えて得られた結晶をメタノール−エーテ
ルにて再結晶する。収率は８５％、融点は１３４−１３
５℃であった。

（６）　Ｂｏｃ−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｌ−Ｇｌｎ−
Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｌ−Ａｓｎ−
ＯＮｂの合成 Ｂｏ　ｃ−Ｌ−８ｅ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　）　−Ｌ−Ｇｌ
ｎ−Ｇｌｙ−ＮＨＮＨ，３０ミリモル（１５，２０４Ｊ
）をＤＭＦ５Ｑゴにて溶解し、ドライアイスメタノール
浴中（−２０°以下に保つ）、３Ｎ−ＨＣＩ／１，４−
ジオキサン２１−Ｚを一気に加え、更に亜硝酸インアミ
ル４．６２−を加え、３０分間攪拌した後、反応液のと
ドラジンテストが陰転するまで亜硝酸インアミルを加え
、ひきつづきＴＥＡ　８．８２ｔ＝ｔを加える（Ａ液と
する）。一方Ｂｏｃ−Ｇｌ　ｙ　−Ｌ−８ｅｒ　（Ｂ　
ｚ　ｌ　）−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＮｂ　３０ミリモル（１８
，０４７９）に氷冷下６Ｎ−ＨＣＩ／１，４ジオキサン
８４ゴおよびアニソール８４−を加えて溶解し室温で３
０分間放置した後、減圧乾固し得られた残渣をエーテル
で十分に洗浄する。この残渣を乾燥した後、ＤＭＦ６０
−にて溶解し、水冷下ＴＥＡ４．２−を加えたものを、
′前記のＡ液に滴下し、はじめの１時間は一２０℃以下
を保ちながら攪拌する。ついで水冷下２４時間攪拌した
後、結晶が析出しない程度まで反応液を減圧濃縮する。

得られた濃縮液に酢酸エチルを加えて１ｔとし、４％炭
酸水素ナトリウム、生理食塩水、０２Ｍクエン酸、生理
食塩水のｊ−に各々５００−ずつで３回洗浄し、更に無
水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、減圧濃縮し、エーテ
ルを加えて得られた結晶を酢酸エチル−エーテルにて再
結晶する。収率は７０％、融点は１８４−１８５℃であ
った。アミノ酸組成は、ＮＨ，：　１．００、Ｓｅｒ：
２．０８、Ｑｌ　ｕ　：　０．９８、Ｇｌ　ｙ　＋　１
．００、Ａｓｐ：１，００であった。

（７）　Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ−Ｃ１）−Ｌ−８ｅｒ
（Ｂｚｌ）−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌ−８ｅｒ
　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＮｂの合成りｏ　ｃ
−Ｌ−８ｅ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｌ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ
−Ｇｌ　ｙ−Ｌ−８ｅ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｌ−Ａｓ
ｎ−ＯＮｂ２０ミリモル（１９，２５，９ｙ　）　に、
氷冷下６Ｎ−ＨＣｌ／Ｌ４−ジオキサン６４Ｉ＋１１！
およびアニソール６．４１１＋７を加えて溶解し、室温
で３０分間放置した後、減圧乾固し得られだ残渣をエー
テルで十分に洗浄する。この残渣を乾燥した後、ＤＭＦ
６肛にて溶解し、水冷下ＴＥＡ２．８　ｍｅ　：更Ｋ　
Ｂｏ　ｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ−ＣＩ　）−ＯＮＳｕ２０Ｎ
Ｓ上ル、（１０，２３９ｊ）を粉末のまま少量ずつ加え
て溶解し室温で３時間攪拌する。次にＮ−−（２−アミ
ルエチル）ピペラジン３−を加え、室温で３０分間攪拌
した後、酢酸エチルを加えて液量を５００−とじ、４％
炭酸水素ナトリウム、生理食塩水’１０．２Ｍクエン酸
、生理食塩水の順に各々２００−ずつで３回洗浄し、更
に無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、減圧濃縮し、エ
ーテルを加えて得られた結晶を酢酸エチル−エーテルに
て再結晶する。収率は６５％、融点は１５０−１５３°
Ｃであった。

（８）　Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｔｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅの合
成Ｈ−’Ｌ−Ａ、ｌａ−ＯＭｅ−）ＴＣｌ　１００ミリ
モル（１３，９５８ｇ）を、ＤＭＦ’２００ｍｔにて溶
解し、氷冷下ＴＥＡ１４−ｊ、更にＢｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ
　−ｏＮｐ　８３ミリモル（３１，２３８２）を粉末の
１ま加えて溶解し室温で４０時間攪拌する。次にＮ−（
２−アミノエチル）ピペラジン５−を加え室温で３０分
間攪拌した後、酢酸エチル１ｔを加えたものを、４％炭
酸水素す）　ＩＪウム、生理食塩水、０．２Ｍクエン酸
、生理食塩水の順に各々５００．ｎｔずつで３回洗浄し
、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、減圧濃縮しエー
テルを加えて得られた結晶を酢酸エチル−エーテルにて
再結晶する。

収率は８０％、融点は１５０−１５２℃、であった。

（９）　Ｂ’ｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ
−Ａｌａ−ＯＭｅノ合成りｏｃ−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｌ−Ａ
ｌａ−ＯＭｅ　８０　ミ　リ　モ／しく２６．５１９’
）　に氷冷下６Ｎ−ＨＣＩ／１，４−ジオキサン２５６
−およびアニソール２５６−を加えて溶解、室温で３０
分間放置した後、減圧乾固し得られた残渣をエーテルで
十分に洗浄する。この残渣を乾燥した後、■１６０−に
て溶解し、水冷下１誌１１．２．ｄ、更にＢｏＣ−Ｌｉ
−Ｌｙ　ｓ　（Ｚ）　−０ＮＳｕ　８０ミリモル（３ｓ
２ｏ２ｙ　）を粉末のｉｔ少量ずつ加えて溶解し、室温
で３時間攪拌する。

次にＮ−（２”７ミノエチル）ピペラジン５−をカロえ
、室温で３０分間攪拌した後、酢酸エチルをカいえて液
量を１ｔとしたものを４％炭酸水素ナト１ノウム、生理
食塩水、０，２Ｍクエン酸、生理食塩水の順に各々５０
０−！ずつで３回洗浄し、更に無水硫酸ナトリウムにて
乾燥した後、減圧濃縮し、エーテルを加えて得ら゛れた
結晶を酢酸エチル−エーテルにて再結晶する。収率は７
５％、融７点は１８１−１８４℃、であった。

αＯ）　ＢＯｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−
Ａｌａ−Ｎｌ（ＮＩ（２の合成１３０ｃｍＬ−Ｌｙｓ　
（Ｚ）−Ｌ−Ｇｌ　ｎ　−Ｌ−ノ＼１　ａ−ＯＭｅ　６
０　ミ　１ノ　モル（３５，５６２ｇ、ｌをメタノール
２００−に溶解し、水冷下抱水ヒドラジン６０−を加え
、室温で４５分間放置する。反応液を減圧濃縮し、再び
メタノールを加え減圧濃縮して過剰のヒドラジンを可及
的に留去する。これにエーテルを加えて得られた結晶を
、メタノール−エーテルにて再結晶する。

収率は８５％、融点は１９２−１９８℃であった。

Ｃ１）　Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）　−Ｌ−Ｇｉｎ−Ｌ
−Ａｌａ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ−ＣＩ）−Ｌ−８ｅ　ｒ　（
Ｂｚ　Ｉ　）−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｙ−Ｇｌ　ｙ−Ｌ
−８ｅ、ｒ　（Ｂｚ　１）−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＮｂの合成 りｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｌａ−
ＮＨＮＨｔ　５０ミリモル（２９，６３４Ｍ）をＤＭＦ
２００．ｚ　テ溶解１．、トライアイス−メタノール浴
中（−２０’Ｃ，以下に保つ）　、３Ｎ−ＨＣい、４−
ジオキサ・ン３５−を一気に加え、更に亜硝酸イソアミ
ル７７−を加え、ひきつづきＴＥＡ１４．７−を加える
（Ａ液とする）。一方Ｂ　ｏ　ｃ−Ｉ、−Ｌｙ　５（Ｚ
−ＣＩ　）−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ　）−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｇ
ｌｙ−Ｌ−８ｃｒ　（Ｂｚ　Ｉ　）−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＮ
ｂ　５０　ミリ％　ル（６３，０３５ＩＩ　）　ニ氷］
下６Ｎ−ＨＣＩ／１，４−ジオキサン１４０−およびア
ニソール１４コを加えて溶解し、室温で３０分間放置し
た後、減圧乾固し得られた残渣をエーテルで十分に洗浄
する。この残渣を乾燥した後、ＤＭＦ２００−にて溶解
し、水冷下ＴＥＡ２．８−ｔを加えたものを前記のＡ液
に滴下し、はじめの１時間は一２０℃、以下を保ちなが
ら攪拌する。ついで水冷下２４時間攪拌した後、結晶が
析出しない程度まで反応液を減圧濃縮する。得られた濃
縮液に酢酸エチルを加えて１ｔとし４％炭酸水素ナトリ
ウム、生理食塩水、０．２Ｍクエン酸、生理食塩水の順
に各々５００−ずつで３回洗浄し更に無水硫酸す）　Ｉ
Ｊウムにて乾燥した後、減圧濃縮し、エーテルを加えて
得られた結晶を酢酸エチル−エーテルにて再結晶する。

収率は６０％、融点は１９０−１９６℃であった。

（Ｅ　Ｈ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−、Ａｌａ−Ｌ
−Ｌｙｓ−Ｌ−８ｅｒ−Ｌ−Ｇｉｎ−Ｇｌ　ｙ−Ｇｌ　
ｙ−Ｌ−８ｅｒ−Ｌ’Ａｓｎ−ＯＨ（７）合成り’ｏｃ
−Ｌ−Ｌｙｓ　＠）−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｌ−Ａｌ　ａ−Ｌ
−Ｌｙｓ（Ｚ−ＣＩ　）−Ｌ−８ｅ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　
）−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｙ−Ｃ１ｙ−Ｌ−８ｅ　ｒ　
（Ｂｚ　ｌ　）−Ａｓｎ−ＯＮｂ３０ミリモル（５１，
６９９ｇ）を５０・％酢酸水溶液５００ｉにて溶解し、
洗浄したパラジウム活性炭５０９を加え、水素ガスを通
気しながら１６時間撹拌する。

次に活性炭を濾去し、濾液を減圧乾固した後、蒸留水を
加え、再び減圧乾固して溶液中の酢酸を留去する。得ら
れた残渣を１％酢酸水溶液２０〇−にて溶解し、その１
０分の１量ずつを用いてセファデックスＧ−１５による
ゲル濾過を行なう。ゲル濾過は一般的なゲル濾過法に従
って行なう。

カラムのベッド容積は１．７Ｘ４０αとなる様に調製し
７〜８’／ｈｒの流速で１％酢酸水溶液にて溶出する。

５＋ｎｔずつ分画し、２３０ｎｍにおける吸光度を指標
として本物質の溶出画分を集め、凍結乾燥する。収率は
６０％、融点は１９２＝１９’６℃であった。アミノ酸
組成ばＮＨ，：３．２５、Ａｌａ：１，００゜Ｌｙｓ：
２．００、ＧＩ　Ｙ　：　１．９８、Ｇｌｕ：２．００
、Ｓｅｒ：１．ｇＢ、Ａｓｐ：１．００であった。

川　化合物（２）の合成 （１）　Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｇｉｎ−Ｌ−ＡＩａ
７０Ｍｅノ合成化合物（１）の合成の（８）で得だＢｏ
ｃＪ−Ｇｌ　ｎ　Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅ８０　ミリモル（
２６５１ｇ）ニ氷冷下６Ｈ−ＨＣＩＩ１．４−ジオキサ
ン２５６ｄおよびアニソール２５．６．１！を加えて溶
解し、室温で３０分間放置した後、減圧乾固して得られ
た残渣をエーテルで十分に洗浄する。この残渣を乾燥し
た後、ＤＭＦ　］、　６０−にて。

溶解し水冷下ＴＥＡｌ　１．２’ｓ更にＢｏ　ｃ−Ｌ−
Ｔｙｒ−ＯＮＳｕ　８０ミＩＪモル（３０，２７１９）
を粉末のま捷少量ずつ加えて溶解し、室温で３時間攪拌
する。次にＮ−（２−アミノエチル）ピペラジン５−を
加え室温で３０分間攪拌した後、酢酸エチルを加えて液
量を１ｔとしたものを４％炭酸水素ナトリウム、生理食
塩水、０．２Ｍクエン酸、生理食塩水の順に各々５００
ゴずつで３回洗浄し、更に無水硫酸ナトリウムにて乾燥
した後、減圧濃縮し、エーテルを加えて得られた結晶を
酢酸エチル−エーテルにて再結晶する。収率は７５％、
融点は１８０−１８６°Ｃであった。

（２）　Ｂｏ、ｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌ−Ｔｙｒ　−
Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅノ合成りｏｃ−Ｌ−Ｔ
ｙｒ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅ　６０　ミ　リ
　モル（２９，６７３ｆ）に氷冷下６Ｎ−ＨＣＩ／１，
４ジオキサン１６８−およびアニソール１６８ｄを加え
て溶解し、室温で３０分間放置した後、減圧乾固し得ら
れた残渣をエーテルで十分に洗浄する。この残渣を乾燥
した後、ＤＭＦ１２０ゴにて溶解し、氷冷下ＴＥＡ８，
４．ｇ、更にＢｏ　ｃ−Ｌ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−ＯＮＳｕ
　６０　ミＩＪ　モ／ｌ’　（２８，６５１９）　ｌ）
末のまま少量ずつ加えて溶解し、室温で３時間攪拌する
。次にＮ−（２−アミノエチル）ピペラジン４−を加え
、室温で３０分間攪拌した後、酢酸エチルを加えて液量
を１ｔとしたものを４％炭酸水素ナトリウム、生理食塩
水、０．２Ｍクエン酸、生理食塩水の順に各々５００−
ずつで３回洗浄し、更に無水硫酸ナトリウムにて乾燥し
た後、減圧濃縮し、エーテルを加えて得られた結晶を酢
酸エチル−エーテルにて再結晶する。収率は７０％融点
は１７０−１７６℃であった。

（３）　Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）　−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ
”Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＮＩＬ（Ｎｕ。

合成 りｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｇｌ　
ｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅ　４０ミリモル（３０，２７！
Ｍ）をメタノール１５０−に溶解し水冷下、抱水ヒドラ
ジン４０ｍを加え、室温で４５分間放置する。反応液を
減圧濃縮し、再びメタノールを加え、減圧濃縮して、過
剰のヒドラジンを可及的に留去する。次にエーテルを加
えて得られた結晶を、メタノール−エーテルにて再結晶
する。収率は８５％、融点は１９０−１９７℃であった
。

（４）　Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−
Ｇ１．ｎ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ−ＣＩ　）−Ｌ
−８ｅｔ（Ｂｚｌ）−Ｌ−Ｇｌｎ７ＧＩｙ−Ｇｌｙ−Ｌ
−８ｅｒ（Ｂｚｌ　）−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＮｂの合成 りｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｇｌｎ
−Ｌ−Ａｌａ−ＮＨＮＨ。

３０ミリモル＜２２．７０６９）をＤＭＦ　１２０づに
て溶解し、ドライアイス−メタノール浴中（−２０℃以
下に保つ）　、３Ｎ−ＨＣＩ／１，４−ジオキサン２１
ｊｎｔを一気に加え、更に亜硝酸インアミル４．６−を
加え、ひきつづきＴＥＡ　８．８−を加える（Ａ液とす
る）。−力比合物（２）の合成の（７）で得たＢｏｃ−
Ｌ−Ｌｙｓ　（Ｚ−Ｃ１）−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｌ
−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｌ
−Ａｓｎ−ＯＮｂ３０ミリモル（３７，８２１４）（合
成法は化合物（１）の合成の項の（７）参照）に氷冷下
６Ｎ−ＨＣ１／　１．’４−ジオキサン８４．ｇおよび
アニソール８．４量ｗｔを加えて溶解し、室温で３０分
間放置した後、減圧乾固し得られだ残渣をエーテルで十
分に洗浄する。この残渣を乾燥した後、ＤＭＦ１２０＋
Ｒｔにて溶解し、水冷下ＴＥＡ２．８−を加えたものを
前記のＡ液に滴下し、はじめの１時間は一２０℃以下を
保ちながら攪拌する。

ついで水冷下２４時間攪拌した後、結晶が析出しない程
度まで反応液を減圧濃縮する。得られた濃縮液に酢酸エ
チルを加えて１ｔとし４％炭酸水素ナトリウム、生理食
塩水、０２Ｍクエン酸、生理食塩水の順に各々５００−
ずつで３回洗浄し、更に無水硫酸ナトリウムにて乾燥し
た後、減圧濃縮しエーテルを加えて得られた結晶を酢酸
エチル−エーテルにて再結晶する。収率は６０％、融点
は１９１−１９７℃であった。

（５）　Ｈ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ
−Ａｌａ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−８ｅｒ−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ
１　ｙ−Ｇｌ　ｙ−Ｌ−８ｅｒ−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＨの合
成りｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｇｉｎ
−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ−Ｃ１）−Ｌ−８ｅｔ　
（Ｂｚ　ｌ　）−Ｌ−Ｇｌｎ　−Ｇｌ　ｙ−Ｇｌ　ｙ−
Ｌ−８ｅｒ　（Ｂｚ　Ｉ　）−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＮｂ　１
８ミリモルＣ３３，９５７ｆ）を５０％酢酸水溶液３０
０−にて溶解し、洗浄したパラジウム活性炭３Ｃ）９を
加え、水素ガスを通気しながら１６時間攪拌する。活性
炭を濾去し、濾液を減圧乾固した後、蒸留水を加え、再
び減圧乾固して溶液中の酢酸を留去する。得られた残渣
を１％酢酸水溶液１２０−にて溶解し、その６分の１量
ずつを用　。

いてセファデックスＧ−１５によるゲル濾過を行なう。

ゲル濾過は一般的なゲル濾過法に従って行なう。カラム
のベッド容積は１．７Ｘ４０ｃｍとなる様に調製し７〜
８ｍｔ／１１ｒの流速で１％酢酸水溶液にて溶出する。

５ｒｎｔずつ分画し、２３０ｎｍにおける吸光度を指標
として本物質の溶出画分を集め、凍結乾燥する。収率は
６０％、融点は１９２−１９８℃。

テアツタ。７ミ／ａＮｉ成［ＮＨ，：　３．１５、Ａｌ
ａ：１．００、Ｌｙｓ：１，９８、ＧＩ３’：１．９８
、Ｇｌ　ｕ　：　２．’Ｏ０１Ｓｅｒ：１．９８、Ａｓ
　ｐ　：　１．００であった。

■　化合物（３）の合成 （１）　Ｂｏｃ−Ｇｌ　ｙ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｇ４　ｎ
−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅの合成化合物（２）の合成の（１
）で得たＢ　ｏ　ｃ−Ｌ−Ｔｙ　ｒ　−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−
Ｌ−Ａｔ　ａ−ＯＭｅ　６０ミリ−Ｅ−ル（２９，６７
：ｌ）に水冷下、６Ｎ−ＨＣ１／１．４−ジオキサン１
６８−およびアニソール１６８−を加えて溶解し室温で
３０分間放置した後、減圧乾固し得られた残渣をエーテ
ルで十分に洗浄する。この残渣を乾燥した後、ＤＭＦ１
２０ｍにて溶解し、水冷下ＴＥＡｇ、４ｇ更にＢｏｃ、
−Ｇｌｙ＝ＯＮＳｕ　６０ミリモル（１６，３３６ｇ）
を粉末のまま、少量ずつ加えて溶解し、室温で３時間攪
拌する。次にＮ−（２−アミノエチル）ピペラジン４−
を加え、室温で３０分間攪拌した後、酢酸エチルを加え
て液量を１１としたものを４％炭酸水素ナトリウム、生
理食塩水、０．２Ｍクエン酸、生理食塩水の順に各々５
００ｄずつで３回洗浄し、更に無水硫酸ナト’　ＩＪウ
ムにて乾燥した後、減圧濃縮しエーテルを加えて得られ
た結晶を酢酸エチル−エーテルにて再結晶する。収率は
７０％、融点は１７２−１７５℃であった。

（２）　Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｓ−Ｇｌｙ−ＯＨの合成）（
−Ｇｌｙ−ＯＨ１００ミリモル（７，５０’８　！　）
をＤＭＦ２００−にて溶解し、氷冷下ＴＥＡ１４−ｇ、
更にＢ　ｏ　ｃ−Ｌ−Ｔｙｒ−ＯＮＳｕ１００ＮＳ上ル
（３７，８３９ｆ）を粉末の−１：ま少量ずつ加えて溶
解し、室温で３時間攪拌する。次にＮ−（２−アミノエ
チル）ピペラジン６ｉを加え、室温で３０分間攪拌した
後、酢酸エチルを加えて液量を１ｔとしたものを４％炭
酸水素ナトリウム、生理食塩水、０．２Ｍクエン酸、生
理食塩水の順に各々５００−ずつで３回洗浄し、更に無
水硫酸す）　ＩＪウムにて乾燥した後、減圧濃縮しエー
テルを加えて得られた結晶を酢酸エチル−エーテルにて
再結晶する。収率は７５％、融点は１８０＝１８３℃、
であった。

（３）　Ｚ−Ｌ−Ｌ３／５（Ｚ）−Ｌ−Ｔｙ−ｒ−Ｇｌ
ｙ−ＯＨ０合成りｏｃ　−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−ＯＨ８
０ミリモル（２６，９９ｇ）に氷冷下６Ｎ−ＨＣＩ／１
．４−ジオキサン２２４−およびアニソール２２．４−
Ａ’を加えて溶解し室温で３０分間放置した後、減圧乾
固し得られた残渣をエーテルで十分洗浄する。この残渣
を乾燥した後、ＤＭＦ１６０ｍｌにて溶解し、水冷下１
’ＥＡ　１１．２＋ｄ、更にＺ−Ｌ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−
ＯＮＳｕ８０ＮＳ上ル（３ｓ、２ｏ２ｇ）　を粉末のま
ま、少量ずつ加えて溶解し、室温で３時間攪拌する。次
にＮ−（２−アミノエチル）ピペラジン５−を加え、室
温で３０分間攪拌した後、酢酸エチルを加えて液量を１
ｔとしたものを、４％炭酸水素ナトリウム生理食塩水、
０．２Ｍクエン酸、生理食塩水の順に５００−ずつで３
回洗浄し、更に無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、減
圧濃縮し、エーテルを加えて得られた結晶を酢酸エチル
−エーテルにて再結晶する。収率は７０％、融点ｕ４７
９−１８２℃。

であった。

（４）　Ｚ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−
Ｇｌｙ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ４１ａ−ＯＭｅ　
ノ合成 りｏｃ−Ｇｌ　ｙ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｌ−Ａ
ｌａ−ＯＭｅ　４０　ミリモル（２２，０２５Ｆ）に氷
冷下６Ｎ−ＨＣ１／　ｉ　、４−ジオキサン１１２−お
よびアニソール１１．２−を加えて溶解し、室温で３０
分間放置した後、減圧乾固し、得られた残渣をエーテル
で十分に洗浄し、乾燥する（Ａ−）。一方、Ｎ−ヒドロ
キシコハク酸イミド４４ミリモル（５，０６４９）をＴ
ＨＦ　２００ｍに溶解し、Ｚ−Ｌ−Ｌｙｓの）−り−Ｔ
ｙｒ−Ｇｌｙ−ＯＨ４０ミリモルｃ２５．３０８１）を
粉末のまま少量ずつ加え゛て溶解したものを氷冷した後
、ＤＣＣ４４ミリモルＣ９，０７８ｆ）をＴＨＦ　４４
　、ｔに溶解したものを滴下し、室温にて１６時間攪拌
する。生成するジシクロへキシルウレアを濾去し、反応
液を減圧濃縮して得られた飴状残渣を酢酸エチルに溶解
したものにエーテルを加えて生成する結晶を酢酸エチル
−エーテルで再結晶する（Ｂ）。八）をＤＭＦ　、８０
−にて溶解し、水冷下、ＴＥＡ、　５．５　、ｔ、更に
俣）を粉末のまま少量ずつ加えて溶解し、室温で３時間
攪拌する。次にＮ−（２−アミノエチル）ピペラジン３
−を加え、室温で３０分間攪拌した後、酢酸エチルを加
えて液量をＩＬとしたものを、４％炭酸水素す）　ＩＪ
ウム水溶液、生理食塩水、０．２Ｍクエン酸、生理食塩
水の順に各々５００−ずつで３回洗浄し、更に無水硫酸
す）　ＩＪウムにて乾燥した後、減圧濃縮し、エーテル
を加えて得られた結晶を酢酸エチル−エーテルにて再結
晶する。

収率は６０％融点は１９０−１’９５℃、であった。ア
ミノ酸組成ばＮＨ，：　２．０３、Ｌｙｓ＋１．００、
Ｔｙｒ：１．９８、Ｇｌｙ：２．００、Ｑｌ　ｕ　：　
１．０２、Ａｌａ：０．９８であった。

（５）　、Ｚ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ
−Ｇｌｙ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＡＩａ−ＮＨ
ＮＨ，ノ合成 Ｚ−Ｌ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−Ｌ−’Ｉ’ｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇ
ｌｙ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅ　
３０ミリモル（３１，９８５ｆ）をメタノール１５□−
に溶解し、水冷下、抱水ヒドラジン３ｏ−を加え、室温
で４５分間放置する。反応液を減圧濃縮し、再ヒメタノ
ールを加え減圧濃縮して過剰のヒドラジンを可及的に留
去する。次にエーテルを加えて、得られた結晶をメタノ
ール−エーテルにて再結晶する。収率は８５％、融点は
１９２−１９７であった。

（６）　Ｚ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−
Ｇｌｙ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｌ　ａ−Ｌ−
Ｌｙｓ（Ｚ−ＣＩ　）−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｌ−Ｇ
ｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｌ−Ａ
ｓｎ−ＯＮｂの合成Ｚ−Ｌ−Ｌｙ　ｓ　（Ｚ）　−Ｌ−
Ｔｙ　ｒ　−Ｇｌ　ｙ−Ｇｌ　ｙ−Ｌ−Ｔｙ　ｒ　−Ｌ
−Ｇｌ　ｎ　−Ｌ−Ａｌａ　−ＮＨＮＨ２２０ミリモル
（２１，３２３ｆ）をＤＭＦ８ｏ−にて溶解し”ドライ
アイス−メタノール浴中（−２０”Ｃ０以下に保つ〕、
３Ｎ−’ＨＣＩ／１．４−ジオキサン１４づを一気に加
え、更に亜硝酸イソアミル３．０８．ｊを加え３０分間
攪拌した後、反応液のヒドラジン・テストが陰転す゛る
まで亜硝酸イソアミルを加え、ひきつづきＴＥＡ５．Ｂ
８−を加える（Ａ液とする）。−労化合物（２）の合成
の（７）で得たＢ□ｃ−Ｌ−Ｌｙｓ　（ｚ、ｃｌ）−Ｌ
−８ｅ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｌ−Ｇｌ　ｎ　−Ｇｌ　
ｙ”ＧＩ　ｙ”Ｌ−８ｅｒ　（Ｂｚ　１）−Ｌ　Ａｓｎ
−０Ｎｂ２０ミリモルＣ２５，２１１Ｌｐ）に氷冷下６
Ｎ−ＨＣＩ／１．４−ジオキサン５６５ｇおよびアニソ
ール５．６ｍｌを加えて溶解し室温で３０分間放置した
後、減圧乾固し、得られた残渣をエーテルで十分に洗浄
する。この残渣を乾燥した後、ＤＭｌｌｉ′１００−に
て溶解し、水冷下ＴＥＡ２．８−を加えたものを前記の
Ａ液に滴下し、はじめの１時間は一２０℃、以下を保ち
ながら攪拌する。ついで水冷下２４時間攪拌した後、結
晶が析出しない程度まで反応液を減圧濃縮する。得られ
た濃縮液に酢酸エチルを加えて１ｔとし、４％炭酸水素
ナトリウム、生理食塩水、０２Ｍクエン酸、生理食塩水
の順に各々５００−ずつで３回洗浄し、更に無水硫酸ナ
トリウムにて乾燥した後、減圧濃縮し、エーテルを加え
て得られた結晶１１Ｅ酸エチル−エーテルにて再結晶す
る。

収率は６０％、融点は１９０−１９８℃であった。

（７）　Ｈ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ
−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−ＧＬｎ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｌｙｓ−
Ｌ−８ｅｒ−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｙ−０１ｙ−Ｌ−８
ｅｒ−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＨ合成 Ｚ−Ｌ−Ｌｙｓ　（Ｚ）　−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌ　ｙ−Ｇ
ｌ　ｙ−’Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ
−Ｌｙｓ（Ｚ−ＣＩ　）−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｌ＝
ＧＩｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌ−８ｅ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　
）　−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＮｂ　１５ミリモル（３２，９２
２ｇ）を５０％酢酸水溶液５００−にて溶解し、洗滌し
たパラジウム活性炭５０ｊ’−ｉ加え、水素ガスを通気
しながら１６時間攪拌する。ついで活性炭を濾去し、濾
液を減圧乾固した後、蒸留水を加え、再び減圧乾固して
、溶液中の酢酸を留去する。得られた残渣を１％酢酸水
溶液１００−にて溶解し、その１０分の１量ずつを用い
て七ファデックスＧ−１５によるゲル濾過を行なう。ゲ
ル濾過は一般的なゲル濾過法に従って行なう。カラムの
ベッド容積は１．７Ｘ４０いとなる様に調製し７〜８ｍ
ｔ／ｈｒの流速で１％酢酸水溶液にて溶出する。５−ず
つ分画し、２３００ｍにおける吸光度を指標として、本
物質の溶出画分を集め凍結乾燥する。収率は６０％、融
点は１９２−１９８℃であった。アミノ酸組成はＮＨ，
：３，２４、Ａｌａ：１．００、Ｌｙｓ：１．９８、Ｇ
ｌｙ＋４．００ｓＧｌ　ｕｏ：　０．９　Ｂ、Ｓｅｒ：
１．７８、Ｔｙｒ：ｌ、７６、Ａｓｐ：０．ｇＢであっ
た。

実施例２．　同相法による合成 ■　化合物（１）の合成 （１）担体上保護デカペプチドの合成 ■　Ｂｏｃ−Ｌ−Ａ、５ｎ−ＯＨ２０ミリモル（４Ｍ５
ｙ）をエタノール／水Ｃ７：２）　７０−にて溶解し、
１０ミリモルの炭酸セシウム水溶液を滴下してｐＨ７と
する。減圧濃縮して得られた液状の残渣（はとんど水）
にベンセンを少量加えて共沸させることにより水を留去
する。残渣を、真空デシケータ中、減圧乾燥したものを
ＤＭＦ５０−にて溶解し、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ　（メ
リフィールド）ｍ脂（ポリスチレン−１％ジビニルベン
ゼン重合体）２５ノを加え、５０℃、にて４８時間静か
に攪拌する。ついでこの樹脂をＤＭＦ　、　ＤＭＦ　／
水（９：１）、９５％エタノール、無水エタノール、１
．４−　シ：）ｒ　＋　サン、エタノール、クロロホル
ム、エタノール、ジクロロメタン、メタノールの順に１
００−ずつで３回洗浄し、ナシケータ中、減圧乾燥する
。

■　Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＨを結合させたＭｅｒｒｉ
ｆｉｅｌｄ樹脂をジクロロメタンＩＱＯ，ｊで２回洗浄
する。

Ｂｏａ基を脱離するだめに、ジクロロメタン−ＴＦＡ混
液（１：１）１００．ｇを加え５分間放置した後、Ｌ−
Ａｓｎ−樹脂を濾取し、再びジクロロメタン−ＴＦＡ混
液（１：　１）　１００−を加えて十分混和し、２０分
間反応させる。次いでジクロロメタン、ジクロロメタ／
−ジオキサン（２：　１）の順に１００−ずつで３回洗
浄した後、ＴＥＡ−クロロホルム（１：９）１００−を
加えて５分間混和し、いったん濾過して得られたＬ−Ａ
ｓｎ　−樹脂にＴＥＡ−クロロホルム（１９）１００−
を加えて５分間混和する。更にクロロホルム１００７で
１回、ジクロロメタン１００−で３回洗浄した後、Ｌ−
Ａｓｎ−樹脂にジクロロメタン２０ｍｌ　、ＢｏＣ−Ｌ
−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−０Ｈ２０ミリモル（５９０７９）
を加えて１０分間混和し、ＤＣｏ　２０ミ　リモル（４
，１２９）ＨＯＢｔ２（ｙミリモル（２，７０９）をジ
クロロメタン５０−に溶解したものを加え、混和する。

３０分間混和した後、更にＢｏｃ　−４−Ｓｅｒ　（Ｂ
ｚｌ　）−ＯＨ１０ミリモル（２９５４ｆ）、ＤＣＣ１
０ミリモルＣ２，０６ｐ）、ＨＯＢｔ’１０ミリモル（
ｘ３５ｐ）をジクロロメタン２０−　に溶解したものを
加え、１時間２０分混和する（カブプリングは計２時間
を要する）。次いで生成物であるＢｏｃ−Ｌ−８ｅｒ（
Ｂｚｌ　）−Ｌ−Ａｓｎ−樹脂ヲジクロロメタン、ＤＭ
Ｆの順に１００−ｊｆつで３回洗浄する。次にＤＭＦ４
０−と無水酢酸５−の混液を加え、更にＤｌｖｌＦ　４
０−にＮ−メチルモルホリン３ノを溶解したものを加え
２０分間混和する。得られた生成物ｆ：ＤＭＦ、エタノ
ール、ジクロロメタンの順に１００−／ずつで３回洗浄
する。

■　■と同様、Ｂｏｃ−（）ｌｙ−ＯＨ２０ミリモル（
３，４ｉｏｇ）ｆ：Ｌ−８ｅｒ　（Ｂｚ　Ｉ　）−Ｌ−
Ａｓｎ−樹脂と反応させ、　更に反応を完結させるため
Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ１０ミ’Ｊモルを追加する。以下
■と同様の操作にて行なう。

■　■と同様にして■で生成しだＧｌｙ−Ｌ−３ｅｔ（
Ｂｚ　ｌ　）　−Ｌ−Ａｓ　ｎ−樹脂にＢ’ｏｃ−Ｇｌ
ｙ−ＯＨをカップリングする。その際、はじめＢｏｃ−
Ｇｌｙ−ＯＨ２０ミ！Ｊモルを更に同１０ミリモルをカ
ップリングに供する。

以下■と同様の操作にて行なう。

■　■と同様、■で生成したＢｏｃ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−
Ｌ−８ｅ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｌ−Ａｓｎ−樹脂ノＢ
ｏＣ基を脱離した後、Ｂｏｃ−Ｌ−（）ｉｎ−ＯＮｐ　
２０ミリモ＃（７，３５Ｆ）、ＨＯＢｔ２０ミリモル（
２，７０２ｇ）、ＤＣＣ２０ミリモルＣ２０，６１）を
加え、静かに３０分間反応させる。ひきつづき更にＢｏ
ｃ−Ｌ−Ｑｌｎ−ＯＮｐ　４０ミリモル（１４，７Ｆ）
、ＨＯＢ　ｔ４０ミリモル（５，４０４１）およびＤＣ
Ｃ４０ミリモルＣ４Ｌ２ｆ）を加える。３０分間反応さ
せた後、樹脂をＤＭＦｌｏｏ−にて３回洗浄し、次いで
ＤＭＦ４０−と無水酢酸５＋ｎｔの混液を加え、更にＤ
ＭＦ’４０−にＮ−メチルモルホリン３ｆを溶解したも
のを加え、２０分間混和する。得られた生成物をＤＭＦ
、エタノール、ジクロロメタンの順に１００ｄずつで３
回洗浄する。

■　■と同様、■で生成したＢｏｃ−Ｌ−Ｇｉｎ−Ｇｌ
　ｙ−Ｇｌ　ｙ−Ｌ−８ｅｒ　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｌ−Ａ
ｓｎ−樹脂ノＢｏＣ−保護基を脱離した後、Ｂｏａ−Ｌ
−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−０Ｈ２０ミリモル（５，’）１ｆ
）をジクロロメタン５０−に溶解したもの、更にＤＣ０
２０ミリモル（ジクロロメタン溶解）を加え、カップリ
ングを行ない、１，５時間反応させた後、再びＢｏｃ−
Ｌ−８ｅ、ｒ　（Ｂｚｌ）−〇Ｈ２０ミリモル、ＤＣ０
２０ミリモルを加えて２．５時間反応させる。以下洗浄
の方法等は■と同様で、ある。

■　■と同様、■で生成したＢｏｃ−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚ
ｌ）−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｙ−Ｌ−８ｅ　ｒ’　（Ｂ
ｚ　ｌ　）−Ｌ−Ａｓｎ−樹脂のＢＯＣ保護基を脱離し
た後、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓの−ＯＨ２０ミリモル（７，
６ｏｃ＋ｇ）、ＤＣＣ２０ミリモル、ジクロロメタンを
用いて、カップリングを行ない、更に、Ｂｏ　ｃ−Ｌ−
Ｌｙ　ｓ　（Ｚ）ＯＩ−１２０ミ　リモル、ＤＣｏ　２
０ミリモル（いずれもジクロロメタンに溶解）を加えて
反応を完結させる。洗浄の方法は■と同様である。

■　■と同様、■で生成しだＢｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ　（Ｚ
）　−Ｌ−８ｅｔ　（Ｂｚｌ　）−Ｌ−Ｃ１ｎ−Ｇ１　
ｙ−Ｇｌ　ｙ−Ｌ−８ｅｔ　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｌ−Ａｓ
ｎ−樹脂のＢｏ、ｃ保護基を脱離した後、Ｂ□ｃ−Ｌ−
Ａｌａ−ＯＨ２０ミリモ／’（３，７８１１）、ＤＣｏ
　２０ミリモル、ジクロロメタンを用いてカップリング
を行ない、更にＢｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＨ２０ミリモル
、ＤＣＣ２０ミリモル（いずれもジクロロメタンに溶解
〕を加えて反応を完結させ、■同様の方法で洗浄を行な
う。

■　■と同様、■で生成しだＢ。ｃ−Ｌ−Ａｌ　ａ−Ｌ
−Ｌｙ　ｓ　（Ｚ）−Ｌ−８ｅ　ｒ　（Ｂｚ　Ｉ　）　
−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　ｙ−Ｇｌｙ−Ｌ−８ｅｔ　（Ｂ
ｚ　Ｉ　）−Ｌ−Ａｓｎ−樹脂のＢＯＣ保護基を脱離し
た後、■と同様の方法にてＢｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−ＯＮｐ
をオクタペプチド樹脂とカップリングさせる。カップリ
ング後の樹脂の洗浄は■に従う。

０　■と同様、■で生成したＢｏ　ｃ−Ｌ−Ｇｌ　ｎ　
−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ＋）”Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚ
ｌ）−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌ−８ｅｒ（Ｂｚ
ｌ　）−Ｌ−ｋｓｒｒ−樹脂ＣＩＢｏＣ保護基を脱離し
た後、Ｂｏ’ｃ−Ｌ−Ｌｙｓ　（Ｚ−ｃ　Ｉ　）ＯＨ２
０ミリ％　ル（８，２９８ｇ）を用いてカップリングを
行なう。反応条件、洗浄方法等は■に従う。以上の操作
によりデカペプチド樹脂が生成する。

（２）担体からのペプチドの分離 得られ′たデカペプチド樹脂を真空デシケータ中で減圧
乾燥し、ＴＦＡ２５０ｇｔを加えて混和させた後、３％
レゾルシノールおよヒチオアニンールを那えたものに室
温下ＨＦガスを通気して２時間反応させる。樹脂を濾去
１．　Ｔ　Ｆ　Ａ溶液を減圧濃縮して得られた油状残渣
を酢酸水溶液（７５％）１５０−に溶解し再び減圧濃縮
す。

る。得られた残渣を【−ブタノール−水−（１：１）８
００−に溶解し凍結乾燥する。得られた白色粉末に酢酸
水溶液、氷酢酸−エー水−溶液（いずれも７５％）の順
に加えて再沈澱する。

瀘取した残渣をＤｉＶＩＦ−メタノール−クロロホルム
（７：４：８）に溶解した後、エーテルを加えて再沈澱
しゼリー状の沈澱をペレットにあけ、真空デシケータ中
で減圧乾燥する。

（３）　デカペプチドのゲル濾過による精製粗デカペプ
チドをセフ７テツクスＧ−ｉ５（カラム容積：５Ｘ９０
の、溶出液、氷酢酸−水（１：１）溶出速度（０，７、
／／分）〕に負荷し、溶出液を減圧濃縮したものに氷酢
酸を加えて溶解した後、再びセファデックスＧ−１５に
負荷し、１０−ずつ分画する。２３００ｍにおける吸光
度を各画分について測定すると、目的とするデカペプチ
ドは２００−５００−の溶出画分中に認められるので、
この画分を合し、減圧乾固した後、氷酢酸に溶解し、エ
ーテルを加えて結晶化する。この結晶を瀘取した後、氷
酢酸−エーテルで再結晶する。

■　化合物（２）の合成 （１）担体上、保護ウンデカペプチドの合成■　化合物
（１）の合成の（１）デカペプチドの合成の項の■と同
様の方法にて、■で生成したＢＯｃＬ−Ｇｌ　ｎ−Ｌ−
Ａｌ　ａ−Ｌ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−Ｌ−８ｅｔ　（Ｂｚ　
ｌ　）−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｇｌ　ｙ−Ｇｌ　ｙ−Ｌ−８ｅｒ
　（Ｂｚ　Ｉ　）−Ｌ−Ａｓ　ｎ−樹脂のＢｏｃ保護基
を脱離した後、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ　（Ｊ３ｚ　ｌ　）
−ＯＨ２０ミリモル（７，４２９’ｌ／）を用いてカッ
プリングを行なう。

反応条件、洗浄方法等は上記同様■に従う。

■■■同様■で生成したＢｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）
−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｌ−Ａ’ｌ　ａ−Ｌｙ　ｓ　（Ｚ）−
Ｌ−８ｅ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｌ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　
ｙ−Ｇｌ　ｙ−Ｌ−８ｅ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｌ−Ａ
ｓｎ−樹脂のＢｏｃ保護基を脱離した後、Ｂｏｃ−Ｌ−
Ｌｙｓ（Ｚ−ＣＩ）−０Ｈ２０ミリモルＣＢ、’２９８
９）　？−用いてカップリングを行なう。

反応条件、洗浄方法等は■同様、化合物（１）の合成の
（１）の■に従う。以上の操作によりウンカペプチド樹
脂が生成する。

（２）担体からのペプチドの分離 得られたウンデカペプチド樹脂を真空デシケータ中で減
圧乾燥し、ＴＦＡ　２５０−を加えて混和させた後、３
チレゾルシノールおよびチオアニンールを加えたものに
室温下ＨＦガスを通気して２時間反応させる。樹脂を濾
去しＴＦＡ溶液を減圧濃縮して得られた油状残渣を酢酸
水溶液（７５％）　１５０．１に溶解し再び減圧濃縮す
る。得られた残渣を１−ブタノール−水（１：１）８０
０７に溶解し凍結乾燥する。得られた白色粉末に酢酸水
溶液、氷酢酸−エーテル溶液（いずれも７５％）の順に
加えて再沈澱する。濾取した残渣をＤ　１１／Ｌ　Ｆ−
メタノール−クロロホルム（７：４：］）に溶解した後
、エーテルを加えて再沈澱しゼリー状の沈澱をペレット
にあけ、真空デシケータ中で減圧乾燥する。

（３）　ウンデカペプチドのゲル濾過による精製粗ウン
デカペプチドをセファテックスＧ−１５〔カラム容積：
５Ｘ９Ｑａｎ、溶出液：氷酢酸−水（１’　：　１　）
、溶出速度（０，７，ｄ／分）〕に負荷し、溶出液を減
圧濃縮したものに氷酢酸を加えて溶解した後、再びセフ
ァデックスＧ−１５に負荷し、１０ｄずつ分画する。２
３０ｎｍにおける吸光度を各画分について測定すると、
目的とするウンデカペプチドは２００−５００．／の溶
出画分中に認められるので、この両分を合し、減圧乾固
した後、氷酢酸に溶解し、エーテルを加えて結晶化する
。

この結晶を瀘取した後、氷酢酸−エーテルで再結晶する
。

■　化合物（３）の合成 （１）担体上保護テトラデカペプチドの合成■　化合物
（１）の合成の（１）デカペプチドの合成の項の■と同
様の方法にて、化合物（２）の合成の■ウンデカペプチ
ドの合成の項の■で生成したＢ□ｃ二Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂ’
ｚｌ）−Ｌ−Ｇｉｎ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌ−
８ｅｒ（Ｂｚｌ　）−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｇｌ　ｙ−Ｇｌｙ−
Ｌ−８ｅｔ（Ｂｚｌ）−Ｌ−Ａｓｎ−樹脂のＢｏｃ保饅
基を脱離した後、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ１Ｂｏｃ−（）
ｌｙ”ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−０Ｈ，Ｂ
ｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ−’ＣＩ）−０Ｈの順に各々２０
ミリモルずつにて、カップリングさせる。その際、各カ
ップリングごとに、洗浄を行ない、次のカップリングに
。

進む前にＢｏｃ保護基の脱離を行なう。

■　以上の操作によりテトラデカペプチド樹脂が生成す
る。

（２）担体からのペプチドの分離 得られたテトラデカペプチド樹脂を真空デシケータ中で
減圧乾燥し、Ｔｌｉ”Ａ２５０−を加えて混和させた後
、３％レゾルシノールおよびチオアニソールを加えたも
のに室温下ＨＦガスを通気して２時間反応させる。樹脂
を濾去しＴＦＡ溶液を減圧濃縮して得られた油状残渣を
酢酸水溶液（７，５％　）１５０．ｄに溶解し再び減圧
濃縮する。得られだ残渣をｔ−ブタノール−水（１：１
）８００−に溶解し凍結乾燥する。得られた白色粉末に
酢酸水溶液、氷酢酸−エーテル溶液（いずれも７５％）
の順に加えて再沈澱する。瀘取した残渣をＤＭＦ−メタ
ノール−クロロホルム（７：４：３）に溶解した後、エ
ーテルを加えて再沈澱し、ゼリー状の沈澱をペレントに
あけ真空デシケータ中で減圧乾燥する。

（３）７＋″トラデカペプチドのゲル濾過による精製粗
テトラデカペプチドをセファデックスＧ−１５〔カラム
容積：５×９０３、溶出液：氷酢酸−水（１：１）、溶
出速度（０，７ｍ／分）〕に負荷し、溶出液を減圧濃縮
したものに氷酢酸を加えて溶解した後、再びセファデッ
クスＧ−１５に負荷し、１０コずつ分画する。２３Ｑｎ
ｍにおける吸光度を各画分について測定すると、目的と
するテトラデカペプチドは２００−５．　ＯＯ−の溶出
画分中に認められるので、この画分を合し、減圧乾固し
た後、氷酢酸に溶解し、エーテルを加えて結晶化する。

この結晶を瀘取した後、氷酢酸−エーテルで再結晶する
。　゛ 実験例１．　放射性ヨウ素による標識化化合物（１）、
（２）および（３）を以下の■〜■の方法で標識化じた
。

■、　Ｂｏ　Ｉ　ｔｏｎ　、Ｈｕｎ　ｔｅｒ試薬（Ｂｉ
　ｏｃｈｅｍ、Ｊ　、　、　１３３　。

５２９−５３９．１９７３　）　５００μＣ１をマイク
ロバイアル反応容器に入れ、これにｌＡｆ！のペプチド
を含む０．Ｉ　Ｍ酢酸溶液１０μｔを加える。

■　１５〜３０分間、氷冷しながら（０℃、）反応させ
る。

■　０．２ＭグリシンＱ、５−を加え、０℃、で５分間
反応させる。

■　０．２５％のゼラチンを含む０．０５Ｍ　ＩＪン酸
緩衝液を加えて全量を１０−とじ放射能を測定する。

■　生成物をＢｌｏ−Ｇｅ１　Ｐ−２によるゲル濾過ク
ロマトグラフィーにより精製する。

以上の方法により調製上たヨウ素化ペプチドの比放射能
は、化合物（１）が５０μｃｉ／μｆ、（２）および（
３）が７５μＣｉ／μｆであった。

実験例２．　ヨウ素化ペプチドのＲＩＡ化合物（１）、
偉）および（３）を用いて以下の■〜■の方法でＲ，Ｉ
Ａを行なった。

■　化合物（１）、（２）あるいは（３）各々と、牛血
清アルブミンをグルタルアルデヒドを用いて結合させた
後、生理食塩水に溶解し、フロイントの完全アジュバン
トを加えて混和しエマルジ・ンを作製し、これをウサギ
に免疫して抗血清を得た。

■　ＦＴＳの種々の濃度の標準試料に０．１％牛血清ア
ルブミンを含むリン酸緩衝液を加えて１００μｔとし、
抗（１）、（２）又は（３）血清の希釈液５０μｔを加
え、４℃にて１６〜１８時間反応させた後、実験例１で
得たヨウ素化した化合物（１）、（２）！は（３）の各
々１５０００ｃｐｍ／’５０μｔ（ｉ％牛γグロブリン
、５００ＫＩＥ／、ｇ　）ラジロール、リン酸緩衝液中
）を加えて更に４℃で６−７時間反応させた。

次いで２０％ポリエチレングリコールにて抽出した後、
ガンマ−カウンターによシ放射能を測定した。以上の方
法にて化合物（１）、（２）又は（３）を用いたＲ、Ｉ
Ａを行なった結果、いずれの化合物もＦＴＳを１〜１１
０００ｐの範囲で定量できた。

特許出願人　三井製薬工業株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 弐　Ｒ，−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−
   ８ｅｒ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｇｌ　ｙ、−Ｇｌ　ｙ−Ｌ−８ｅ
   　ｒ−Ｌ−Ａｓｎ−Ｒ。 〔式中Ｒ，（ｌ−１：Ｈ−Ｌ−ＬｙＳ　（１）、Ｈ−Ｌ
   −Ｌｙｓ−Ｌ−Ｔｙｒ　（２）、またはＨ−Ｌ−Ｌｙｓ
   −Ｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌ　ｙ−Ｇｌ　ｙ−Ｌ−Ｔｙｒ　（３
   ）を示し、Ｒ２はＯＨｌ示す〕で示されるペプチド。