JPS6072823A - 抗ウイルス剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗ウイルス活性物質、詳しくはヒメヒオオギズ
イセン（学名：　Ｃｒｏｃｏｓｍｉａ　Ｘ　ｃｒｏｃｏ
ｓｍａｅｆｌｏｒａＮ、　Ｅ、　Ｂｒ、１：たｌ、Ｔｒ
目ｏｎｉａ　ｃｒｏｃｏｓｍａｅｆｌｏｒａＬｅｍｏｉ
ｎｅ　）の全草、とくにその根茎から抽出して得られる
抗ウイルス活性物質に関する。

ヒメヒオオギズイセンはアヤメ科の多年草であって庭園
で栽培されるほか、暖地では自生することもある。地下
部に球状の根茎を有し、高さは５０〜８０　ｃｍ　ｓ葉
は剣状である。夏に茎の上部に２〜３枝を分ち、多数の
紅色の花を側倒的な穂状花房として開く、花の径は２〜
３　ｃｍ　ｓ花被はロード状で６片である。このヒメヒ
オオギズイセンは前述のように観賞用として用いられる
ほか確定した別の用途はなかった。

本発明はヒメヒオオギズイセンの全草、とくにその根茎
から抽出して得られる成分が人を含む生物に対して抗ウ
ィルス活性を示し有用であるという知見に基づいてなさ
れたものである。

すなわち、本発明は、ヒメヒオオギズイセンから抽出し
て得られる成分を有効成分として含有する抗ウィルス剤
である。

本発明の成分はヒメヒオオギズイセンの全草、とくにそ
の根茎から、この成分は、具体的には例えば次のような
方法で得ることができる。すなわち、ヒメヒオオギズイ
センの全草、根茎、またはそれらの乾燥物を水、低級脂
肪族アルコール類、含水低級脂肪族アルコール類、芳香
族アルコール類、その他ある程度親水性、ある程度親油
性の溶媒類を用いて、０℃付近より沸点に至る範囲内で
減圧、常圧、または加圧下に抽出操作を行い得ることが
できる。さらにこの抽出液を濃縮して濃縮エキスとして
もよい。必要により、たとえば葉緑素等を除くための原
料、抽出液、または濃縮エキスを酢酸エチルなどの脂溶
性溶剤で処理することもある。このようにして得られた
濃縮エキスは実質的に抗ウィルス活性を含有するもので
あって、そのまま本発明の有効成分として使用できるが
、要すれば各種の乾燥方式を用いて粉末状とすることも
できる。

本発明の成分はやや苦味を有する。また濃縮エキスおよ
び乾燥粉末は通常淡黄色から黄褐色を呈する。これらは
また、水、メタノール、エタノール、プロパツールなど
の低級アルコールおよびこれらの含水物に可溶である。

本発明の成分は組成物として経口投与用、非経口投与用
の注射剤、および外用剤として用いることができる。す
なわち当該分野で公知の賦形剤、蒸留水箋高級アルコー
ル、界面活性剤などを用いることができる。

以下に実施例を示すが、本発明はこれらに限定されるも
のではない。

実施例１ 自生ヒメヒオオギズイセンの根茎３５０２を粉砕し・さ
らに水２，０００ｍ７！を加え沸とう温度で９０分攪拌
しながら抽出し、ついでｆ過後、ｒ液を一夜放置する。

生成した白色沈澱を分取し、残液を減圧下８０℃で約１
５０ｎＪまで濃縮する。この時点で白色沈澱が生じたと
きはこれを沢別しさらに凍結乾燥して２．７ｆの茶褐色
の乾燥成分を得た。

得られた乾燥成分は混合物であるが、その元素分析値を
参考迄に次に示す（単位４１％）。

０：４２．ＯＨ：５．’７　Ｎ：１，５実施例２ 栽培したヒメヒオオギズイセンの根茎ｌ　Ｋｆを粉砕し
・酢酸エチル３／を加え約２０℃で２時間攪拌する。ｆ
過し、固型分を少量の水で洗浄後風乾する。風乾した固
形分にエタノール６／を加え５０℃で攪拌下に２時間抽
出する。抽出液を沢過し、ｆ液を６０℃で減圧下に濃縮
乾固する。これに水１１！を加えて生ずる微細な白色沈
澱を沢別し、沢液を減圧下８０℃で濃縮乾固して２１．
１　ｔの黄褐色の乾燥成分を得た。

得られた乾燥成分は混合物であるが、その元素分析値を
参考までに次に示す（単位二重量％）。

０：４２．２　Ｈ：６，８　Ｎ：０．１実施例５ 自生ヒメヒオオギズイセンの全草１−を細断し、酢酸エ
チル３Ｉ！を加え約２０℃で４時間攪拌する。ｆ過し固
型分を少量の水で洗浄後風乾し、ついで８０容量チエタ
ノール（２０％は水）６Ｉ！を加え６０℃で攪拌下に２
時間抽出する。

ｆ過し、ｒ液を６０℃で減圧下に約３００　ｍｌまで濃
縮する。室温まで冷却し、生ずる固形分をｒ別し、Ｐ液
をさらに８０℃で濃縮乾固して１８．４　ｆの乾燥成分
を得た。

得られた乾燥成分は混合物であるが、その元素分析値を
参考までに次に示す（単位：重量％）。

０：４２．ｌ　Ｈ：６．６　Ｎ：１．１上記実施例で得
られた抽出成分のインフルエンザウィルスに対する阻止
効果を以下に示す生物学的方法により実施した。

＝５− 参考例Ｉ Ａ、試験材料 （１）検体と試料の調製 実施例１で得られた抽出乾燥成分である検体を秤量しこ
れに（１／　１００−ｅ：　／ｌ／）／　ｔ　Ｐ　Ｂ　
５Ｈ（ｐＨ７，２）を加え、１００℃３０分熱湯中にて
加熱して得た溶液を原液（１゜６％溶液）とし、これを
ＰＢＳＨにより２倍段階希釈法で７段階に希釈し試料と
した。

（２）発育鶏卵 白色レグホン系ＳＰＦ鶏群（Ｌｉｎｅ−８）の１１日齢
発育鶏卵を用いた。

（３）インフルエンザウィルス インフルエンザウィルス　Ａ／熊本／３７／７９株を発
育鶏卵によりウィルス価を測定した後月いた。

Ｂ、試験方法および成績 （１）検体の発育鶏卵に対する毒性 １．６〜０．０２５優に調製した試料を、各濃度あたり
１０個の１１日齢発育鶏卵の尿膜腔６一 内に○、ｌ−ずつ接種し、３４±１℃で５日間培養した
。接種後２４時間以内に死亡したものを除外し、培養５
日間の生死によって毒性の有無を判定した。

その結果は表１に示したとおりで、最高濃度１．６チか
ら０．Ｃ２５チに至るいずれの濃度の試料を接種した群
においても、死亡は認められなかった。この成績から、
検体の発育鶏卵に対する毒性はないものと判断された。

（２）検体のウィルス不活化効果 ■感作時間不変／ウィルス・検体濃度変動法による試験 １０６−０〜１０２・０ＢＩＤ５ｏ／　０．１ｍ／　ｌ
−希釈したウィルス液各３７！と試料各３−を混合し、
１０分間室温（２２℃）で感作の後、各混合液を１０個
の１１日齢発育鶏卵に０．１　ｒｎｌずつ接種し、３４
±１℃で３日間培養した後・尿膜腔液の赤血球凝集（Ｈ
Ａ　）活性を調べた。

なお赤血球凝集（ＨＡ）試験は、発育鶏卵の尿膜腔１０
．４ｍｌに０．５チニワトリ赤血球浮遊液０．４ｍｌを
加えて振盪し、室温で４０分間感作した後凝集の有無を
判定することとした。

その結果は、表２に示したとおりで、１０２・０ＢＩＤ
５ｏ１０．１−のウィルスに対しては、０．０５チ溶液
で２２％のウィルス不活化効果が認められたが、１０５
°ＯＥＩＤ５ｏ１０．１−のウィルス量に対しては０．
８％溶液で２０優の不活化効果が認められたにすぎなか
った。

■ウィルス量不変／検体濃度・感作時開変動法による試
験 前の成績から、１０４・’ＥＩＤ、ｏ１０，１−のウィ
ルス液を選び、各濃度のウィルス不活化効果を経時的に
調べた。

その結果は、表３に示したとおりで％　１０”０ＢＩＤ
、ｏｌｏ、１−のウィルス量における０、２チ溶液の増
殖抑制効果は１０分間で２０チ、３０分間で３０チ、６
０分間で７０チであった。このような感作時間依存的不
活化効果は、他の濃度の検体でも認められた。

Ｃ１結　論 実施例１で得られた抽出成分についての発育鶏卵を用い
てのインフルエンザウィルスに対する以上の不活化試験
から次の結論を得た。

（１）検体は１１日齢発育鶏卵に対して毒性を示さなか
った。

（２）検体はインフルエンザウィルスに対してウィルス
濃度、感作時間依存的に不活化効果を示した。

検体濃度　毒　性２） １）ＩＩ日齢発育鶏卵に００１−ずつ接種後３４±１℃
で５日間培養後判定。

２）死亡発育鶏卵数／接種発育鶏卵数 −〇− １０− 参考例２ Ａ、材料と方法 （１）検体 実施例２で得られた抽出乾燥成分である検体を０．３０
　ｒ　（第１回試験）及び０．１０　ｆ（第２回試験）
秤量し、（１７１００モル＞／　１ＰＢＳ←３（ｐＨ７
，２）を加えて溶解し、所定濃度に希釈して調製した。

（２）発育鶏卵 白色レグホン系ＳＰＦ鶏群（Ｌｉｎｅ　Ｓ　）　の１１
日齢発育鶏卵を供試した。

（３）インフルエンザウィルス 国立予防衛生研究所から分与を受けたインフルエンザウ
ィルス　Ａ／熊本／３７／７９株を用いた。このウィル
ス原液の感染価は１０Ｂ・７ＥＩＤ５ｏ１０，１−であ
った。

（４）予備試験（鶏胎児毒性試験） ２進法で１．６％（１’５２．５倍）〜０．０５チ（２
，０００倍）まで希釈した検体を、各濃度あたり１０個
の卵を用い、尿膜腔内に０．１ｍｌずつ接種し、３４±
１℃で４日間培養した。

その間、接種卵を毎日検卵し、生死を記録した。

（５）検体のインフルエンザウィルスに対する不活化試
験 ２進法で０．４チ（２５０倍）〜０．００３１２５％（
３２，０００倍）まで希釈したそれぞれの検体１５−に
１０’−７Ｂ　Ｉ　Ｄ　ｓｏ　／　０．１−のウィルス
液を等量加え、室温（２８℃）で、５．１Ｏ１３０及び
６０分間感作した後、各混合液中のウィルス感染価を、
卵接種法により測定した。

Ｂ、成　績 （１）検体の卵に対する毒性 表４に示したとおり、１．６及び０．８　％の検体溶液
を接種した卵は、接種後２４時間以内に全例が死亡し、
０．４　％溶液を接種した卵は４８時間以内に７個（’
７０％）が死亡した。・さらに低濃度の検体を接種した
卵では、１例（０，１％溶液接種卵）を除き、全例が生
残した。これらの死亡卵について、細菌汚染によ１３− る死亡か否かを確認するために細菌培養を実施したが、
結果は表５に示したとおり、生菌はいずれの死亡卵から
も検出できなかった。

（２）検体のインフルエンザウィルス不活化効果試験は
、先ず、最終濃度０．４〜０．０２５％までのそれぞれ
の検体を用いて行われた。その結果、表６．８に示した
とおり、供試したいずれの濃度の検体存在下においても
、はぼ同様なウィルス不活化傾向が見られ、感作時間３
０分以降では、全例において感染性ウィルスの検出はで
きず、検体の最少有効量は測定できなかった。そこで、
第２回試験として、最終濃度０．０２５〜０．００３１
２５％　までのそれぞれの検体存在下で同様な試験を行
った。その結果、表７．８に示した如＜　、０．０２５
％の濃度の検体存在下では、第１回試験とほぼ同様な成
績が得られ、試験の再現性が確認された。検体のウィル
ス不活化効果は０．０１２５チの濃度まで、はぼそれ以
上の高濃度の検体存在下で見られたのと同様な程度で認
められ−１４＝ た。しかし、０．００６２５％より低濃度の検体存在下
では、各感作時間後におけるウィルス価は明らかに高く
なり、不活化効果の限界が認められた。

Ｃ０結　論 実施例２で得られた抽出成分は、実施例１で得られたも
のに比較して卵に対してかなり強い致死効果を示した。

これは、死亡部の細菌培養の結果が金側陰性であったこ
とから、検体の毒性によるものと思われた。プロビット
図解法により、検体の５０％卵致死量（ＥＬＤ５ｏ）を
めると、約ｏ、３３ｔｑ／卵で、本試験においてもこれ
とほぼ同様な濃度で致死効果が認められた。

一方、検体のインフルエンザ不活化効果は、毒性を示し
た濃度以上の高希釈において認められた。感作時間の長
短によって不活化効果は当然具なるが・３０分の感作時
間で見ると０．０１２５ｔｓ　（ｏ、ｏ１ｚ５ｑ／卵）
の検体存在下で大部分のインフルエンザウィルスが不活
化されたと考えられた。

１５− 表４　実施例２で得られた抽出成分の 発育鶏卵に対する毒性 り各濃度の検体を０．１＋＋＋／／卵接種した。したが
って実際に接種された検体の量は、１．６チについて言
えば１．６１１ＩＰ／卵になる。

２）各濃度について１０個の卵に接種、数字は死亡卵数
。

表５　毒性試験における死亡部についての細菌培養試験 ０．８　０／１０　０／１０　陰性 ０．４　０／７　０／７　陰性 −１６−’死亡卵数） 表６　各濃度の検体溶液中における インフルエンザウィルスの感染価（１）（次のページへ
つづく） １７− （前のページのつづき） １）検体濃度は、検体とウィルス液を等量に混合した後
の濃度で表現。

２）Ｃ□ｎｔｒｏｌはウィルス液とＰＢＳ（へ）を混合
したもの。

１８− 表７　各濃度の検体溶液中における インフルエンザウィルスの感染価（２）（次のページへ
つづく） （前のページのつづき） １）検体濃度は、検体とウィルス液を等量に混合した後
の濃度で表現。

２）　Ｃｏｎｔｒｏｌはウィルス液とＰＢＳ（−３を混
合したもの。

表８　各濃度の検体溶液中におけるインフルｌ）検体濃
度は、検体とウィルス液を等量に混合した後の濃度で表
現。

２）　ＮＤ　：Ｎｏｔ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ、感作後、試
料を無希釈で接種しても感染性ウィルスの検出できず。

５）Ｃｏｎｔｒｏ／はウィルス液とＰＢＳ（ハ）を混合
、感作した後のウィルス価を表わす。

２１− ２０−

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ヒメヒオオギズイセン（学名：　Ｃｒｏｃｏｓｍｉａ　
   Ｘｃｒｏｃｏｓｍａｅｆｌｏｒａ　Ｎ＋Ｅ、　Ｂｒ、ま
   たはＴｒｌｔｏｎｉａｃｒｏｃｏｓｍａｅｆｌｏｒａ　
   Ｌｅｍｏｌｎｅ　）から抽出して得られる成分を有効成
   分として含有する抗ウィルス剤。