JPS6069035A - 高力価緑膿菌免疫血清グロブリン - Google Patents

高力価緑膿菌免疫血清グロブリン

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JPS6069035A
JPS6069035A JP59118371A JP11837184A JPS6069035A JP S6069035 A JPS6069035 A JP S6069035A JP 59118371 A JP59118371 A JP 59118371A JP 11837184 A JP11837184 A JP 11837184A JP S6069035 A JPS6069035 A JP S6069035A
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serum globulin
globulin
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pseudomonas
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    • C07K16/12Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
    • C07K16/1203Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
    • C07K16/1214Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Pseudomonadaceae (F)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
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    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
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  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な免疫取消グロブリン及び新規なその製造
法に関し、これをその目的に含んでいる。
特に本発明は緑膿菌(Psendomonas aer
uginosa )のリポ多1jJIi類抗原に対する
天然産抗体の高力価を有する免疫血清グロブリンに関す
る。本発明の更なる目的は以下の記述から明らかになる
であろう。
ここに以下の記述において部及び・ぞ−セン) k:L
特に断らない限り重量によるものとする。
超免疫Lfn清グログロブリンち特別な抗体の高力価を
有する免疫血清グロブリンd:抗体免疫欠陥の患者を無
筋するのに治療学的に有用である。例えば破傷風の超免
疫グロ・プリンは破傷風の処置に、また狂犬病の超免疫
グロブリンは狂犬病の処1首に有用である。超免疫血清
グロブリンは、平均的分布で普通に見出されるよりも非
常に高い特別な抗体に対する力価を有する選別された供
力者がら待られる血漿又は血清を用いて調製することが
できる。これらの供乃者は、最近特別なワクチンで免疫
にさせられたものであり(米国特ilr第4.174゜
388号)、或いは最近感染又は病気から回復したもの
である( Stiehm、、 pediatrics、
63(11,301〜319 (1979)j。これら
の高力価の血清又は血漿を集め、次いで画分II?a−
分動1する点1で普通のコーン(Cohn )分別法に
供するfニーC0htIら、J、 Am、 Chem、
 Soc、 + 68 +459(1946)、及び0
ncleyら、同上、71.541 <+949)′X
1゜緑膿菌での感染は一般的な個体群の中で普通でない
けれども、ある感受性の患者群では非常にしばしば遭遇
する。火傷の儀牲者及び免疫の抑制されたガン患者は、
深刻な及び時には致命的な緑1儂菌の感染といし異常に
高い危険性にさらされているものと見なされてきた2、
緑膿菌の感染は普通家庭でなくて病院郡在中に起こる。
緑胎菌はペニシリンGK内j性である。緑膿菌に特異的
なペニシリン及びアミノグリコシドの組合せは、緑膿菌
種に対する普通の治療であり、患者の生き残りに対して
、特に白血病に対して非常に寄与してきた。火傷の患者
における緑膿菌の処置は局所的な抗微生物の治療にも依
存する。
Jamesら、Th、e Lancet、 1980年
12J]13日、1263〜1265は、敗血症の危険
のある火傷の患者の受動的免疫化VCついて記述してい
る。この免疫化は、多価のフ0ソイド七ナス属ワクチン
を接種した健康な人間の奉仕者の拙漿から得られる免疫
グロブリンを用いて達成される。勿論血漿中の力価を増
加させるプζめに健康な奉仕者にワクチンを接種するこ
とはいくらかの危険が必る。
Zaiaら、1°he Journal of Inj
’ectionaiノ1seases、 l 37 (
51、601〜604(197g)は、水痘−帝状症疹
(VZ)の免疫グロブリンの実際的な調製法を開示して
いる。
VZウィルスに対する補体を固定する抗体のために古い
ゴ11液′(il−選別する。血漿7.1位の約15%
は16よシ大きい又はそれに等しい力価を有し、約7.
5%は32よシ大きい又はそれに等しい力価を有する。
Fischerらは緑膿菌の7つの無交配保護(non
−cross−protective )の免疫型を同
定した( Fischer ら、Jownal of 
Bacteriolo−(7y、1969年5月、83
5〜836頁; これは本明細書に参考文献として引用
される)、、この著者は試験管内での崩清学的試験から
区別される如きマウスにおける攻撃保護(chαl l
 engeprotection )に基づく緑膿菌の
だめの抗原スキーム(scheme )を開発した。
今回、プソイドモナス属のワクチンを接種されてない或
いは最近プソイドモナス属の感染を受けていない供与者
からの正常の血漿は、緑膿菌の7つの免疫型(Fiac
herら)のうち4つに対する抗体の正常の力価よシも
高力価なものに対して選別できることが発見された。約
1:1600よシも大きい力価を有するこれらのmu漿
を集め、次いで分別して、すべての7つのフィッシャー
(Fis−cher)免稜型のリボ多糖類抗原に対する
抗体の高力価を有する緑膿菌の超免疫力゛ンマグロブリ
ンを得ることができ、甘だこの血漿はフィッシャー免疫
型のすべての7つに対してかなりの保護を提供すること
ができる。ワクチンを接種されてない或いは最近プソイ
ドモナス属の感染を受けてない正常の供与者からの血漿
が、これを集め且つ分別した時、緑膿菌の感染の処置に
かなシの効果を示すプソイドモナス属の超免疫グロブリ
ンを生成するのに十分高い緑膿菌に対する抗体の力価を
有するということは予期されないから、上述の結果は全
く驚くべきことである。更に7つのフィッシャー免疫型
のうち4つだけに対する選別及び7つのフィッシャー免
疫型のうち4つだけに対して正常の力価よシも高い力価
の癩漿の収集物がフィッシャー免疫型のすべて7つに対
して重大な保護を提供する超免疫W+清グロン゛リンを
与えることは驚くべきことである。
本発明の1つの明らかな利点は、正常な供与者にワクチ
ンを接種する必要のないことである。結果としてそのよ
うな実施に固有の危険が回避される。本発明の他の利点
は、得られる超免疫グロブリンが直接的な保岐を提供し
且つ静脈内注射できるようにするために処置でき、従っ
て筋肉的投与と関連した患者の不快さが回避できるとい
うことである。更に筋肉内に投与される生成物で得られ
るのと同一量の予防又は治癒を達成するためには、よシ
少い生成物を静脈内投与するたけでよい。
これらの及び他の本発明の利点は次の方法で得ることが
できる。
酵素結合の免疫吸着分析(、ELISA)又は他の同等
に敏感な選別法、例えば放射線免疫分析などを用いるこ
とによシ、供与者からの正常の血漿を、フィッシャー免
疫型1,2,4及び6の紅膿菌のリポ多糖類抗原に対す
る天然産の抗体に関して選別した。かなり効果的である
ためには、そのような供与者からの血漿は約1:160
0よりも大きい上述のフィッシャー免疫型に対する抗体
の力価を有すべきであることが発見された。血漿供与者
の約2〜5%はそのような力価を有する。この方法で得
られる超免疫血清グロブリンは、すべての7つのフィッ
シャ免疫型に対する抗体の正常の力価よシも高い力価を
有し、また緑膿菌に関してフィッシャー免疫型のすべて
7つに対して非常に有効であシ、従って緑膿菌の感染で
苦しむ患者の処置に有効である。
血漿の選別法、即ちE L I SA法は、本明細書に
参考文献として引用されるEngvall及び135 
(1972) 、 Engvall ら、Bioche
micaEt Biophysica Acta、25
1 (1971)427−434 、 Engvall
 ら、Immwn o c h emi −8try、
8,871−874 (1971)、VOtlerら、
Bull、ll’orld Health Organ
、、51 。
209−211 、(1974)、及びVollerら
、同上、上ユ、55−65(19763に本質的に記述
されているようなものである。この分析は抗体の定量分
析のだめの簡単な方法である。即ちポリスチレン製の抗
原で被覆された96の井戸のミクロ力価板を抗血清と、
続いて抗免疫グロブリンの酵素で標識した調製物と培養
する。洗浄後に管内に残る酵素は血清中の特異的な抗体
の量の尺度を与える。ELISA法を用いると、1〜1
00n Q / mlの抗体が測定できる。
緑膿菌のフィッシャー免疫型に対する抗体の十分高い力
価を有する血漿を集め、分別して免疫血清グロブリンを
得る。この目的のためには、集めた血漿から静脈内注射
しうる免疫“血清グロブリンを得るだめのいずれかの方
法を用いることができる。例えばコーン(Cohn )
分別法(前述の参考文献参照)を用いてコーン画分■を
得てもよく、また硫酸アンモニウム分別、ガスクロマト
グラフィー、半透過性膜での濾過法なども使用しうる。
本発明の免疫血清グロブリンは少くとも1:6400の
フィッシャー免疫型1,2.4及び6に対する、そして
少くとも1:1600のフィッシャー免疫型3.5及び
7に対する抗体の力価を有する。上述の免疫血清グロブ
リンはIQG、普。
通IQG単量体の少くとも90%を含んでなる。
本物質は一般に他のガンマグロブリン例えばIQA。
1gM力ども含有する。
上述のように、緑膿菌の超免疫グロブリンは筋肉内に又
は静脈内圧投与しうる。後者のための物質は好適であシ
、例えば米国特許第3,903,262号(これは本明
細書に参考文献として引用)の方法或いはこの米国特許
に引用されているいずれかの方法に従って調製できる。
米国特許第亀901262号の改変免疫血清グロブリン
は、静脈内投与に適当であシ、部分的に無傷の銀白ジス
ルフィド結合を有する無傷の免疫血清グロブリン鎖から
なる。各開裂したソスルフィド結合は一対のアルキル化
メルカプト基で置換され、この開裂した鎖は非共有的会
合によって合体したま\であシ、従って非解離溶媒中に
おける改変取消グロブリンの見かけの分子量は改変され
てない免疫血清グロブリンと実質的に同一である。上述
の物質は免疫血清グロブリンの穏やかにアルカリ性の水
溶液をソチオスレイトール又はジチオリスリトールで選
択的に還元し、このように還元した銀白ジスルフィド基
をアルキル化し、そしてこのように改変したグロブリン
を非蛋白質性の反応生成物から公比ILすることによっ
て製造される。
本発明の超免疫グロブリン調製物は、米国特許第4.1
86.192号の教示に従ってマルトースを安定剤とし
て含有することもできる。従って本調製物は重i/容量
基準で約1〜20%のマルトースを含有しうる。
本発明の超免疫生成物は、製薬学的調製物、普通治療の
目的に使用できる超免疫血清グロブリンの水溶液中に混
入してよい。しかしながら、「製薬学的調製物」とは、
広義において、治療の目的ばかりでなく試剤の目的、即
ちワクチンなどの調製に対して有機体例えばビールスを
血漿又は血漿画分、例えばコーン流出物11+ll[、
コー、ン画分■、コーン画分■、など上で生長させる組
織培養のために技術的に公知のように使用される本発明
の超免疫血清グロブリンを含有する調製物を包含するも
のとする。
治療用に意図された製薬学的調製物は、治療量の超免疫
血清グロブリン、即ち予防又は治癒の健康の尺度に対し
て必要な量のそれを含有すべきでおる。製薬学的組成物
を試剤として用いる場合には、それは試剤量の超免疫血
清グロブリンを含有すべきである。同様に、組織培養又
は培養媒体に用いる場合、調製物は所望の生長を得るの
に十分な量の超免疫血清グロブリンを含有すべきである
次の例示的実施例は本発明を更に例示する。
分析法 分析法はVoilerら、上述、に記述されているもの
と本質的に同一であった。炭酸塩緩衝剤p E 9.6
中抗原(5μf/1d)200μlを、ポリスチレン製
ミクロ力価板の各井戸(well)に添加し、37℃で
3時間培養した。この板を、0.05%Twean 2
0を含む燐酸塩緩衝の食塩水(PES)で1回洗浄し、
除水した。血清をPBS−Twain中で希釈した。各
井戸にP B S −Tween20の50μlを添加
した。血清の最初の希釈(1:50)をワツセルマン省
・中で行った。この希釈からミクロカ価板中においてミ
クロ力[liループC1oop)soμlを用いること
にょ9、連続して2重の希釈を行った。板中での最初の
希釈は1:100であった。連続しfC2回目の希釈の
完了後、井戸内の容量をpBs −Tween 20の
150μlで200μlにした。このようにして各井戸
における最終希釈を4倍に増加させた。各版を室温で夜
通し培養し、次いで3回洗浄した。
PBS −Tween 20中においてl:1000に
希釈されたアルカリホスファターゼに共役したヤギの抗
六間1ctG 2ooμノを井戸に添加し、室温で4時
間培養した。この板f P B S −1重wsen2
0で4回洗浄した後、酵素基質p−ニトロ7エ、、=/
lzホスフェート(Sigma Chetnical 
Co、 。
5aint Louis、 Missouri )のジ
ェタノールアミン緩衝剤1 ml!当り1 +ayの2
00μlを各井戸に添加し、室温で30分間培養させた
。発現する黄色を405 nmにおいて分光学的に定量
化した。
1:1,600における正常の血清の希釈は0.05以
下の吸光度(OD)の読みを与えた。それ故に、0、1
又′はそれ以上のODの読みを有する1: 1,600
に希釈された血清は正と考えられる。
上述の工程で用いた物質及び試剤は次の通シであった: pBs −Twain 20−0.05%のTween
20を含有。
炭酸塩緩衝剤−0,06Jf;pJ79.5−蒸留水l
l中NaC0,1,91f 、 NaBCO,3,52
2゜ ジェタノールアミン緩衝剤10%;pH9,8−1,M
 lIC1でpHを調節(注:上記試薬に0.02%N
aN、を添加してバクテリヤの生長を禁じた)。
アルカリホスホターゼで共役したヤギの抗人間1gG 
(Miles Laboratories。
Elkんart 、 Indiana )。
ポリスチレン製ミクロカ価板−DynatgchLab
oratoriesカタログ番号1−220−4X0 12−チャンネルピペット及びマルチチップ(mrbl
ti−tips ) 、 Flow Laboτato
riesカタログ番号77−889−0.0゜ 実施例1 上述のE L I SA法を用いることにより、供力者
から得た血漿を、緑膿菌のフィッシャー免疫型1.21
4及び6に対する抗体の力価に関して選別した。力価は
OD、。s nm > ” ’を与えるその希釈である
1:1600又はそれ以上の脈膿菌のフィッシャー免疫
型1,2.4及び6の力価を有する血漿を集めた。この
集めた血清(0,1me )を用いて縁線−の20倍L
D、。で攻撃する3時間前に受動的に免疫化した。(2
0倍LD、o−攻撃されたマウスの50%を死亡きせる
のに必要な投薬量×20)。
対照として、1 : 400以下、1:4QO及び1:
800の縁線閑に対する抗体の力価を有する血清を集め
た。これらの集めた血清の1つを、上述の如き緑膿菌の
20倍LD、。で攻撃する前にマウスに同様に注射した
結果を第1表に要約する。
実施例2 実施例1からの16人の供与者は実施例1の供与から1
〜3ケ月後に更なる血漿を供給した。8つの血清試料に
おいてELISAによる緑膿菌に対する抗体の力価が1
 : 1600又はそれ以上であり;他の8つの試料に
おいて力価は1:800又はそれ以上であった。
集めた血清を実施例1における如くマウスに注射し、こ
のマウスを上述の如く緑膿菌で攻撃した。
1 : 400よシ低い力価の血清及び食塩水を対照に
した。
結果を第2表に要約する。
実施例3 1:1600又はそれ以上の!+膿菌のフィッシャー免
疫型1.2.4及び6に対する抗体の力価を有する血清
の集めたものを分別して静脈の免疫血清グロブリン(I
GIV)を得た。1leide ら著、” 1iand
book of Experimental Imyn
rbno−lo a y II、第3版、1979年、
の硫酸アンモニウム分別法を用いた。対照として、正常
の血清を上述の方法で分別してIGIVを得た。
不発明及び対照の超免疫IGIVの抗体分布を第3表に
要約する。
実施例4 実施例30分別した超免疫プソイドモナス属IGIV並
びに実施例3からの血清を実施例1に記述したようにマ
ウスに投与し、このマウスを実施例1における如く攻撃
した。
結果を第4表に要約する。
第 4 表 I(7G(1:6400) 2/10 血清(1:1600) 4/10 レーテツド

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1、 少くとも約1 : 6400の、フィッシャー免
    疫型1,2.4及び6の緑膿菌の9−多糖類抗原に対す
    る抗体の力価を有する免疫血清グロブリン。 2 ・免疫血清グロブ+jンを緑膿菌の感染の処置に有
    効ならしめるのに十分であるフィッシャー免疫型1〜7
    の緑膿菌のリポ多糖類抗原に対する抗体の力価を有する
    特許請求の範囲第1項記載の免疫血清グロブリン。 & 特許請求の範囲第1項記載の免疫血清グロブリンを
    含んでなる製薬学的調製物。 4、 マルトースを更に含んでなる特許請求の範囲第3
    項記載の調製物。 5、静脈内注射しうる特許請求の範囲第1項記載の免疫
    血清グロブリン。 6、(α) 1:1600又はそれ以−ヒであるフィッ
    シャー免疫型1,2.4及び6の緑膿菌のリポ多糖類に
    対する滅相しtない抗体の力価のだめの供与者の血漿を
    スクリーニングし、 (b)該力価の抗体のMat漿を集め、そして(C) 
    該集めた血漿から免疫血清グロブリンを調製する、 ことを含んでなるフィッシャー免疫型l〜7の緑膿菌の
    リポ多糖勢抗原に対する抗体の高力価を有す夛免疫血清
    グロブリンの調製法、。 7、工程Cの免疫血清グロブリンを静脈内注射しうるよ
    うにする工程を更に含んでなる特許請求の範囲第6項記
    載の方法。 8、供与者の顛漿を、酵素結合の免疫吸着分析によって
    スクリーニングする特許請求の範囲第6項記載の方法。 9.免疫血清グロブリンをコーン分別法によって得る%
    許請求の範囲第6項記載の方法。 10、免疫薄情グロブリンを硫酸アンモニウム分別法に
    よって得る特許請求の範囲第6項記載の方法。 11、免疫血清グロブリンを還元し且つアルキル化して
    これを静脈内注射しうるようにする特許請求の範囲第6
    項記載の方法。 1z 免疫血7F?グロブリンがIgGを含んでfJ:
    る特許請求の範囲第6項記載の方法。
JP59118371A 1983-06-14 1984-06-11 高力価緑膿菌免疫血清グロブリン Expired - Lifetime JPH0639389B2 (ja)

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US06/504,106 US4587121A (en) 1983-06-14 1983-06-14 High titer Pseudomonas immune serum globulin
US504106 2000-02-14

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Publication Number Publication Date
JPS6069035A true JPS6069035A (ja) 1985-04-19
JPH0639389B2 JPH0639389B2 (ja) 1994-05-25

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JP59118371A Expired - Lifetime JPH0639389B2 (ja) 1983-06-14 1984-06-11 高力価緑膿菌免疫血清グロブリン

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US (1) US4587121A (ja)
EP (1) EP0129147B1 (ja)
JP (1) JPH0639389B2 (ja)
AT (1) ATE49219T1 (ja)
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