JPS604197A

JPS604197A - ヌクレオシドとヌクレオチドの分離方法

Info

Publication number: JPS604197A
Application number: JP11095283A
Authority: JP
Inventors: Toru Kiyota; 徹清田
Original assignee: Toyo Soda Manufacturing Co Ltd
Current assignee: Tosoh Corp
Priority date: 1983-06-22
Filing date: 1983-06-22
Publication date: 1985-01-10

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】法に関するものである。

更に詳しくは、エポキシ基を含む多孔性ゲルに核酸塩基
を結合した多孔性ゲルを用い、ｋンモニア水で処理する
ことから成るヌクレオシドとヌクレオチドの分離方法を
提供するものである。

ヌクレオチドは合成りＮＡ，ＲＮＡの原料となるばかり
でなく、医薬品の中間体としても極めて重要な化合物で
あシ、最近ではその需要は特に多くなっている。

しかし、一方ではヌクレオチドを使用する条件が高度化
すればするほど純度も高品質のものが要求されてくる。

従って、ヌクレオチドを効率よく、しかも高品質でその
前駆体であるヌクレオシドから分離できるならばその工
業的意義は大きい。

一般に、核酸関連化合物の分離はイオン交換クロマトグ
ラフィーによって行われてきた。

しかし、イオン交換クロマトグラフィーの方法には次の
ような大きな問題がある。

１）　溶出ｐＨ，塩濃度等によシ溶出挙動が非常に影響
を受けること。

２）イオン交換クロマトグラフィーの方法では、分離物
中に塩を含有するため、さらに透析等で塩を除去する必
要がある。この工程は分離を複雑にするのみならず、完
全に塩を除去する事は困難であること。

等である。

そこで、本発明者は、これら種々の欠点を解決するため
、鋭意検討を続けてきた結果、エポキシ基を含む多孔性
ゲルに核酸塩基を結合せしめた多孔性ゲルを用いて、ア
ンモニア水で処理すれば、極めて高品質でしかも効率よ
くヌクレオシドからヌクレオチドを分離することができ
ることを見出し、本発明を達成するに至った。

本発明の方法に従えば、アンモニア水のみで処理が可能
であるため、分離物中に塩等の不純物を含有しない。従
って、透析等の複雑な工程が不要になり、従来使用され
てきたイオン交換クロマトグラフィーと比較し、極めて
優れた分離方法と言える。

さらに、分離する系中にヌクレオシドの前駆体である核
酸塩基が存在していても効率よく分離することもできる
。

本発明の方法は、ヌクレオシドからヌクレオチドへの転
換工程での分離プロセスへの応用などその利用範囲は広
い。さらに、本発明の方法はイオン交換クロマトグラフ
ィーで行われているような系のｐＨの調整等が不要であ
ると同時に塩効果を受けないために正確力Ｎつ迅速な定
量も可能にしだものである。

本発明の中で使用できる核酸塩基含有の多孔性ゲルとし
ては、エポキシ基を含む有機系、無機系ゲル担体に核酸
塩基を含有したものであればよい９多孔性ゲルとしては
、有機Ｆゲルとして、樹脂族又は芳香族ゲルで、グリシ
ジルメタクリレート。

グリシジルアクリレート、グリシジルアリルエーテル、
１，２−エポキシスチレン等のエポキシ基含有モノマー
の単独重合体または共重合体、更にこれらとスチレン、
α−メチルスチレン等の置換スチレン；アクリル酸ある
いはメタアクリル酸およびそれらのエステル類；アクリ
ロニトリルあるいはメタアクリロニトリル等の置換アク
リロニトリル等の単量体との共重合体、またはこれらと
架橋剤として通常知られているもの、たとえば、ジビ二
ノハンゼイ、エチレングリコ〜ルジメタまたはアクリレ
ートのように不飽和基を２個以上含む単量体を少なくと
も一種以上含む共重合体からなる多孔性のゲルをあげる
ことができる。またデキストランの如き天然物にエポキ
シ基を含有させたものでもよい。

捷だ、態様系ゲルとしては上記のようなエポキシ基を含
むモノマーをシリカゲル、アルミナ等にグラフトさせた
重合体も使用できる。

使用されるゲルの孔の大きさは１μｍ以下、好ましくは
１０〜２０００Ｘ、更に好ましくは５０〜５００スのも
ので、架橋密度は５〜３０モルチ、ゲルの太きさは２〜
２００μｍ１好ましくは５〜５０μｍである。

一方、反応に使用される核酸塩基およびその関連化合物
としては、アデニン、グアニン、チミン。

ウラシル、シトシン、テオフィリン、゛ヒポキサンチン
、６−メルカプトプリン、５−ハロピリミジン等をあげ
ることができる。

本発明の方法にしたがって得られるゲルの製造はきわめ
て簡単であって、種々の溶媒中で多孔性ゲルと核酸塩基
および／またはその関連化合物を加熱反応すればよい。

この場合、使用できうる溶媒としては、Ｎ、Ｎ−ジメチ
ルホルムアミド、Ｎ。

Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルスルホキ
シドなどの極性溶媒の単独および二種以上の混合溶媒が
ある。

このゲルの製法の好ましい例として、特公昭５３−１３
９９７号の記載の方法で製造すればよい。

即ち、架橋化した多孔性ポリグリシジルメタクリレート
（ポアー丈イズ、１ｏａｊ、）ゲルに溶媒、たとえばＮ
、Ｎ−ジメチルホルムアミド中で核酸塩基を反応させた
核酸塩基含有の多孔性ゲルである。

アンモニア水としては１ＯＮ〜ｏ、ｏｏｌＮの範囲の濃
度を使用すればよい。

以下に実施例により本発明を具体的に説明するが、本発
明はこれら実施例のみに限定されるものではない。

実施例１アデニル酸、アデノシンおよびアデニンの混合水溶液を
ｒＨＬｏ−８０２ＵＪ　（商品名、東洋曹達工業株式会
社製、液体クロマトグラフィ）により下記の条件で分離
した。結果は図−１に示した。

１）使用ゲル：特公昭５３−１３９９７号に従い製造し
た。即ち架橋した多孔性ポリグリシジルメタクリレート
（ポアーサイズ、１ｏｏｋ）にチミンを結合させたゲル
（チミン含有量２０モルチ）２）分離条件；検出器：紫外線吸収検出器（２５４ｎｍ）溶　媒：［Ｌ
ＯＩＮアンモニア水圧損：２ｏ１ｃ９／ｃ＋＋！温　度：２５℃、　流速：３ｍｌ／ｍｉｎカラムサイズ
＝２フィート（長さ）。

α３１インチ（内径）実施例２実施例１の試料中にＱｌｙ、の食１塩水を添加して実施
例１と同様の条件で分離したところ、図−２に示す結果
を得た。図−１と全く同一であり、塩効果を受けていな
いことがわかる。

実施例３グアノシン酸、グアニジンおよびグアニンの混合水溶液
を用いて、実施例１と同様の条件下で分離したところ、
図−３の結果を得た。

実施例４シチジル酸とシチジンの混合水溶液を用いて、実施例１
と同様の条件下で分離したところ、図＝４の結果を得た
。

実施例５実施例１で用いたゲルを下記のゲルに変えてチミジル酸
、チミジンおよびチミンの混合水溶液を実施例１と同様
の条件下で分離したところ、図−５の結果を得た。

使用ゲル：架橋した多孔性ポリグリシジルメククリレー
ト（ポアーサイズ、＊ｏｏＡ）にアデニンを結合させた
ゲル（アデニン含有量１８モル９ｇ）実施例６ウリジル酸、ウリジンおよびウラシルの混合水溶液を用
いて、実施例５と同様の条件下で分離したところ、図−
６の結果を得たつ

【図面の簡単な説明】

図−１はアデニン誘導体の分離のクロマトグラム。図−２は塩存在下でＤアデニ１専本υ燐のクロマトグラ
ム。図−３はグアニン誘導体の分離のクロマト・ダラム。図−４はシチジンとシチジル酸の分離のクロマ・トゲラ
ム。図−５はチミン誘導体の分離のクロマトグラム、。図−６はウラシル誘導体の分離のクロマトグラムを示す
。１、　アデニル酸、２．　アデニン、５．　アデノシン
。４、り７＝ル酸、ｓ、クアノシン、＆クアニン。ｌ　シチジル酸、ａ　シチジン、９．　チミジル酸。１ａチミジン、１１．チミン、１２．ウリジル酸。１３Ｌ　ウリジン、１４．ウラシル特許出願人　東洋曹達工業株式会社３２．１図１溶出時間（分）図２５４１２　８　４　０溶出時間（分）図３７１６　１２　８　４　０溶出時間（分）図４

Claims

【特許請求の範囲】

（１）　エポキシ基を含む多孔性ゲルに核酸塩基を結合
させた多孔性ゲルを用いて、アンモニア水で処理するこ
とを特徴とするヌクレオシドとヌクレオチドの分離方法
っ
（２）　アンモニア水として１ＯＮないし０．００１Ｎ
の範囲の濃度を使用する特許請求の範囲第１項に記載の
方法。