JPS6029667A - 尿素の測定法 - Google Patents
尿素の測定法Info
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- JPS6029667A JPS6029667A JP13712183A JP13712183A JPS6029667A JP S6029667 A JPS6029667 A JP S6029667A JP 13712183 A JP13712183 A JP 13712183A JP 13712183 A JP13712183 A JP 13712183A JP S6029667 A JPS6029667 A JP S6029667A
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- Japan
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- urea
- reaction
- deriv
- phthalaldehyde
- reducing agent
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- Pending
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/58—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving urea or urease
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、尿素特に尿中の尿素を効果的に測定すること
のできる尿素の測定法に関する。
のできる尿素の測定法に関する。
現在、尿素の測定には尿素にウレアーゼを作用させて生
成するアレモニアにグルタミン酸脱水素酵素（ＧＬＤＨ
）を共役させ、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの変化で測定する方法、
或いはアンモニアをインドフェノール反応により測定す
る方法、更に尿素を強酸酸性条件で酸化剤の存在下に直
接ジアセチルモノオキシムと縮合させて測定する方法な
どが知られている。
成するアレモニアにグルタミン酸脱水素酵素（ＧＬＤＨ
）を共役させ、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの変化で測定する方法、
或いはアンモニアをインドフェノール反応により測定す
る方法、更に尿素を強酸酸性条件で酸化剤の存在下に直
接ジアセチルモノオキシムと縮合させて測定する方法な
どが知られている。
これらの方法は、いずれも感度がよく、血清中の尿素の
測定を意図したものであって、尿中の尿素は極めて高濃
度のため、希釈せずに測定することは困難であった。ま
た、尿中に多量に存在するアンモニアのため、上述した
従来の方法ではブランク値が高くなり、測定範囲が限ら
れてしまうという不都合があった。また、ジアセチルモ
ノオキシム法は、加熱を必要とするため、最近のディス
クリートタイプの自動分析装置には応用出来ないもので
あった。
測定を意図したものであって、尿中の尿素は極めて高濃
度のため、希釈せずに測定することは困難であった。ま
た、尿中に多量に存在するアンモニアのため、上述した
従来の方法ではブランク値が高くなり、測定範囲が限ら
れてしまうという不都合があった。また、ジアセチルモ
ノオキシム法は、加熱を必要とするため、最近のディス
クリートタイプの自動分析装置には応用出来ないもので
あった。
本発明者は、上述したごとき従来法の欠点を解消すべく
研究を重ねた結果、本発明を完成したものである。
研究を重ねた結果、本発明を完成したものである。
本発明は、常温で短時間に尿中の尿素の測定ができ且つ
自動化が可能なうえ、血液中の尿素は勿論特に尿中の尿
素をも測定することができるようにした尿素の測定法を
提供することを目的とするものである。
自動化が可能なうえ、血液中の尿素は勿論特に尿中の尿
素をも測定することができるようにした尿素の測定法を
提供することを目的とするものである。
本発明の要旨は、尿素を酵素的又は非酵素的に反応させ
てアンモニア又は反応中間体を生成せしめ、アルカリ性
で且つ還元剤の存在のもとにフタルアルデヒド及び／又
はその誘導体を作用させ比色定置することによって尿素
を測定するようにしたことを特徴とする尿素の測定法に
存する。
てアンモニア又は反応中間体を生成せしめ、アルカリ性
で且つ還元剤の存在のもとにフタルアルデヒド及び／又
はその誘導体を作用させ比色定置することによって尿素
を測定するようにしたことを特徴とする尿素の測定法に
存する。
尿素を酵素的に反応させるとは、例えば尿素にウレアー
ゼを作用させてアンモニアを生成させることをいい、こ
の生成したアンモニアをアルカリ性条件下、還元剤の存
在のもとにフタルアルデヒド及び／又はその誘導体と反
応させ、このとき生ずる赤〜緑色の色素を比色定量する
ことによって尿素の測定を行う。
ゼを作用させてアンモニアを生成させることをいい、こ
の生成したアンモニアをアルカリ性条件下、還元剤の存
在のもとにフタルアルデヒド及び／又はその誘導体と反
応させ、このとき生ずる赤〜緑色の色素を比色定量する
ことによって尿素の測定を行う。
尿素を非酵素的に反応させるとは、例えば尿素と亜硝酸
ナトリウム（Ｎ ａ Ｎ ０２）とを反応させて反応中
間体を生成させることをいい、この生成した反応中間体
をアルカリ性条件下、還元剤の存在のもとにフタルアル
デヒ１−”及び／又はその誘導体と反応させ、このとき
生ずる赤〜緑色の色素を比色定量することによって、尿
素の測定を行う。
ナトリウム（Ｎ ａ Ｎ ０２）とを反応させて反応中
間体を生成させることをいい、この生成した反応中間体
をアルカリ性条件下、還元剤の存在のもとにフタルアル
デヒ１−”及び／又はその誘導体と反応させ、このとき
生ずる赤〜緑色の色素を比色定量することによって、尿
素の測定を行う。
フタルアルデヒド及び／又はその誘導体とはオルト、メ
タ及び／又はバラの各フタルアルデヒド及び／又はその
誘導体を指称する。
タ及び／又はバラの各フタルアルデヒド及び／又はその
誘導体を指称する。
本発明の上記反応を一般式で示已ば下記のごとくとなる
。
。
フタルアルデヒド
ＮＨ， □赤〜緑色の色素
本発明で用いる還元剤としては、特に限定はないが、例
えば、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜硫酸及びその塩
、亜硫酸水素すｌ・リウム、亜硫酸水素カリウムなどの
無機還元剤、システィン、シスチン、グルタチオン、メ
ルカプトエタノール、チオグリコールなどのＳＨ剤、ア
スコルビン酸などが挙げられる。
えば、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜硫酸及びその塩
、亜硫酸水素すｌ・リウム、亜硫酸水素カリウムなどの
無機還元剤、システィン、シスチン、グルタチオン、メ
ルカプトエタノール、チオグリコールなどのＳＨ剤、ア
スコルビン酸などが挙げられる。
以下に実施例をあげて本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１
本実施例では酵素的方法について実験した。
試液
Ｒ・１液
ウレアーゼ−一ーーーーー−−−−−−−−−・−−−
−−一ーーーーーーーーーーーーーー−−−＝−−一〜
１２０Ｕ５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐｉ（７．０）−−−
一−−−−−−−−−−−−−−−１ ２ ｍ ｌ！Ｒ
・２液 Ｎ ａ２Ｓ ０．３−−−一− −−−−−−−−−−
−−一ーーーーーーーーーー−−− − − −−−−
−−２０ ０ ０ ｒｎ ｇオルトフタルアルデヒドー
−−−−−−−− ２ ０ ０ ｍ ｇＮａＯＨ−ＫＣ
＃緩ｉＩｉ液（ｐＨ１３．５）−〜ーーーー・−＝−・
− １００ｍｊ２Ｒ・１液Ｑ．１ｍｊ２に尿２０μρを
加え、３７℃、１５分間加熱後Ｒ・２液を４ ｍ ｌｌ
加え、更に３７℃、１０分間加温した。室温に放置後５
５０ｎｍで比色定量した。
−−一ーーーーーーーーーーーーーー−−−＝−−一〜
１２０Ｕ５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐｉ（７．０）−−−
一−−−−−−−−−−−−−−−１ ２ ｍ ｌ！Ｒ
・２液 Ｎ ａ２Ｓ ０．３−−−一− −−−−−−−−−−
−−一ーーーーーーーーーー−−− − − −−−−
−−２０ ０ ０ ｒｎ ｇオルトフタルアルデヒドー
−−−−−−−− ２ ０ ０ ｍ ｇＮａＯＨ−ＫＣ
＃緩ｉＩｉ液（ｐＨ１３．５）−〜ーーーー・−＝−・
− １００ｍｊ２Ｒ・１液Ｑ．１ｍｊ２に尿２０μρを
加え、３７℃、１５分間加熱後Ｒ・２液を４ ｍ ｌｌ
加え、更に３７℃、１０分間加温した。室温に放置後５
５０ｎｍで比色定量した。
尿検体２例について同時再現性を検討し、その結果を第
１表に示した，また、アンモニア及び尿素標準液、試液
ブランク及び検体について吸収スペクトルを調べその結
果を第１図に示した。更に本発明方法と公知のジアセチ
ルモノオキシム法との相関についても検討し、その結果
を第２図に示した。これらの実験結果はいずれも良好で
、本発明方法が尿中の尿素を測定するのに適した方法で
あることがわかった。
１表に示した，また、アンモニア及び尿素標準液、試液
ブランク及び検体について吸収スペクトルを調べその結
果を第１図に示した。更に本発明方法と公知のジアセチ
ルモノオキシム法との相関についても検討し、その結果
を第２図に示した。これらの実験結果はいずれも良好で
、本発明方法が尿中の尿素を測定するのに適した方法で
あることがわかった。
以下余白
第１表
１ Ｎｏ ｉ 検体１ １ 検体２ ）Ｈ
ｌ １ ｌ ２２３ｎｖ／ｄ１１ ８１４ｍｇ／ｄｆ１
１ ２１２３０ １８２４ １ ＋ ３１２ｔｓ １８２０ １ １ ４１２２１ １８１８ １ １ ５１２２８ １８１１ １ １ ６１２２６ １８２５ １ １ ７１２３０ １８３５ １ １ ８１２２０ １８４０ １ １ ９１２２３ １８３７ １ １ １０ １ ２３２ １ ８２９ １Ｈ−一←□Ｉ ＩＮＩＩＯＩＩＯｌ １ 平均 １ ２２５．１ １ ８２５．３ １１標準
偏差１ ４．８１ ９．９１ １変動係数１ ２．１３１ １．２０１実施例２ 本実施例では非酵素的方法について実験した。
１ ２１２３０ １８２４ １ ＋ ３１２ｔｓ １８２０ １ １ ４１２２１ １８１８ １ １ ５１２２８ １８１１ １ １ ６１２２６ １８２５ １ １ ７１２３０ １８３５ １ １ ８１２２０ １８４０ １ １ ９１２２３ １８３７ １ １ １０ １ ２３２ １ ８２９ １Ｈ−一←□Ｉ ＩＮＩＩＯＩＩＯｌ １ 平均 １ ２２５．１ １ ８２５．３ １１標準
偏差１ ４．８１ ９．９１ １変動係数１ ２．１３１ １．２０１実施例２ 本実施例では非酵素的方法について実験した。
Ｒ・１液
Ｎ ａ Ｎ Ｏｌ−・−−−−−−−−−−−−−−−
−−−−−−−−−−−−５００ｍ ｇｏ 、５ Ｎ
ＨＣ１−−−−−−−−−−−−−−−−−１００ｍ
（ＩＲ・２液 実施例１と同じ組成 測定手順はＲ・１液をｌ ｍρとする以外は実施例１と
同様に行った。
−−−−−−−−−−−−５００ｍ ｇｏ 、５ Ｎ
ＨＣ１−−−−−−−−−−−−−−−−−１００ｍ
（ＩＲ・２液 実施例１と同じ組成 測定手順はＲ・１液をｌ ｍρとする以外は実施例１と
同様に行った。
実施例１の場合と同様に良好な結果が得られ、尿中の尿
素の測定に通することがわかった。
素の測定に通することがわかった。
図面は本発明方法の実施例１の実験結果を示し第１図は
再現性を示すグラフ及び第２図は吸収スペクトルを示す
グラフである。 特許出願人 三光純薬株式会社 第１図 浪ル（気り 第２図 りア記ケル毛フキしム琢
再現性を示すグラフ及び第２図は吸収スペクトルを示す
グラフである。 特許出願人 三光純薬株式会社 第１図 浪ル（気り 第２図 りア記ケル毛フキしム琢
Claims (1)
- （１）尿素を酵素的又は非酵素的に反応させてアンモニ
ア又は反応中間体を生成せしめ、アルカリ性で且つ還元
剤の存在のもとにフタルアルデヒド及び／又はその誘導
体を作用させ比色定量することによって尿素を測定する
ようにしたことを特徴とする尿素の測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13712183A JPS6029667A (ja) | 1983-07-27 | 1983-07-27 | 尿素の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13712183A JPS6029667A (ja) | 1983-07-27 | 1983-07-27 | 尿素の測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6029667A true JPS6029667A (ja) | 1985-02-15 |
Family
ID=15191306
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13712183A Pending JPS6029667A (ja) | 1983-07-27 | 1983-07-27 | 尿素の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6029667A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2333782A (en) * | 1997-08-26 | 1999-08-04 | Nsk Ltd | Method of production of rolling bearing |
-
1983
- 1983-07-27 JP JP13712183A patent/JPS6029667A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2333782A (en) * | 1997-08-26 | 1999-08-04 | Nsk Ltd | Method of production of rolling bearing |
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