JPS6029068B2 - 蛋白質検出感度の改善法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、試験用スライドの表面上に予め吸着させられ
た蛋白質およびそれと特異的に反応する蛋白質の間の免
疫学的複合を検出することによる免疫学的な蛋白質検出
に関するものである。

更に詳しく言えば本発明は、追加の蛋白質層を免疫学的
かつ選択的に結合させることにより、上言己のごとき免
疫学的診断用スライド上で観察されるコントラストを改
善することに関する。本願発明は、発明者ギアェヴア（
Ｇｉａｅｖｅｒ）名義の特開昭４９−４８８２ぴ号、袴
関昭５０−７６２２６号及び米国特許第３８５３４６７
号の特許明細書（以後、それぞれギアェヴアの特許明細
書Ａ，Ｂ及びＣとして参照する）に記載の発明に関連し
ている。

上記に引用されたギアェヴアの特許明細書Ａ及びＢ中に
明記されている通り、任意の蛋白質はもっぱら一分子層
を成して基体に付着するが、かかる蛋白質層にその他任
意の蛋白質が付着することはない。

しかるに、基体上に吸着された第１の蛋白質と特異的に
反応する蛋白質だけは免疫学的に結合するのである。こ
れらの特許明細書の教示に従えば、かかる発明の利用に
よって医学診断用の装置が提供される。かかる装置はあ
る蛋白質の一分子層を吸着させた基体から成るもので、
それを用いれば、その蛋白質と特異的に反応する蛋白質
の存在が疑われる溶液を試験することができる。

その際、特異的に反応する蛋白質が問題の溶液中に存在
すれば、浸債後のスライドは蛋白質の二分子層を有する
ことになる。他方、特異的に反応する蛋白質が問題の溶
液中に存在しなければ、浸債後のスライドは元来の蛋白
質の一分子層だけしか有しない。なお、上記のギアェヴ
アの特許明細書中には、蛋白質の二分子層と一分子層と
を識別するための光学的、電気的および化学的手段が記
載されている。上言己のギァェヴァの特許明細書中に記
載のごとき診断装置に関する２つの実施例に従えば、蛋
白質の二分子層と一分子層との光学的識別がスライドの
肉眼観察によって行なわれる。また、その際の検出感度
はスライドの構造および蛋白質の絶対膜厚に依存するこ
とも示されている。更に詳しく言えば、金属球体が多数
付着した基体およびその上に設置された蛋白質の一分子
層から成る診断用スライドは２００△以下の膜厚に対し
て最大感度を有する一方、金製表面を持った基体から成
る実施例は３０Ａを越える膜厚に対して最大感度を有す
る。また、上記のギアェヴアの特許明細書中に記載のご
とき化学的検出の実施例は、水銀と可視的なアマルガム
を生成する物質から成る表面を持った基体を使用するも
のである。その動作原理は、蛋白質の二分子層の上に設
置された水銀満がそれを通って拡散するのに要する時間
が蛋白質の一分子層の上に設置された水銀満の場合の約
１の苦であるという発見に基づいている。更にまた、上
記のギアェヴアの特許明細書中に記載のごとき電気的検
出の実施例は、導電性基体材料を使用し、蛋白質層の上
に電極を設置し、次いでこれらの導電性部材間の電気容
量を測定するというものである。その値は、導電性部材
同士を隔離している絶縁性蛋白質層の膜厚、従ってかか
る蛋白質層が二分子層および一分子層のいずれであるか
を表示する。このように、これらの電気的および化学的
検出の実施例においては、検出すべき蛋白質が問題の溶
液中に存在する場合、それが診断用スライド上に第２の
一分子層を完全に生成する必要のあることが理解されよ
う。上記のギアェヴアの特許明細書中に記載のごとき技
術および装置は、免疫学的に活性な粒子の迅速、信頼可
能かつ安価な検出を可能にする。

とは言え、金製表面を持ったスライドの場合、免疫学的
に活性な粒子は約２０△を越える直径を有していなけれ
ばならない。更に重要な／ことには、検出すべき粒子が
極めて低い濃度でしか生理学的検体中に存在しないこと
もある。このような場合には、少数の粒子した診断用ス
ライドに結合しないため、それらの検出可能性は限られ
てしまう。たとえばウイルスのごとき大きな粒子が低い
濃度で存在するような特殊な場合には、上記のギアェヴ
アの特許明細書Ｃが信頼可能な粒子検出手段を提供して
いる。かかる特殊な場合の試験用スライドでは、たとえ
ば検出すべきウイルスに対する抗体の層の下方に腐食可
能な金属の層が設置されている。ウイルスを結合させた
後、スライドおよびウイルスの上に腐食不可能な金属の
薄層が沈着させられる。次いで腐食を行なえば、ウイル
スの結合していた部位はスライド中に空孔となって現わ
れるわけで、その大きさはたとえば光学顕微鏡によって
検出可能な程度である。ところで、抗体分子が脊椎動物
の生体系内に導入された場合、その脊椎動物にとつつて
異種蛋白質であれば抗体分子も抗原として作用すること
は免疫技術界において公知である。

従って、所定の抗体と特異的に反応する抗体は容易に入
手することができる。このような可能性は、免疫学的に
複合した蛋白質に蛍光性分子を付着させ、それによって
特定の種類の微生物を検出するために従来利用されてき
た。たとえば、ヒト免疫グロブリンに対する抗体を調製
し、次いでそれをィソチオシアン酸フルオレセィンのご
とき蛍光性有機分子と化学的に結合させることができる
。このようないわゆる標識抗体を使用すれば、免疫反応
が紫外線顕微鏡によって可視的に観察される。かかる抗
体に対する抗体の最も重要な用途の１つは、従来公知の
通り、クーンズ（Ｃｏｏｎｓ）の方法に基づく梅毒血清
試験すなわち現在ＦＴＡ−ＳＴＳ法として知られている
試験である。ＦＴＡ−ＳＴＳ法に従えば、一定量のトレ
ポネマ・パリドウム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｐａｉｍｕｍ
）がスライド上において乾燥される。かかるスライドが
血液検耐中に浸潰され、次いでヒト免疫グロブリンに対
する標識抗体の溶液中に浸潰される。ところで、かかる
標識抗体はトレポネマ・パリドゥムには結合しない。従
って、血液検体がトレポネマ・パリドウムに対する抗体
を含有する場合に限り、紫外線顕微鏡によって観察され
たスラィドーま蛍光を示すことになる。このように、従
来技術は単一の免疫反応を実用化したことがわかる。

しかしながら、連続的な複数の免疫反応の有用性は従来
知られていなかった。さて、本発明の主たる目的は免疫
学的診断用スライドの検出感度を改善することにある。

また、特異的に反応する蛋白質の多分子層を形成させる
ことによってかかるスライドの検出感度を改善すること
も本発明の目的の１つである。

更にまた、かかる基体の表面上に蛋白質の完全な一分子
層を少なくとも２枚追加は存在させるに足るだけの追加
の蛋白質層を結合させることによって免疫学的診断用ス
ライドの検出感度を改善することも本発明の目的の１つ
である。本発明の一実施例に従って簡潔に言えば、検出
すべき蛋白質と特異的に反応する蛋白質の一分子層をそ
の一表面に有する免疫学的試験用スライドが用意され、
次いで検出すべき蛋白質を含有するかどうか疑われる溶
液中にそれが浸潰される。

その結果、問題の溶液中に検出すべき蛋白質が存在すれ
ば、浸債後のスライドは元来の蛋白質の一分子層および
その上に付着した検出すでき蛋白質の一分子層から成る
蛋白質の二分子層を有することになる。しかるに、問題
の溶液中に検出すべき蛋白質が存在しなければ、浸債後
のスライドは元来の蛋白質の一分子層のみを有するに過
ぎない。次いで、第２の一分子層を成す蛋白質と免疫学
的に反応する蛋白質の溶液中に上記のスライドが浸積さ
れる。その結果、問題の溶液が検出すべき蛋白質を含有
する場合のスライドは蛋白質の三分子層を有し、また問
題の溶液が検出すべき蛋白質を含有しない場合のスライ
ドは蛋白質の一分子層のみを有することになる。従って
、蛋白質の三分子層および一分子層の間のコントラスト
は蛋白質の二分子層および一分子層の間のコントラスト
に比べて増大しているから、スライドの検出感度は改善
されるわけである。特許の対象とすべき本発明の新規な
特徴は前記特許請求の範囲に明確に示されている。

なお本発明は、その目的および利点を含め、添付の図面
に関連してなされる以下の記載を読めば良く理解される
はずである。先ず第１図には、基体１０が示されている
。

かかる基体１０の上には、前述のギアェヴアの特許明細
書中の記載に従い、任意の蛋白質分子またはその他の粒
子１１たとえばウイルスや肝炎関連抗原の粒子が多数吸
着されている。かかる多数の蛋白質分子またはその他の
粒子１１は、２１および２２として示された特異的に反
応する抗体分子と免疫学的に複合している。なお、それ
らの構造の説明を容易にするため、抗体分子２１および
２２は漠式的に図示されている。便宜上、特に記載のな
い限り、最初の層を構成する粒子は以後「蛋白質分子」
と呼ばれるが、本発明の範囲内にはその他の粒子も包含
されることが了解されるべきである。抗体を大きく分類
すれば、１ｇＧ，１ｇＭ，１ｇＡ，１ｇＤおよび１ｇＥ
と命名された５種類の免疫グロフリンからなる。

中でも、最も量が多いのは１ｇＧであって、これは正常
なヒト血清中の免疫グロブリンの約８５％を占める一方
、その他の脊椎動物の正常な血清中でもほぼ同様な割合
で見出される。１ｇＧ抗体分子はジスルフィド結合によ
って結合した２本の重べプチド鎖および２本の軽べプチ
ド鎖から成るため、概してＹ字形の形状を呈する。

１ｇＧ抗体分子は免疫学的に２価である。

換言すれば、各分子は２つの抗体活性部位を有している
。分子２１の抗体活性部位２１ａｌ，２１ａ２および分
子２２の抗体活性部位２２ａｌ，２２ａ２はＹ字形分子
の腕部の末端に位置している。かかる抗体活性部位は、
抗体がそれに関連する抗原の分子と免疫学的に結合する
ことを可能にする。たとえば第１図の場合、抗体活性部
位２１ａｌ，２２ａｌ，２２ａ２は複数の蛋白質分子１
１と結合している。ところで前記に指摘された通り、抗
体分子が脊椎動物の生体系内に導入された場合、その脊
椎動物にとって異種蛋白質であれば抗体分子も抗原とし
て作用する。それ故、抗原としての抗体に対して特異的
な抗体の産生が励起されることになる。１ｇＧ抗体に対
する抗体は別種の１や抗体であり、従ってやはり２つの
抗体活性部位を有する、これらの抗体活性部位は第１の
抗体上の個々の抗原活性部位と結合する。

かかる抗原活性部位はまた、抗原デテルミナントあるい
はェピトープとしても知られている。前述の通り、１ｇ
Ｇ分子の抗体活性部位の数は２であることが知られてい
る。他方、１ｇＧ分子に付随したェピトープの数は正確
には知られていないが、少なくとも２であることは知ら
れている。なお、ェピトープはＹ字形分子の尾部に存在
することが知られており、また恐らくは腕部にも存在す
る。第１図では、本発明の動作原理を図解するため、３
個のェピトームは各抗体分子の重べプチト鎖に沿って配
置されている。抗体分子２１のェピトープは２１ｅｌ，
２１ｅ２，２１ｅ３として表わされ、また抗体分子２２
のエピトープは２２ｅｌ，２２ｅ２，２２ｅ３として表
わされている。このように、基体１０の上に蛋白質分子
１１を吸着させ、次いで蛋白質１１に対する抗体の溶液
中に得られた免疫学的試験用基体を浸渡して抗体分子２
１，２２を免疫学的に結合させるところまでは、前述の
ギアェヴアの発明の実施を構成するものである。

しかるに本発明の実施に従えば、２１および２２として
表わされたような種類の抗体の溶液が脊椎動物に注射さ
れ、それによって抗体の産生が励起される。こうして産
生された抗体が当技術界において公知の方法により回収
され、そしてその溶液が本発明に基づく改良された診断
方法において使用される。すなわち、かかる抗体に対す
る抗体の溶液中に基体が浸潰される。その結果、蛋白質
分子１１に抗体分子２１，２２が付着している場合には
、多数の抗体分子３１，３２，３３，３４，３５が抗体
分子２１，２２と免疫学的に結合する。しかるに、２１
および２２として表わされたような種類の抗体が最初の
溶液中に存在しなかった場合には、抗体分子３１，３２
，３３，３４，３５を含有する溶液中に浸潰した後でも
基体上にこれらの抗体分子は存在しない。なぜなら、抗
体分子３１，３２，３３，３４，３５は抗体分子２１，
２２と特異的に反応するものであって、蛋白質分子１１
には付着しないからである。それ故、本発明に基づく方
法のこの段階においても抗体分子２１，２２の検出可能
性は改善されていることになる。なぜなら、蛋白質分子
１１から成る層と蛋白質分子１１および抗体分子２１，
２２から成る層とを識別するのとは異なり、蛋白質分子
１１から成る層と蛋白質分子１１および抗体分子２１，
２２，３１，３２，３３，３４，３５から成る層とを識
別することによって抗体分子２１，２２の存在が判定さ
れるからである。更にまた、本発明に基づく操作を繰返
して追加の蛋白質層を付着させれば、検出感度を一層向
上させることもできる。たとえば、抗体分子４１，４２
，４３，４４，４５，４６，４７，４８，４９，５０，
５１，５２，５３を抗体分子３１，３２，３３，３４，
３５と選択的に結合させることにもできるわけである。
抗体分子３１，３２，３３，３４，３５はそれぞれ抗体
活性部位３１ａ１，３１ａ２，３２ａｌ，３２ａ２，３
３ａｌ，３３ａ２，３４ａｌ，３４ａ２，３５ａｌ，３
５ａ２を有している。

抗体分子３１はェピトーブ２１ｅ２に対する抗体活性部
位３１ａ２の付着によって抗体分子２１と免疫学的に結
合し、抗体分子３２はェピトープ２１ｅｌに対する抗体
活性部位３２ａｌの付着によって抗体分子２１と免疫学
的に結合し、抗体分子３３はェピトープ２２ｅ２に対す
る抗体活性部位３３ａ２の付着によって抗体分子２２と
免疫学的に結合し、抗体分子３４はェピトープ２２ｅｌ
に対する抗体活性部位３４ａｌの付着によって抗体分子
２２と免疫学的に結合し、そして抗体分子３５はヱピト
ープ２２ｅ３に対する抗体活性部位３５ａｌの付着によ
って抗体分子２２と免疫学的に結合している。抗体分子
２１で始まる第１図左側の蛋白質連鎖においては、各抗
体分子が２個の有効なェピトープを有するものとして図
示されている。従って、抗体分子２１には抗体分子３１
，３２が結合しており、また抗体分子３１，３２は抗体
分子４１，４２，４３，４４が結合している。これは１
や抗体分子１個当りの有効なェピトープの最小数に相当
している。しかるに、抗体分子２２で始まる第１図右側
の蛋白質連鎖においては、各抗体分子が３個の有効なェ
ピトープを有するものとして図示されている。このよう
に、本発明に従って達成される検出感度の改善は抗体分
子１個当りの有効なェピトープの数および互いに連続し
た抗体溶液中への基体の浸債の回数に比例することがわ
かろう。

本発明に従って実施された血清免疫反応の実例を述べれ
ば、先ず、ウシ血清アルブミンの層が基体上に吸着させ
られた。

次いで、得られたスライドをウシ血清アルブミンに対す
るウサギ抗血清の溶液中に浸潰したところ、浸簿後のス
ライドは元来のウシ血清アルブミンの層およびそれと免
疫学的に結合したウシ血清アルブミンに対するウサギ１
ｇＧ抗体の層を有していた。更に、ウサギ１ｇＧ抗体に
対するャギ抗血清の溶液中に浸漬後したところ、浸債後
のスライドはウシ血清アルブミンの層、ウシ血清アルブ
ミンに対するウサギ１ｇＧ抗体の層、およびゥサギーや
抗体に対するャギ１ｇＧ抗体の層を有していた。次の１
程は、ャギ１や抗体に対するウサギ抗血清の溶液中にス
ライドを浸潰し、それによってャギ１ｇ０抗体に対する
ウサギ１ｇＧ抗体から成る第４の層をスライドに追加す
ることであった。以後、ウサギ１ｇＣ抗体に対するウサ
ギ抗血清および１ｇＧ抗体に対するウサギ抗血清を使用
する最後の２つの工程を所望の回数だけ繰返せば、蛋白
質のｎ分子層を形成し得ることは明らかであろう。かか
る技術を応用した別の実施例を述べれば、一定量の肝炎
関連抗原粒子が基体上に吸着させられた。

得られたスライドがヒト血清検体中に浸潰され、次いで
ヒト肝炎抗体に対するウサギ抗体の溶液中に浸潰された
。従って、ヒト血清検体が肝炎抗体を含有していれば、
浸糟後のスライドは肝炎関連抗原、それと免疫学的に結
合した肝炎抗体、およびそれと免疫学的に結合したヒト
肝炎抗体に対するウサギ抗体を有することになる。しか
るに、ヒト血清検体が陰性であれば、浸債後のスライド
は元来の肝炎関連抗原粒子しか有しないはずである。本
発明に基づくかかる技術は、肝炎杭体のみを肝炎関連抗
原と結合させる場合に比べ、ヒトの肝炎の検出可能性を
著しく改善することが判明した。この実例によれば、本
発明の技術が特に有用であるのは、スライド上に付着し
た最初の蛋白質含有粒子がそれと特異的に反応する蛋白
質よりも実質的に大きい場合であることが指摘される。
第２図はスライド上における蛋白質の多分子層を示す縦
断面図である。

基体６０上には、たとえば上記の最初の実例に記載のご
と〈にして、ウシ血清アルブミンの一分子層６１が吸着
免疫学的診断用スライドが構成される。ゥシ血清ァルプ
ミンに対するウサギ抗血清中に浸薄後すれば、特異的な
免疫反応によって第２の一分子層６２が第１の一分子層
６１に付着する。次いでウサギ１ｇＧに対するャギ抗血
清中に浸糟すれば、第２の一分子層６２が存在する場合
には、第３の一分子層６３が第２の一分子層と免疫学的
に結合する。同様に、ヤギ１ｇＧに対するウサギ抗血清
中に浸債すれば、ャギ１ｇＧに対するウサギ１ｇＧ抗体
から成る第４の一分子層６４がスライドに付着する。前
述の通り、かかる操作は繰返すことができるが、蛋白質
の一分子層の結合は特異的な免疫反応であるから、いず
れか１つの蛋白質の一分子層が形成されなければ上記の
過程は回復不可能に中断されてしまう。特に、第２図の
構造物は一分子層６２を成す蛋白質の高感度検出のため
に有用である。一分子層６１は吸着によってスライド６
０に付着するが、これは非特異的な過程である。しかる
に、以後の過程は全て特異的である。それ故、一分子層
６１を成す蛋白質と特異的に反応する蛋白質が検体中に
存在すれば、一分子層６２が形成されるから、本発明に
従って蛋白質のｎ分子層が形成され得る。しかるに、一
分子層６１を成す蛋白質と特異的に反応する蛋白質が検
体中に存在しなければ、一分子層６２が形成されないか
ら、以後の蛋白質層も形成され得ない。その結果、スラ
イド上における蛋白質の一分子層と任意所望の膜厚の蛋
白質層とを識別することにより、検体中の問題の蛋白質
を任意所望の感度で検出することが可能となる。第３図
は本発明の技術の別の有用性を示すスライドの縦断面図
である。

この図は、基体上に完全な一分子層を形成するには低過
ぎる濃度で生理学的検体中に存在する蛋白質の検出にお
ける本発明の有用性を示している。特定の蛋白質を使用
した実例を述べれば、スライド７０上にヒト肝炎抗体７
１の一分子層が吸着させられる。得られたスライドを血
液検体中に浸贋後すれば、肝炎関連抗原が検体中に存在
する場合には多数の肝炎関連抗原粒子７７が免疫学的に
結合する。次いで、かかるスライドをサル肝炎抗体の溶
液中に浸糟すれば、サル肝炎抗体の一分子層７２がスラ
イドーこ結合された肝炎関連抗原粒子に結合する。更に
、かかるスライドをサル肝炎抗体に対するウサギ抗血清
の溶液中に浸債後すれば、それの一分子層７３がサル肝
炎抗体の−分子層に結合する。ところで、一分子層７２
をヒト肝炎抗体でも構成し得ることは言うまでもない。
しかし、そうした場合、次の一分子層はヒト肝炎抗体に
対する抗体でなければならない。かかる抗体は肝炎関連
抗体粒子７７を包囲する一分子層７２ばかりでなく元来
の一分子層７１にも結合するから、本発明の技術の目的
は挫折してしまうことになる。引続いて、かかるスライ
ドをたとえばウサギ１ｇＧ抗体に対するャギ抗血清中に
浸債すれば、それの一分子層７４が形成される。結局、
７５として表わされた容積によって略示されるごとく、
最後の蛋白質の一分子層７６がスライド上における肝炎
関連抗原粒子７７間の空間を完全に埋める状態に至るま
で上記の操作が繰返される。本発明のかかる技術は、ス
ライドの表面全域にわたって少なくとも蛋白質の二分子
層を形成することを可能にするものであって、前述のギ
アェヴァの特許明細書に記載された化学的および電気的
検出の実施に際して特に有用である。以上、特定の実施
例に関連して本発明が記載されたが、上記の教示に従え
ばその他の変形や変更も可能であることは当業者にとっ
て自明であろう。従って、前記特許請求の範囲内であれ
ば、上記の実施例とは異なるやり方でも本発明を実施し
得ることが了解されるべきである。次に、本発明の実施
態様を列挙すれば下記の通りである。

１ 前記の検出すべき蛋白質と免疫学的に反応する前記
蛋白質に対する抗体の溶液を調製し、次いで前記溶液中
に前記スライドを浸債する工程が追加包含される、前記
特許請求の範囲記載の方法。

２ ある溶液中の抗体がそれに先行する溶液中の抗体に
対する抗体であるような系列を成す一連の抗体溶液を調
製し、次いで前記系列の各溶液中に前記スライドを相次
いで浸薄する工程が追加包含される、前記第１項記載の
方法。

３ 前記スライドの感度が前記スライド上の蛋白質層の
絶対膜厚の関数であり、しかも蛋白質の二分子層では前
記スライドの最大感度を得るのに不十分である場合、前
記スライド上に蛋白質の二分子層が存在するならば前記
二分子層に蛋白質の一分子層が免疫学的に結合させられ
る結果、前記スライド上における蛋白質の三分子層と一
分子層とを識別することによって前記の検出すべき蛋白
質の検出が達成される、前記特許請求の範囲記載の方法
。

４ ある溶液中の抗体がそれに先行する溶液中の抗体に
対する抗体であるような系列を成す一連の抗体溶液を調
製し、次いで前記系列の各溶液中に前記スライドを相次
いで浸債する工程が追加包含される、前記第３項記載の
方法。

５ 前記スライド上に蛋白質の二分子層が存在するなら
ば前記二分子層に複数の蛋白質の−分子層が免疫学的に
結合させられる結果、前記スライド上における蛋白質の
多分子層と−分子層とを識別することによって前記の検
出すべき蛋白質の検出が達成される、前記第４項記載の
方法。

６ 前記の検出すべき蛋白質が生理学的検体中に極めて
低い濃度で存在するため、適当な時間内では前記スライ
ド上に完全な二分子層が形成されない場合、前記スライ
ド上における前記の検出すべき蛋白質の各粒子に蛋白質
の−分子層が免疫学的に結合させられる、前記特許請求
の範囲記載の方法。

７ ある溶液中の抗体がそれに先行する溶液中の抗体に
対する抗体であるような系列を成す一連の抗体溶液を調
製し、次いで前記系列の各溶液中に前記スライドを相次
いで浸造後する工程が追加包含される、前記第６項記載
の方法。

８ 前記スライド上における前記の検出すべき蛋白質の
各粒子に複数の蛋白質の一分子層が免疫学的に結合させ
られる、前記第７項記載の方法。

９ 前記蛋白質の一分子層の数が前記スライドをその表
面全域にわたり少なくとも蛋白質の二分子層で被覆する
に足るだけのものである、前記第８項記載の方法。

【図面の簡単な説明】

第１図は基体に対する複数の蛋白質層の付着を示す模式
図、第２図は蛋白質の一分子層を４枚有するスライドの
縦断面図、そして第３図は本発明の一実施例に従って作
製されたスライドの縦断面図であってスライド上におけ
る蛋白質の二分子層の完成を示す。 図中、１０は基体、１１は蛋白質分子、２１および２２
は蛋白質分子１１に対する抗体分子、３１〜３５は抗体
分子２１および２２に対する抗体分子、そして４１〜５
３は抗体分子３１〜３５に対する抗体分子を表わす。 密８．１ ９も．２ 碗９る

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 検出すべき蛋白質と特異的に免疫学的に反応する第
   ２の蛋白質の粒子を層状に吸着させた基体を含む免疫学
   的診断用スライドにおける前記検出すべき蛋白質の存否
   のコントラストを改善する方法において、（ａ）前記検
   出すべき蛋白質を含有するかどうか疑われる液体に前記
   スライドを接触して前記検出すべき蛋白質の多数の粒子
   を前記第２の蛋白質の粒子と結合させ、次いで（ｂ）前
   記の検出すべき蛋白質と免疫学的に反応する第３の蛋白
   質の溶液に前記スライドを接触することを特徴とする方
   法。 ２ 検出すべき蛋白質と特異的に免疫学的に反応する第
   ２の蛋白質の粒子を層状に吸着させた基体を含む免疫学
   的診断用スライドにおける前記検出すべき蛋白質の存否
   のコントラストを改善する方法において、（ａ）前記検
   出すべき蛋白質を含有するかどうか疑われる液体に前記
   スライドを接触して前記検出すべき蛋白質の多数の粒子
   を前記第２の蛋白質の粒子と結合させ、（ｂ）前記の検
   出すべき蛋白質と免疫学的に反応する第３の蛋白質の溶
   液に前記スライドを接触し、次いで（ｃ）前記第３の蛋
   白質に対する抗体の溶液を調製して前記スライドを更に
   この抗体の溶液と接触させることを特徴とする方法。 ３ 検出すべき蛋白質と特異的に免疫学的に反応する第
   ２の蛋白質の粒子を層状に吸着させた基体を含む免疫学
   的診断用スライドにおける前記検出すべき蛋白質の存否
   のコントラストを改善する方法において、（ａ）前記検
   出すべき蛋白質を含有するかどうか疑われる液体に前記
   スライドを接触して前記検出すべき蛋白質の多数の粒子
   を前記第２の蛋白質の粒子と結合させ、（ｂ）前記の検
   出すべき蛋白質と免疫学的に反応する第３の蛋白質の溶
   液に前記スライドを接触し、（ｃ）前記第３の蛋白質に
   対する抗体の溶液を調製して前記スライドをこの抗体の
   溶液と接触し、次いで（ｄ）一連の抗体の溶液を調製し
   て、前記スライドを更に前記一連の抗体の溶液と連続的
   に接触させて一連の抗体−抗体による免疫学的特異反応
   を介して前記工程（ｃ）から得られたスライドの前記抗
   体上に順次前記一連の抗体を連続的に結合させることを
   特徴とする方法。