JPS60248167A - スクリ−ニング用プレ−ト - Google Patents
スクリ−ニング用プレ−トInfo
- Publication number
- JPS60248167A JPS60248167A JP10540584A JP10540584A JPS60248167A JP S60248167 A JPS60248167 A JP S60248167A JP 10540584 A JP10540584 A JP 10540584A JP 10540584 A JP10540584 A JP 10540584A JP S60248167 A JPS60248167 A JP S60248167A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- microorganism
- polymer layer
- hydrophilic polymer
- antibody
- plate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（技術分野）
本発明は複数種の微生物から目的とする微生物を検出す
るためのスクリーニング用プレートに関する。
るためのスクリーニング用プレートに関する。
（従来技術）
複数種の微生物のなかから目的とする微生物を検出する
ことは、微生物を用いる生化学的実験などにおいて必要
不可欠な事項である。複数種の微生物が生育して形成さ
れた複数種のコロニーから目的とする菌を簡単な操作で
検出する方法は今までに知られていない。従来の検出法
によれば、土壌などから分離された複数種の微生物から
常法にて単一菌株をそれぞれ単離しこれを培養してその
形態学的観察および生理学的観察が行われる。このよう
な操作は煩雑なうえに高度の専門的知識と長期にわたる
反復実験を必要とする。
ことは、微生物を用いる生化学的実験などにおいて必要
不可欠な事項である。複数種の微生物が生育して形成さ
れた複数種のコロニーから目的とする菌を簡単な操作で
検出する方法は今までに知られていない。従来の検出法
によれば、土壌などから分離された複数種の微生物から
常法にて単一菌株をそれぞれ単離しこれを培養してその
形態学的観察および生理学的観察が行われる。このよう
な操作は煩雑なうえに高度の専門的知識と長期にわたる
反復実験を必要とする。
（発明の目的）
本発明の目的は、複数種の微生物から目的とする微生物
を簡単な操作で容易、迅速かつ正確に検出できるスクリ
ーニング用プレートを提供することにある。
を簡単な操作で容易、迅速かつ正確に検出できるスクリ
ーニング用プレートを提供することにある。
（発明の構成）
本発明のスクリーニング用プレートは微生物特異抗体、
もしくは微生物特異抗体および溶菌酵素を有する親水性
高分子層を備え、そのことにより上記目的が達成される
。
もしくは微生物特異抗体および溶菌酵素を有する親水性
高分子層を備え、そのことにより上記目的が達成される
。
本発明のスクリーニング用プレートの親水性高分子層は
微生物特異抗体、溶菌酵素などを保持することが可能で
、かつ寒天などの培地と接触したときそれらを簡単に溶
出させ得る特性を有する。
微生物特異抗体、溶菌酵素などを保持することが可能で
、かつ寒天などの培地と接触したときそれらを簡単に溶
出させ得る特性を有する。
このような親水性高分子は含水性で、かつゲル層を形成
でき得る化合物である。通常、９０四八％以上の水を担
持できる化合物が使用される。この親水性高分子は微生
物特異抗体や溶菌酵素と反応しないことが必要であり、
透明性に優れていることが望ましい。このような親水性
高分子としては。
でき得る化合物である。通常、９０四八％以上の水を担
持できる化合物が使用される。この親水性高分子は微生
物特異抗体や溶菌酵素と反応しないことが必要であり、
透明性に優れていることが望ましい。このような親水性
高分子としては。
寒天、アルギン酸ソーダ、に−カラギーナン、アクリル
アミド、親水ウレタン、アクリル酸ソーダ。
アミド、親水ウレタン、アクリル酸ソーダ。
ポリビニルアルコール、スターチ、ゼラチンなどがある
。このような化合物は架橋処理して用いられてもよい。
。このような化合物は架橋処理して用いられてもよい。
特に、寒天、アルギン酸ソーダおよびに一カラギーナン
が好んで用いられる。
が好んで用いられる。
親水性高分子層に含まれる微生物特異抗体は微生物の菌
体あるいは菌体外生産物をウサギやモルモットなどの動
物に免疫して得られる抗血清を用いる。抗血清を精製し
て免疫グロブリンＧ （ＩｇＧ ）分画を得、これを用
いてもよい。 微生物特異抗体の含量はその種類や精製
度により異なるが、精製ＩｇＧ分画とした抗体は親水性
高分子層に０．１〜２０．０ｍｇ／ｍ ｊ２ 、好まし
くは０．５〜５．Ｏｍｇ／ｍ ｊ！の割合で含有される
。検出を目的とする微生物細胞壁およびその微生物によ
り生成される特有のムコ多糖類や蛋白質が上記抗体の抗
原部位となる。 これらが菌体外に放出されない場合に
は、親水性高分子層にリゾチームなどの溶菌酵素を含有
させる。
体あるいは菌体外生産物をウサギやモルモットなどの動
物に免疫して得られる抗血清を用いる。抗血清を精製し
て免疫グロブリンＧ （ＩｇＧ ）分画を得、これを用
いてもよい。 微生物特異抗体の含量はその種類や精製
度により異なるが、精製ＩｇＧ分画とした抗体は親水性
高分子層に０．１〜２０．０ｍｇ／ｍ ｊ２ 、好まし
くは０．５〜５．Ｏｍｇ／ｍ ｊ！の割合で含有される
。検出を目的とする微生物細胞壁およびその微生物によ
り生成される特有のムコ多糖類や蛋白質が上記抗体の抗
原部位となる。 これらが菌体外に放出されない場合に
は、親水性高分子層にリゾチームなどの溶菌酵素を含有
させる。
リゾチームの含有量は親水性高分子層に対して。
通常、０．１〜３０．０ｍｇ／ｍｃ好ましくは１．０−
１０．０ｍｇ／ｍβである。
１０．０ｍｇ／ｍβである。
本発明のスクリーニング用プレートは１通常。
親水性高分子層で構成されるが、必要に応じてこれを支
持する支持板を構成要素に加えることができる。支持板
は親水性高分子層を支持し、高分子層をコロニー」二に
密着させるまでの間２その形状を所定のものに保ち得れ
ばどのような素材であってもよい。支持板の素材として
は１例えばポリウレタン、ポリアミド、ポリカーボネー
ト、アクリル樹脂、ポリプロピレン、ポリエチレンテレ
フタレート、ポリビニルクロリドなどがある。支持板が
透明であればスクリーニング用プレートを培地上に積層
したときに、支持板をとおして沈降綿を観察することが
できる。支持板は不透明でもよく。
持する支持板を構成要素に加えることができる。支持板
は親水性高分子層を支持し、高分子層をコロニー」二に
密着させるまでの間２その形状を所定のものに保ち得れ
ばどのような素材であってもよい。支持板の素材として
は１例えばポリウレタン、ポリアミド、ポリカーボネー
ト、アクリル樹脂、ポリプロピレン、ポリエチレンテレ
フタレート、ポリビニルクロリドなどがある。支持板が
透明であればスクリーニング用プレートを培地上に積層
したときに、支持板をとおして沈降綿を観察することが
できる。支持板は不透明でもよく。
その場合には親水性高分子層をコロニーに密着させた状
態で支持板を高分子層から剥離するか、さもなければ発
色状態をコロニー生育培地の裏側から観察すればよい。
態で支持板を高分子層から剥離するか、さもなければ発
色状態をコロニー生育培地の裏側から観察すればよい。
支持板の厚さには、特に制限はないが１通常０．５〜１
．０顛程度である。支持板の厚さが薄すぎると支持板と
しての機能を有し得す、したがって親水性高分子層との
剥離性が悪くなる。極端に厚いと取りあつかいに不便で
ある。
．０顛程度である。支持板の厚さが薄すぎると支持板と
しての機能を有し得す、したがって親水性高分子層との
剥離性が悪くなる。極端に厚いと取りあつかいに不便で
ある。
支持板が存在しなくてもスクリーニング用プレートの機
能には変わりはない。
能には変わりはない。
本発明のスクリーニング用プレートは上記の親水性高分
子溶液に微生物特異抗体、溶菌酵素などを加えて混合し
親水性高分子層を形成して調製される。親水性高分子層
は９通常、支持板上に一定の厚さの層に形成され、その
水分含量が５０％以上。
子溶液に微生物特異抗体、溶菌酵素などを加えて混合し
親水性高分子層を形成して調製される。親水性高分子層
は９通常、支持板上に一定の厚さの層に形成され、その
水分含量が５０％以上。
好ましくは７０％以上で９９．５％以下となるように調
製される。親水性高分子層に含有される液体は抗原抗体
反応を起こしよくするため、ハルビタールバ・７フアー
などを用いるのが好適である。親水性高分子のゲル状層
を形成しておき、微生物特異抗体などを含む溶液を表面
に塗布してもよい。微生物特異抗体などを含む溶液に親
水性高分子のゲル状層を浸漬してもよい。塗布もしくは
浸漬により作製された親水性高分子層でなるスクリーニ
ング用プレートは９表面に微生物特異抗体を有するため
、微生物特異抗体とコロニーとの接触状態が良好である
。親水性高分子層の厚さは抗原抗体反応に必要な量の微
生物特異抗体や溶菌酵素を含有できる厚さであればよく
１通常１〜５Ｎである。親水性高分子層は含水状態であ
っても乾燥状態であってもよく、そのため、８周製され
たスクリーニング用プレー１−を凍結乾燥しておけば長
期間の保存が可能である。
製される。親水性高分子層に含有される液体は抗原抗体
反応を起こしよくするため、ハルビタールバ・７フアー
などを用いるのが好適である。親水性高分子のゲル状層
を形成しておき、微生物特異抗体などを含む溶液を表面
に塗布してもよい。微生物特異抗体などを含む溶液に親
水性高分子のゲル状層を浸漬してもよい。塗布もしくは
浸漬により作製された親水性高分子層でなるスクリーニ
ング用プレートは９表面に微生物特異抗体を有するため
、微生物特異抗体とコロニーとの接触状態が良好である
。親水性高分子層の厚さは抗原抗体反応に必要な量の微
生物特異抗体や溶菌酵素を含有できる厚さであればよく
１通常１〜５Ｎである。親水性高分子層は含水状態であ
っても乾燥状態であってもよく、そのため、８周製され
たスクリーニング用プレー１−を凍結乾燥しておけば長
期間の保存が可能である。
上記スクリーニング用プレートは任意の形状・大きさに
切断されて使用される。例えば、培地用の直径９ｃｍ程
度のシャーレの大きさにあわせて円形に切断される。ス
クリーニング用プレート１は。
切断されて使用される。例えば、培地用の直径９ｃｍ程
度のシャーレの大きさにあわせて円形に切断される。ス
クリーニング用プレート１は。
例えば、第１図に示すような親水性高分子層４とこれを
支持する支持板６を有する。第２図に示すように、複数
種の微生物のコロニー２の生育した培地３上に親水性高
分子層４が接するようにスクリーニング用プレート１を
コロニー２上に積層し。
支持する支持板６を有する。第２図に示すように、複数
種の微生物のコロニー２の生育した培地３上に親水性高
分子層４が接するようにスクリーニング用プレート１を
コロニー２上に積層し。
所定温度にて所定時間培養を行う。培養する温度や時間
は微生物特異抗体などの種類によって適宜選択される。
は微生物特異抗体などの種類によって適宜選択される。
親水性高分子層４の微生物特異抗体や溶菌酵素が培地３
に溶出しそこに抗体に対応する菌体が存在すれば、その
菌体細胞壁または菌体から放出される特有のムコ多糖類
や蛋白質と抗原抗体反応を起こし、第３図に示すように
、コロニー２の周辺に沈降線５を生じる。沈降線５は２
通常、白色でありかつ培地に用いられる寒天などは透明
もしくは半透明であるため、容易にこれを目視観察する
ことができる。支持板６が透明である場合には沈降線５
が支持板６を通して目視観察できる。支持板６が不透明
である場合には、これを親水性高分子層４から剥離する
。シャーレの裏側から観察することもできる。このよう
に極めて簡単な操作で、培地上に生育した複数種の微生
物から目的とする′８１に生物を沈降線を観察すること
により正確に検出することができる。
に溶出しそこに抗体に対応する菌体が存在すれば、その
菌体細胞壁または菌体から放出される特有のムコ多糖類
や蛋白質と抗原抗体反応を起こし、第３図に示すように
、コロニー２の周辺に沈降線５を生じる。沈降線５は２
通常、白色でありかつ培地に用いられる寒天などは透明
もしくは半透明であるため、容易にこれを目視観察する
ことができる。支持板６が透明である場合には沈降線５
が支持板６を通して目視観察できる。支持板６が不透明
である場合には、これを親水性高分子層４から剥離する
。シャーレの裏側から観察することもできる。このよう
に極めて簡単な操作で、培地上に生育した複数種の微生
物から目的とする′８１に生物を沈降線を観察すること
により正確に検出することができる。
（実施例）
以下に本発明を実施例により説明する。
実施例Ｉ
（Ａ＞免疫グロブリンＧ分画の調製：肺炎球菌の菌体を
ソニックで粉砕し、これを遠心分離し細胞壁分画を得た
。これをアジュバントと共にウサギの背中に１週問おき
に３回注射し、最終免疫後３週間後に採血を行った。血
清をアフィニティクロマトグラフィにかけて精製を行い
、免疫グロブリンＧ （ＩｇＧ ）分画を得た。
ソニックで粉砕し、これを遠心分離し細胞壁分画を得た
。これをアジュバントと共にウサギの背中に１週問おき
に３回注射し、最終免疫後３週間後に採血を行った。血
清をアフィニティクロマトグラフィにかけて精製を行い
、免疫グロブリンＧ （ＩｇＧ ）分画を得た。
（Ｂ）スクリーニング用プレートの調製： ０．８５％
の塩化ナトリウムを含有するＩ）Ｈ’７．０の０．１Ｍ
バルビタール緩衝液１００ｍＩ２に寒天粉末３．０ｇを
加え、１００℃の温浴中で溶解させた。これを寒天が凝
固する直前の温度である約６０℃に冷却し、塩化リゾチ
ーム１５０ｍｇおよび（Ａ）項で得られたＩｇＧ分画１
００■を加えて混合した。この寒天溶液を厚さ２００μ
ｍのウレタンフィルム上に厚さが２龍となるように延展
し、寒天ゲルを親水性高分子層とするシートを得た。こ
れを直径８５態の円板に打ち抜き、スクリーニング用プ
レートを得た。
の塩化ナトリウムを含有するＩ）Ｈ’７．０の０．１Ｍ
バルビタール緩衝液１００ｍＩ２に寒天粉末３．０ｇを
加え、１００℃の温浴中で溶解させた。これを寒天が凝
固する直前の温度である約６０℃に冷却し、塩化リゾチ
ーム１５０ｍｇおよび（Ａ）項で得られたＩｇＧ分画１
００■を加えて混合した。この寒天溶液を厚さ２００μ
ｍのウレタンフィルム上に厚さが２龍となるように延展
し、寒天ゲルを親水性高分子層とするシートを得た。こ
れを直径８５態の円板に打ち抜き、スクリーニング用プ
レートを得た。
（Ｃ）菌の検出：土壌から採取したバクテリアを０．８
５％の塩化ナトリウムを含有する寒天培地で培養し、コ
ロニーを約１５０個形成させた。（Ｂ）項で得られたス
クリーニング用プレートを親水性高分子層がコロニーと
密着するように積層し、１５°Ｃで一夜放置した。周辺
に白い沈降線が認められるコロニーは肺炎球菌であるこ
とが確認された。
５％の塩化ナトリウムを含有する寒天培地で培養し、コ
ロニーを約１５０個形成させた。（Ｂ）項で得られたス
クリーニング用プレートを親水性高分子層がコロニーと
密着するように積層し、１５°Ｃで一夜放置した。周辺
に白い沈降線が認められるコロニーは肺炎球菌であるこ
とが確認された。
実施例２
（Ａ）免疫グロブリンＧの調製：肺炎球菌の代わりに大
腸菌を用いたこと以外は実施例１と同様である。
腸菌を用いたこと以外は実施例１と同様である。
（Ｂ）スクリーニング用プレートの調製： ｐＨ７，０
の０．１Ｍ リン酸緩衝液１０ｍＡに塩化ナトリウム０
．０８５ ｇとに一カラギーナン０．５ｇとを加えて混
合した。これを厚さ２００μｍのナイロンフィルム上に
厚さ１１ｉＩとなるように延展し、４℃に冷却してゲル
化させた。これを直径７６龍の円板に打ち抜いた。別に
塩化リゾチームおよび（Ａ）項で得られたＩｇＧ分画を
ｐＨ７，０の０．１Ｍリン酸緩衝液に溶解させ、それぞ
れ１．５ｍｇ／ｍ １！およびｌ ｍｇ／ｍ Ｉ！の濃
度となるようにした。このリン酸緩衝液中に上記円板状
シートを２時間浸漬し２．スクリーニング用プレートを
得た。
の０．１Ｍ リン酸緩衝液１０ｍＡに塩化ナトリウム０
．０８５ ｇとに一カラギーナン０．５ｇとを加えて混
合した。これを厚さ２００μｍのナイロンフィルム上に
厚さ１１ｉＩとなるように延展し、４℃に冷却してゲル
化させた。これを直径７６龍の円板に打ち抜いた。別に
塩化リゾチームおよび（Ａ）項で得られたＩｇＧ分画を
ｐＨ７，０の０．１Ｍリン酸緩衝液に溶解させ、それぞ
れ１．５ｍｇ／ｍ １！およびｌ ｍｇ／ｍ Ｉ！の濃
度となるようにした。このリン酸緩衝液中に上記円板状
シートを２時間浸漬し２．スクリーニング用プレートを
得た。
（Ｃ）菌の検出＝ （Ｂ）項で得られたスクリーニング
用プレートを用い、実施例１と同様にして土壌から採取
したバクテリアコロニーから大腸菌のコロニーを検出し
た。
用プレートを用い、実施例１と同様にして土壌から採取
したバクテリアコロニーから大腸菌のコロニーを検出し
た。
（発明の効果）
本発明のスクリーニング用プレートを用いると。
このように、複数種の微生物から目的とする微生物を簡
単な操作で容易、迅速かつ正確に検出することができる
。このようなスクリーニング用プレートは、微生物を用
いた種々の実験をはじめ感染症患者からの特定の菌の検
出など多方面に応用されうる。
単な操作で容易、迅速かつ正確に検出することができる
。このようなスクリーニング用プレートは、微生物を用
いた種々の実験をはじめ感染症患者からの特定の菌の検
出など多方面に応用されうる。
第１図は本発明のスクリーニング用プレートの一実施例
の部分断面図、第２図は複数種のコロニーが生育した培
地に上記スクリーニング用プレートを積層した状態を示
す断面図、そして第３図はそのスクリーニング用プレー
トによりコロニーの周辺に生じた沈降線を示す平面図で
ある。 １・・・スクリーニング用プレート ２・・・コロニー
。 ３・・・培地、４・・・親水性高分子層、５・・・沈降
線。 ６・・・支持板。 以上 代理人 弁理士 山本秀策 第１図 １２図 第３図
の部分断面図、第２図は複数種のコロニーが生育した培
地に上記スクリーニング用プレートを積層した状態を示
す断面図、そして第３図はそのスクリーニング用プレー
トによりコロニーの周辺に生じた沈降線を示す平面図で
ある。 １・・・スクリーニング用プレート ２・・・コロニー
。 ３・・・培地、４・・・親水性高分子層、５・・・沈降
線。 ６・・・支持板。 以上 代理人 弁理士 山本秀策 第１図 １２図 第３図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、微生物特異抗体、もしくは微生物特異抗体および溶
菌酵素を有する親水性高分子層を備えたスクリーニング
用プレート。 ２、前記親水性高分子層が支持板に支持された特許請求
の範囲第１項に記載のプレート。 ３、前記支持板が透明もしくは半透明である特許請求の
範囲第２項に記載のプレート。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10540584A JPS60248167A (ja) | 1984-05-23 | 1984-05-23 | スクリ−ニング用プレ−ト |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10540584A JPS60248167A (ja) | 1984-05-23 | 1984-05-23 | スクリ−ニング用プレ−ト |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60248167A true JPS60248167A (ja) | 1985-12-07 |
Family
ID=14406701
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10540584A Pending JPS60248167A (ja) | 1984-05-23 | 1984-05-23 | スクリ−ニング用プレ−ト |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60248167A (ja) |
-
1984
- 1984-05-23 JP JP10540584A patent/JPS60248167A/ja active Pending
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