JPS6022720B2 - ペプチドおよびその製法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はすぐれた黄体形成ホルモン（ＬＨ）および卵胞
刺戟ホルモン（ＦＳＨ）放出作用を有する、式（ピロ）
一ＧＩｕ一日ｉｓ−Ｔｒｐ一Ｘ一Ｔひ一Ｙ‐じｕ−Ａ

【
ｇ‐Ｐｒｏ‐Ｚ 〔１〕〔式中、【ａ
】 ＸはＳｅｒ、ＹはＤ一Ｔｒｐ、ＺはＧＩｙ一ＮＨ２
、

【ｂー ＸはＳｅｒ、ＹはＤ‐Ｐｈｅ、ＺはＧＩｙ−
Ｎ比、または‘ｃー ×はＳｅｒ、ＹはＤ−ＬｅリＺは
ＮＨＲ１（ＲＩは低級アルキル）〕で示されるべプチド
およびその合成中間体に関する。 上記式〔１〕のべプチドにおいて、ｔａ’、【ｂ１およ
び【ｃ｝の化合物は、それぞれつぎのように表わされる
。 ｛ａー ＬーピログルタミルーＬ−ヒスチジル−Ｌ−ト
リブトフイル−Ｌ−セリル−ＬーチロジルーＤートリプ
トフイルー・ＬーロイシルーＬーアルギニル−Ｌーブロ
リルグリシンアミド、｛ｂ｝ Ｌ−ピログルタミルーＬ
ーヒスチジル−Ｌ−トリプトフイル−Ｌーセリル−Ｌー
チロジルーＤーフエニルアラニル−Ｌーロイシル−Ｌー
アルギニルーＬ−プロリルグリシンアミド、【ｃー Ｌ
ーピログルタミル−ＬーヒスチジルーＬ−トリプトフイ
ルーＤ−セリルーＬーチロジル−Ｄ−ロイシルーＬーロ
イシルーＬーアルギニル−Ｌ−プロリル低級アルキルア
ミド。 これらの化合物は、以下、つぎのごとく略記される。 【ａー 〔Ｄ−Ｔｒｐ６〕−ＬＨ−ＲＨ、‘ｂ’〔Ｄ−
ｐｈｅ６〕−ＬＨ−ＲＨ、 （ｃ）〔Ｄ一Ｓｅ〆、Ｄ‐じｕ６、デスＧＩｙ−ＮＨ２
１０〕−ＬＨ−ＲＨ低級アルキルアミド。 黄体形成ホルモン（ＬＨ）および卵胞刺戟ホルモン（Ｆ
ＳＨ）は、ともに、人間および他の噸乳動物の下垂体腺
から産出される向生殖腺ホルモンであり、ＬＨとＦＳＨ
とは卵巣の成熟卵胞からヱスト。 ジェンの放出を促進させ、また雌の排卵を誘引する。雄
では、ＬＨは間質細胞を刺戟し、このため間質細胞刺戟
ホルモン（ＩＣＳＨ）とも呼ばれている。ＦＳＨは卵巣
における卵胞の成熟を促がし、ＬＨとともに雌における
周期現象に重要な役割を果している。ＦＳＨは雄におけ
る塁丸での精子の発達を促がす。ＬＨおよびＦＳＨは、
ＬＨ−およびＦＳＨ−放出ホルモンの作用により下垂体
腺から放出され、該放出ホルモンは視床下部で同化され
神経液の通路を通って下垂体に達することが証明されて
いる〔シヤリイら（Ａ．Ｖ．Ｓｃｈａｌｌｙｅｔａｌ）
、ＲｅｃｅｎｔＰｍ匁ｅｓｓｉｎＨｏ皿ｏ船 Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ第２９等、４９刀頁（１９斑）を参照〕。天然
のＬＨ−およびＦＳＨ−放出ホルモンは、豚の視床下部
から単離され、シャＩＪィらによりその構造が明らかに
されている〔Ａ．Ｖ．Ｓｃｈａｌｌｙｅｔａｌ、Ｂｊ比
ｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．第４
窃蓋、３９３頁（１９７１）〕。 彼等はつぎのデカベプチド構造を提称している。（ピロ
）一Ｇ１ｕ一日ｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ一Ｔｙｒ一Ｇ１ｙ
−Ｌｅｕ−ＡＪｇ−Ｐｒｏ−ＧＩｙ−ＮＨ２この構造は
合成により確認されている〔たとえば、マツオら（日．
ＮＥｔｓｕｏ ｅｔ ａｌ）、Ｂｉ比ｈｅｍ．Ｂｉｏｐ
ｈ略．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．第４申登、８２２頁（１９７
１）およびガィジヤーら（Ｒ．Ｑｉ舞ｒｅｔａｌ）、同
書第４５巻、７６刀頁（１９７１）〕。 天然のＬＨ−およびＦＳＨ−放出ホルモンを以下ＬＨ−
ＲＨと略称する。 ＬＨ−ＲＨは診断用および治療用医薬として重要であり
、天然ホルモンよりさらに改良された活性を有する新規
化合物の製造に多大の関心が払われている。 その１つは、ＬＨ−ＲＨのアミノ酸残基を他のアミノ酸
で選択的に置き換えたものである。そのような改変べプ
チドの数例において、ＬＨ−ＲＨよりも高い活性を示し
ている。たとえば、〔Ｄ−山ａ６〕−ＬＨ−ＲＨ〔アリ
ムラら（ＡＡｒｉｍ町ａｅｔａｌ）、Ｅｎｄ比ｒｉｏ皿
ｌｏｇｙ、第９５巻、１１７４頁（１９７４）〕、〔Ｄ
一Ｌｅが〕一ＬＨ一ＲＨおよび〔Ｄ−Ｌｅｕ６、デスＧ
Ｉｙ一ＮＨ２１．０〕一ＬＨ一ＲＨエチルアミド〔ビル
ツシエッーマーチネツツら（Ｊ．Ａ．Ｖｉｌｃｈｅｚ一
Ｍｂｒｔｉ肥Ｚ ｅｔ ａｌ ）、Ｂｉ比ｈｅｍ，Ｂｉ
ｏｐｈ＄．ＲｅＳ．Ｃｏｍｍ血．第５９蓋、１２６頁（
１９７４）〕。しかしながら、大部分の改変べプチドは
より活性が劣っている。本発明者らの研究によれば、 【ａー ＬＨ−ＲＨの６位のグリシル基をＤートリプト
ファンで置き換えるか、‘ｂー ＬＨ−ＲＨの６位のグ
リシル基を○ーフェニルァラニンで贋き換えるか、また
は‘ｃ’ＬＨ−ＲＨの４位のＬ−セリル基をＤ−セリル
基で、６位のグリシル基をＬーロィシル基で、さらにｌ
ｑ立のグリシンアミドを低級アルキルアミドで置き換え
ることによりＬＨ−ＲＨよりも高活性でかつ長期間作用
しうる前記式〔１〕のべプチドをえた。 本発明における１態様である、６位にＤ−ロィシル基を
導入するとともに４位のセリル基の非対称性を変えるこ
とにより、式〔１〕（式中、ＸはＤ一Ｓｅｒ、ＹはＤ一
Ｌｅｕ、ＺはＮＨＲＩ）のべプチドの高活性と長期持続
作用がもたらされるという本発明者らの発見は、ＬＨ一
ＲＨのアミノ酸残基の非対称性を変えると一般にＬＨ−
ＲＨ自体よりも活性が落ちる〔ヒロツ（Ｙ．Ｈｉｒｏｔ
ｓｕ）、ＢｉＭｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈ＄．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ
ｍ血．、第５９巻、２７７頁（１９７４）〕という事実
からみて、まさに驚くべきことである。 さらに本発明者らは、〔Ｄ−Ｓｅ〆〕−ＬＨ−ＲＨは天
然ホルモンよりＬＨ−ＲＨ活性が５％以下に落ちること
を知った。本発明の式〔１〕のべプチドは使用上におい
てもすぐれた特徴を有しており、たとえば、より少ない
最小有効量のために副作用を減じうるうえその製造コス
トも低く、さらにその長期持続作用のために多数回の投
与の必要性がなくなる。 本発明の化合物は、前記式〔１〕の化合物およびその非
毒性の薬学的に受容されうる塩、さらに、式〔０〕：Ｒ
８一（ピロ）一ＧＩｕ一日ｉｓ（Ｎ１ｍ一Ｒ７）Ｔｒｐ
−Ｘ′−ＴＭ（Ｒ５）−Ｙ−比ｕ−〜ｇ（ＮＣ一Ｒ４）
一日。 一Ｚ′ 〔〇〕〔式中、（ａ｝ Ｘ′はＳｅｒ
（Ｒ６）、ＹはＤ−Ｔｒｐ、Ｚ′はＧＩｙ−Ｒ２、‘ｂ
】 Ｘ′はＳｅｒ（Ｒ６）、ＹはＤ−Ｐｈｅ、Ｚ′はＧ
Ｉｙ−Ｒ２、

【Ｃ】Ｘ′は。 一Ｓｅｒ（Ｒ６）、ＹはＤ一Ｌｅｕ、Ｚ′はＯＲ３、Ｒ
２はアミノまたは０一（低級アルキル）、Ｒ３は低級ア
ルキル、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は前記式〔１〕の
（ピｏ）‐ＧＩｕ一日ｉｓ‐Ｔｒｐ−Ｘ−Ｔび‐Ｙ−Ｌ
ｅｕ一ＡＹｇ一Ｐ。 で−Ｚ（×、ＹおよびＺは前記と同じ）に影響を与えな
い１以上のイｂ学的処理により離脱しうる保護基、Ｒ８
は水素または上記と同じ保護基を意味する〕で示される
化合物、および式〔ｍ〕：Ｒ８一（ピロ）一ＣＩｕ一日
ｉｓ一Ｔｒｐ一○‐Ｓｅｒ（Ｒ６）−ＴＭ（Ｒ５）‐Ｄ
‐舵ｕ‐戊ｕ−〜ｇ（ＮＧ−Ｒ４）−Ｐｒｏ−ＮＨＲ１
〔ｍ〕〔式中、ＲＩは低級アルキル、Ｒ４、Ｒ
５、ＲＢおよびＲ７は前記と同様の保護基、Ｒ８は水素
または同様の保護基を意味する〕で示される化合物を包
含する。 上記式〔ロ〕および式〔ｍ〕の化合物のうちの好ましい
ものは、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は前記と同じで、Ｒ４が
トシル、ニトロ、ベンジルオキシカルボニルおよびアダ
マンチルオキシカルボニルから選ばれるアルギニンのＮ
６、ＮのおよびＮの′窒素原子の保護基、Ｒ５が２−ブ
ロモベンジルオキシカルボニル、ベンジル、アセチル、
トシル、ベンゾイル、ｔーブチル、テトラヒドロピラン
ー２ーイル、トリチル、２・４ージクロロベンジルおよ
びペンジルオキシカルボニルから選ばれるチロジンの水
酸基保護基、Ｒ６が上記Ｒ５に関して示したものから選
ばれるセリンの水酸基保護基、Ｒ７がトシルおよびジニ
トロフェニルから選ばれるヒスチジンのィミダゾール窒
素原子の保護基、Ｒ８が水素またはｔーブチルオキシカ
ルボニル、ベンジルオキシカルポニル、シクロヘキシル
オキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニルおよび
ｄーイソボルニルオキシカルボニルから選ばれるＱ−ア
ミノ保護基である化合物である。 本発明の他の態様は、固形樹脂迫体に連結した中間体に
関する。 その中間体は次式で示される。Ｒ８一（ピロ）一Ｇ１ｕ
一日ｉｓ（Ｎ１ｍ−Ｒ７）一Ｔｒｐ−Ｘ′−ＴＭ（Ｒ５
）−Ｙ−仏ｕ−んｇ（ＮＧ−Ｒ４）−Ｐｒｏ−Ｚ、Ｒ９
一Ｈｉｓ（Ｎ１ｍ一Ｒ７）Ｔｒｐ一Ｘ′一Ｔｙｒ（Ｒ５
）‐Ｙ‐じｕ−〜ｇ（ＮＧ−Ｒ４）‐Ｐｒｏ‐Ｚ２、Ｒ
９−Ｔｒｐ−Ｘ′−ＴＭ（Ｒ５）−Ｙ−比ｕ一ふｇ（Ｎ
Ｇ−Ｒ４）一Ｐｒｏ−Ｚ、およびＲ９一Ｘ′‐ＴＭ（Ｒ
５）‐Ｙ−Ｌｅｕ−〜ｇ（ＮＧ−Ｒ４）−Ｐｒｏ−Ｚ 〔式中、

【ａ）Ｘ′はＳｅｒ（Ｒ８）、ＹはＤ一Ｔｒｐ、ＺはＧ
Ｉｙ一Ａ、【ｂ）Ｘ′はＳｅｒ（Ｒ６）、Ｙは。 一Ｐｈｅ、Ｚ２はＧＩｙ一Ａ、（Ｃ）Ｘ′はＤ一Ｓｅて
（Ｒ６）、ＹはＤ一Ｌｅｕ、ＺはＡ′、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ
６、Ｒ７およびＲ８は前記と同じ、Ｒ９はポリベプチド
の段階的合成に用いられているＱ−アミノ保護基、Ａお
よびＡ′は固形樹脂担体に連結する固相合成法に用いら
れているアンカー結合、たとえば、Ａはまたは Ａ′は を意味する〕 本明細書において、「低級アルキル」とは炭素数１〜３
個のアルキルを意味し、メチル、エチル、プロピルおよ
びィソプロピルを含む。 「ＮＧ」とはアルギニンの側鎖窒素原子、「Ｎ１ｍ」と
はヒスチジンのィミダゾール窒素原子を意味し、さらに
「？」はフェニルを意味する。またアミノ酸およびその
保護基に関する略号は生化学命名に関するＬＵＰＡＣ−
ｍＢ委員会（ＩＵＰＡＣ−ｍＢ ＣｏｍｍｉｓｓＩｏｎ
ｏｎ Ｂｉ比ｈｅｍｉＣａＩＮｏｍｅｎｃｌａｗｒｅ
）の勧告にしたがったものである（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔひ、第１１巻１７２６頁（１９７２）を参照）。たと
えば、ｔ−ＢＸはｔーブチルオキシカルボニル、Ｚはペ
ンジルオキシカルボニル、Ｔｏｓはトシル、２一Ｂｒ一
Ｃ舷は２−ブロモベンジルオキシカルポニル、Ｂｂｌは
ペンジル、Ｄｎｐは２・４ージニトロフェニルを意味す
る。アミノ酸の略号は、Ａ止ｇ：アルギニン、ＧＩｙ：
グリシン、Ｈｉｓ：ヒスチジン、じｕ：ロイシン、Ｐｒ
ｏ：プロリン、（ピロ）一ＧＩｕ：５ーオキソプロリン
（ピログルタミン酸）、Ｓｅｒ：セリン、Ｔｒｐ：トリ
プトフアン、およびＴｙｒ：チロジンである。すべての
アミノ酸はとくに断らない限りＬ体である。たとえば、
Ｄ−ＳｅｒはＤ−セリル基、Ｄ一ＬｅｕはＤ−ロィシル
基、Ｄ−ＰｈｅはＤ−フェニルアラニル基、Ｄ−Ｔｒｐ
はＤートリプトフィル基である。本発明の式〔１〕のべ
プチドは酸付加塩の形でえられる。 塩の例としては、酢酸、乳酸、こはく酸、安息香酸、サ
リチル酸、メタンスルホン酸、トルェンスルホン酸など
の有機酸またはタンニン酸、カルボキシメチルセルロー
スなどの高分子酸との塩、あるいは、塩酸などのハロゲ
ン化水素酸、硫酸、燐酸などの無機酸との塩が挙げられ
る。所望により、特定の酸付加塩を適当なイオン交換樹
脂で処理して〔ボアソンら（Ｒ．Ａ故ｉｓｓｏｎ岬ｓｅ
ｔａｌ）、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．比ｔａ、第４３巻、１
私９頁（１９６０）〕、他の酸付加塩、たとえば、非蓑
性の薬学的に許容しうる塩に変換されうる。 好ましいイオン交換樹脂としては、カルボキシメチルセ
ルロースなどのセルロース系カチオン交換体、または、
Ｃ型セフアデックスなどのイヒ学的に変性した架橋デキ
ストランカチオン交換体、あるいは強塩基性ァニオン交
換樹脂〔たとえば、グリーンスタインら（Ｊ．Ｐ．Ｇｒ
ｅｅｎｓｔｅｉｎ ＆ Ｍ．Ｗｉｎｉｔｚ、“Ｃｈｅｍ
ｉｓ○ｙｏｆｔｈｅＡｍｉｎｏＡｃｉｄｓ”、Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｌｍ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ ａｎｄ Ｌｏｎｄｏｎ、１９６１、第２巻、１４５
６頁）に記載のもの〕などが挙げられる。式〔１〕のべ
プチドおよびその塩はすぐれた持続性のＬＨ−およびＦ
ＳＨ一放出ホルモン活性を有する。 これらのすぐれた活性は標準的な薬理試験法によって確
認される。たとえば、アリムラら〔へＡｒｉｍｍａｅｔ
ａｌ、ＥＭ比ｒｉｍｌｏｇｙ、第９５巻、１１７４頁（
１９７４）〕に記載の方法により、式〔１〕のべプチド
をラットに投与（５瓜夕、皮下注）すると、投与後２時
間半で活性がピークに達し、６時間後でも高い活性を示
すが、ＬＨ−ＲＨを投与（５仇夕、皮下注）した場合に
は、活性ピークは１８分後に生じ、投与１時間後には効
果は認められない。また６時間内のＬＨの総濃度よりみ
て、式〔１〕の化合物：〔Ｄ−Ｓｅｒ４、Ｄ−Ｌｅが、
デスＧＩｙ−ＮＨ２１０〕一ＬＨ一ＲＨエチルアミド、
〔Ｄ−Ｐｈｅ８〕一ＬＨ一ＲＨおよび〔Ｄ一Ｔｒｐ６〕
一ＬＨ一ＲＨでは、ＬＨ放出活性は、ＬＨ−ＲＨに比べ
て、それぞれ、２１倍、２０倍および１２倍であった。
また、ＦＳＨ放出活性については、式〔１〕の化合物：
〔Ｄ一Ｓｅｒ４、Ｄ−ＬｅザーデスＧＩｙ−ＮＨ２１０
〕一ＬＨ−ＲＨエチルアミド、〔Ｄ一Ｐｈｅ６〕−ＬＨ
一ＲＨおよび〔Ｄ−Ｔｒｐ６〕−ＬＨ−ＲＨは、それぞ
れ、同投与量（５仇夕）のＬＨ−ＲＨの活性の約１１倍
、２ぴ音であった。式〔１〕の化合物の活性は人間につ
いても確認されており、鼻腔内投与した場合のＬＨ血清
濃度を放射線免疫試験法で調べたところ、ＬＨ一ＲＨの
最小有効量は約２．仇ｃであったが、本発明の〔Ｄ−Ｔ
ｒｐ６〕−ＬＨ−ＲＨでは０．５の９で同程度の活性を
示した（化合物は通常の食塩水溶液として人間に投与し
た）。 人間におけるＦＳＨ放出活性について、ＬＨ−ＲＨと本
発明の〔Ｄ−Ｔｒｐ６〕−ＬＨ−ＲＨとを比較すると著
しい差異が認められた。すなわち、ＬＨ−ＲＨ２．０の
ｏを鼻腔内投与して、放射線免疫試験法〔ダーレンら（
日．○．Ｄａｈｌｅｎｅｔａｌ）、ＨｏｎｎＭｅｔａｂ
．Ｒｅｓ．第６巻、５１０頁（１９７４）〕にてＦＳＨ
血清濃度を測定したところ、ほとんどまたは全く効果が
認められなかったのに対し、同条件にて本発明の〔Ｄ−
Ｔｒｐ６〕−ＬＨ−ＲＨＯ．５のｃ投与で著しい量のＦ
ＳＨ放出が認められた（すなわち、血清濃度は０．３〜
１．５仏／地であった）。ＦＳＨ放出能を有する化合物
が多くの治療に適用されうろことは明らかである（上記
ダーレンらの文献参照）。動物における排卵を誘引する
前記式〔１〕のべプチドのＬＨ−およびＦＳＨ−放出活
性により、該べプチドは家畜の飼育および放畜に有用で
ある。 たとえば、牛、羊、豚などの家畜類の発情を合せて、比
較的短期間内に、一定群の雌を所望の品種の雄とかけ合
せたり、また最大数の雌を人工的に受精させることがで
きる。従来、このような目的には、動物に排卵抑制剤を
与え、かけ合せまたは人工受精を行なうべき日の少し前
に該排卵抑制剤の投与を止め、ＬＨおよびＦＳＨを自然
に生じせしめるかまたはゴナドトロピンを投与してＬＨ
およびＦＳＨを生じさせて排卵の誘引または発情を起さ
せる方法が採用されているが、このような方法では、ゴ
ナドトロピンを用いないと、一定時期に全動物に排卵が
起らずある比率でのみ排卵が起るため充分な効果がえら
れない。一方、ゴナドトロピンは高価であるうえ副作用
も強く実用的でない。本発明の化合物を用いれば、排卵
および発情をほとんど完全に同時期に合せることができ
る。 すなわち、一定群の動物をまず排卵抑制剤で処理し、そ
の投与の中止後、所望のかけ合せおよび人工受精の時期
の少し前に式〔１〕のべプチドを与えると一定期間内に
排卵および発情が起る。べプチド投与後の排卵および発
情までの期間は動物の種類により変り、最適時期間隔は
各種類に応じて選ばれる。たとえば、ラットやハムスタ
ーなどの函歯類では、本発明のべプチド投与後１報時間
で排卵が起る。上記のような、かけ合せを確実にするた
めに特に正確な時期間隔で排卵および発情を起させる方
法は、レース用馬とかショウ動物などのように、特定の
雄動物に多額の費用を要する場合には、その畜産家にと
ってとくに重要である。 式〔１〕のべプチドはまた、牛、羊、豚などの家畜類の
妊娠当りの出産数の増加にも有用である。 この目的には、本べプチドを、発情およびかけ合せ前９
６〜１幼時間の間に、０．１〜仇ｈｃｇ／ｋ９／日の用
量で連続的に非経口投与、好ましくは静脈注射または皮
下注射する。このべプチド投与前１〜４日に、妊娠した
雌馬の血清ゴナドトロピン１０００〜５０００ｍをまず
注射してもよい。同様の処置（ゴナドトロピンの前処理
をほどこしてもほどこさなくてもよい）は、農場の動物
における発情期の誘引にも応用されうる。本発明の式〔
１〕のべプチドを、温血動物、ことにラット、ハムスタ
ーなどの蟹歯類および家畜類の排卵および発情の誘引ま
たは発情期の誘引に用いる場合には、薬理学的に許容し
うる液体または固体担体とともに全身的に、好ましくは
非経口的に、投与される。 べプチドの割合は、用いられる担体に対する溶解性、投
与方法、および標準的な生イｂ学的慣習などにより決定
される。非経口投与には、ベプチドを滅菌水溶液の形で
用いられ、これには緩衝剤、防腐剤、さらに等張にする
ための充分量の薬学的に許容しうる塩またはグルコース
などの他の溶質を加えてもよい。用量は投与形および処
理動物の種類などにより変るが、好ましくは、０．１〜
１０ｍｃｇ／ｋ９の濃度で用いられる。しかし、約１〜
約５ｍｃｇ／ｋ９の用量が有効な結果を与えるためにも
っとも望ましい。式〔１〕のべプチドはまた作用持続性
、徐放性またはデポ投与形態にて、好ましくは静脈注射
または移植により投与される。 そのような投与形では１日当り約０．１〜約１仇ｈｃｇ
の活性成分が放出されるようにする。式〔１〕のべプチ
ドは人間用医薬としても用いられる。 たとえば、人の繊毛膜ゴナドトロピン（ＨＣＧ）（主と
してＬＨを含み若干のＦＳＨも含む）が、女性における
周期異常、無月経、二次性数発育不全、不妊症などの内
分泌疾患、あるいは男性における性機能不全、発情遅延
、潜在幸丸症、非精神的不能症などの治療用に、３０王
以上も用いられている。近年、女性における不妊症を人
の閉経期におけるゴナドトロピン（ＨＭＧ）（主として
ＦＳＨを含む）で処理し、ついで、ＨＣＧで処理する方
法がとられている。このＨＣＧによるかまたはＨＭＧつ
いでＨＣＧによる女性の不妊症の治療法における欠点の
１つは、いまいま多排卵をもたらし多産の原因となるこ
とであり、それは排卵に必要なＦＳＨおよびＬＨの正確
な塁を与えることが困難であることに起因しているもの
であろう。本発明のべプチドを投与する場合には、この
化合物は正常な排卵に必要な正確な量のＬＨおよびＦＳ
Ｈのみが下垂体から放出されるようにするため、前記の
ごとき欠点が解消される。このため、本発明のべプチド
は、上記の目的のみならず、女性の周期異常、無月経、
性機能不全、二次性徴発育不全などにも同様に有用であ
る。さらに、本発明のべプチドは避妊にも用いうる。 たとえば、このべプチドを月経周期の初期に投与すると
、ＬＨが放出され、早期排卵が起り、その未熟卵は受精
しえないかまたは受精がまったく起らない。また子宮内
膜形成に必要なェストロジヱンープロゲスチンのバラン
スがないため子宮内膜が着床に必要な状態になく、受精
卵が着床することはほとんどありえない。一方、ベプチ
ドを周期の終りに投与すると、子宮内膜が破壊され月経
が起る。さらにまた、本発明のべプチドは、リズム法と
併用して避妊に用いてもよい。 リズム法は、女性の排卵を正確に予知することはほとん
ど不可能であり、本発明のべプチドの伴用はきわめて有
用である。周期の中間、すなわち、排卵が予想される時
期に、ベプチドを投与すると投与後短期間内に排卵が譲
発されリズム法を安全かつ有効に利用しうるようになる
。式〔１〕のべプチドはまた、女性における視床下部お
よび不華体の機能不全または顔患との区別をするための
診断用にも利用できる。 そのような機能不全または疾患を有する患者にべプチド
を投与したとき、ＬＨ濃度が上昇すると、その機能不全
が視床下部に起因し、下垂体は正常であることを示して
いる。一方、ベプチド投与で循環ＬＨの上昇が認められ
ない場合は、下垂体の機能不全または疾患であるとの診
断が下しうる。人の男性に式〔１〕のべブチドを与える
と、性機能不全または遅延発情の場合に正常な性的発達
に必要なＬＨ（またはＩＣＳＨ）およびＦＳＨの量が放
出され、また潜在塁丸症の治療にも有用である。 さらに、ベプチド投与によるＦＳＨ放出は精子の発育も
促がし、精神的または非精神的不能の治療にも有用であ
る。式〔１〕のべプチドを、好ましくは酸付加塩の形で
、人間用医薬として用いるときは、薬学的に許容しうる
賦形薬または担体との組成物として、全身的に、たとえ
ば静脈注射、皮下注射、筋肉注射、あるいは舌下、鼻腔
内または陣内投与する。 鼻腔内投与には、式〔１）のべプチドを滅菌水溶液とし
て点滴または頃蕗により与えられ、この溶液には、緩衝
剤、防腐剤、あるいは等張にするための薬学的に許容さ
れる塩類またはグルコースなども配合しうる。鼻腔内投
与における用量は０．１〜５肌ｃｇ／ｋ９、好ましくは
０．５〜１０ｍｃｇ／ｋ９の範囲である。式〔１〕のべ
プチドは、粉末またはガス注入法により鼻腔内または陣
内投与されうる。 この目的には、ベプチドを薬学的に許容しうる固体担体
、たとえば、ポリエチレングリコール（カルボワツクス
１鼠０）微粉末、ラクトース微粉末、あるいは陣内投与
用にはシリカ（カブーオウージル（Ｃａｂ−○−Ｓｉｌ
）極小微粉末などとともに微粉末の形で用いられる。こ
のような組成物は、防腐剤、緩衝剤、表面活性剤などの
他の賦形薬の固体微粉末を配合していてもよい。舌下ま
たは睦内投与には、式〔１〕のべプチドを、殿粉、ラク
トース、ある種のクレイ、緩衝剤、滑剤、崩壊剤、表面
活性剤などの他の固体賦形薬、あるし、は坐薬の処方に
通常用いられる半固体賦形薬などとともに、舌下錠、睦
挿入剤、坐薬などの固形投与剤形に処方するのが好まし
い。 そのような賦形薬の例は標準的な薬学書物（たとえば、
Ｒｅｍｊｎｇｏｎ′ｓ Ｐ的ｒｍ舷ｃｅｕｔｉｃａＩ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｎねｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏｍｐａｎｙ 、 Ｅａｓのｎ 、Ｐａ．１９７
０）に記載されている。式〔１〕のべプチドの用量は投
与剤形および治療すべき患者により変るが「一般に、治
療の初期は最適用量よりも少ない用量で行ない、ついで
少しずつ増量して最適効果が蓮せられる用量にする。 式〔１〕のべプチドは、一般に、有害な副作用が現われ
ることなくＬＨおよびＦＳＨの効果的な放出が行なわれ
る濃度で投与するのがもっとも好ましい。好ましくは、
約０．０１〜約１００ｈｃｇ／ｋ９の範囲である。しか
し、式〔１〕のべプチドのうち、【ａ’ Ｘ力ミＳｅｒ
、ＹカギＤ−Ｔｒｐ、Ｚ力ミＧＩｙ・ＮＨ２【ｂ】Ｘが
Ｓｅｒ、ＹがＤ−Ｔてｐ、ＺがＧＩｙ−ＮＨ２のものは
約０．５〜約５．仇ｈｃｇ／ｋ９の用量が、また

【Ｃ１
×がＤ−Ｓｅｒ、ＹがＤ−Ｌｅ止 ＺがＮＨＲ１のも
のは約０．１〜約１仇ｈｃｇ／ｋ９の用量が、有効な結
果をもたらすためにもっとも好ましい。式〔１〕のべプ
チドは、いよいよ、作用持続性、徐放性またはデポ剤形
にて長期間連用するのが好ましい。 そのような剤形には、体液への溶解性の低い化合物の薬
学的に許容しうる塩、たとえば、パーモ酸、タンニン酸
またはカルボキシメチルセルロースとの塩を含んでいて
もよく、あるいは、ベプチドの水落性塩を早期放出を防
ぐ保叢担体とともに含有させてもよい。後者の例として
は、たとえば、ベプチドを排抗原性のゼラチン部分加水
分解物とともに粘欄な液剤形に処方するか、ベプチドを
薬学的に許容しうる園体担体、たとえば水酸化亜鉛（プ
ロタミンを配合または非配合）に吸着させるか、または
べプチドを薬学的に許容しうる液体稀釈剤中に懸濁させ
て投与するか、あるいはまた、ベプチドを、非投原性の
保護ヒドロコロイド〔たとえば、カルポキシメチルセル
ロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、アルギン酸
ナトリウム、ゼラチン、ポリガラクツロン酸（ペクチン
など）、またはある種のムコポリサッカラィド〕および
水性または非水性の薬学的に許容される液体稀釈剤、防
腐剤または表面活性剤などとともにゲル剤または懸濁液
の形に処方してもよい。このような処方の例は、標準的
な薬学書（ た と え ば 、前 記Ｒｅｍｉｎ亀ｏ
ｎ′ｓＰｈａｒｎ憤ｃｅｕｔｉｃａＩＳｃｉｅＭｅｓ）
に記載されている。べプチドの作用持続性、徐放製剤は
、薬学的に許容される被覆剤、たとえば、ゼラチン、ポ
リビニルアルコール、エチルセルロースなどを用いてマ
イクロカプセル化してもえられる。このマイクロカプセ
ル化に用いる被覆剤およびその方法は、ハービツク〔Ｊ
．Ａ．Ｈｅｒｂｉｇ、“Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏ
ｆＣｈｅｍｉｃａＩＴｅｃｈｎｏｌｏ期”、Ｗｉｌｅｙ
、ＮｅｗＹｏｒｋ、第筋蓋、第２版、１９６７、４３６
〜４５６頁〕に記載されている。このような製剤および
体液に易溶性のべプチド塩の懸濁液においては、その活
性成分が約０．１〜約５仇ｈｃｇ／ｋｇ／日の範囲で放
出されるように処方される。これらの製剤は、筋肉注射
による投与が好ましい。また、前記の投与形態のうち固
形のもの、たとえば、ベプチドの易溶性塩、またはべプ
チド塩を固体坦体に分散または吸着させたもの〔たとえ
ば、エチレングリコールメタクリレート重合体または類
似のモノマー架橋物（米国特許第３５５１５５６号三１
９７０年１２月２９日発行、クラィメントら（Ｋ．Ｋｌ
ｉｍｅｎｔｅｔａｌ）所有に記載）のナチュラルヒドロ
ゲル中に分散したものを〕を、上記と同用量でべレット
形に処方してもよく、それは皮下または筋肉に移植して
用いられる。 さらに、長期間にわたって徐々に放出して効果を発揮さ
せるために、ベプチドを酸付加塩の形で陣内挿入器また
は一時的移植器に入れて投与してもよい。 たとえば、非刺戟性のシリコンポリマー、たとえばポリ
シロキサン〔シラステイツク（Ｓｉｌａｓｔｊｃ）など
〕または前記のポリマーのナチュラルヒドロゲルなどか
ら作られ、ベブチドを約０．１〜約５０ｈｃｇ／ｋｇ／
日放出しうる透過性を有する容器が用いられる。そのよ
うな持続性投与用の陣内挿入用または移植用の投与形態
は、治療を中断または中止したときにいつでも除きうる
という利点を有する。つぎに本発明のべプチドの製法に
ついて説明する。 本発明の式〔１〕のべプチド合成に用いられる特定の側
鎖保護基の選択に当ってはつぎの条件を満たすことが必
要である。：‘１１その保護基は合成の各工程で用いら
れる反応剤に対し、またＱーアミノ保護基離脱条件下で
安定であること、【２１ その保護基は保護機能を有す
ること、すなわちカップリング条件下で開裂を起さない
こと、糊 その側鎖保護基は、所望のアミノ酸配列を有
するべプチド合成が完了したのち、ベプチド鎖を変えな
い反応条件下に離脱されうろこと。 Ｒ９に適したＱ−アミノ保護基としては、‘１）ｔ−プ
チルオキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボ
ニル、ビフエニルイソプロピルオキシカルボニル、イソ
プロピルオキシカルボニル、ｔーアミルオキシカルボニ
ル、エトキシカルボニルアリルオキシカルボニルなどの
脂肪族ウレタン保護基、‘２ーシクロベンチルオキシカ
ルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、ｄーイソボ
ルニルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボ
ニル、ニトロフエニルスルフエニル、トリチルスルフエ
ニル、Ｑ・Ｑ−ジメチルー３・５ージメトキシベンジル
オキシカルボニル、トリチルなどのシクロアルキルウレ
タン系保護基などが挙げられる。Ｒ９の好ましいＱ−ア
ミノ保護基は、ｔーフチルオキシカルボニル、シクロベ
ンチルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル
、ｄーイソボルニルオキシカルボニル、ｏ−ニトロフエ
ニルスルフエニル、ビフエニルイソプロピルオキシカル
ボニルおよびＱ・Ｑ−ジメチルー３・５−ジメトキシベ
ンジルオキシカルボニルである。本発明の式〔１〕のべ
プチドは固相法にて製造され、以下、特定のべプチドに
したがって説明する。式〔１〕のべプチド【ａ｝および
｛ｂ｝の製造｛ａ）ＸがＳｅｒ、ＹがＤ−Ｔｒｐ、Ｚが
ＧＩｙ−ＮＨ２・‘ｂ’ＸがＳｅｒ、ＹがＤ−Ｐｈｅ、
ＺがＧＩｙ−Ｎ比このポリベプチド‘ａ｝および｛ｂ｝
の固相合成は、Ｑ−アミノ保護樹脂を用い、Ｃ末端から
開始する。 該出発物質は、Ｑーアミノ保護グリシンをベンツヒドリ
ルアミン樹脂、クロロメチル化樹脂またはヒドロキシメ
チル樹脂（前者が好ましい）に結合させて調製される。
ベンツヒドリルアミン樹脂の製法は１」ベールら〔Ｐ．
Ｒｉｖａｍｅｅｔａｌ、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ
、第５４豊、２７７２頁（１９７１）〕に、ヒドロキシ
メチル樹脂の製法は、ボタンツキィら〔Ｍ．Ｂ０ｄａｍ
ｚｋｙ ＆ Ｊ．Ｔ．Ｓｈ−ｅｅｈａｎ、Ｃｈｅｍ．
ｌｎｄ．（山ｎｄｏｎ）、第斑巻、１５９７頁（１９６
６）〕に記載されている。クロロメチル化樹脂はバイオ
・ラツド・ラボラトリイズ（ＢｉｏＲａｄ 仏ｂｏぬｔ
ｏｒｉｅｓＲｉｃｈｍｏｎｄ、Ｃａｌｉｆｏｍｉａ）か
ら市販されている。ベンツヒドリルアミン樹脂を用いる
場合、つぎのごとき、Ｑ−アミ／保護グリシンとでアミ
ドアンカー結合が形成される。この場合、所望のアミノ
酸配列が完了したのち、ベプチド‘こ連続した樹脂坦体
を開裂させることにより、直接、所望のデカベプチドの
Ｃ末端にグリシンアミドが形成される。 この樹脂担体の開裂にはフツ化水素が用いられ、この場
合、側鎖保護基も除去されて対する式〔１〕のデカベプ
チド（式中、‘ａ｝ＸがＳｅｒ、ＹがＤ−Ｔｒｐ、Ｚが
ＧＩｙ−Ｎ比、または（ｂ）ＸがＳｅｒ、ＹがＤ−Ｐｈ
ｅ、ＺがＧＩｙ−Ｎ比）、が得られる。他の樹脂を用い
る場合は、アンカー結合は前記のごとくペンジルェステ
ル基である。 この場合、連結した保護べプチドをＣ末端アミドのもの
に変換する好都合の方法は、その保護べプチドをアンモ
ノリシスに付して樹脂を除き、ついでえられたアミドの
保護基をナトリウムまたは液体アンモニアで処理するか
、フッ化水素による開裂に付して離脱させる方法である
。別法として、トリェチルアミンの存在下、低級アルカ
ノール、好ましくはメタノールまたはエタノールでェス
テル変換反応に付して開裂させ、ついでえられたェステ
ルをアミドに変えたのち前記の保護離脱を行なう〔スチ
ユアートら（Ｊ．Ｍ．Ｓｔｅｗａ比 ＆ Ｊ．Ｄ．Ｙｏ
皿ｇ）、“Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ
Ｓｙｎ仇ｅｓｉｓ ”、 Ｗ．日．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆
Ｃｏ．、ＳａｎＦｍｃｉｓｃｏ、１９６９ ４０〜４
９頁を参照〕。さらに具体的な態様では、ｑ−アミノ保
護グリシン（好ましくはｔーブチルオキシカルボニルグ
リシン）を、カルボキシル基活性化化合物（好ましくは
ジシクロヘキシルカルボジイミド）の存在下にベンツヒ
ドリルアミン樹脂と結合させる。 このＱーアミノ保護グリシンの樹脂担体へのカップリン
グののち、そのＱーアミノ保護基は、メチレン中トリフ
ルオロ酢酸、トリフルオロ酢酸単独またはジオキサン中
塩酸を用いて離脱させる。その脱保護基は０℃から室温
にて行なわれる。このＱ−アミノ保護基を離脱するため
の他の標準的な開裂剤および条件は、シュローダ−ら〔
Ｅ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ ＆ Ｋ．Ｌｕｂｋｅ、“ｍｅＰ
ｅｐｔｉ舵ｓ’、第１巻、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅＳＳ
、ＮｅｗＹｏｒｋ、１９６５、７２〜７５頁〕に記載さ
れている。 Ｑーアミノ保護基を離脱させたのち、所望のＱ−アミノ
保護アミノ酸類を所望の順序に段階的にカップリングさ
せて目的とするべプチドをうる。 各保護アミノ酸は３倍過剰量を固相反応器中に加え、メ
チレンクロリドまたはメチレンクロリドとジメチルホル
ムアミドの混合溶媒中でカップリングを行なわせる。カ
ップリング反応が不完全に行なわれた場合には、つぎの
アミノ酸をカップリングさせる前で、Ｑーアミノ保護基
の離脱をする前にそのカップリング操作を繰返して行な
う。各工程でカップリング反応がうまく行なわれたか否
かは、ニンヒドリン反応により検査する〔ＥＫａｉｓｅ
ｒｅｔａｌ、ＡｎａｌＸ．Ｂｉ比ｈｅｍ．、第３年萱、
５９５頁（１９７０）〕。 所望のアミノ酸配列が完了したときは、該樹脂および全
側鎖保護基ならびにベンツヒドリルアミン樹脂を用いた
場合にはピログルタミン酸残基上のＱ−アミノ保護基を
開裂しうるフッ化水素などの試薬で該べプチドを処理し
て樹脂損体から離脱させて直接前記式〔１〕、‘ａ｝お
よび‘ｂ）のべプチドをうる。 クロロメチル化樹脂を用いた場合は、該べプチドを低級
アルカノール（好ましくはメタノールまたはエタノール
）を用いてェステル交換反応に付して樹脂から離脱させ
、ついでえられた生成物をシリカゲルクロマトグラフィ
に付し、集めたフラクションをアンモニアで処理してそ
の低級アルキルェステル（好ましくはメチルまたはエチ
ルェステル）をＣ末端ァミドに変換する。 その側鎖保護基は前記の方法、たとえば液体アンモニア
中ナトリウムで処理するかフツ化水素で処理して、離脱
される。ヒスチジンのィミダゾ−ル窒素の保護基Ｒ７と
しては、前記のものに加えて、２・２・２ートリフルオ
ロー１ーベンゾイルオキシカルボニルアミノエチルおよ
び２・２・２ートリフルオロー１一ｔ−ブチルオキシカ
ルボニルアミノェチルが挙げられる。 式〔１）のべプチド‘ｃ｝の製造 ｔＣ１ ×がＤ−Ｓｅｒ、ＹがＤ−ＬｅリＺがＮＨＲＩ
式〔１〕のべプチド（式中、ＸがＤ−Ｓｅｒ、ＹがＤ−
仏ｕ、ＺがＮＨＲＩ）の固相合成法は、Ｑ−アミノ保護
プロリン樹脂を用いてべプチドのＣ末端から開始する。 その出発物質はＱ−アミ／保護プロリンをクロロメチル
イ〇鞍脂またはヒドロキシメチル樹脂（前者が好ましい
）に結合させて製造される。ヒドロキシメチル樹脂の製
法はポダンツキイら〔Ｍ．８幻ａ船ｚｋｙ ＆ Ｊ．Ｔ
．Ｓｈｅｅｈａｎ、Ｃｈｅｍ．ｌｎｄ．（山ｎｄｏｎ）
、第＄巻、１５９７頁（１９６６）〕に記載されている
。クロロメチルイけ樹脂はバイオ・ラツド・ラボトリー
ズより市販されている。クロロメチルイリ樹脂を用いた
場合、Ｑーアミノ保護プロリンと、つぎのごとき、ェス
テルアンカー基が形成される：その連結した保護べプチ
ドをＣ末端低級アルキルァミドーこ変換する好ましい方
法は、それを低級アルキルアミンで処理し〔コイら（Ｄ
．日．Ｃｏｙｅｔａｌ）、Ｂｉ比ｈｅｍ．ＢｉｏＰｈｙ
ｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ肌．、第５７巻、３３５頁（１９
７４）を参照〕、保護べブチドを樹脂から離脱させて対
応する保護べプチド低級アルキルアミドとする方法であ
る。 このものは、ついで、液体アンモニア中ナトリウムで処
理するか、好ましくはフッ化水素で処理して、該べプチ
ド低級アルキルアミドの保護基を離脱させて対応する式
〔１〕【ｃ｝のべプチドをうる。別法として、保護基べ
プチドを低級アルカノール（好ましくはメタノールまた
はエタノール）とトリェチルアミンの存在下ヱステル交
換反応に付し、ついで得られたェステルを対応する低級
アルキルァミドに変換させ、さらに、前記のごとく保護
基離脱に付す〔スチユワートら（Ｊ．Ｍ．Ｓｔｅｗａｎ
＆ Ｊ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ）、‘‘Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａ
ｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”、 Ｗ．
日．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃ
ｉｓｃｏ、１９６９、４０〜４９頁を参照〕。より具体
的な態様では、Ｑーアミノ保護プロリン、好ましくはｔ
−ブチルオキシカルボニルプロリンを、触媒（好ましく
は重炭酸セシウムまたはトリヱチルアミン）の存在下、
クロロメチル化樹脂にカップリングさせ、ついでこれを
、たとえば、塩化メチレン中トリフルオロ酢酸、トリフ
ルオロ酢酸単独またはジオキサン中塩酸にて処理してＱ
−アミノ保護基を離脱させる。 この保護基鰍脱は約０℃から室温にて行なう。このＱ−
アミノ保護基の離脱に用いる標準的な開裂剤および条件
はシュｏ‐ダ‐ら〔Ｅ．Ｓｃｈｒのｅｒ ＆ Ｋ．
Ｌｕｂｋｅ、“Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”、第１巻、
ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、１９６
ふ ７２〜７５頁〕に記載されている。このＱーアミ／
保護基離脱後、残りのＱーァミノ保護アミノ酸を所望の
順序にて段階的にカップリングさせて式〔１〕｛ｃ｝の
べプチドを得る。各保護アミノ酸は約３倍過剰量で固相
反応器中に導入し、塩化メチレンまたはジメチルホルム
アミドと塩化メチレン混合溶媒中でカップリングさせる
。カップリングが不完全に行なわれた場合には、つぎの
アミノ酸を固相反応器中でカップリングを行なうに先だ
って、Ｑ−アミノ保護基離脱前に該カップリング操作を
繰返す。各合成工程におけるカップリングの完成はニン
ヒドリン反応により調べる〔カイザーら（Ｅ．Ｋａｉｓ
ｅｒｅｔａｌ）、抑ａＭ．Ｂ■ｈｅｍ．、第３４巻、５
９５頁（１９７０）を参照〕。所望のアミノ酸配列がえ
られたのち、低級アルキルアミンで処理して保護べプチ
ドを樹脂担体から離脱させて対応する保護べプチド低級
アルキルアミンをうる。 ヒスチジル基の保護基としてジニトロフェニルまたはト
シルを用いた場合には、そのジニトロフェニルまたはト
シル保護基は該低級アルキルアミンでの処理中に離脱さ
れる。このべプチドは、低級アルカノール（好ましくは
メタ／ールまたはエタノール）でェステル交換反応に付
して樹脂から離脱させてもよく、その生成物は、ついで
、シリカゲルクロマトグラフイに付して精製し、集めた
フラクションを低級アルキルアミンで処理してその低級
アルキルェステル（好ましくはメチルまたはエチルェス
テル）をＣ末端低級アルキルァミドに変換させる。（こ
の場合、ヒスチジル基上にジニトロフェニルまたはトシ
ル基があれば、それも関裂される）。この保護アルキル
アミド（たとえば、エチルアミド）の残りの側鎖保護基
は前記の方法により、たとえば、液体アンモニア中ナト
リウムあるいはフッ化水素で処理して、脱保護基され所
望の式〔１〕【ｃーのノナベプチドを得る。つぎに実施
例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。 実施例 １ Ｌーピログルタミル−Ｌ−ヒスチジル（トシル）一Ｌー
トリプトフイル−Ｌ−セリル（ベンジル）一Ｌ−チロシ
ル（２ーブロモベンジルオキシカルボニル）一Ｄートリ
プトフイルーＬ−ロイシルーＬーアルギニル（トシル）
一Ｌープロリルグリシルベンズヒドリルアミン樹脂（Ｒ
８一（ｐｙｒｏ）−ＣＩｕ−Ｈｉｓ−（Ｎ１ｍ−Ｒ７）
−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（Ｒ６）一ＴＭ（Ｒ５）−Ｄ−Ｔｒｐ
−Ｌｅｕ−〜ｇ（ＮＧ−Ｒ４）−Ｐｒｏ−ＧＩｙ−Ａ；
Ｒ４＝Ｔｏｓ、Ｒ５＝２−Ｂｒ−Ｃｂ２、Ｒ８＝Ｂｚｌ
、Ｒ７＝Ｔｏｓ、Ｒ６＝日、Ａ＝ペンズヒドリルアミン
樹脂）ペンズヒドリルアミン樹脂１．２５夕（１．０ミ
リモル）を、つぎの洗練工程をプログラムしたべツクマ
ン・モデル（茂ｃｋｍａｎＭのｅｌ）９９０目動べプチ
ド合成応器に入れる：｛ａ｝塩化メチレン、【ｂー塩化
メチレン中３３％トリフルオロ酢酸（２回、各々、２．
５分間、ついで２３分間）、‘ｃ）塩化メチレン、‘ｄ
’エタノール、【ｃ｝クロロホルム、的クロロホルム中
１０％トリェチルアミン（各２母分間、２回）、（ｇ）
クロロホルム、（ｈ）塩化メチレン、にて洗糠。 ついで洗練した樹脂を塩化メチレン中でｔ−フチルオキ
シカルボニルグリシン５２５のｏ（３．０モル）と振と
うし、ジシクロヘキシルカルボジィミド（３．０モル）
を加える。該混合物を室温（２２〜２５℃）で２時間振
とうし、このアミノ酸樹脂を塩化メチレン（３回）、エ
タノール（３回）および塩化メチレン（３回）で連続的
に洗縦する。ついで、塩化メチレン中３３％トリフルオ
ロ酢酸（各２．５分ついで２５分、２回）で結合したア
ミノ酸の脱保護を行ない、さらに前記‘ｃー〜（ｈ）の
洗練工程を行なう。ついで、以下のアミノ酸（３．０モ
ル）を同様な工程で連続的にカップリングさせる：ｔ−
＆ｃ−Ｌープロリン：ｔ一Ｂ比‐Ｌ−アルギニン（Ｔｏ
ｓ）；ｔ一Ｂ比一Ｌーロイシン；ｔ一Ｂｏｃ−Ｄートリ
プトフアン；ｔ−Ｂ比一Ｌーチロシン（２一Ｂｒ−Ｃｂ
ｚ）、ｔ一Ｂ比一Ｌーセリン（Ｂｚｌ）、ｔ一Ｂｏｃ−
Ｌートリプトフアン、ｔ一ＢＣｃ−Ｌ−ヒスチジン（Ｔ
ｏｓ）、Ｌ一（ｐｙｒｏ）ーグルタミン酸。 この完成したデカベプチド樹脂を塩化メチレンで３回、
ついでメタノールで３回洗練し、減圧下に乾燥して理論
上の収量９８％を得た。 この実施例で用いられたペンズヒドリルアミン樹脂は市
販されているもの（１％架橋、ＢａＣｈｅｍＩｎｃ．、
ＮねｒｉＭｄｅＩＲｅｙ、Ｃａｌ船ｒｎｉａト以下同じ
）である。 実施例 ２ Ｌ−ピログルタミルーＬーヒスチジル−Ｌートリプトフ
イルーＬーセリル−Ｌーチロシル−Ｄートリプトフイル
ーＬ−ロイシル−Ｌ−アルギニルーＬ−ピロリルグリシ
ンアミド〔１〕；Ｘ＝Ｓｅｒ、Ｙ ＝ Ｄ −Ｔｒｐ、
Ｚ ＝ＧＩｙ−ＮＨ２〔（ｐｙｒｏ）−ＧＩｕ一日ｉ
ｓ一Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−戊ｕ‐Ａｒ
ｇ‐Ｐｒｏ‐Ｇｌｙ−ＮＨ２〕前記実施例１の保護基の
除去およびデカベプチド樹脂からデカベプチドの開裂を
、フッ化水素（２４叫）およびアニソール（６私）で該
物質１．０夕を０００、３０分間処理して行なう。 フッ化水素を減圧下に除去し、アニソールを酢酸エチル
で洗練して除去する。粗べプチドをセフアデックスＧ−
２５（細かいグレード、化学的に変化させた架橋デキス
トラン）のカラム（２．５×１０瓜ネ）上でゲル炉過に
付し、２モル酢酸で熔出させ、２８仇ｍにＵＶ吸収ピ−
クを有するものの大部分を含むフラクションをブールし
、蒸留乾固して精製する。 この油状残澄を、ｎープタノール−酢酸−水（４：１：
５）の溶媒系の下層、ついで上層で平衡させたセフアデ
ツクスＧ−２５（ファイン）カラム（２．５×１０比か
）にのせ、該溶媒の上層で溶出させてピークフラクショ
ンを得、このフラクションの物質を、ディー・エイチ・
コィら〔Ｄ．日．Ｃｏｙｅｔａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅ
ｍ．、１虎登、１１４０頁（１９７３手）〕の条件に従
ってカルボキシメチルセルローズカラム（１．４×斑弧
）から溶出させる。 相当するフラクション（１０５０〜１１９０机）を恒量
に凍結乾燥して白色わた状粉末（８０の夕）Ｄ‐Ｔｒｐ
６一ＬＨ−ＲＨを得た。〔Ｑ〕費一５８．８ｏ（ｃ＝０
．３入 ＩＮＨＯＡｃ）。この生成物は４つの溶媒系を
用い、試料量２０〜３肌ｃｇ、ヨウ素蒸気、っも、でェ
ルリッヒ（Ｅｈｒｌｉｃｈ）試薬でスポットを検出する
薄層クロマトグラフィーに付したところ均一であった。
Ｒｆ値は次の通りである：１ープタノール：酢酸：水（
４：１：５上層）「０．２５、酢酸エチル：ピリジン：
酢酸：水（５：５：１：３）、０．６〆 ２ープロパノ
ール：ＩＭ酢酸（２：１）、０．斑、１ーブタノール：
酢酸、水：酢酸エチル（１：１：１：１）、０．５１。 アミノ酸分析はつぎのとおりである。：ＧＩｕ、１．雌
；Ｈｉｓ、０．９５；Ｔｒｐ、２．００：Ｓｅｒ、０．
９４；Ｔｙｒ、０．９７：じｕ、０．＄；Ａｒｇ、０，
９Ｌ Ｐｒｏ、１，００；ＧＩｙ、１．０２；ＮＨ３、
１．０３実施例 ３ ＬーピログルタミルーＬーヒスチジル（トシル）一Ｌー
トリプトフイル−Ｌーセリル（ベンジル）一Ｌーチロシ
ル（２ーブロモ−ペンジルオキシカルボニル）一Ｄーフ
エニルアラニル−Ｌ−０イシルーＬ−アルギニル（トシ
ル）−Ｌ−プロリルグリシルベンズヒドリルアミン樹脂
（Ｒ８−（ｐＭｏ）−ＧＩｕ一日ｉｓ−（Ｎ１ｍ−Ｒ？
）Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（Ｒ６）−ＴＭ（Ｒ５）一Ｄ一Ｐｈｅ
一Ｌｅｕ一Ａね（ＮＧ−Ｒ４）−Ｐｒｏ−ＧＩｙ−Ａ：
Ｒ４＝Ｔｏｓ、Ｒ５＝２−Ｂｒ−Ｃｂｚ、Ｒ６＝Ｂｚｌ
、Ｒ７＝Ｔｐｓ、Ｒ８＝日、Ａ＝ペンズヒドリルアミン
樹脂）ペンズヒドリルアミン樹脂１．２５夕（１．０モ
ル）を、次の洗糠工程をプログラムしたべツクマン・モ
デル９９０目敷べプチド合成反応器に入れる：‘ａ｝塩
化メチレン、‘ｂー塩化メチレン中３３％トリフルオロ
酢酸（２回、各々２．５分間ついで２５分間各１回）；
‘ｃ｝塩化メチレン；‘ｄーェタノール；‘ｅ｝クロロ
ホルム；Ｍクロロホルム中１０％トリェチルアミン（２
５分間づつ２回）；（ｇ）クロロホルム；（ｈ）塩化メ
チレンｏ洗練した樹脂を塩化メチレン中でｔ−ブチルオ
キシカルボニルグリシン５２５のｃ（３．０モル）と蝿
拝し、ジシクロヘキシルカルボジイミド（３．０モル）
を加える。 該混合物を室温（２２〜２５ｏｏ）で２時間振とうし、
ついでアミノ酸樹脂を塩化メチレン（３回）、エタノー
ル（３回）および塩化メチレン（３回）で連続的に洗糠
する。ついで、塩化メチレン中３３％トリフルオロ酢酸
（２回、各々、２．８分ついで２５分）で結合したアミ
ノ酸の脱保護を行ない、さらに前記｛ｃ｝〜（ｈ）の洗
総工程を行なう。ついで、以下のアミノ酸（３．０モル
）を同様な工程で連続的にカップリングさせる：ｔ−Ｂ
Ｘ−Ｌープロリン；ｔ一ＢＭ−Ｌ−アルギニン（Ｔｏｓ
）、ｔ−ＢＭ−Ｌーロイシン；ｔ−ＢＭ−Ｄ−フエニル
アラニン；ｔ−Ｂｏｃ−Ｌーチロシン（２一Ｂ【一Ｃｂ
ｚ）；ｔ一Ｂ比−Ｌーセリン（Ｂｚｌ）；ｔ一８に−Ｌ
ートリプトフアン；ｔ一Ｂに−Ｌーヒスチジン（Ｔｏｓ
）；Ｌ一（ＰＭｏ）ーグルタミン酸。 この完成したべプチド樹脂を塩化メチレンで３回、つい
でメタノールで３回洗淡し、減圧下に乾燥して論理上の
収量１００％を得た。 この実施例で用いたペンズヒドリルアミン樹脂も市販の
ものである。 実施例 ４ Ｌ−ピログルタミルーＬーヒスチジルーＬートリプトフ
イル−ＬーセリルーＬーチロシルーＤ−フエニルアラニ
ル−Ｌーロイシル−ＬーアルギニルーＬープロリルグリ
シンアミド〔１〕；Ｘ＝Ｓｅｒ、Ｙ＝Ｄ−Ｐｈｅ、Ｚ＝
ＧＩｙ−ＮＨ２〔（ｐｙｒｏ）−ＧＩｕ一日ｉｓ−Ｔｒ
ｐ−Ｓｅｔ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−〜ｇ−Ｐｒ
ｏ−ＧＩｙ−Ｎ比〕前記実施例３の保護基の除去および
デカベプチド樹脂からデカベプチドの開裂を、フッ化水
素（２４の‘）およびアニソール（６の【）で該物質１
．０夕を０００、３び分間処理して行なう。 フッ化水素を減圧下に除去し、アニソールを酢酸エチル
で洗糠して除去する。粗べプチドをセフアデツクスＧ−
２５（細かいグレード、化学的に変化させた架橋デキス
トラン）のカラム（２．５×１００肌）上でゲル炉過に
付し、２モル酢酸で溶出させ、２８仇仇にＵＶ吸収ピー
クを有するものの大部分を含むフラクションをプールし
、蒸留乾固して精製する。 この油状残澄をｎ−ブタノールー酢酸−水〔４：１：５
〕の溶媒系の下層、ついで上層で平衡させたセフアデツ
クスＧ一２５（ファイン）カラム（２．５×１０比１）
にのせ、該溶媒の上層で溶出させてピークフラクション
を得、このフラクションの物質をプールして渡縦乾固す
る。 残澄を０．州酢酸で凍結乾燥して白色わた状粉末（１斑
の３）の〔Ｄ一Ｐｈｅ６〕−ＬＨ−ＲＨを得る。〔Ｑ〕
色５−５７．５ｏ（ｃ＝０．５う ０．１ＮＨＯＡｃ）
。この生成物は４つの溶媒系を用い、試料量２０〜３比
ｈｃｇ、ヨウ素蒸気、ついでェルリツヒ試薬でスポット
を検出する薄層クロマトグラフィーに付したところ均一
であった。 Ｒｆ値はつぎの通りである：１ーブタノール：酢酸：水
（４：１：５上層）、０．１４；酢酸メチル：ピリジン
：酢酸：水（５：５：１：３）、０．斑；２ープロパノ
ール：ＩＭ酢酸（２：１）、０．４１：１ープタ／ール
：酢酸：水：酢酸エチル（１：１：１：１）、０．４７
。 アミノ酸分析はつぎのとおりである。：ＧＩｕ、１．０
１；Ｈｉｓ、０．９７；Ｔｔｐ、０．９０；Ｓｅｔ、０
．班、Ｔｙ【、１．００；Ｐｈｅ、０．９６：Ｌｅｕ、
１．００：Ａｒｇ、１．０２：Ｐｒｏ、０．９５：ＧＩ
ｙ、１．００；ＮＨ３、１．００。実施例 ５Ｌーピロ
グルタミルーＬ−ヒスチジル（ジニトロフエニル）一Ｌ
ートリプトフイルーＤーセリル（ベンジル）一Ｌ−チロ
シル（２ーブロモベンジルオキシカルポニル）一Ｄーロ
イシルーＬ−０イシルーＬーアルギニル（トシル）−Ｌ
−プロリルー○−Ｃ弘一樹脂；Ｒ８−（ｐｙｒｏ）−０
１ｕ−Ｈｉｓ（Ｎ１ｍ一Ｒ７）Ｔｒｐ−Ｄ−Ｓｅｒ（Ｒ
６）−Ｔｙｒ（Ｒ５）−Ｄ−Ｌｅｕ−じｕ−Ａ【ｇ（Ｎ
Ｇ−Ｒ４）−Ｐｒｏ一Ａ′；Ｒ４＝Ｔｏｓ、Ｒ５ニ２一
Ｂｒ一Ｃ舷、Ｒ８＝Ｂｚｌ、Ｒ７＝Ｄｎｐ、Ｒ８＝日、
式： で表わさ れる８×ープロリン１．４０夕（０．５モル）を、次の
洗練工程をプログラムしたべックマン・モデル９９０目
動べプチド合成 反応器に入れる：‘ａー塩化メチレン
；（ｂ｝塩化メチレン中３３％トリフルオロ酢酸（２回
、２．５分間ついで２５分間）；【ｃ｝塩化メチレン；
‘ｄ】エタノール：

【ｅ｝クロロホルム：｛ｆ】塩化メ
チレン中１０％トリェチルアミン（５分間、２回）：（
ｇ）クロロホルム；（ｈ）塩化メチレン。 洗糠した樹脂を塩化メチレン中でｔーブチルオキシカル
ボニルートシルーアルギニンー６４５雌（１．５モル）
と燈拝し、ジシク。へキシルカルボジィミド（１．５モ
ル）を加える。該混合物を室温（２２〜２５ｏｏ）で２
時間振とうし、ついでアミノ酸樹脂を塩化メチレンで３
回連続的に洗練する。ついで、塩化メチレン中３３％ト
リフルオロ酢酸（２回、各々、２．５分ついで２３分間
）で結合したアミノ酸の脱保護を行い、さらに前記洗糠
工錘ｃ｝から（ｈ）までを行なう。ついで、以下のアミ
ノ酸（１．５モル）を同様の工程で連続的にカップリン
グさせる。 ：ｔ−Ｂ比一Ｌ−口イシン；ｔ一Ｂ比一Ｄ−○イシン；
ｔ一ＢＸーチロシン（２一Ｂｒ−Ｃｂｚ）；ｔ一ＢＭ−
Ｄ−セリン（Ｂｚｌ）；ｔ−Ｂ比−Ｌートリプトフアン
；ｔ−Ｂ比−Ｌ−ヒスチジン（Ｄｎｐ）；Ｌ−（ｐのｏ
）−グルタミン酸。この完成したノナベプチド樹脂を塩
化メチレンで３回、ついでメタノールで３回洗総し、減
圧下に乾燥して理論上の収量９６％を得た。 この実施例で用いたプロリン樹脂は市販のクロロメチル
化樹脂（１％架橋、ＢｉｏＲａｄＬａ広、Ｒｉｃｈｍｏ
肘、Ｃａｌｉｆｏｍｉａ）である。 実施例 ６Ｌ−ピログルタミル−ＬーヒスチジルーＬ−
トリプトフイルーＤーセリル（ベンジル）−Ｌ−チロシ
ル（２−フロモベンジルオキシカルボニル）−Ｄ−ロイ
シル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アルギニル（トシル）一Ｌー
プロリルエチルアミン、Ｒ８一（ｐｙｒ○）一ＧＩｕ一
日ｉＳ−Ｔｒｐ一Ｄ一Ｓｅｒ（Ｒ６）−ＴＭ（Ｒ５）−
Ｄ−じｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−（ＮＧ−Ｒ４）−Ｐｒｏ−
ＮＨＲＩ：Ｒ４＝Ｔｏｓ、Ｒ５＝２−Ｂｒ−Ｃ舷、Ｒ６
＝弦１、Ｒ８＝日、ＲＩ＝Ｃ２氏前記実施例５の保護ノ
ナベプチド樹脂２．１６夕を０℃でエチルアミン２０泌
中に懸濁させ、６時間振とうする。 過剰のエチルアミンを室温で蒸発させ、ついで開裂した
べプチドをジメチルホルムアミドで樹脂から洗練する。
この保護べプチドは酢酸エチルを加えることにより沈殿
し、炉過してクリーム色粉末６７２脚を得る。１−プタ
ノール：酢酸：水（４：１：５）のシリカゲル上のＲｆ
値は０．４５である。 該物質は精製せずに実施例７において使用する。実施例
７ Ｌ−ピログルタミルーＬーヒスチジル−Ｌ−トリプトフ
イル−Ｄ−セリルーＬ−チロシル−Ｄ−ロイシル−Ｌー
ロイシル−ＬーアルギニルーＬ−プ。 リルエチルアミド〔１〕；Ｘ＝Ｓｅｒ、Ｙ〒Ｄ−Ｌｅｕ
、Ｚ＝ＮＨＥｔ〔（ｐｙｒｏ）−ＧＩｙ−Ｈｉｓ−Ｔｒ
ｐ−Ｄ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−〜ａ−
Ｐｒｏ‐Ｎ皿〕フッ化水素（５０の‘）およびアニソー
ル（１５の）で該物質６７０岬を０℃で３０分間処理す
ることにより、実施例６の保護べプチドからの保護基の
除去を行なう。 フッ化水素を減圧下に除去後、エーテルで洗総してアニ
ソールを除く。粗べブチドをセフアデツクスＧ−２５（
細かいグレード、化学的に変化させた架橋デキストラン
）のカラム（２．５×１０比汎）上でゲル炉過に付し、
２モル酢酸で溶出させ、２８仇肌にＵＶ吸収を有するも
のの大部分を含むフラクションをプールし、蒸発乾固し
て精製する。 この油状残澄を、２ーブタノールー酢酸−水（４：１：
５）の溶媒系の下層、ついで上層で平衡させたセフアデ
ツクスＧ−２５（ファイン）カラム（２．５×１０比ネ
）にのせ、該溶媒の上層で溶出させてＵＶ吸収ピーク２
８仇肌を示すピークフラクションを得、このフラクショ
ンの物質をシリカゲルのカラム（１．５×９４仇）でク
ロマトグラフイ−に付し、１−ブタノール：酢酸：水（
４：１：１）の混合物で溶出させる。 相当するフラクション（３００〜３９０の‘）を水から
恒量に蒸発凍結乾燥して白色わた状粉末の〔０−Ｓｅｒ
４、Ｄ−Ｌｅｕ６、ｄｅｓＧ１ｙ−ＮＨ２１０〕一ＬＨ
−ＲＨ、エチルアミン１０３の９を得る。；〔Ｑ〕も３
＝−２９．６ｏ（ｃ＝０．５４、０．１ＮＨＯＡｃ）。
この生成物はシリカゲル上で、４つの溶媒系を用い、試
料量２０〜３肌ｃｇ、ヨウ素蒸気、ついでェルリッヒ試
薬でスポットを検出する薄層クロマトグラフィーに付し
たところ均一であった。 Ｒｆ値は次の通りである。１−ブタノール：酢酸：水（
４：１：５上層）、０．２０：酢酸エチル：ピリジン：
酢酸：水（５三５：１：３）、０．７２；２ープロパノ
ール：ＩＭ酢酸（２：１）、０．４３；１−ブタノール
：酢酸：水：酢酸エチル（１：１：１：１）、０．５０
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 （ピロ）−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｘ−Ｔｙｒ−Ｙ−
   Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｚ〔式中、 （ａ） ＸはＳｅｒ、ＹはＤ−Ｔｒｐ、ＺはＧｌｙ−Ｎ
   Ｈ＿２、（ｂ） ＸはＳｅｒ、ＹはＤ−ｐｈｅ、ＺはＧ
   ｌｙ−ＮＨ＿２、または（ｃ） ＸはＤ−Ｓｅｒ、Ｙは
   Ｄ−Ｌｅｕ、ＺはＮＨＲ＾１（Ｒ＾１は低吸アルキルを
   意味する〕で示されるペプチドまたはその非毒性の薬学
   的に許容し得る塩。 ２ 該ポリペプチドがＬ−ピログルタミル−Ｌ−ヒスチ
   ジル−Ｌ−トリプトフイル−Ｌ−セリル−Ｌ−チロジル
   −Ｄ−トリプトフイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アルギニル
   −Ｌ−プロリルグリシンアミドである特許請求の範囲第
   １項のペプチドまたはその非毒性塩。 ３ 該ペプチドがＬ−ピログルタミル−Ｌ−ヒスチジル
   −Ｌ−トリプトフイル−Ｌ−セリル−Ｌ−チロジル−Ｄ
   −フエニルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アルギニル−
   Ｌ−プロリルグリシンアミドである特許請求の範囲第１
   項のペプチドまたはその非毒性塩。 ４ 該ペプチドがＬ−ピログルタミル−Ｌ−ヒスチジル
   −Ｌ−トリプトフイル−Ｄ−セリル−Ｌ−チロジル−Ｄ
   −ロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−プロ
   リルエチルアミドである特許請求の範囲第１項のペプチ
   ドおよびその非毒性塩。 ５ 式 Ｒ＾８−（ピロ）−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ（Ｎ＾Ｉ＾ｍ−Ｒ＾
   ７）−Ｔｒｐ−Ｘ′−Ｔｙｒ（Ｒ＾５）−Ｙ−Ｌｅｕ−
   Ａｒｇ（Ｎ＾Ｇ−Ｒ＾４）−Ｐｒｏ−Ｚ＾２〔式中、Ｘ
   ′はＳｅｒ（Ｒ＾６）、ＹはＤ−ＴｒｐまたはＤ−Ｐｈ
   ｅ、Ｚ＾２はＧｌｙ−Ａ、Ａは▲数式、化学式、表等が
   あります▼ 、Ｒ＾４、Ｒ＾５、Ｒ＾６およびＲ＾７は後記式〔I〕
   のペプチドに影響を与えない１以上の化学的処理により
   離脱しうる保護基、Ｒ＾８は水素または上記と同じ保護
   基を意味する〕で示される化合物をＲ＾４、Ｒ＾５、Ｒ
   ＾６、Ｒ＾７およびＲ＾８の保護基を離脱しうる試薬と
   反応させて後記式〔I〕のペプチドをうることを特徴と
   する、 式 （ピロ）−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｘ−Ｔｙｒ−Ｙ−
   Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｚ 〔I〕〔式中、 （ａ） ＸはＳｅｒ、ＹはＤ−Ｔｒｐ、ＺはＧｌｙ−Ｎ
   Ｈ＿２、または（ｂ） ＸはＳｅｒ、ＹはＤ−Ｐｈｅ、
   ＺはＧＬｙ−ＮＨ＿２、を意味する。 〕で示されるペプチドまたはその非毒性の薬学的に許容
   しうる塩の製法。 ６ 該ポリペプチドがＬ−ピログルタミル−Ｌ−ヒスチ
   ジル−Ｌ−トリプトフイル−Ｌ−セリル−Ｌ−チロジル
   −Ｄ−トリプトフイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アルギニル
   −Ｌ−プロリルグリシンアミドである特許請求の範囲第
   ５項のペプチドまたはその非毒性塩の製法。 ７ 該ポリペプチドがＬ−ピロリルグルタミル−Ｌ−ヒ
   スチジル−Ｌ−トリプトフイル−Ｌ−セリル−Ｌ−チロ
   ジル−Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アル
   ギニル−Ｌ−プロリルグリシンアミドである特許請求の
   範囲第５項のペプチドまたはその非毒性塩の製法。 ８ 該保護基を離脱しうる試薬がフツ化水素である特許
   請求の範囲第５項の製法。 ９ 式 Ｒ＾８−（ピロ）−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ（Ｎ＾Ｉ＾ｍ−Ｒ＾
   ７）−Ｔｒｐ−Ｘ′−Ｔｙｒ（Ｒ＾５）−Ｙ−Ｌｅｕ−
   Ａｒｇ（Ｎ＾Ｇ−Ｒ＾４）−Ｐｒｏ−Ｚ′〔式中Ｘ′は
   Ｓｅｒ（Ｒ＾６）、ＹはＤ−ＴｒｐまたはＤ−Ｐｈｅ、
   Ｚ′はＧｌｙ−Ｒ＾２、Ｒ＾２はアミノ、Ｒ＾４、Ｒ＾
   ５、Ｒ＾６およびＲ＾７は後記式〔I〕のペプチドに影
   響を与えない１以上の化学的処理により離脱しうる保護
   基、Ｒ＾８は水素または上記と同じ保護基を意味する〕
   で示される化合物をＲ＾４、Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾７お
   よびＲ＾８の保護基を離脱しうる試薬と反応させて後記
   式〔I〕のペプチドをうることを特徴とする、 式 （ピロ）−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｘ−Ｔｙｒ−Ｙ−
   Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｚ 〔I〕〔式中、 （ａ） ＸはＳｅｒ、ＹはＤ−Ｔｒｐ、ＺはＧｌｙ−Ｎ
   Ｈ＿２、または（ｂ） ＸはＳｅｒ、ＹはＤ−Ｐｈｅ、
   ＺはＧｌｙ−ＮＨ＿２、を意味する〕で示されるペプチ
   ドまたはその非毒性の薬学的に許容しうる塩の製法。 １０ 該ポリペプチドがＬ−ピログルタミル−Ｌヒスチ
   ジル−Ｌ−トリプトフイル−Ｌ−セリル−Ｌ−チロジル
   −Ｄ−トリプトフイル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アルギニル
   −Ｌ−プロリルグリシンアミドである特許請求の範囲第
   ９項のペプチドまたはその非毒性塩の製法。 １１ 該ポリペプチドがＬ−ピロリルグルタミル−Ｌ−
   ヒスチジル−Ｌ−トリプトフイル−Ｌ−セリル−Ｌ−チ
   ロジル−Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ア
   ルギニル−Ｌ−プロリルグリシンアミドである特許請求
   の範囲第９項のペプチドまたはその非毒性塩の製法。 １２ 該保護基を離脱しうる試薬がフツ化水素である特
   許請求の範囲第９項の製法。 １３ 式 Ｒ＾８−（ピロ）−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｓｅ
   ｒ（Ｒ＾６）−Ｔｙｒ（Ｒ＾５）−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ
   −Ａｒｇ（Ｎ＾Ｇ−Ｒ＾４）−Ｐｒｏ−ＮＨＲ＾１〔式
   中、Ｒ＾１は低級アルキル、Ｒ＾４、Ｒ＾５およびＲ＾
   ６は後記式〔I〕のペプチドに影響を与えない１以上の
   化学的処理により離脱しうる保護基、Ｒ＾８は水素また
   は上記と同じ保護基を意味する〕で示される化合物をＲ
   ＾４、Ｒ＾５、Ｒ＾６およびＲ＾８の保護基を離脱しう
   る試薬と反応させて後記式〔I〕のペプチドをうること
   を特徴とする、 式 （ピロ）−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｘ−Ｔｙｒ−Ｙ−
   Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｚ 〔I〕〔式中、ＸはＤ−
   Ｓｅｒ、ＹはＤ−Ｌｅｕ、ＺはＮＨＲ＾１（Ｒ＾１は低
   級アルキル）を意味する〕で示されるペプチドまたはそ
   の非毒性の薬学的に許容しうる塩の製法。 １４ 該ポリペプチドがＬ−ピログルタミル−Ｌ−ヒス
   チジル−Ｌ−トリプトフイル−Ｄ−セリル−Ｌ−チロジ
   ル−Ｄ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ
   −プロリルエチルアミドである特許請求の範囲第１３項
   のペプチドまたはその非毒性塩の製法。 １５ 該保護基を離脱しうる試薬がフツ化水素である特
   許請求の範囲第１３項の製法。