JPS60227166A - 液体クロマトグラフイ−用カラム - Google Patents
液体クロマトグラフイ−用カラムInfo
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- JPS60227166A JPS60227166A JP59166113A JP16611384A JPS60227166A JP S60227166 A JPS60227166 A JP S60227166A JP 59166113 A JP59166113 A JP 59166113A JP 16611384 A JP16611384 A JP 16611384A JP S60227166 A JPS60227166 A JP S60227166A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、液体クロマトグラフィー用カラムに関する。
特に、アミノ酸の光学分割用カラムや核酸などの分離カ
ラムとして有用な液体クロマトグラフィー用カラムに関
する。
ラムとして有用な液体クロマトグラフィー用カラムに関
する。
従来アミノ酸の光学異性体の混合物をカラムクロマトグ
ラフィーによって分離する方法があり、この目的のため
にはすでにいくつかの充填剤を充填した光学分割用カラ
ムが開発されている。
ラフィーによって分離する方法があり、この目的のため
にはすでにいくつかの充填剤を充填した光学分割用カラ
ムが開発されている。
併しながら一般に液体クロマトグラフィーによる分離に
おいては、目的とする分離対象物以外に種々の混入物を
含む場合がある。例えば通常のアミノ酸の分析分離にお
いては、緩衝液としてクエン酸ソーダなどを用いるが、
これが光学活性体分離の障害になることがある。従来の
充填剤を用いた光学分割用カラムではこの様な混入物を
含む場合液体クロマトグラフィーを行うには不適当であ
った。
おいては、目的とする分離対象物以外に種々の混入物を
含む場合がある。例えば通常のアミノ酸の分析分離にお
いては、緩衝液としてクエン酸ソーダなどを用いるが、
これが光学活性体分離の障害になることがある。従来の
充填剤を用いた光学分割用カラムではこの様な混入物を
含む場合液体クロマトグラフィーを行うには不適当であ
った。
本発明者は種々検討の結果、液体クロマトグラフィー用
カラムにおいて、分離対象物のみを可逆的に吸着する層
を分離剤の充填されたカラムの入口側に設けることによ
り、非常に分離のすぐれたクロマトグラｆが得られるこ
とを見出して本発明に至ったものである。
カラムにおいて、分離対象物のみを可逆的に吸着する層
を分離剤の充填されたカラムの入口側に設けることによ
り、非常に分離のすぐれたクロマトグラｆが得られるこ
とを見出して本発明に至ったものである。
第１図は、本発明の液体クロマトグラフィーれた分離対
象物を可逆的に吸着出来る層０からなる。
象物を可逆的に吸着出来る層０からなる。
例えば、本発明のカラムは、光学分割クロマトグラフィ
ーのための微結晶セルロース層［相］の上に、アミノ酸
を可逆的に吸着する物質の層［相］を形成してなり、該
物質としては、例えば活性炭が好ましい特性を有する。
ーのための微結晶セルロース層［相］の上に、アミノ酸
を可逆的に吸着する物質の層［相］を形成してなり、該
物質としては、例えば活性炭が好ましい特性を有する。
具体的には１００〜５００メソシユ程度の活性炭の適量
（分離対象物、例えばアミノ酸１ｍｇ当り０．１〜０．
５ｎ＋ｊ！が好ましい）より成る層をセルロース層の上
に形成する。吸着層の形状は１、粉末でもよいが、前も
って粉末をカラムの大きさに合わせて、タブレットに成
形することもできる。ここで微結晶セルロースは、液体
クロマトグラフィー用分離剤であり、又光学分割用充填
剤として好ましいものである。
（分離対象物、例えばアミノ酸１ｍｇ当り０．１〜０．
５ｎ＋ｊ！が好ましい）より成る層をセルロース層の上
に形成する。吸着層の形状は１、粉末でもよいが、前も
って粉末をカラムの大きさに合わせて、タブレットに成
形することもできる。ここで微結晶セルロースは、液体
クロマトグラフィー用分離剤であり、又光学分割用充填
剤として好ましいものである。
尚本発明の実施に当たっては分離剤としては液体クロマ
トグラフィー用充填剤であればいかなるものでも良い。
トグラフィー用充填剤であればいかなるものでも良い。
又本発明の液体クロマトグラフィー用カラムの分離対象
物としては、液体クロマトグラフィーで分離されるもの
であれば、いかなるものでも良い。但し上記の如く本発
明のカラムは、アミノ酸の光学分割用カラムとして有用
に用いられるものである。
物としては、液体クロマトグラフィーで分離されるもの
であれば、いかなるものでも良い。但し上記の如く本発
明のカラムは、アミノ酸の光学分割用カラムとして有用
に用いられるものである。
次に、本発明のカラムを用いた具体例を第２図を用いて
説明する。
説明する。
第２図において、０体、多種類のアミノ酸を単一のＤＬ
−アミノ酸に分離する充填剤であり、■は、第１図につ
いて説明した本発明の光学分割カラムである。◎は、分
流器である。この光学分割カラム■の操作方法は、次の
ようである。
−アミノ酸に分離する充填剤であり、■は、第１図につ
いて説明した本発明の光学分割カラムである。◎は、分
流器である。この光学分割カラム■の操作方法は、次の
ようである。
少量の塩酸により活性炭層［相］を洗浄、活性化した後
、アミノ酸分析器から排出された単一のアミノ酸を含存
する溶離液■（通常クエン酸塩水溶液から成る緩衝液）
をカラム■に導く。アミノ酸は活性炭に吸着され、クエ
ン酸塩等は１０−３Ｍ）Ｉ（１！を２０〜３０ ｍ ｌ
送液することにより、クエン酸塩のみを共に流出させ、
次いで光学分割用溶出液■を送液するとアミノ酸は活性
炭より脱着すると共にセルロース上での展開が始まる。
、アミノ酸分析器から排出された単一のアミノ酸を含存
する溶離液■（通常クエン酸塩水溶液から成る緩衝液）
をカラム■に導く。アミノ酸は活性炭に吸着され、クエ
ン酸塩等は１０−３Ｍ）Ｉ（１！を２０〜３０ ｍ ｌ
送液することにより、クエン酸塩のみを共に流出させ、
次いで光学分割用溶出液■を送液するとアミノ酸は活性
炭より脱着すると共にセルロース上での展開が始まる。
即ち、活性炭層を設けることにより、クエン酸塩とアミ
ノ酸をきれいに分離でき、その結果、アミノ酸の光学分
割がスムースにできるのである。
ノ酸をきれいに分離でき、その結果、アミノ酸の光学分
割がスムースにできるのである。
このようにしであるアミノ酸混合物のサンプルのアミノ
酸組成と光学異性体組成をきわめて簡単なシステムで殆
ど同時に分析することが可能となった。又この際分流器
＠を用いてカラム■で分割された９体又はＬ体のアミノ
酸をフラクションコレクター■へ分取することもできる
。面図中■はミキサー、■は溶出液■のタンクを示す。
酸組成と光学異性体組成をきわめて簡単なシステムで殆
ど同時に分析することが可能となった。又この際分流器
＠を用いてカラム■で分割された９体又はＬ体のアミノ
酸をフラクションコレクター■へ分取することもできる
。面図中■はミキサー、■は溶出液■のタンクを示す。
゛アミノ酸、例えばＤＬ−Ｔｒｐ （Ｌリプトファン）
の光学分割において、カラム■に活性炭層［相］を設け
た場合と、設けない場合を仕較すると第３図（ａ） 、
（ｂ）のようになる。活性炭を設けないと、アミノ酸分
析器で用いたクエン酸ソーダがアミノ酸ピークと重なり
すぐれた分離を示さないことがわかる（第３図（ａ））
。これに対し活性炭層を設けた本発明のカラムでは、第
３図（ｂ）に示す様にクエン酸ソーダ、ピーク（２ｈ）
とり、Ｌ−アミノ酸のピーク（７〜８ｈ）が９体とＬ体
にきれいに分離されていることがわかる。
の光学分割において、カラム■に活性炭層［相］を設け
た場合と、設けない場合を仕較すると第３図（ａ） 、
（ｂ）のようになる。活性炭を設けないと、アミノ酸分
析器で用いたクエン酸ソーダがアミノ酸ピークと重なり
すぐれた分離を示さないことがわかる（第３図（ａ））
。これに対し活性炭層を設けた本発明のカラムでは、第
３図（ｂ）に示す様にクエン酸ソーダ、ピーク（２ｈ）
とり、Ｌ−アミノ酸のピーク（７〜８ｈ）が９体とＬ体
にきれいに分離されていることがわかる。
尚使用された本発明のカラム■は微結晶性セルロースＯ
及び活性炭層（厚み３ｍｍ）Ｑからなるものである。活
性炭層［相］は、粉末で形成できるが、前もってカラム
のサイズに合わせて厚み３ ｍｍのタブレットを粉末か
ら成形したものを用いても良い。カラム■は一般に市販
されているアミノ酸分析カラムが用いられる。具体的に
はＮａ型イオン交換樹脂（０，８５ｘ ８ ｃｍ）を用
いた。
及び活性炭層（厚み３ｍｍ）Ｑからなるものである。活
性炭層［相］は、粉末で形成できるが、前もってカラム
のサイズに合わせて厚み３ ｍｍのタブレットを粉末か
ら成形したものを用いても良い。カラム■は一般に市販
されているアミノ酸分析カラムが用いられる。具体的に
はＮａ型イオン交換樹脂（０，８５ｘ ８ ｃｍ）を用
いた。
尚本明細書に於いてアミノ酸とは脂肪族アミノ酸、さら
に芳香族核を持つアミノ酸、複素環をもつアミノ酸をい
い、又中性、酸性および塩基性アミノ酸がある。
に芳香族核を持つアミノ酸、複素環をもつアミノ酸をい
い、又中性、酸性および塩基性アミノ酸がある。
本発明の液体クロマトグラフィー用カラムは、特に多種
類のアミノ酸を光学分割する方法に用いる光学分割用カ
ラムとして優れた分離能力を示す。
類のアミノ酸を光学分割する方法に用いる光学分割用カ
ラムとして優れた分離能力を示す。
即ち、本発明のカラムを用いると分離対象物、例えばア
ミノ酸の濃度が非常にうすいサンプルでも活性炭などの
吸着層で一度吸着され、アミノ酸用溶離液を用いて流出
させることにより、アミノ酸のシャープなピークを得る
ことができるのである。
ミノ酸の濃度が非常にうすいサンプルでも活性炭などの
吸着層で一度吸着され、アミノ酸用溶離液を用いて流出
させることにより、アミノ酸のシャープなピークを得る
ことができるのである。
又、アミノ酸分析に用いるクエン酸塩も同様にこの活性
炭層に吸着され、アミノ酸用溶離液を送液する前に、ア
ミノ酸を流出しない希塩酸を用いてクエン酸塩を先に流
れさせ、クエン酸塩とダブらない、光学分割されたアミ
ノ酸のチャートを得ることができる。
炭層に吸着され、アミノ酸用溶離液を送液する前に、ア
ミノ酸を流出しない希塩酸を用いてクエン酸塩を先に流
れさせ、クエン酸塩とダブらない、光学分割されたアミ
ノ酸のチャートを得ることができる。
第１図は本発明の液体クロマトグラフィー用カラムを示
す略示図、第２図は本発明のカラムをアミノ酸の光学分
割に使用したシステムのフローシートを示す図、第３図
は本発明のカラムを用いて得られた分析チャートの一例
の略示図である。 Ｂ・・・カラム Ｂ、・・・活性炭層 Ｂ２・・・セルロース層 出願人代理人古谷 をピ
す略示図、第２図は本発明のカラムをアミノ酸の光学分
割に使用したシステムのフローシートを示す図、第３図
は本発明のカラムを用いて得られた分析チャートの一例
の略示図である。 Ｂ・・・カラム Ｂ、・・・活性炭層 Ｂ２・・・セルロース層 出願人代理人古谷 をピ
Claims (1)
- 液体クロマトグラフィー用カラｌ、において、分離剤の
充填されたカラムの入口側に分離対象物を可逆的に吸着
できる層を設けたことを特徴とする液体クロマトグラフ
ィー用カラム。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59166113A JPS60227166A (ja) | 1984-08-08 | 1984-08-08 | 液体クロマトグラフイ−用カラム |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59166113A JPS60227166A (ja) | 1984-08-08 | 1984-08-08 | 液体クロマトグラフイ−用カラム |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8349084A Division JPS60226847A (ja) | 1984-04-25 | 1984-04-25 | 脂肪族中性アミノ酸の光学分割方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60227166A true JPS60227166A (ja) | 1985-11-12 |
| JPH0561262B2 JPH0561262B2 (ja) | 1993-09-06 |
Family
ID=15825261
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59166113A Granted JPS60227166A (ja) | 1984-08-08 | 1984-08-08 | 液体クロマトグラフイ−用カラム |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60227166A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999000168A1 (en) * | 1997-06-27 | 1999-01-07 | Life Technologies, Inc. | One step device and process for concentration and purification of biological molecules |
| JP2006159148A (ja) * | 2004-12-10 | 2006-06-22 | Nagoya Institute Of Technology | クロマトグラフィー用カラムおよび電気クロマトグラフィー用カラム |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5388793A (en) * | 1977-01-14 | 1978-08-04 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Packed column system for high speed liquid chromatography |
-
1984
- 1984-08-08 JP JP59166113A patent/JPS60227166A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5388793A (en) * | 1977-01-14 | 1978-08-04 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Packed column system for high speed liquid chromatography |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999000168A1 (en) * | 1997-06-27 | 1999-01-07 | Life Technologies, Inc. | One step device and process for concentration and purification of biological molecules |
| JP2006159148A (ja) * | 2004-12-10 | 2006-06-22 | Nagoya Institute Of Technology | クロマトグラフィー用カラムおよび電気クロマトグラフィー用カラム |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0561262B2 (ja) | 1993-09-06 |
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