JPS60149601A - 純度の向上したヒアルロン酸ナトリウムの製造法 - Google Patents
純度の向上したヒアルロン酸ナトリウムの製造法Info
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- JPS60149601A JPS60149601A JP615484A JP615484A JPS60149601A JP S60149601 A JPS60149601 A JP S60149601A JP 615484 A JP615484 A JP 615484A JP 615484 A JP615484 A JP 615484A JP S60149601 A JPS60149601 A JP S60149601A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、純度の向上したヒアルロン１雀ナトリウムを
頑竜する方法に関する。
頑竜する方法に関する。
ヒアルロン酸は揚艇やｊ屑の緒等の動物の結合組織中に
存在するムコ多、貼ノ浜の一種であり、このような！妨
′１勿結合ポ１１．哉から佃出寂よび精製してイ浮たヒ
アルロン酸またはヒアルロン酸ナトリウムには保水性や
（閑滑１生ヲ翁しているところから、化粧品の暴利とし
てろるいは眼球手０！−了用等の医薬として、用いられ
ている。
存在するムコ多、貼ノ浜の一種であり、このような！妨
′１勿結合ポ１１．哉から佃出寂よび精製してイ浮たヒ
アルロン酸またはヒアルロン酸ナトリウムには保水性や
（閑滑１生ヲ翁しているところから、化粧品の暴利とし
てろるいは眼球手０！−了用等の医薬として、用いられ
ている。
このような用途に用いるには、ヒアルロン酸またはヒア
ルロン１３９ナトリウムは高分子ｈ）かつ、？・ｂ純度
のものであることが安来される。分子ｔが高くなければ
十分な保水性や潤滑性が得られないからであり、純１川
が高くなければ医薬として不適当であるばかりでなく、
化粧品ｆ＆相として使用する場合に透明であるべきその
水浴液が白濁するからでちる。
ルロン１３９ナトリウムは高分子ｈ）かつ、？・ｂ純度
のものであることが安来される。分子ｔが高くなければ
十分な保水性や潤滑性が得られないからであり、純１川
が高くなければ医薬として不適当であるばかりでなく、
化粧品ｆ＆相として使用する場合に透明であるべきその
水浴液が白濁するからでちる。
ところで、従来から行なわれているヒアルロン酸または
そのす） ｌ）ラム塩の製造法は、動物組織からの抽出
および精製からなるものである。抽出は結合、組織の蛋
白質を酵素的Ｖこあるいは非酵素的に分解してヒアルロ
ン＋＊’を遊離の状態にする工程およびヒアルロンｉｔ
’ｃ水Ｍｉｆとして得る工程からなり、一方４青製は
このようにして（！）られるヒアルロン酸水溶液にハロ
ゲン化アルキルピリジニウムたとえば塩化セチルピリジ
ニウム（ｃｐｃ）２添加してヒアルロンｎ１２ｋｃＰｃ
との附加物として沈殿させ、この沈殿を食塩水に溶解さ
せてこの附加換金ヒアルロン酸とＣＰＣとに遊離はせ、
溶存ヒアルロンｊ’ｉｌ ｋその水溶性非溶剤たとえば
エタノールの添加によってそのナトリウム＞ｌ１ｆｉと
して該溶液から析出させることからなるものである。
そのす） ｌ）ラム塩の製造法は、動物組織からの抽出
および精製からなるものである。抽出は結合、組織の蛋
白質を酵素的Ｖこあるいは非酵素的に分解してヒアルロ
ン＋＊’を遊離の状態にする工程およびヒアルロンｉｔ
’ｃ水Ｍｉｆとして得る工程からなり、一方４青製は
このようにして（！）られるヒアルロン酸水溶液にハロ
ゲン化アルキルピリジニウムたとえば塩化セチルピリジ
ニウム（ｃｐｃ）２添加してヒアルロンｎ１２ｋｃＰｃ
との附加物として沈殿させ、この沈殿を食塩水に溶解さ
せてこの附加換金ヒアルロン酸とＣＰＣとに遊離はせ、
溶存ヒアルロンｊ’ｉｌ ｋその水溶性非溶剤たとえば
エタノールの添加によってそのナトリウム＞ｌ１ｆｉと
して該溶液から析出させることからなるものである。
このような方法においては、共存蛋白質の分解を酵素的
に行なうことによって、また原料動物組織中に含まれて
いることあるべきヒアルロニダーゼ（作用基質としてヒ
アルロン酸ヲ分解するものであることはいう１でもない
）の失活のだめの加熱を行なうことによって、天然ヒア
ルロン酸が生得的に有する高い分子ｉ （１５０万〜２
５０万程度）を過ｒｗｖｃ低ドさせないようにすること
ができょうが、高純度のヒアルロン１設置たはそのナト
リウム塩を得ようとするときには上記の精製法は不満足
である。すなわち、動９勿組織中のヒアルロン酸はコン
ドロイチン硫酸などのヒアルロン酸以外のムコ多糖類と
共存状態にあって抽出されたヒアルロン酸にもこの他種
ムコ多糖類が混在するところ、ＣＰ Ｃｔｒｌヒアルロ
ン１浚以外のムコ多糖類とも附力旧勿をつくるので、前
記のようにＣＰＣにょる沈１股を食塩水に溶解させたと
きにはこの他種ムコ多糖類も必然的にこの溶液ＶＣ持ち
込まれて、エタノールによるヒアルロン酸ナトリウムの
析出の際に同様に析出してしまうからである。
に行なうことによって、また原料動物組織中に含まれて
いることあるべきヒアルロニダーゼ（作用基質としてヒ
アルロン酸ヲ分解するものであることはいう１でもない
）の失活のだめの加熱を行なうことによって、天然ヒア
ルロン酸が生得的に有する高い分子ｉ （１５０万〜２
５０万程度）を過ｒｗｖｃ低ドさせないようにすること
ができょうが、高純度のヒアルロン１設置たはそのナト
リウム塩を得ようとするときには上記の精製法は不満足
である。すなわち、動９勿組織中のヒアルロン酸はコン
ドロイチン硫酸などのヒアルロン酸以外のムコ多糖類と
共存状態にあって抽出されたヒアルロン酸にもこの他種
ムコ多糖類が混在するところ、ＣＰ Ｃｔｒｌヒアルロ
ン１浚以外のムコ多糖類とも附力旧勿をつくるので、前
記のようにＣＰＣにょる沈１股を食塩水に溶解させたと
きにはこの他種ムコ多糖類も必然的にこの溶液ＶＣ持ち
込まれて、エタノールによるヒアルロン酸ナトリウムの
析出の際に同様に析出してしまうからである。
発明の概要
要旨
本発明は、上記の点に解決を与えることを目的とし、従
来の精製法でのＣＰＣ沈殿物を食塩水に溶解させる工程
を共存不純物が不溶状態に留まるように実施してこの不
溶不純物を分離することによってこの目的全達成しよう
とするものである。
来の精製法でのＣＰＣ沈殿物を食塩水に溶解させる工程
を共存不純物が不溶状態に留まるように実施してこの不
溶不純物を分離することによってこの目的全達成しよう
とするものである。
従って、本発明による純度の同上したヒアルロン酸ナト
リウムの製造法は、−ドｉ己の単位工程Ａ、〜Ｅ、の組
合せからなる工程金少なくとも１回実施すること’１
（！：ｅｇとするものである。
リウムの製造法は、−ドｉ己の単位工程Ａ、〜Ｅ、の組
合せからなる工程金少なくとも１回実施すること’１
（！：ｅｇとするものである。
Ａ、ヒアルロン酸またはヒアルロン酸ナトリウムの水溶
液を用意すること。
液を用意すること。
Ｂ、この溶液にハロゲン化アルキルピリジニウム（たソ
し、アルキルは炭素数１２〜１８のものであり、ハロゲ
ンは塩素、臭素またはヨウ素である）を添加して、ヒア
ルロン酸またはヒアルロン酸ナトリウム金それ金含む沈
殿物として得ること。
し、アルキルは炭素数１２〜１８のものであり、ハロゲ
ンは塩素、臭素またはヨウ素である）を添加して、ヒア
ルロン酸またはヒアルロン酸ナトリウム金それ金含む沈
殿物として得ること。
Ｃ０この沈殿物を食塩水に溶解させ、その際ヒアルロン
酸またはヒアルロン酸ナトリウムの少なくとも大部分が
溶解するが共存不純物の少なくとも一部が不溶で存在す
るようにする□こと。
酸またはヒアルロン酸ナトリウムの少なくとも大部分が
溶解するが共存不純物の少なくとも一部が不溶で存在す
るようにする□こと。
Ｄ、このようにして得られる溶液を遠心分離に付してヒ
アルロン酸またヒアルロン酸ナトリウムをその上澄液と
して得ること。
アルロン酸またヒアルロン酸ナトリウムをその上澄液と
して得ること。
Ｅ、この上澄液にヒアルロン酸ナトリウムに対する水浴
性非溶剤を添加して、ヒアルロン酸ナトリウムの析出物
（ｉ＝４−すること。
性非溶剤を添加して、ヒアルロン酸ナトリウムの析出物
（ｉ＝４−すること。
効果
本発明は、従来の梢製法での（’、Ｐ Ｃ沈殿物を食塩
水に溶解さぜる際に、食塩水に対するこの沈殿物からの
ヒアルロン酸またはヒアルロン酸ナトリウムのＵＳ離の
程度と不純・吻の雷離の程度は食塩水の一度によっては
有意に異なっていて、この差を不純′吻の除去に利用で
きること、の発見に基くものである。ＣＰＣ沈殿物に関
して食塩水中でのこのような解４ｔの程度の差があるこ
と、この差が不純物の分離に利用できるほど大きいこと
、ならびにこの差によって不溶解状態に留め得た不純物
が遠心分４によって溶存ヒアルロン酸ナトリウムから分
離し得ること、は思いがけなかったことというべきであ
る。
水に溶解さぜる際に、食塩水に対するこの沈殿物からの
ヒアルロン酸またはヒアルロン酸ナトリウムのＵＳ離の
程度と不純・吻の雷離の程度は食塩水の一度によっては
有意に異なっていて、この差を不純′吻の除去に利用で
きること、の発見に基くものである。ＣＰＣ沈殿物に関
して食塩水中でのこのような解４ｔの程度の差があるこ
と、この差が不純物の分離に利用できるほど大きいこと
、ならびにこの差によって不溶解状態に留め得た不純物
が遠心分４によって溶存ヒアルロン酸ナトリウムから分
離し得ること、は思いがけなかったことというべきであ
る。
このような本発明によれば、不純物を効果的に除去して
、ヒアルロン酸ないしそのナトリウム塩に対する高純度
という要請に応えるばかりでなく、この精製工程は分子
ｔ３低下させる要因を含んでいないからヒアルロン酸な
いしそのナトリウム頃に対する高分子量という要請にも
応えることができる。
、ヒアルロン酸ないしそのナトリウム塩に対する高純度
という要請に応えるばかりでなく、この精製工程は分子
ｔ３低下させる要因を含んでいないからヒアルロン酸な
いしそのナトリウム頃に対する高分子量という要請にも
応えることができる。
本発明方法は、前記単位工程Ａ、〜Ｅ、からなる工程を
少なくとも１回実施することからなるものである。
少なくとも１回実施することからなるものである。
単位工程Ａ。
この工程は、ヒアルロン酸またはそのナトリウム塩の水
溶液を用意することからなる。
溶液を用意することからなる。
このような水溶液は、任意の方法によって得ることがで
きる。そのような方法の一つは、ヒアルロン酸含有動物
組織の粉砕物を蛋白分解酵素で処理して得られた産物か
ら不溶物を除去することからなるものである。他の方法
の一つは、適当な供給源からのヒアルロン酸またはその
ツートリウム塩の標品を水に溶解することからなるもの
である。
きる。そのような方法の一つは、ヒアルロン酸含有動物
組織の粉砕物を蛋白分解酵素で処理して得られた産物か
ら不溶物を除去することからなるものである。他の方法
の一つは、適当な供給源からのヒアルロン酸またはその
ツートリウム塩の標品を水に溶解することからなるもの
である。
その場合の供給源としては市販品または何らかの方法で
つくった標品、特に別途実施した本発明方法の単位工程
Ｅ、 （詳細後記）において得られたヒアルロン酸ナト
リウム、がありうる。なお、この後者の場合は、単位工
程Ａ、〜Ｅ、からなる工程を少なくとも２回実施する場
合に相当する。
つくった標品、特に別途実施した本発明方法の単位工程
Ｅ、 （詳細後記）において得られたヒアルロン酸ナト
リウム、がありうる。なお、この後者の場合は、単位工
程Ａ、〜Ｅ、からなる工程を少なくとも２回実施する場
合に相当する。
単位工程Ａ、で用意すべき溶液は、ヒアルロン酸−また
はそのナトリウム塩の水溶液である。ここで「水溶液」
とは、溶媒が清水の場合の外に、ヒアルロン酸またはそ
のナトリウム塩が溶存しうる範囲内において塩たとえば
塩化ナトリウム、水溶性 “有機溶剤たとえばエタノー
ル、を含むものであってもよい。
はそのナトリウム塩の水溶液である。ここで「水溶液」
とは、溶媒が清水の場合の外に、ヒアルロン酸またはそ
のナトリウム塩が溶存しうる範囲内において塩たとえば
塩化ナトリウム、水溶性 “有機溶剤たとえばエタノー
ル、を含むものであってもよい。
なお、ヒアルロン酸またはそのナトリウム塩の水溶液を
前記のように動物組織から得る方法は公知であって、本
発明でも適当な方法によってこの水溶液を得ることがで
きる。具体的には、たとえば、凍結保存しであるヒアル
ロン酸含有組織（たとえば、鶏冠、月齋の緒、眼球、皮
膚、軟骨等）を流水中等で緩慢解凍したのち、必要に応
じて６０〜１００℃の熱水中に２０〜４０分間浸漬して
加熱してから、肉挽用チョツ、６−などで細断し、これ
（（その重量の１〜３倍量程度の清水を加え、ホモ・ジ
ナイザーでｌＯ〜３０分間程度処理して、ペースト状と
する。このペーストに蛋白分解ｎ累たとえばペゾシン、
トリフシン、パパイン、ソロメリン、フィシン等を添加
し、一定温度条件下に一定時間保持して、動物組織中の
蛋白質を分解する。蛋白分ｊ’ｊ％酵素の添加量は原料
動物組織に対して０．０１〜０．０５−程度、処理条件
は３５〜４５°Ｃ／３〜ｉｏ時間程度、がふつうである
。このようにして得られたペースト状産物をｒ過すれば
、ヒアルロン酸の水浴液が得られる。
前記のように動物組織から得る方法は公知であって、本
発明でも適当な方法によってこの水溶液を得ることがで
きる。具体的には、たとえば、凍結保存しであるヒアル
ロン酸含有組織（たとえば、鶏冠、月齋の緒、眼球、皮
膚、軟骨等）を流水中等で緩慢解凍したのち、必要に応
じて６０〜１００℃の熱水中に２０〜４０分間浸漬して
加熱してから、肉挽用チョツ、６−などで細断し、これ
（（その重量の１〜３倍量程度の清水を加え、ホモ・ジ
ナイザーでｌＯ〜３０分間程度処理して、ペースト状と
する。このペーストに蛋白分解ｎ累たとえばペゾシン、
トリフシン、パパイン、ソロメリン、フィシン等を添加
し、一定温度条件下に一定時間保持して、動物組織中の
蛋白質を分解する。蛋白分ｊ’ｊ％酵素の添加量は原料
動物組織に対して０．０１〜０．０５−程度、処理条件
は３５〜４５°Ｃ／３〜ｉｏ時間程度、がふつうである
。このようにして得られたペースト状産物をｒ過すれば
、ヒアルロン酸の水浴液が得られる。
単位工程Ｂ。
この工程でヒアルロン酸またはそのナトリウム塩をその
水溶液から沈殿させるだめの薬剤は、ノ・ロゲン化アル
キルピリジニウムである。ここで、「アルキル」は炭素
数１２〜１８のもの、特にセチル、であり、「ノ・ロゲ
ン」は塩素、臭素またはヨウ素、特に塩素、である。具
体的には、塩化または臭化セチルピリジニウム、特に塩
化セチルピリジニウム（ｃｐｃ）、が適当である。
水溶液から沈殿させるだめの薬剤は、ノ・ロゲン化アル
キルピリジニウムである。ここで、「アルキル」は炭素
数１２〜１８のもの、特にセチル、であり、「ノ・ロゲ
ン」は塩素、臭素またはヨウ素、特に塩素、である。具
体的には、塩化または臭化セチルピリジニウム、特に塩
化セチルピリジニウム（ｃｐｃ）、が適当である。
ＣＰ Ｃ’４の添加量は一般に少直であって、具体的に
はヒアルロン酸またはそのす） ＩＪウム塩の乾物に対
して１００〜１５０重量％程１ｆである。
はヒアルロン酸またはそのす） ＩＪウム塩の乾物に対
して１００〜１５０重量％程１ｆである。
ＣＰＣ等は水溶液として添加するのが匣利である。
単位工程Ｃ０
上記のようにして得られた沈殿物７ｋｆ過などの方法で
分取して、これを食塩水に溶解させる。
分取して、これを食塩水に溶解させる。
本発明によれば、この場合の食塩水の羨度を適当に選ん
で、ヒアルロン酸またはそのナトリウム塩の少なくとも
大部分が溶解するが共存不純物の“少なくとも一郡が不
溶で存在するようにする。
で、ヒアルロン酸またはそのナトリウム塩の少なくとも
大部分が溶解するが共存不純物の“少なくとも一郡が不
溶で存在するようにする。
このような食塩水濃度は、沈殿剤として使用したハロゲ
ン化アルキルピリジニウムがＣＰＣである場合について
いえば、０．５〜１．５重量％、好ましくは０．６〜１
．２重量％、程度である。本発明での沈殿−溶解を２回
以上行なう場合には、次第に食塩水濃度を高くすること
が好ましく、従って一回目の溶解は食塩水濃度が０．６
〜０．９％、二回目のそれが０．９〜１．２％、である
ことが適当である。
ン化アルキルピリジニウムがＣＰＣである場合について
いえば、０．５〜１．５重量％、好ましくは０．６〜１
．２重量％、程度である。本発明での沈殿−溶解を２回
以上行なう場合には、次第に食塩水濃度を高くすること
が好ましく、従って一回目の溶解は食塩水濃度が０．６
〜０．９％、二回目のそれが０．９〜１．２％、である
ことが適当である。
なお、ここで食塩水の、濃度は、そこに溶解させるべき
沈殿物から持ち込まれる水のけ全も４慮して定めるべき
で必る。
沈殿物から持ち込まれる水のけ全も４慮して定めるべき
で必る。
溶解温度は、ｌＯ〜５０℃程度がふつうである。溶解は
適当な攪拌の下に行なうべきこと、↓いう壕でもない。
適当な攪拌の下に行なうべきこと、↓いう壕でもない。
なお、食ｊム水に溶解したヒアルロン酸は、ナトリウム
塩の形となるで必ろう（もつとも、／＃／Ｉｉ中では解
離しているであろう）。
塩の形となるで必ろう（もつとも、／＃／Ｉｉ中では解
離しているであろう）。
単位工程り。
上記工程Ｃ０から得られるヒアルロン酸壇たはそのす）
ＩＪウム塩の食塩水溶液にはコンドロイチン硫酸等の
不純・吻がガム状物＝ｔＸと１．て微粒子状に分数して
いるので、この溶液を遠心分離に附して、ヒアルロン酸
またはそのナトリウム塩ヲ上澄液として得る。
ＩＪウム塩の食塩水溶液にはコンドロイチン硫酸等の
不純・吻がガム状物＝ｔＸと１．て微粒子状に分数して
いるので、この溶液を遠心分離に附して、ヒアルロン酸
またはそのナトリウム塩ヲ上澄液として得る。
不純物の性状からいって、この工程での固−溶分離手段
は遠心分離でなければならない。遠心分離の程度は使用
食唱水の濃度によって異なるが、食塩水濃度が０．９重
量％の場合には３０００〜５０００Ｇ／２Ｄ５＋ＶＣ−
相当するものであることが適当でるる。
は遠心分離でなければならない。遠心分離の程度は使用
食唱水の濃度によって異なるが、食塩水濃度が０．９重
量％の場合には３０００〜５０００Ｇ／２Ｄ５＋ＶＣ−
相当するものであることが適当でるる。
単位工程Ｅ。
このようにして得られるヒアルロン酸またはそのナトリ
ウム塩の食塩水溶液に、ヒアルロン酸ナトリウムに対す
る水溶性非溶剤を添加することによって、ヒアルロン酸
ナトリウムを析出させることができる。
ウム塩の食塩水溶液に、ヒアルロン酸ナトリウムに対す
る水溶性非溶剤を添加することによって、ヒアルロン酸
ナトリウムを析出させることができる。
ここで用いる溶剤は゛、ヒアルロン酸ナトリウムに対す
る溶解能を実質的に持たず、しかも水溶性の任意のＭ機
溶剤でありうる。具体的には、たとえば、低級アルカノ
ールたとえばメタノール、エタノール、およびプロ・に
ノール類、低級ケトンたとえばアセトンおよびメチルエ
チルケトン、などが挙げられる。これらのうちで好まし
いのは、エタノールである。
る溶解能を実質的に持たず、しかも水溶性の任意のＭ機
溶剤でありうる。具体的には、たとえば、低級アルカノ
ールたとえばメタノール、エタノール、およびプロ・に
ノール類、低級ケトンたとえばアセトンおよびメチルエ
チルケトン、などが挙げられる。これらのうちで好まし
いのは、エタノールである。
このような溶剤の添加量は、所与の食塩水溶液に対して
合目的的な任意のものでありうる（ちなみに、この単位
工程Ｅ、はそれ自身公知のものである）。具体的には、
たとえば、食塩水４度が０．９％で析出すべきヒアルロ
ン酸ナトリウムの溶存量が０．１％ときに、エタノール
清は艮繊水ｆ６液に対して１．５〜３．０倍（いずｎも
重軟による）程度である。
合目的的な任意のものでありうる（ちなみに、この単位
工程Ｅ、はそれ自身公知のものである）。具体的には、
たとえば、食塩水４度が０．９％で析出すべきヒアルロ
ン酸ナトリウムの溶存量が０．１％ときに、エタノール
清は艮繊水ｆ６液に対して１．５〜３．０倍（いずｎも
重軟による）程度である。
実験例゛
１）処理工程
一加℃で駒日浦凍結保存した爆１ｔｆ、６ｋｇ全加℃の
流水中に入れ、２時間かけて緩慢解凍を行なった。
流水中に入れ、２時間かけて緩慢解凍を行なった。
この揚艇５ｋｇを８０℃の熱水中に加分間浸漬した後、
取り出してミート・チョッパー（−目３Ｉ’ｍ ）にて
細断した。
取り出してミート・チョッパー（−目３Ｉ’ｍ ）にて
細断した。
細断した珊冠に清水１５リツトルを加え、ホモジナイザ
ー（増幸産業■ｌ！Ａ「マスコロイダー」）にて鶏冠組
織をホモジナイズして、ペース）’２０ｋｇを得た。
ー（増幸産業■ｌ！Ａ「マスコロイダー」）にて鶏冠組
織をホモジナイズして、ペース）’２０ｋｇを得た。
このペーストにプロテアーゼ（科研製薬■製「アクｆ−
）−−ゼＡＳＪ ）ｔ−８，５ｇ加え、４０’ＣＣ２時
間酵素処理を行った後、更にプロテアーゼ（前記のもの
と同じ）を８．５ｇ加え、４０℃で２時間酵素処理を行
い、その後ペーストを１過して、ｆ液１８ｋｇを得た。
）−−ゼＡＳＪ ）ｔ−８，５ｇ加え、４０’ＣＣ２時
間酵素処理を行った後、更にプロテアーゼ（前記のもの
と同じ）を８．５ｇ加え、４０℃で２時間酵素処理を行
い、その後ペーストを１過して、ｆ液１８ｋｇを得た。
この２１−Ｊ液に１０％ｃｐｃ水溶液９００ｍ１を添加
して沈殿物を生じさせ、生じた沈殿物をｆ別した。得ら
れた沈殿物を清水ＶＣて洗浄した後、沈殿物に０．５８
％食塩水１０１Ｊツトルを加えて、沈殿物ｔ−溶解さ
せた。
して沈殿物を生じさせ、生じた沈殿物をｆ別した。得ら
れた沈殿物を清水ＶＣて洗浄した後、沈殿物に０．５８
％食塩水１０１Ｊツトルを加えて、沈殿物ｔ−溶解さ
せた。
得らｌした！／ｇを４０００Ｇ／２Ｑ分に相当する遠心
分離に付して、上澄液を採取した。
分離に付して、上澄液を採取した。
この上せ液Ｖｃ貨塩を添加して、液の食塩濃度が２．３
％となるように調整した後、この液にエタノール１２１
Ｊツトルを加えて再び沈殿物を生じさせた。
％となるように調整した後、この液にエタノール１２１
Ｊツトルを加えて再び沈殿物を生じさせた。
この沈殿物金ｆ別／エタノール洗浄／乾燥したところ２
０ｇの乾物が得られた。
０ｇの乾物が得られた。
得られた乾物を清水４リツトル中に入れて浴解させた後
、プロテア−ぜ（前記のものと同じ）を０．４ｇ加え、
４０℃で２時間酵素処理を行ない、その後１０％ＣＰＣ
水溶液２００ｍ１を添加して沈殿物を生じさせ、この沈
殿ｖａ ｔ−ｐ別した。
、プロテア−ぜ（前記のものと同じ）を０．４ｇ加え、
４０℃で２時間酵素処理を行ない、その後１０％ＣＰＣ
水溶液２００ｍ１を添加して沈殿物を生じさせ、この沈
殿ｖａ ｔ−ｐ別した。
得られた沈＆ｌｉｍを１．２チ食塩水中にｄ解させ、こ
の溶液を５０００Ｇ／加分に相当する遠心分離に付した
後、上澄液を採取した。
の溶液を５０００Ｇ／加分に相当する遠心分離に付した
後、上澄液を採取した。
この上澄液に食塩を添加して、液の食塩濃度が２．３％
となるように調整した後、この液にエタノール２．７リ
ツトルを加えて再び沈殿物を生じさせた。
となるように調整した後、この液にエタノール２．７リ
ツトルを加えて再び沈殿物を生じさせた。
この沈殿物を１別／エタノール洗浄／乾燥したところ、
精製ヒアルロン酸ナトリウムｌｏｇが得られた。
精製ヒアルロン酸ナトリウムｌｏｇが得られた。
２）結果
次の四つの方法によって得られた精製ヒアルロン酸ナト
リウムのサンプル全用意した。
リウムのサンプル全用意した。
（１）テスト区Ａ（遠心分離１回）
上記処理工程において、ＪＡ１回目の遠心分離を省略し
、・虞２回目の遠心分離のみを行った方法で得られたサ
ンプル （２）テスト区Ｂ（遠心分離１回） 上記処理工程において、第１回目の遠心分離のみを行な
い、第２回目の遠心分ａｔ省略した方法で得られたサン
プル・ （３）テスト区Ｃ（遠心分離２岨） 上記処理工程で得られたサンプル （４）対象区（遠心分離なし） 上記処理工程において遠心分離を２回とも省略した方法
で得られたサンプル この四つのサンプルについて、分子量の大きさを知るた
め目安として動粘麿を、また純度を知るための目安とし
て溶液の透明度を測定したところ、表−１の結果が得ら
れた。
、・虞２回目の遠心分離のみを行った方法で得られたサ
ンプル （２）テスト区Ｂ（遠心分離１回） 上記処理工程において、第１回目の遠心分離のみを行な
い、第２回目の遠心分ａｔ省略した方法で得られたサン
プル・ （３）テスト区Ｃ（遠心分離２岨） 上記処理工程で得られたサンプル （４）対象区（遠心分離なし） 上記処理工程において遠心分離を２回とも省略した方法
で得られたサンプル この四つのサンプルについて、分子量の大きさを知るた
め目安として動粘麿を、また純度を知るための目安とし
て溶液の透明度を測定したところ、表−１の結果が得ら
れた。
なお、テスト区Ａのす／ゾルの分子量を測定したところ
、約１４０万であった。
、約１４０万であった。
表−１
備考
曇１粘度は、サンプルを０．２チの水溶液とし、刃℃に
調廠してウベローデ型粘度計にて測定した動粘度である
。
調廠してウベローデ型粘度計にて測定した動粘度である
。
蒼２ 透明度は、サンプルを０．１％の水溶液とし、３
７０ ｎｍの光を当てた場合の吸光度でめる。
７０ ｎｍの光を当てた場合の吸光度でめる。
出願人代理人 猪 股 ゛清
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、下記の単位工程Ａ、〜Ｅ、の組合せからなる工程を
少なくとも１回笑施することを特徴とする、純度の向上
したヒアルロン酸ナトリウムの製造法。 Ａ、ヒアルロン酸またはヒアルロン酸ナトリウムの水溶
液を用意すること。 Ｂ、この溶液にハロゲン化アルキルピリジニウム（たソ
し、アルキルは炭素数１２〜１８のものであり、ハロゲ
ンは塩素、美累またはヨウ累である）を添加して、ヒア
ルロン酸またはヒアルロン酸ナトリウムをそｎを含む沈
殿物として得ること。 Ｃ０この沈服物金食塩°水に溶解通せ、その際ヒアルロ
ン酸またはヒアルロン酸ナトリウムの少なくとも大部分
が溶解するが共存不純物の少なくとも一部が不溶で存在
するようにすること。 Ｄ、このようにして得られる溶液を遠心分離に付してヒ
アルロン酸またはヒアルロン酸ナトリウムをその上澄液
として得ること。 Ｅ、この上澄液にヒアルロン酸ナトリウムに対する水溶
性非溶剤を添加して、ヒアルロン酸ナトリウムの析出−
吻を得ること。 ２、ハロゲン化アルキルピリジニウムが塩化セチルピリ
ジニウムである、特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ３、単位工程Ｃ０での食塩水の濃度が０．５〜１．５重
量％である、特許請求の範囲第２項に記載の方法。 ４、単位工程Ａ、のヒアルロン酸またはヒアルロン酸ナ
トリウムの水ｍ液が、ヒアルロン酸含有動物組織の粉砕
物を蛋白分解酵素で処理して得られた産物から不溶ｖｌ
Ｊを除去して得られたものである、特許請求の範囲第１
〜３項のいずれか１項に記載の方法。 ５．単位工程Ａ、のヒアルロン酸ナトリウムの水溶液が
、別途実施された単位工程Ｅ、において得られたヒアル
ロン酸ナトリウムを水に溶解させたものである、！１．
］、計請求の範囲第１〜３項のいずれか１項に記載の方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP615484A JPS60149601A (ja) | 1984-01-17 | 1984-01-17 | 純度の向上したヒアルロン酸ナトリウムの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP615484A JPS60149601A (ja) | 1984-01-17 | 1984-01-17 | 純度の向上したヒアルロン酸ナトリウムの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60149601A true JPS60149601A (ja) | 1985-08-07 |
Family
ID=11630608
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP615484A Pending JPS60149601A (ja) | 1984-01-17 | 1984-01-17 | 純度の向上したヒアルロン酸ナトリウムの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60149601A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0239335A2 (en) * | 1986-03-21 | 1987-09-30 | International Pharmaceutical Products, Inc. | Non-inflammatory hyaluronic acid fraction and process for preparing it |
-
1984
- 1984-01-17 JP JP615484A patent/JPS60149601A/ja active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BIOCHIMCA ET BIOPHYSICA ACTA=1968 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0239335A2 (en) * | 1986-03-21 | 1987-09-30 | International Pharmaceutical Products, Inc. | Non-inflammatory hyaluronic acid fraction and process for preparing it |
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