JPS60123497A - グルタチオン伝達系 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はグルタチオンの細胞内濃度を増大せしめる方法
に関する。なお、本発明はアメリカ合衆国陸軍の提供に
かかる政府援助（契約番号Ｄ　Ａ　Ｍ１？−８３−Ｃ−
３０２０）の下に行なわれたものであって、アメリカ合
衆国政府は本発明について一定の権利を有するものであ
る。

実質上すべての細胞中に認められるトリペプチドチオー
ルであるグルタチオン（Ｌ−γ−グルタミルーし一シス
テイニルーグリシン；Ｇ５ｌ−１）が、新陳代謝、運搬
および細胞保護に関与していることはよく知られている
。グルタチオンは蛋白質や他の分子のジスルフィド結合
の還元、ＤＮＡのデオキシリボヌクレオチド前駆体の合
成およびメタボリズムで形成される７リーランカルや過
酸化物のような反応性酸素中間体の影響から細胞保護の
役割を果たす。

グルタチオンメタボリズムの修飾は、選択的酵素阻止剤
を投与して細胞内グルタチオン濃度を減少せしめること
により、あるいはグルタチオン合成を増大せしめる化合
物を与えることによって達成される。かがる効果は、化
学療法および放射療法においであるいは医薬、他の外的
化合物および酸素の毒性効果からの細胞保護において有
用である。実際、Ｇ　Ｓ　Ｈの種々の機能は、酵素学や
移行のみならず薬理学、放射生物学、癌療法学、毒物学
、内分泌学、微生物学、農学などを含む生物学の多くの
分野において適切なものである。グルタチオンメタボリ
ズムの酵素学的および移行現象は、−マイスター（Ｍｅ
ｉｓｔｅｒ）：　ｒグルタチオンメタボリズムの選択的
修飾」（サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）＋２２０巻４５
９６号４７２〜４７７頁（１９８３年４月））に概要が
示されており、この文献は参照として本明細書の一部を
なすものである。

細胞内Ｇ　Ｓ　Ｈを減少または増加さぜるＧＳＨメタボ
リズムの修飾は、種々の目的に役立つものである。たと
えば、チオール類が照射効果から細胞を保護するもので
あることは長く知られてきたところである。細胞内ＧＳ
Ｈをｊ減少させることは細胞照射に対する感受性を高め
ることになるから、グルタチオンの減少は、死滅すべき
細胞と生存すべき細胞がＧ　Ｓ　Ｈに対し本質的に異な
った定量的要求を有するような化学療法的状況において
有用なものである。また、その合成を抑制することによ
ｌ）　Ｇ　Ｓ　Ｈを減少させることは、ＧＳＨを含む反
応によって解毒される医薬を使用する化学療法における
貴重な補助手段として役立つものである。

逆に、医薬や照射に対する抵抗性は細胞内ＧＳＨの増加
と関係がある。Ｇ　Ｓ　Ｈは多くの医薬の解毒化に有効
に働らくものであり、アセトアミ／７エンの解毒過程が
ＧＳＨとの結合を含んでいることは既に知られている。

Ｌ−２−オキソチアゾリノン−４−カルボン酸のような
チアゾリジンによる処置は、肝臓病患者や、システィン
形成用メチオニン硫黄の利用が不充分であり、ＧＳＨ合
成に欠陥のある早熟児にとって貴重である。細胞内シス
ティン前駆体のようなチアゾリノンの効果は殆どすべて
の動物細胞に認められる酵素活性、５−オキソプロリナ
ーゼの存在に依存する。この酵素はまた植物体中にもそ
の発生が認められ、前記のごときチアゾリジン、従って
グルタチオンが除草剤の毒性効果から穀物植物体を保護
する農業用安全剤として有用であることを示唆する。

グルタチオンの細胞濃度を高めるためには種々の方法が
知られている。グルタチオンは三つのアミノ酸、すなわ
ちグルタミン酸、システィンおよびグリシンから成って
いる。グルタチオンのアミノ酸前駆体を動物に投与する
と、細胞内グルタチオンが増加するが、この方法の効果
には一定の限界がある。ＧＳＨの濃度はシスティンの供
給に依存するが、これは食料蛋白からそして肝臓中のメ
チオニンからの硫黄転移により誘導される。システィン
は急速に新陳代謝され、更に非常に毒性であるため、そ
れ自体の投与はＧＳＨ濃度を高めるのに理想的な方法と
は言い難い。細胞内へ移行し、細胞内でシスティンに変
化する化合物を動物に投与することは、細胞内のグルタ
チオン濃度を高めるのにしばしば有用である。たとえば
、前記チアゾリジンすなわちＬ−２−オキソチアゾリジ
ン−４−カルボキシレートは、これを細胞内へ移行させ
た場合、５−オキソブロリナーゼによってＬ−システィ
ンに変化し、このＬ−システィンは速やかにＧ　Ｓ　ｌ
−１合成に利用される。

組織内ＧＳＨ濃度を高める他の方法としては、γ−グル
タミルシスティンまたはγ−グルタミルシスチンを投与
する方法がある。投与されたγ−グルタミルアミノ酸は
そのまま移行し、ＧＳＨシンセターゼの基質として役立
つ。Ｎ−アセチル−し−システィンの投与がＧＳＨの、
Ｉｌｌｌ製織を上昇セシめることも知られている。

グルタチオンそれ自身の投与もグルタチオン濃度を上昇
せしめるのではないがと言うこともこれまで考えられて
来た。しかしながら、グルタチオンが細胞内に入ること
を証明する文献はこれまでに発表されていない。むしろ
、グルクチオンそれ自身は細胞内へ移行しないことを示
す特別の生物系についての報告が若干存在する位である
。グルタチオン投与後にしばしば認められる細胞内グル
タチオンの増加は、（ａ）グルタチオンの細胞外分解、
（１〕）細胞外でグルタチオンから誘導された遊離アミ
ノ酸またはジペプチドの細胞内への移行、（ｃ）グルク
チオンの細胞内再合成によるものであろう。

細胞内グルタチオン濃度を」１昇せしめるこれら従来法
は、上記したように、効率、毒性、達成される有効濃度
についての制限などの点で不利である。加えて、二つの
シンセターゼに対する基質の供給を高めてＧ　Ｓ　Ｈの
合成を行なう公知方法は、その一つがＧ　Ｓ　Ｉ−１に
よるフィードバック阻止作用に従うシンセターゼの存在
に依存するものである。

従って、本発明の目的の−っは、アミノ酸基質ヨリモグ
ルタチオン自体を細胞に伝達ぜしぬることにより、グル
タチオンの細胞内濃度の上昇を達成することにある。

本発明の目的の他の一つは、グルタチオンの純粋な誘導
体を提供すると共に、グルタチオン伝達系において当該
誘導体を使用することにある。

本発明の目的の他の一つは、効率良く、しがもシンセタ
ーゼの存在に依存することなくグルクチオンの細胞内濃
度の上列を達成せしめることにある。

本発明の目的の更に他の一つは、池の公知方法に認めら
れるような毒性効果を発揮することなくグルタチオンの
細胞内濃度の上昇を達成せしめることにある。

本発明の目的の更に他の一つは、医薬の解毒、酸素およ
びその新陳代謝物（たとえば過酸化物）、フリーラジカ
ル、外的化合物などからの細胞の保護のような特定の目
的を達成するのに必要な細胞内グルタチオン濃度を効率
的かつ迅速に達成することにある。

本発明は、細胞内グルクチオン濃度を上昇せしめる従来
技術に認められるような毒性、制限された効果、細胞内
シンセターゼ依存性などの困難を克服するものである。

更に具体的にはエステル化がグリシンカルボキシル基に
おいて起こっているグルタチオンの低級アルキルモノエ
ステル、好ましくはモノメチルエステルまたは／および
モノエチルエステルを投与して細胞内グルタチオン濃度
を高めることにより、上記したもしくはその他の目的を
達成するものである。上記したエステルは、たとえば肝
臓や腎臓の細胞内へ移行し、細胞内で脱エステル化して
、グルタチオンの細胞内濃度の」−昇に寄与するもので
ある。

Ｇ　Ｓ　Ｉ（エステルの投与を含む本発明により、ＧＳ
　Ｈの濃度上昇は効率的かつ迅速に達成される。

加うるに、本発明は純粋な低級アルキルエステル、好ま
しくはモノメチルエステルおよび／またはモノエチルエ
ステル並びにそれらの製法を提供する。モノエステル合
成の副産物であるジエステル体は極めて毒性が高い。

第１ａ図および第１ｂ図は、グルタチオンエステルまた
はグルタチオンを投与された絶食マウスの肝臓と腎臓に
おけるグルタチオン濃度を対照群の場合と比較して示し
たものである。

第２ａ図および第２ｂ図はプチオニンスルホキシイミド
で前処理したマウスのグルタチオン濃度の変化を示すグ
ラフである。

第３図はアセトアミノフェンで前処理したマウスの肝臓
におけるグルタチオン濃度の変化を示すグラフである。

本発明により、エステル化されたグルタチオンはそのま
ま細胞内に移行し、細胞内でヒドロラーゼの作用により
脱エステル化し、その結果、グルタチオンの細胞内濃度
が」１昇することになる。グルタチオンは二つのカルボ
キシル基を有しその一つはグルタミン酸残基中に、他の
一つはグリシン残基中に存在する。本発明で使用する化
合物は、グルタチオンの低級アルキルエステル、好まし
くはモノメチルエステルまたはモノエチルエステルであ
って、エステル化かグリシンカルボキシル基においての
み起こっているものである。

本発明で使用するグルタチオン源は重要ではない。すな
わち、グルタチオンは常套の方法によって合成、分離さ
れたものであっても、また購入されたものであってもよ
い。

エステル化は自体常套の方法で行なえば良く、得られた
エステルは充分に精製してモノエステルの純度を少なく
とも９８％（重量）、好ましくは９９％とする。この理
由は、従来の文献に記載された常套方法、たとえばエタ
ノール性塩酸で処理する方法においては、約５〜２０％
の割合でジエステルが混在するモノエステルが得られる
からである。ジエステルはマウスを使用する実験により
極めて毒性が高い事実が明らかとなった。純粋なモノエ
ステルを製造する方法の典型的な一例を以下の合成例１
に示す。モノエステルは塩基性１１１１において極めて
水溶性であり、ジエステルは塩基性１〕１１において有
機溶媒可溶性である。従って、常套の合成法によって得
られた不純な成績体を水に溶かし、アミンのごとき普通
の塩基を使用してｐｌ＋約８゜０〜９．２に調節し、次
いでクロロホルムや酢酸エチルのような水非混和性有機
溶媒を用いて処理することにより、純粋な目的物を得る
ことが出来る。

合成例１ グルタチオンモノエチルエステル（Ｌ−γ−グルタミル
ーし一システイニルーグリシルエチルエステル）の製造 ガラス栓付き容器中、グルタチオン（２０ｇ）を塩化水
素（４，８ｇ）含有エタノール（１００ｚｎ）で処［，
０°Ｃに６時間放置した。冷エタノール（２００＋ｐ）
を添加した後、トリエチルアミンを加えてｐＨ６とした
。この混合物を０°Ｃに１８時間保持し、沈澱物を炉取
した。この沈澱物を水（１００ａβ）に溶かし、Ｏ’Ｃ
に冷却した。−この溶液のｌ）Ｈをトリエチルアミンに
より８．８に調節し、りａａホルム（２５０ｉ（’づつ
）で３回にわたり迅速に抽出した。水層を６Ｍ塩酸によ
り素早＜ｐＨ５に調節し、減圧下に溶媒を蒸発、除去し
た。乾燥成績体を乾燥ノエチルエーテルおよびエタノー
ルで処理した。

得られた結晶をシ戸取し、ジエチルエーテルで洗った。

これを五酸化リンおよび塩化カルシウム上で減圧下に乾
燥させ、水性エタノールから再結晶した。収率８０〜９
０％。

このようにして得られるグルタチオンの低級アルキルエ
ステル、好ましくはモノメチルエステルまたはモノエチ
ルエステルは、通常、水に溶解して注射用に供する。し
がしなが呟これらエステルは経口的に投与されても良い
。また、これらエステルは適当な医薬的に許容しうる担
体と混和して製剤化してもよい。たとえば水に溶解させ
て液体剤としたり、ラクトースなどと混和して粉末剤と
する。

治療的有効量は、常套の実験方法により、特に殆ど化学
量論的細胞内加水分解が進行するものと信しられること
を考慮に入れ、グルタチオンに関する常套技術および下
記実験例に基づいて適宜に決定すれば良い。いずれの場
合においても処理される毒性の性質に基づいて患者内の
グルタチオン濃度をモニターすることか出来、また効果
の他のパラメターを使用することが出来る。現時点にお
いて提案しうる使用量は、体重ｋｇ当たりエステル約０
．５〜１０ミリモル、好ましくはエステル約２〜５ミリ
モルて・あって、これを１日１〜６回にわたって投与す
る。

投与は、通常、投与後０．５〜２時間で約０．５〜３ミ
リモルのグルタチオン細胞内濃度が得られるように行な
う。

反応の詳細なメカニズムは未だ明らかではないが、本発
明によって達成される細胞内のグルタチオン濃度の上昇
は、投与されたグルタチオンエステルが少なくとも肝臓
もしくは腎臓の細町中に移行し、そこで加水分解してグ
ルタチオンに変化することを示すものと解されて良い。

かがる加水分解は、グルタチオンモアエステルを肝臓お
よび腎臓のホモゲネートと共に培養するインビトロの実
験によって証明された。

なお、ＬＤ５゜（マウス、腹腔内性）はグルタチオンメ
チルエステルおよびグルタチオンエチルエステルのいず
れの場合も１０ミリモル／ｋｇｔ−’ｌａかに」二進る
値を示す。

以」二、本発明を一般的に説明したが、以下実施例によ
り本発明を更に具体的に説明する。

実施例１ 本例ではグルタチオンモノメチルエステルを使用した（
純度９９％）。グルタチオンエステルの溶液は無菌水を
使用して調製された。タフニック・ファームス・インコ
ーホレイテンドから得られた体重２Ｏ−２５ｙのマウス
（ＴＡＧ；（ＳＷＦＩ３Ｒ））を２４４時間置させた後
、グルタチオンエステルを１０　ミ１７モル／ｋｇの割
合で腹腔的投与した。第１ａ図及び第１１１図に示すご
とく、２時間置きにマウスを解剖し、肝臓と腎臓を取り
出して、グルタチオンの分析を行なった。、１群当たり
３匹のマウスを使用し、値を平均値±Ｓ、Ｄ、で示した
。

第１ａ図（肝臓）に示す如く、グルタチオンエステル（
ＧＳＨ−ＥＳＴＥＲ）を投与したマウスの肝臓では、投
与後２時間で実質的にグルタチオン濃度の上昇が認めら
れ、濃度はその後徐々に減少した。また、第１ｂ図（腎
Ｊｌｔｉ）に示す如く、腎臓中のグルタチオン濃度も投
与後２時間で実質的に上昇し、その後減少した。対照群
（ＣＯＮＴＲＯＬ）には０．１５Ｍ塩化す）　１７ウム
溶液の等容量が投与されだが、肝臓お、よび腎臓のいず
れにおいてもグルタチオン濃度の上昇は認められなかっ
た。

実施例２ 実施例１と同様にして、グルタチオンモノメチルエステ
ルをマウスに投与しすこ。ただし、マウスはグルタチオ
ン合成の阻止剤であるプチオニンスルホキシイミン２ミ
リモル／ｋｇで前処理し、グルタチオンエステルは当該
阻止剤投与後４時間に投与した。本実施例において、肝
臓と腎臓のグルタチオン濃度は、グルタチオン合成に必
要な酵素（γ−グルタミルシステインシンセターゼ）が
プチオニンスルホキシイミンによって着しく阻止されて
いたため、当初、著しく低い値まで減少していた。

」１記のごとく前処理したマウスにグルタチオンエステ
ル（ＧＳＨ−ＥＳＴＥＲ）を投与したところ、肝臓およ
び腎臓においてグルタチオン濃度の本質的増加が認めら
れた。第２ａ図（肝臓）および第２ｂ図（腎臓）参照。

対照群（ＣＯＮＴＲＯＬ）には食塩水を与え、前記した
時間的間隔においてＧ　Ｓ　Ｈの組織内濃度を調べた。

値は各群３匹のマウスを使用し、その平均値±Ｓ、Ｄ、
で表わす。

比較例１ グルタチオンモノメチルエステルに代えてグルタチオン
同量を使用した以外は実施例１と同様に操作を行なった
ー。第１ａ図に示されるように、投与群（ＧＳＨ）の肝
臓におけるグルタチオン濃度にはいかなる効果も認めら
れなかった。また、第１ｂ図に示される腎臓の場合には
、実質的に何等の変化もなかった対照群（ＣＯＮＴＲＯ
Ｌ）に比べて、投与群（ＧＳＩ−１）に僅かな効果か認
められた。

なお、グルタチオンモアメチルエステルについて観察さ
れた効果は、グルタチオンモアメチルエステルについて
認められた効果とほぼ同等である。

実施例３ 致死量以下のアセトアミ／７エンで処理したマウスにお
いてＪＩＦ、臓グルタチオン濃度に著しい低下が認めら
れた（第３図；対照群＜Ｃ０ＮＴＲ０Ｌ））。

アセトアミノ７エン処理に続いてグルタチオンモノメチ
ルエステルを注射された投与群（ＧＳＨ−ＥＳＴＥＲ）
においては、そのようなグルタチオン濃度の低下は認め
られなかった。対象的に、肝臓のグルタチオン濃度は着
しく上昇した。同じ条件下において、他のチオール類す
なわちＬ−システィン（ＣＹＳＴＥＩＮＥ）やＬ−シス
ティンメチルエステル（ＣＹＳＴＥＩＮＥ−ＥＳＴＥＲ
）の投与では、グルタチオンの肝臓濃度が著しく低かっ
た（第３図）。

本例において、絶食マウスにアセトアミ／７エン（２，
５ミリモル／ｋｇ’）を腹腔内注射し、３０分後（第３
図矢印）、ＧＳＨ千ツメツメチルエステル５１−１、Ｌ
−システィン、し−システインメチルエステル（１０ミ
リモル／ｋｇ）または等容量の０゜１５Ｍ食塩水（フン
トロール）を投与した。組繊ＧＳＨ濃度は、示された時
間間隔において各群３匹のマウスについて決定された。

値は平均値上Ｓ、Ｄ。

を示す。

実施例４ マウスに致死量の７セトアミノ７エン（５ミリモル／ｋ
ｌ？）を投与し、１時間後グルタチオンモアメチルエス
テル（１０ミリモル／ｋｇ）を投与したところ、致死し
たものは認められなかった。この実験においては１５匹
のマウスを上記方法で処理した；総で生存し、７日後に
は明らかに回復が認められた。等量のアセトアミ／７エ
ンを投与したのみで、グルタチオンモアメチルエステル
を投与しなかった４０匹のマウス群においては、７日以
内に総てが致死した。

本明細書における開示は、投与されたグルタチオンエス
テルが肝臓および腎臓の細胞中に移行し、そこで加水分
解されてグルタチオンになることを示す。マウスがプチ
オニンスルホキシイミンで前処理された実験は、グルタ
チオンエステルの移行に対する強い証明を与える；これ
らの条件下において構成分アミノ酸からのグルタチオン
合成は著しく阻害される。

グルタチオン合成はブチオニン又ルホキシイミン眸より
着しく阻害されるのでグルタチオンは細胞内に伝達され
るものと考えられる。すなわち、本発明はグルタチオン
の必要シンセターゼが欠乏している場合でも、細胞内グ
ルタチオン濃度の上昇を可能ならしめるものである。

本発明の技術的範囲はここに詳細に開示された例に限定
されるものではなく、当業者にとって明白な改変をも包
含するものである。たとえば本発明により、容易には細
胞膜を通過しない他のチオール類についてこれを細胞内
に移行せしめるため、低級アルキルエステル、好ましく
はメチルエステルまたはエチルエステルを形成せしめる
ことが可能である。また、本発明のエステルは、穀物植
物に対しまたは成育前のそれらの種子に対し、吸収可能
な液体剤の形で投与することにより、それらに対して適
用されることのある除草剤の影響を防ぐ安全剤として使
用することも出来る。

なお、本明細書で使用した「低級アルキル」なる用語は
通常の意味を有し、メチルおよびエチルに加え、プロピ
ルも包含する。

【図面の簡単な説明】

第１ａ図および第１ｂ図はそれぞれ肝臓および腎臓にお
けるグルタチオンエステルまたはグルタチオン投与群と
対照群のグルタチオン濃度の比較を示すグラフ、 第２ａ図および第２１〕図はそれぞれ肝臓および腎臓に
おけるプチオニンスルホキシイミド前処理マウスのグル
タチオン濃度変化を示すグラフ、第３図は肝臓における
アセトアミノ７エン前処理マウスのグルタチオン濃度変
化を示すグラフである。 特許出願人　コーネル・リサーチ・ファウンデーション
、インコーホレイテッド 代　理　人　弁理士　青　山　葆　はか１名ｏｃＯ＜Ｄ
　寸　へ　０ ５／Ｈ９９／７ｔ）７ｆ （ε ’／ＨＳＥ）’ｌ１７７７’

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、グルタチオンのグリシンカルボキシル基に関する低
   級アルキルエステルを有効成分とする細胞の内部におけ
   るグルタチオン濃度の」二列剤。 ２、当該低級アルキルエステルがメチルエステルである
   特許請求の範囲第１項記載の上昇剤。 ３、当該低級アルキルエステルがエチルエステルである
   特許請求の範囲第１項記載の上昇剤。 ４゜当該細胞が動物の細胞である特許請求の範囲第１項
   記載の上碧剤。 ５、当該細胞が植物の細胞である特許請求の範囲第１項
   記載の上昇剤。 ６、当該低級アルキルエステルが体重キログラム当たり
   ０．５〜１０ミリモル投与されるような投与形態にある
   特許請求の範囲第４項記載の上昇剤。 ７、当該投与形態が注射剤形である特許請求の範囲第、
   ６項記載の上ｙ１剤。 ８、医薬の解毒剤として使用される特許請求の範囲ｔｐ
   Ｊ１項記載の上昇剤。 ９、照射抵抗増強剤として使用される特許請求の範囲第
   １項記載の上昇剤。 １０、当該医薬が７セトアミノ７エンである特許請求の
   範囲第８項記載の上昇剤。 １１、除草剤の毒性に対する抵抗増強剤として使用され
   る特許請求の範囲第１項記載の」二昇剤。 １２、反応性酸素中間体の影響に対する抵抗増強剤とし
   て使用される特許請求の範囲第１項記載の」二昇剤。 １３、本質的に舅粋なグルタチオンのグリシンカルボキ
   シル基に関する低級アルキルエステルを有効成分とする
   薬剤を、細胞の内部におけるグルタチオン濃度を上昇せ
   しめるに足る量において投与することにより、当該低級
   アルキルエステルを当該細胞の内部に移行せしめたうえ
   、その内部で加水分解せしめてグルタチオンに変化せし
   めることを特徴とするグルタチオンの細胞内濃度の上昇
   方１４、　当該低級アルキルエステルがメチルエステル
   である特許請求の範囲第１３項記載の上昇方法。 １５６　当該低級アルキルエステルがエチルエステルで
   ある特許請求の範囲第１３項記載の上昇方法。 １６、当該細胞が動物の細胞である特許請求の範囲第１
   ３項記載の上昇方法。 １７、当該細胞が植物の細胞である特許請求の範囲第１
   ３項記載の上昇方法。 １８、当該低級アルキルモノエステルが体重キログラム
   当たり０．５〜１０ミリモル投与されるような投与形態
   にある特許請求の範囲第１６項記載の上昇方法。 １９、当該投与形態が注射剤形である特許請求の範囲第
   １８項記載の上昇方法。 ２０、医薬の解毒を特徴とする特許請求の範囲第１３項
   記載の上昇方法。 ２１、照射抵抗増強を特徴とする特許請求の範囲第１３
   項記載の上昇方法。 ２２、当該医薬が７セトアミノ７エンである特許請求の
   範囲第２０項記載の上昇方法。 ２３、除草剤の毒性に対する抵抗増強を特徴とする特許
   請求の範囲第１３項記載の」１昇方法。 ２４、反応性酸素中間体の影響に対する抵抗増強を特徴
   とする特許請求の範囲第１３項記載の上昇方法。 ２５、本質的に純粋なグルタチオンのグリシンカルボキ
   シル基に関する低級アルキルエステル。 ２６、当該低級アルキルエステルがメチルエステルであ
   る特許請求の範囲第２５項記載のエステル。 ２７、当該低級アルキルエステルがエチルエステルであ
   る特許請求の範囲第２５項記載のエステル。 ２８、グルタチオンジエステルが混入しているグルタチ
   オンモノエステルを水性媒質に溶解せしめ、この溶液の
   ｐｉを８．０〜９．２に調節し、当該水性媒質に対し非
   混和性の有機溶媒を用いてグルタチオンジエステルを抽
   出することを特徴とするグルタチオンモノエステルの精
   製方法。