JPS6011891B2 - インタ−フエロン誘起剤の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は植物の組織から単離されたインターフェロン（
以下ＩＦという）誘起剤の製法に関する。

本発明は、優れたＩＦ誘起活性を有する物質が、キク科
ヨモギ属に属する各種植物またはその変員の組織に含ま
れ、そしてこの活性物質を簡単に安価に単離することが
できるという知見に塞いている。従って本発明の目的は
、優れたＩＦ譲起活性と低い毒性とをもちかつ簡単に安
価に製造することのできるＩＦ誘起剤の製法を提供する
ことにある。

本発明により、無定形白色状粉末の状態において安定で
ＩＦ誘起活性および下記の理化学的特性を有する物質が
提供される。

風 理化学的特性 【１｝ 元素分析 Ｈ：７．４±０．４％、Ｃ：４５．６±０．４％、Ｎ：
１３．５±０．４％、Ｐ：２．８±０．３％■ 分子量
約１０万なし、し約３００万（主として約５０万なし、
し１００万）、〔スビンコ。

モデルＥ分析用超遠心機（米国べツクマン社製）使用の
超遠心法、アミコン限外炉過機およびＸＭ５０、ＸＭＩ
ＯＯＡおよびＸＭ３００炉過膜（米国アミコン社製）Ｕ
ＫＩ０、ＵＫ５０およびＵＫ２００炉過膜（東洋炉紙製
）使用の限外炉過法、およびセフアデックスＧ−２００
（スェーデン国、ファーマシア・ファイン・ケミカルＡ
Ｂ製）使用のゲル炉過法により測定〕糊 融点または分
解点 融点不明確。

約２２０ｏｏで炭化する。｛４’紫外線吸収スペクトル 第１図の通り（０．１ＮＮａＯＨ中で測定したが、水ま
たはＩＮＮａＯＨ中でも変化しなかった。

）〔５）赤外線吸収スペクトル 第２図の通り（ＫＢｒ法） （６｝ 各種溶剤中の溶解性 水に、溶解し水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸
化アンモニウム等のアルカリ性水溶液にとくによく熔解
する。

メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、
アセトソ、クロロホルム、エーテルに鍵溶である。（７
｝ 呈色反応 ニンヒドリン反応、およびディットマー反応に陽性。

フオリン試薬およびェルソン・モーガン反応に陰性。ｔ
８｝性質 酸性 ‘９） 主な化学組成 川アミノ酸 アスパラギン酸 （９．５±０．６％）スレオ
ニン （４．９±０．６％）セリン
（４．７±０．６％）グルタミン酸
（８．４±０．６％）プロリン
（３．１±０．６％）グリシン （１０．
２±０．６％）アラニン （１１．２±
０．６％）バリン （６．９±０．６
％）イソロイシン （４．６±０．６％）ロ
イシン （７．８±０．６％）チロシン
（徴 量）フエニールアラニン
（２．９±０．６％）リジン （６
．２±０．６％）ヒスチジン （１．８±０
。

６％）アルギニン （５．３±０．６％）
アンモニア （１２．１±０．６％）（鮒
塩酸で１１０００で４鞠時間減圧下に加水分解後、米国
テクニコン社製、テクニコン・アミノ酸オートアナライ
ザーＮＣ−１型で分析した） 【ロー 糖 検出されない。

（０．１Ｎ硫酸で８０℃で２０分間およびＩＮ硫酸で１
００ｑＣで２時間それぞれ加水分解後、米国テクニコン
社製、テクニコン糖オートアナライザーＮ−１型で分析
した） 皿 比旋光度 〔Ｑ〕答＝７３０〜十７９０ 平均＋７６ｏ （濃度０．４７％、０．１ＮＮａＯＨ中）‘Ｂ｝ 生物
学的特性 ‘１’『誘起活性 本発明によるＩＦ謎起剤の試料を用いて試験動物の細胞
および血清中にＩＦを誘起し、その活性を後記試験例記
載の方法で測定した結果は第１表および第２表の通りで
、ＩＦ活性が認められた。

第１表 ２頭のウサギを用いて、後記試験例記載の方法で得た結
果は第２表の通りで、２頭ともに投与後２時間で最大の
活性に達した。

第２表 （ＩＦ活性、ィン・ヒボ法） 投与後採血までの時間（時間） 後記試験例記載の方法により、本発明によるＩＦ誘起剤
の作用で試験物中の体内にＩＦが誘起されたことが認め
られる。

｛２１『譲起活性の安定性 本発明によるｍ誘起剤の試料（各１の９）を水（各１Ｍ
）に溶解し、１００ｑｏで所定時間または所定温度で１
時間それぞれ加熱した後、各試料の活性を試験例１記載
のィン・ビトロ法に準じて測定した結果は第３表および
第４表の通りであって、本発明による誘起剤は熱に安定
であることが認められた。

第 ３ 表（ＩＦ活性） ６０ ＞１００＞１００ ７３ ＜１０８０ ＞１０
０ ＞ｌｏｏ ７０ く１０１００ ＞１００＞１０
０ ７５ ＜１０（注）加熱時間：１時間第 ４
表（ＩＦ活性） （注）加熱温度１００℃ （３｝ 急性毒性 オスおよびメスのマウス（ｄｄｙ系、５週令、体重２０
±１の９、各群１０匹）を試験動物とした。

生理的食塩水に溶解した本発明によるＩＦ誘起剤を、マ
ウス腹腔内または経口投与した結果、ＬＤ５。値は＞１
タ′ｋ９（腹腔）および＞５タ′ｋｇ（経口）であり、
メスとオスとの間に著差はなかった。‘４｝ 抗腫場活
性 マウス（ｄｄｙ系、５週令、体重２０±１夕、各群１０
匹）を試験動物とし、Ｓ−１８０ザルコーマ固型腫湯（
２×２×２肌）またはェーリッヒ腹水がん（２．５×１
ぴ個）をマウスの豚商に移植し、２４時間後に本発明に
よるＩＦ誘起剤（０．２の９含有）水溶液を各マウスに
毎日１回経口投与し、１４日間続けた。

抗腫湯活性が認められた。上記の特性から、本発明によ
る物質は、アミノ酸、リン酸を主体とする分子量約１０
万から約３００万（主として約５０万から約１００万）
の高分子を有し「リン酸を含有する蛋白質の１種である
と思われる。

またこの物質によって動物の体内または試験管内に誘起
された『は、トリプシン（０．０８％、３７０、２時間
）で失活するばかりでなく、動物種特異性とウイルス種
非特異性とを有しているので、本物質は一般に認められ
ているｍ誘起剤の定義に該当する物質であることが分っ
た。本発明による物質を同機な理化学的および生物学的
特性を有する物質は知られていないから、本物質は新規
物質であり、新規ｍ誘起剤である。

すなわち公知のフイトヘマグルチニン、アメリカヤマゴ
ボウ・マイトジエンおよびコンカナバリンＡのような植
物凝集素は公知文献の記載によると、分子量１０万以上
の蛋白質で、５６００で１時間または６０００で５時間
加熱すると、『譲起活性を失なうばかりでなく、これら
のＩＦ誘起活性は非常に弱い。これに対して、本発明に
よるＩＦ誘起剤は、化学組成が異なる点、１００００で
数時間加熱しても安定である点、およびＩＦ誘起活性が
高い点等において植物凝集素と区別される。次に当帰の
緩から得られた公知のＩＦ譲起剤はは１０万以上の高分
子物質で、１００００で１時間加熱しても失活しないが
、その化学組成（ヘキソース４８％、ゥロン酸４０％、
蛋白質５％）および赤外線吸収スペクトルが異なること
によって、本発明による『誘起剤と区別される。またク
ワの根皮から得られたｍ誘起剤は、分子量２万以上（主
に６万以上）で１一３結合グルコース（ヘキソース９６
％を含む）を主体としているから、本発明によるＩＦ誘
起剤と区別される。

本発明によるＩＦ誘起剤の製造原料であるキク料ヨモギ
属植物に含有されるアルテミゼチン、シネオール、セミ
カルバゾン、１−カンフア−、セスキテルベン類、カル
ジネン類、カリオフィレン類、アルテミシアーケトン、
Ｑービネン、クミンアルデヒド、ベンタコサン、カビレ
ン、カビロン、サントニン、ツモン、モノギニン、トリ
コサノール、ビタミンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ等は、ＩＦ誘起活
性を有しない低分子物質で、本発明によるＩＦ誘起剤と
理化学的特性が異なっている。本発明によるＩＦ誘起剤
は、公知の植物の組織から単離されたＩＦ誘起剤よりも
優れたＩＦ譲起活性を有し、動物に経口投与した場合の
急性毒性は非常に低く、抗腫傷活性を有しているので、
ヒトおよび動物における発がん型ウイルスのようなウイ
ルス感染症の予防および治療用として期待される。

本発明による提供されるＩＦ誘起剤の製造方法は、キク
科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）ヨモギ属（Ａれｅｍｉｓｉ
ａ）またはその変員に属しかつｍ誘起活性物質を含有す
る植物の組織から、上記活性物質を抽出し、抽出物から
これを回収することを特徴としている。

本発明の方法に使用される植物は世界各国に豊富に産し
、自然または人工的に突然変異体や雑種のような変員（
Ｖａｒｉａｎｔ）を形成する頭向がある。

各国産の多くのヨモギ属植物およびそれらの変員を本発
明の目的に実用できることがわかった。下記の植物は例
示にすぎない。

ヨモギ（〜ｔｅｍｉｓｉａｐｒｉｎｃｅｐｓＰａｍｐ．
）、カワラョモギ（Ａ．ｃａｐｉｌｌａｒｉｓＴｈ血．
）、ニガヨモギ（Ａａ戊ｉｎ比ｉｕｍＬ．）、ミブヨモ
ギ（Ａ．ｍａｒｉｔｉｍａＬ．）、クラムヨモギ（Ａ．
ｋｍｒａｍｅｎｓｉｓＱａｚ．）、ヤマョモギ（Ａ．ｍ
ｏｎｔａｎａＰａｍＰ．）、ヒメヨモギ（Ａ．ｆｅｄｄ
ｅｉ Ｌｅｖ．ｅｔ Ｖａｎ．）、オトコ ヨモギ（Ａ
財ｐｏｎｉｃａ Ｔｈ血．）、イヌョモギ（Ａ．ｋｅｉ
ｓｋｅａｎａＭｉｑ．）、ヒロハヤマヨモギ（Ａ．ｓｔ
ｏｌｎｉｆｅｒａＫｏｍａｒ．）、ヒトツバヨモギ（Ａ
．ｍｏｎｏｐｈｙｌｌａＫｉｔａｍ．）、シロョモギ（
Ａ．ｓｔｅｌｌｅｒｉａｎａＢｅｓｓ．）、Ａ．ｖｕｌ
鱗ｒｉｓＬ．、Ａ．ａｂｒｏｔａｎｕｍ Ｌ．、Ａ．ｃ
ａｍｐｅｓｔｒｉｓ Ｌ．、ＡｖａｌｌｅＳｉａＣａ
ＡＩｌ‐、 Ａ‐ｍ。

ｌｉｎｉｅｒｉ Ｑｕ舎Ｚ、 Ａｄｒａｃｕｎｃ山ｕＳ
Ｌ− 、Ａ４１ｕｄｏｖｉｃｉａｎａ Ｎｕｔｔ．、
Ａａｒｂ順ｃｕｌａ Ｎｕｔｔ．、 Ａ．ｔｒｉｄｅｎ
ｔａね Ｎｕｔｔ−、 Ａ．ｍｉｆｏｊ；ａ Ｔｏｎ．
、 Ａ．ｃａｕｄａｔａ Ｍｉｏｈｘ．、 Ａ。ｌｊｎ
ｄｌｅｙａｎａ Ｂｅｓｓ．、Ａ．ｆｒｉｇｉｄａ Ｗ
ｍｄ．、Ａ．がｅｎｎｉｓＷｍｄ．。ここに例示した植
物は毒性が低い。

ある種のヨモギ属植物の葉および種子がたとえば食用、
薬草、医薬品原料等として長年の間用いられてきたが、
ヨモギ属の組織にＩＦ誘起活性物質が含まれていること
は知られていない。キク科ヨモギ属に属しかつ本発明に
よる活性物質を含む植物のすべての組織を本発明の方法
に用いることができるので、豊富な原料の安価な供給に
何の問題もない。全部の組織を用いることができるが、
根は土を除去するのに手数がかかるので、葉と茎とを用
いるのが実際的である。葉と茎とに含まれた活性成分の
量はほとんど同じである。組織の各部分に含まれる活性
成分の量は、植物の開花前と開花後と著しい変化がない
。新鮮な原料を用いてもよいが、保存上および抽出率の
点から乾燥した原料を用いるのが有利である。

乾燥方法は任意で自然乾燥や熱風乾燥でもよい。使用前
に水洗してもよい。抽出は一般に水で任意温度（たとえ
ば室温から抽出混合物の沸騰まで）行なうことができる
。

本発明による物質はアルカリ性の水溶液（例、ＰＨ７一
１０）によく溶けるので、公知の緩衝液や水酸化ナトリ
ウム、水酸化カルウム、水酸化アンモニウム等を用いて
、抽出時の水のＰＨを調整するとよい。抽出時間は任意
であるが、室温では通常１−５日である。抽出温度が高
いと抽出時間は短縮される（たとえば４５−８び○で、
麓梓下３０分から６時間）。本発明の方法によって、植
物の組織に含まれた活性成分の大の部分（場合により９
０％以上）を抽出することができる。しかし抽出温度が
高くなると共に色素のような不必要な成分の抽出量も増
加するので、温度をあまり高くすることは避けねばなら
ない。所望により、抽出時に適当な防腐剤を加えること
もできる。抽出は連続式でもバッチ式でもよい。抽出水
と原料との比は任意である。または、メタノール、エタ
ノール、プロパノール、ブタノール、ジメチルスルフオ
キシド、アセトンのような親水性有機溶剤の適当な濃度
（たとえば２０一８０％）で抽出してもよい。この場合
、任意温度（たとえば４０一８０００）４時間ないし２
日間抽出すればよい。炉過、圧搾または遠心分離のよう
な常法により、抽出液から植物和残澄を除去し、こうし
て得られた抽出液から低分子物質、色素等の不活性成分
を除き、活性成分を回収する。

このための実用的な方法の例は次の通りである。風 本
発明によるＩＦ誘起剤の活性成分は、分子量約１０方以
上約３００万以下（主として約５０万なし・し１００万
）の物質を含む部分に存在するから、分画分子量１０万
以上の物質を分別できる適当な膜を用いた限外炉過法で
上燈液を処理する。

限外炉過の圧力はたとえば０．１−５ｋ９／ｃ虎とする
ことができる。こうして得られた活性部分を集めて、凍
結乾燥すると褐色の粉末が得られる。

曲 抽出液を所望による減圧下で濃縮し、親水性有機溶
剤（たとえばメタノール、エタノール、ブロパノール、
ブタノール、アセトン等）を抽出液またはその濃縮液に
適当な濃度（たとえば４０‐７肋′ｖ％）になるように
加えると、活性成分を含む沈殿物が生じるので、これを
減圧下に乾燥すると、褐色の粉末が得られる。

‘ｃ｝ 上記の有機溶剤の代わゆこ、塩化アンモニウム
「硫酸アンモニウム、セチルトリメチルアンモニウムプ
ロミドのようなアンモニウム塩または塩化亜鉛、塩化鋼
のような無機金属塩を適当な濃度（たとえば２０−５帆
／ｖ％）になるように加えると、活性成分を含む沈殿物
が生じるので、沈殿物をたとえばセルロースチュューブ
で透析するか、または限外炉過（分画分子量１万の膜）
によって脱塩後乾燥すると、褐色の粉末が得られる。

以上のようにして抽出液を処理することによって、原料
中の活性成分の大部分（場合により９０％以上）を回収
することができる。

しかし、得られた乾燥粗粉末中の不活性成分の含有量は
凶の方法が最低である。また凶の方法は操作が簡単で費
用が安く短時間に行なうことができる。しかも■の方法
で得られた粗粉末を動物に多量に経口投与しても著しい
副作用は認められないことがわかった。次に、この粗粉
末を、たとえばゲル炉過剤またはイオン交換剤を用いる
カラムクロマトグラフィーのような常法によって精製す
る。

ゲル炉過剤を用いた場合は適当な緩衝液で溶出してもよ
いが、通常は水で熔出すればよい。イオン交換剤を用い
た場合は適当な緩衝液で溶出する。実用的なゲル炉過剤
の例は「セフアデックスＧ５０からＧ−２００まで、セ
フアローズ波から服まで、セフアクリルＳ一２００また
はＳ−３００（スエーデン国、ファーマシア・ファイン
・ケミカルＡＢ製）、バイオゲルＰ−３０力）らＰ−３
００まで、バイオゲルＡ（米国、バイオラード・ラボラ
トリース製）、サガバツク（英国、セラバツク・ラボラ
トリース製）等である。イオン交換剤の実用的な例は、
ＤＥＡＥセフアデツクスＡ−２５およびＡ−５０（ＣＩ
‐型）、ＱＡＥセフアデツクスＡ−２５およびＡ−５０
（ＣＩ‐型）、ＣＭセフアデツクスＣ−２５およびＣ−
５０（Ｎａ＋型）、ＳＰセフアデックスＣ−２５および
Ｃ−５０（Ｎａ＋型）、ＤＥＡＥセフアセル（ＣＩ‐型
）、ＤＥＡＥセファロースＣＬ−服（ＣＩ‐型）、ＣＭ
セファロースＣＬ−曲（Ｎａ十型）（スェーデン国、フ
ァーマシア・ファイン・ケミカルＡＢ製）等である。適
当なアニオンまたはカチオンィオン交換セルロースを用
いて粗粉末を精製することもできる。

こうして得られた物は、多少の不純物を含んでいるが、
ＩＦ誘起剤として実用することができる。所望により、
上記の精製工程を組合わせることによって、不純物をさ
らに除去することもできる。実施例 １ 乾燥したヨモギの葉（ｌｋ９）を水洗した後、水（２０
〆）中に常温で３日間放置することにより抽出し、これ
を遠心処理（６００比．ｐ．ｍ．、２０分間）して、抽
出液と残澄に分け、残経を水（各各５そ））で２回洗浄
し、洗液を抽出液に合わせた。

こうして得られた抽出液をＵＤ−６型限外炉過器（バイ
オェジニアリングＫ．Ｋへ東京）で、ＵＫ２００限外炉
過膜（分画分子量２０万、東洋炉紙社製）を用いて限外
炉遇した（圧力３は／ｃ椎）。残留物を集めて凍結乾燥
し、褐色粉末（１９．６７６夕）を得た。この粉末（１
．５夕）を水（５の‘）に溶解し、その水溶液をセフア
デックスＧ−２００（ファーマシア・ファイン・ケミカ
ルＡＢ、スェーヂン国）を充填したカラム（４．５×７
０肌）に添加し、水（６００の‘）で熔出し、溶出液を
各３地の区分に分け、２７番から６坊蚤までの区分を合
わせて凍結乾燥し、白色状粉末（２２０の９）を得た。
さらに精製するために、この粉末（１００脚）を０．０
１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０、１＝０．０１）
（５羽）に溶解し、ＤＥＡＥセフアデツクスＡ−５０（
フアーマシア・ファイン・ケミカルＡＢ、スェーデン国
）を充填したカラム（２．５×７０伽）に添加し、０．
１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ９．０、０．９の食塩を
含む、３００机上）で溶出し、溶出液を各３の‘の区分
に分け、１５蚤から３抗爵までの区分を合わせた。この
溶液を脱塩後、凍結乾燥し、不定形な白色状粉末（６２
．７ｍ９）を得た。このものの理化学的および生物学的
特性は前記の通りである。これを第１の白色状粉末と比
べると、ＩＦ誘起活性はおよそ同じであるが、不純物の
量が減少した。高純度であることや超遠心法および霞気
泳動によって確認された。比較のために各工程で得られ
た物質のｍ誘起活性を後記試験例１記載のィン・ビトロ
法で測定した結果は次表の通りであった。

第５表 ＩＦ活性 ゲル源過後＞１００＞１００ ９３ イオン交換後＞１００ ＞１００ ＞１００実施例 ２
乾燥したカワラョモギの葉（ｌｋ９）を水洗した後、こ
れに水２０そを加え室温に２時間放置後、ＩＮ水酸化ナ
トリウムを加えてＰＨを８．５に調整した。

次にこれを６５００で２時間加温抽出した。その後、実
施例１の方法に準じて精製した。この精製物（６０．２
の９）の理化学的および生物学的特性は、実施例１によ
って得られたものの特性と大差はなかった。

実施例 ３−２６ 第６表に示した乾燥した植物の葉、茎および種子を実施
例１記載の方法り準じて雲別々に処理し、すべての実施
例の第２工程で得られた産物を後記試験例１記載の方法
（ィン・ビトロ法）によって、『誘起活性を測定した。

結果を第６表に示す。得られた各産物の理化学的および
生物学的特性は実施例１の方法で得られた産物のものと
実質的に同一であった。

第６表 試験例 １ ＩＦ誘起剤によるＩＦ誘起の方法およびＩＦ活性の測定
（参考本蔵：Ｙ．Ｋｏｊｉｍａ、Ｋｉｔａｓａｔｏ〜ｃ
ｈ．、ＥがへＭｅｄへ４３：３５、１９７０）【ａ｝
ィン・ビトロ法によるｍの誘起方法ウサギ（体重約ｌｋ
９、ニュージーランドホワイト種、ＳＰＦ）を全採血し
て殺し、賭臓、骨髄およびリンパ節細胞を採取し、混合
細胞１０７／叫を含む細胞浮遊液をつくり、各浮遊液区
分（１肌【）に、本発明の実施例１記載の方法で得られ
たＩＦ誘起剤１０、１、０．１、０．０１Ａタ′地をそ
れぞれ加え、２５こ０で２４時間培養後、各培養液を遠
心処理してその上燈液をとり、ｍ活性測定用に供した。

‘ｂ’イン・ビボ法によるび議蓬方法 実施例１記載の方法で得られたｍ誘起剤の水溶液（５０
０仏夕／叫）２私をウサギ（体重約ｌｋ９、ニュージー
ランドホワイト種、ＳＰＦ）の耳静脈に注射し、１、２
、４、６時間後に採血（２の‘）し、その血清をＩＦ活
性測定用に供Ｌ．た。

｛ｃ｝『活性の測定 上記｛ａ｝、‘ｂ）法ともに、産生されたＩＦ活性の測
定は、ウサギ腎株化細胞（ＲＫ−１３）を用いた５０％
ブラック半減法で行なわれる。

まず予めシャーレに準備しておいた上誌細胞の単層培養
上に、上記【幻、‘ｂ｝法で得られた適当に稀釈した『
試料溶液を加３７℃で１夜培養後、水庖性口内炎ウイル
ス（Ｖｅｓｉｃ山ａｒｓｔｏｍａｔｉｔｉｓｖｉｒ瓜）
を攻撃用ウイルスとし、そのブラックの減少率を指標と
してＩＦ活性を測定した。なお『活性の単位はＩＦ無処
置細胞におけるブラック数の５０％を示す稀釈の逆数と
して表現される。誌験例 ２ｍ誘起剤であることの証明
方法 上記｛ａ｝、【ｂ｝の方法で産生されたＩＦ試料は、同
動物種のウサギＲＫ−１粉細胞上で水泡性口内炎ウイル
スの増殖を抑制する他、ワクシニアウィルス（Ｖａｃｃ
ｉｎｉａｖｉｍｓ）の増殖も抑制するが、動物種の異な
るマウスのＬ細胞では水庖性口内炎ウイルスの増殖を抑
制しない。

また０．０８％トリプシンを３７０で２岬時間作用させ
るとそのｍ活性は失活する。試験例 ３ 雷気泳動 蚕気泳動は東洋科学産業（株）製（東京）の装置（ＡＥ
−Ｚ型）を用い、厚さ３肋のポリアクリルアマィドゲル
のプレートと０．３Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ８．４）とを
用いて行なった。

その結果、単一のバンドを示し、露気泳動的に本発明の
物質が均一であることが認められた。図面の簡単な説明
第１図は、本発明による物質の紫外線吸収スペクトル、
第２図は赤外線吸収スペクトルを示す。

第１図第２図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）ヨモギ属（Ａｒｔ
   ｅｍｉｓｉａ）に属しかつインターフエロン誘起活性物
   質を含有する植物またはその変員の組織から上記活性物
   質を抽出し、抽出物からこれを回収することを特徴とす
   るインターフエロン誘起剤の製法。 ２ 抽出液に親水性有機溶剤を加えることにより活性物
   質を回収する特許請求の範囲第１項による方法。 ３ 抽出液にアンモニウム塩または無機金属塩を加える
   ことにより活性物質を回収する特許請求の範囲第１項に
   よる方法。 ４ 水性抽出液から限外濾過によつて活性物質を回収す
   る特許請求の範囲第１項による方法。