JPS5955195A

JPS5955195A - Amino acid

Info

Publication number: JPS5955195A
Application number: JP16616282A
Authority: JP
Inventors: Haruyuki Ogishi; 大岸　治行
Original assignee: Mitsubishi Kasei Corp
Current assignee: Mitsubishi Kasei Corp
Priority date: 1982-09-24
Filing date: 1982-09-24
Publication date: 1984-03-30

Abstract

NEW MATERIAL:gamma-L-Glutamyl-3-aminoproline. USE:Useful as a biochemical reagent, and also expected to have a specific physiological activity such as antimetabolic activity. PROCESS:AMIGASATAKE (Morchella esculenta IFO 30287) is cultured at 20- 30 deg.C and 5-9pH for about 5-20days, and the gamma-L-glutamyl-3-aminoproline is separated from the cultured cells and cultured liquid.

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、新規なアずノ酸で１リーシニイルタミル−３
−アミノブーツ、ンに！、するものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention provides a novel azunoic acid, 1-licinyltamyl-3
-Amino boots, nni! , is something to do.

が存在することはすでに思出されてい今。。It is already remembered that it exists now. .

本発明者惑は、アミガサタケの培養について研究を進や
たｉｉ！ｉ米アミガサ（４９培養菌糸中に新規ペプチド
が多量咳存在すると生を見出し、これを純粋に単離する
ことに盛功した。The inventor has been conducting research on culturing morel mushrooms.ii! They discovered that a new peptide was present in large quantities in the cultured mycelia of rice morel (49), and succeeded in isolating it in its pure form.

得られ大ベブテドーホに可溶、↑機溶媒には不溶で酸お
よびγ−グルクミルトランスベブチにより、２つのアミ
ノ酸に加水分解される。この２つのアミノ酸はアミノ酸
自動分析および−く一バ□−クロマトグラフィーにより
、グルタミン酸と３−アミノプロリンと同定された。。The resulting compound is soluble in large bebutate doho, insoluble in organic solvents, and hydrolyzed into two amino acids by acid and γ-glucumyl transbebutylene. These two amino acids were identified as glutamic acid and 3-aminoproline by automatic amino acid analysis and -couple chromatography. .

グルタミン酸けＬ−グルタミン酸脱水米酵素およびＬ−
グータミン酸脱炭酸酵素の作用を受ける事か　　　　：
らＬ入りである。これらの事実から、このペプチドはγ
−Ｌ−グルタミルー３−アミノプロリンと決定された。Glutamic acid, L-glutamic acid dehydrated rice enzyme and L-
Is it affected by the action of gutamate decarboxylase?
Contains L. From these facts, this peptide is γ
-L-glutamyl-3-aminoproline.

埴発明の化合物の製造に用いられる菌種としてはアミガ
サタケ（Ｍｏｒｃｈｅ’ｌｌａ　ｅｅｃｕ’１ｅｎｔ８
．工ＦＯ，３０，２ｇ７　）が挙げられる。The bacterial species used in the production of the compound of the Hani invention is Morche'lla eeku'1ent8.
．． Engineering FO, 30, 2g7).

は、通常例えば炭素源としては、グルコース、スクロー
ス、デキストリン、糖蜜、でんぷん等が使用される。窒
素源としては、コーンステイブリカー、ペプトン、肉エ
キス、ジャガイモ抽出液などが用いられる。また無機塩
七しては、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナ
トリウム等が用いられる。必要に応じて酵母仝キ□ス、
ビタ・□ミ／、アミノ哨ＦＩｈどを加炙、て、：′４よ
い。Usually, for example, glucose, sucrose, dextrin, molasses, starch, etc. are used as carbon sources. Corn stable liquor, peptone, meat extract, potato extract, etc. are used as the nitrogen source. Further, as the inorganic salt, potassium phosphate, magnesium sulfate, sodium chloride, etc. are used. Kiss the yeast if necessary,
Bita・□mi/、Aminobutsu FIh、te：'4 Good.

培キ流度ｔｄ２ｏ〜３０Ｃ付近が好ましく、又ｐＨＩｒ
Ｊ：’ｓ’〜７′イｉ、１望。ニ二培養は、ｔ−，２０
日間で終了するがこの間螢光灯等で光を照射するとさら
に収１率向上が得られる。The culture flow rate is preferably around td2o~30C, and pHIr
J:'s'~7'ii, 1 hope. Ni2 culture is t-,20
The process will be completed within a few days, but if the process is irradiated with light using a fluorescent lamp or the like during this time, the yield rate can be further improved.

培養物中に蓄積されたｒ−Ｌ−グルタミル−・・３−ア
ミノプロリンを分離、精興するためには通常アミノ酸、
ペプチドを分離する方法が適宜応用される。すな□わち
γ□−Ｌ−グルタミ□ルー３−アミノプロリンは菌株お
よが培養液中に蓄積されるが菌体中のγ−Ｌ−グ、ルタ
ミ、ル３−アミノプロリンは、水１年溶媒で抽出し、イ
オン交換樹脂、セルロースを用いたクロマトゲランイー
、ゲル沖過等介適宜組み合わせることにより、精製する
ことができる。上記水性溶媒としては、通常水または水
−エタノールが用いられるが水−エタノールの代シに水
とメタノールやアセトン等の親水性溶媒との混合溶媒を
用いることも□　でき□る。□また所望ならば親水性溶
媒を単独で用、・　・：５　否、、Ｉこ、とも下きる。In order to separate and refine r-L-glutamyl...3-aminoproline accumulated in the culture, amino acids,
Methods for separating peptides are applied as appropriate. In other words, γ-L-glutami-3-aminoproline is accumulated in the bacterial strain and culture solution, but γ-L-g, glutami, and 3-aminoproline in the bacterial body are It can be purified by extraction with a solvent for 1 year, followed by an appropriate combination of ion exchange resin, chromatogelane using cellulose, and gel filtration. As the aqueous solvent, water or water-ethanol is usually used, but instead of water-ethanol, a mixed solvent of water and a hydrophilic solvent such as methanol or acetone can also be used. □Also, if desired, a hydrophilic solvent may be used alone.

抽出は常温で行うが加温してもよい。Extraction is performed at room temperature, but may be heated.

、、本発明に係る□γ二ＬしグルタミＱ　　５−アミ・
　ノブロリンは生化学試薬として貴重で、ちり、又その
構造から代謝拮抗作用等の特−、、な生理活性が期待さ
れる。,, □γ2L and glutamiQ 5-ami・
Nobrolin is valuable as a biochemical reagent, and due to its structure, it is expected to have special physiological activities such as antimetabolite action.

一以下に実・施例によ・す、本発明を更に詳細に説明す
るが本発明はその要旨を超えたい限り、以下の実施例に
限定されるものではない。The present invention will be explained in more detail with reference to examples below, but the present invention is not limited to the following examples as long as it goes beyond the gist thereof.

実施例／ジャガイモ抽出液（ｌＩｏ　０　ｆめジャガイモ切片を
＜１の卒中で蒸興して得られる浸出液）にθ、！チグル
□コース、０．”０’　／　４酵母エキスを添加した培
地左Ｏｍｅを含む三角フラスコ（、？θ０ｍ１）にアミ
ガサタケを接種し１，２４〜２ｋＣ螢光灯下で７日間培
養し、さらに０．／　％　Ｌ−プロリンを含む同組成の
液体培地を入れかえて３日間静置培養した。Example/ Potato extract (infusion obtained by vaporizing lIo 0 f potato slices with a stroke of <1) was added with θ,! Chiguru □ course, 0. "0'/4" Morel was inoculated into an Erlenmeyer flask (?θ0ml) containing medium Ome supplemented with yeast extract, cultured for 7 days under a 1,24-2 kC fluorescent lamp, and further incubated with 0./% L-proline. The culture medium was replaced with a liquid medium of the same composition containing .

ｆｆ＋養終了後各フラスコから菌体を炉別する。After the completion of ff+ cultivation, the bacterial cells are separated from each flask.

得られた溝潤閑体（２ｋｙ、　）を１．０１のｇｏ％エ
タノ−省で抽出し、炉液を゛てンハーライト”工Ｒ−―
θＢ（）１＋）のカラム（、ｉｏＸ、７　／ｃｒｎ）ニ
吸着させ水洗後、Ｊ、　Ｎ−アンモニアで溶出した。The obtained groove filtrate (2ky) was extracted with 1.01 go% ethanol, and the furnace liquid was extracted with ``Tempharite''.
It was adsorbed onto a θB()1+) column (,ioX,7/crn), washed with water, and eluted with J,N-ammonia.

溶出擁企濃、縮１〜、°゛アンバーライト、”工Ｒ７／
、２゜Ｂ（ＮＨ，”　）、　、　（７）カラム（’７．
０×、、３０ｃｍ　）で塩午性アミノ酸を吸着させた。Elution holding plan concentration, reduction 1 ~, °゛ Amber light, "Eng R7/
, 2°B(NH,''), , (7) Column ('7.
0x, 30 cm ) to adsorb hydrophilic amino acids.

非＠、着区分を゛、ｆ゛、ウェッ、クス”／　Ｘ　、２
（ＯＨ，Ｃｏｏ　）、　（１１，Ｏｘ　−１’Ｉｃｍ）
　Ｋ通しせて非吸着区分を得た。Non @, wear classification ゛, f゛, we, kusu''/X, 2
(OH,Coo), (11,Ox -1'Icm)
A non-adsorbed section was obtained by passing K.

、　　　　　　ツクス’、Ｇ−ｉｏでグルや外したＬ　
′°ダウエックス”ｋ　ＯＸ、、、ｆｆ　、　（Ｔ（”
、）、ペーパおよびセルロースカラムクロマトグラフィ
ーによって順次５分両、精製し７３りｍ９の下記式で表
わされるγ−Ｌ−グル：タミルーシスニ３−アミノ−Ｌ
〜ノブロリン結晶を得た。, Tsukusu', L that was grouped or removed with G-io
′°Dowex”k OX,,,ff, (T(”
, ), purified by paper and cellulose column chromatography for 5 minutes sequentially and purified m9, γ-L-glu: tamilcysni-3-amino-L, represented by the following formula:
~Nobrolin crystals were obtained.

なお、目的物アミノ酸の同定に際しては次の方法を採用
した。The following method was used to identify the target amino acid.

タノール：酢酸：水（Ａ３　：　１０””、　’！？　
）あるいはフェノール：水（１０ｏ　：　３ｔ、、ナン
早止ア蒸気中）Ｌｃ展開し、＝ンヒドリンで発色させる
ことによυ行った。単離したペプチド°のアミノ酸分析
は加水分解祷アミノ酸自動分析機によった。Tanol: Acetic acid: Water (A3: 10"", '!?
) or phenol:water (10 o: 3 t, in a steam of Nan), was developed with Lc, and was colored with hydrin. Amino acid analysis of the isolated peptide was carried out using a hydrolysis amino acid automatic analyzer.

Ｎ塩酸中で１００Ｃ，１時間の酸加水分解法および豚ノ
□腎臓と’Ｐｒ６ｔｅｕｓ　ｍ１ｒａ’ｂｉｌｉｓのそ
れぞれ。ｒ’　−＝、””’ｆ　＃　ｌミャトラ７．、
、ベプヶダーゼ（、二ＧＴ’Ｐ）を用いる酵素法で行っ
た。Acid hydrolysis method at 100C in N-hydrochloric acid for 1 hour and pig kidney and 'Pr6teus m1ra'bilis, respectively. r'−=,""'f# l Myatra7. ,
, was carried out by an enzymatic method using Vepgadase (2GT'P).

定：単離したペプチドは酸と酵素加水分解法によシ、３
つのアミノ酸に加水分解され産。このｊつのアミノ酸は
アミノ酸自動分析およびベーパークロマトグラフィーに
より、グルタミン酸とγ−Ｌ−グルタミルーシスー３−
アミノプロリンと同定された。両者の結合比は酸加水分
解□ 法で！：／、０４．酵素法でｔ　：　／、２．７　（豚
腎臓）、／　：　／、Ｏｑ（Ｐ、　ｍ１ｒａｂｉ、１１
ｅ　）と算出された。グルタミン［１：Ｌ−グルタミン
酸脱水素酵素およびＬ−グルタミン酸脱炭酸酵素を作用
させることによりＩＪ　５１１！であることが明らかと
なった。またＰ、　ｍ１ｒａｂ１．］−１ｓの精’Ｊａ
ｒ−ＧＴＰＫより加水分解を受けることから、このペプ
チドがγ−グルタミルペプチドであシ、グルタミン酸の
γ−カルボキシル基がシス−３−アミノプロリンの７位
の窒素とペプチド結合していることを同定した。Determination: Isolated peptides are purified by acid and enzymatic hydrolysis, 3
Produced by hydrolysis into two amino acids. These two amino acids were determined to be glutamic acid and γ-L-glutamyl cis-3-
It was identified as aminoproline. The bonding ratio of both can be determined using the acid hydrolysis □ method! :/, 04. By enzymatic method, t: /, 2.7 (pig kidney), /: /, Oq (P, m1rabi, 11
e) was calculated. Glutamine [1: IJ 511! by acting on L-glutamate dehydrogenase and L-glutamate decarboxylase! It became clear that. Also P, m1rab1. ]-1s Spirit'Ja
Since it was hydrolyzed by r-GTPK, it was determined that this peptide was a γ-glutamyl peptide, and the γ-carboxyl group of glutamic acid was peptide-bonded with the nitrogen at the 7-position of cis-3-aminoproline. .

出　願　人　　三菱化成工業株式会社代　理　人　　弁理士　長谷用　　　−ほか７名４９７−Sender: Mitsubishi Chemical Industries, Ltd. Representative Patent Attorney Hase-yo - 7 others 497-

Claims

[Claims]

(1) γ-L-glutamyl-3-amino, nobrolin.