JPS5950316B2 - ポリペプチドの製法 - Google Patents
ポリペプチドの製法Info
- Publication number
- JPS5950316B2 JPS5950316B2 JP50110462A JP11046275A JPS5950316B2 JP S5950316 B2 JPS5950316 B2 JP S5950316B2 JP 50110462 A JP50110462 A JP 50110462A JP 11046275 A JP11046275 A JP 11046275A JP S5950316 B2 JPS5950316 B2 JP S5950316B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polypeptide
- acid
- lysine
- mobility
- acetic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/485—Epidermal growth factor [EGF] (urogastrone)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/26—Containing cys-cys disulfide bridge between nonadjacent cysteine residues
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は酸性胃液の分泌を抑制する性質を有するポリペ
プチドに関する。
プチドに関する。
人尿の抽出物が温血動物の酸性胃液の分泌を抑制するこ
とは以前より公知であり、また２種の活性成分を純粋な
形で分離することは西ドイツ特許出願公開公報第２３５
９５６４号に記載されている。
とは以前より公知であり、また２種の活性成分を純粋な
形で分離することは西ドイツ特許出願公開公報第２３５
９５６４号に記載されている。
これらの２種の純粋な成分はそれぞれβ−ウロガストロ
ン及びγ−ウロガストロンとして公知である。本発明は
β一又はγ−ウロガストロンの酵素減成が新規ポリペプ
チドをもたらすこと、また新規ポリペプチド及びその還
元生成物が酸性胃液分泌の有効な抑制剤であることを発
見したことに基づく。本発明の目的は、内部ジサルフア
イド結合３個を有する単一のポリペプチド鎖から成る白
色の水溶性酸性ポリペプチドであり、ダンシレーシヨン
でＮ一末端にアスパラギン酸を有し、分子量が約５５０
０であシ、次の物理的性質：ｎ−ブタノール：酢酸：ピ
リジン：水（３０：６：２４：２０）での口紙クロマト
グラフイ ：単一スポツト ＲＦＯ．６２、ＰＨ２．ｌ
で酢酸／蟻酸での口紙電気泳動法：ε−ＤＮＰ−リシン
に対し１．６７の先端移動度を有するコメツト、ＰＨ８
．９で０．１モルのトリス／塩酸緩衝液でのアクリルア
ミドゲル電気泳動法：プロモフエノールブル一に対し０
．７７の移動度でアノードに向つて移動する単一スポツ
ト、を有し、水解物の分析に際して次のアミノ酸比：ア
スパラギン酸（Ａｓｐ）７、セリン（Ｓｅｒ）３ グル
タミン酸（Ｇｌｕ）４、プロリン（ＰｒＯ）１ グリシ
ン（Ｇｌｙ）４、アラニン（Ａｌａ）２ バリン（Ｖａ
ｌ）３、システイン（Ｃｙｓ）６ メチオニン（Ｍｅｔ
）１、イソロイシン（Ｉｌｅ）２ ロイシン（Ｌｅｕ）
３、チロシン（Ｔｙｒ）５ ヒスチジン（Ｈｉｓ）２、
リシン（Ｌｙｓ）１及びアルギニン（Ａｒｇ）２が得ら
れ、後述する生物学的力価が０．２〜１μ７／Ｋｆの範
囲内にあるポリペプチド、又はシスチン残基がシステイ
ン残基に還元されている還元生成物を得ることにある。
ン及びγ−ウロガストロンとして公知である。本発明は
β一又はγ−ウロガストロンの酵素減成が新規ポリペプ
チドをもたらすこと、また新規ポリペプチド及びその還
元生成物が酸性胃液分泌の有効な抑制剤であることを発
見したことに基づく。本発明の目的は、内部ジサルフア
イド結合３個を有する単一のポリペプチド鎖から成る白
色の水溶性酸性ポリペプチドであり、ダンシレーシヨン
でＮ一末端にアスパラギン酸を有し、分子量が約５５０
０であシ、次の物理的性質：ｎ−ブタノール：酢酸：ピ
リジン：水（３０：６：２４：２０）での口紙クロマト
グラフイ ：単一スポツト ＲＦＯ．６２、ＰＨ２．ｌ
で酢酸／蟻酸での口紙電気泳動法：ε−ＤＮＰ−リシン
に対し１．６７の先端移動度を有するコメツト、ＰＨ８
．９で０．１モルのトリス／塩酸緩衝液でのアクリルア
ミドゲル電気泳動法：プロモフエノールブル一に対し０
．７７の移動度でアノードに向つて移動する単一スポツ
ト、を有し、水解物の分析に際して次のアミノ酸比：ア
スパラギン酸（Ａｓｐ）７、セリン（Ｓｅｒ）３ グル
タミン酸（Ｇｌｕ）４、プロリン（ＰｒＯ）１ グリシ
ン（Ｇｌｙ）４、アラニン（Ａｌａ）２ バリン（Ｖａ
ｌ）３、システイン（Ｃｙｓ）６ メチオニン（Ｍｅｔ
）１、イソロイシン（Ｉｌｅ）２ ロイシン（Ｌｅｕ）
３、チロシン（Ｔｙｒ）５ ヒスチジン（Ｈｉｓ）２、
リシン（Ｌｙｓ）１及びアルギニン（Ａｒｇ）２が得ら
れ、後述する生物学的力価が０．２〜１μ７／Ｋｆの範
囲内にあるポリペプチド、又はシスチン残基がシステイ
ン残基に還元されている還元生成物を得ることにある。
本発明によるポリペプチドはβ一又はγ−ウロガストロ
ンからまずβ一又はγ−ウロガストロンをリシン特異性
アミノ−エンドペプチダーゼと共に恒温保持して、アミ
ノ酸残基４７個を有するポリペプチドを生ぜしめ、次い
でポリペプチドを、Ｃ一末端からロイシン残基１個を分
断するカルボキシペプチダーゼＡと共に恒温保持するこ
とによシ得ることができる。
ンからまずβ一又はγ−ウロガストロンをリシン特異性
アミノ−エンドペプチダーゼと共に恒温保持して、アミ
ノ酸残基４７個を有するポリペプチドを生ぜしめ、次い
でポリペプチドを、Ｃ一末端からロイシン残基１個を分
断するカルボキシペプチダーゼＡと共に恒温保持するこ
とによシ得ることができる。
従つて本発明の他の特徴によれば、Ａｓｐ７、Ｓｅｒ３
、Ｇｌｕ４、ＰｒＯｌ、Ｇｌｙ４、Ａｌａ２、Ｖａｌ３
、Ｃｙｓ６、Ｍｅｔｌ、Ｉｌｅ２、Ｌｅｕ４、Ｔｙｒ５
、Ｈｉｓ２ｔＬｙｓｌｓＡｒｇ２の割合でアミノ酸残基
４７個を有し、内部ジサルフアイド結合３個を有する単
一ポリペプチド鎖を形成し、次の性質：ｎ−ブタノール
：酢酸：ピリジン：水（３０：６：２４：２０）での口
紙クロマトグラフイリフエニルアラニンに対し０．９０
の移動度を有する単一スポツト、ＰＨ２．ｌで酢酸／蟻
酸での口紙電気泳動法：ε−ＤＮＰ−リシンに対し１．
５８の先端移動度を有する「コメツト」、ＰＨ８．９で
０．１モルのトリス／塩酸緩衝液でのアクリルアミド●
ゲル●電気泳動法：プロモフエノールブル一に対し０．
８１の移動度でアノードに向つて移動する単一スポツト
、後述するような０．２〜１μｙ／Ｋｆの範囲内の生物
学的力価、を示すポリペプチドを、水性媒体中でカルボ
キシペプチダーゼＡの作用下に曝し、所望のポリペプチ
ドを反応混合物から単離し、その後還元生成物が所望の
場合には、こうして得たポリペプチドを、ジサルフアイ
ド結合を減少させるためペプチド化学で常用の還元剤、
例えばチオール、例えばメルカプトエタノール又はジチ
オトレイトールを用いて還元することから成る、本発明
によるポリペプチドの製法が得られる。
、Ｇｌｕ４、ＰｒＯｌ、Ｇｌｙ４、Ａｌａ２、Ｖａｌ３
、Ｃｙｓ６、Ｍｅｔｌ、Ｉｌｅ２、Ｌｅｕ４、Ｔｙｒ５
、Ｈｉｓ２ｔＬｙｓｌｓＡｒｇ２の割合でアミノ酸残基
４７個を有し、内部ジサルフアイド結合３個を有する単
一ポリペプチド鎖を形成し、次の性質：ｎ−ブタノール
：酢酸：ピリジン：水（３０：６：２４：２０）での口
紙クロマトグラフイリフエニルアラニンに対し０．９０
の移動度を有する単一スポツト、ＰＨ２．ｌで酢酸／蟻
酸での口紙電気泳動法：ε−ＤＮＰ−リシンに対し１．
５８の先端移動度を有する「コメツト」、ＰＨ８．９で
０．１モルのトリス／塩酸緩衝液でのアクリルアミド●
ゲル●電気泳動法：プロモフエノールブル一に対し０．
８１の移動度でアノードに向つて移動する単一スポツト
、後述するような０．２〜１μｙ／Ｋｆの範囲内の生物
学的力価、を示すポリペプチドを、水性媒体中でカルボ
キシペプチダーゼＡの作用下に曝し、所望のポリペプチ
ドを反応混合物から単離し、その後還元生成物が所望の
場合には、こうして得たポリペプチドを、ジサルフアイ
ド結合を減少させるためペプチド化学で常用の還元剤、
例えばチオール、例えばメルカプトエタノール又はジチ
オトレイトールを用いて還元することから成る、本発明
によるポリペプチドの製法が得られる。
出発ポリペプチドをカルボキシペプチダーゼＡに曝す処
理は単に水性媒体に溶解した酵素で実施するか又は水性
媒体に可溶性又は不溶住であつてよい支持体に結合され
た酵素を用いて実施することもできる。
理は単に水性媒体に溶解した酵素で実施するか又は水性
媒体に可溶性又は不溶住であつてよい支持体に結合され
た酵素を用いて実施することもできる。
出発ポリペプチドと酵素との反応の割合及び範囲は、酵
素／基質の比率、培地のＰＨ及び温度、基質の濃度及び
恒温保持時間に依存する。
素／基質の比率、培地のＰＨ及び温度、基質の濃度及び
恒温保持時間に依存する。
もちろん一般には基質を分断するのに要する時間は基質
の濃度又は酵素／基質比を増すことによつて短縮される
。同様に培地のＰＨ又は温度の変化は分断時間に影響を
与える。反応の進行は、分断されたロイシンの量を測定
するためのアミノ酸自動分析器を用いて反応媒体を検査
するととによつてか、又は１−ジメチル−アミノナフタ
リン−５−スルホニルクロリドを用いて試料をダンシレ
ーシヨン（ＤａｎｓｙｌａｔｉＯｎ）〔ハートレイ（Ｈ
ａｒｔｌｅｙ）著「ビオケミカル・ジヤーナル」（Ｂｉ
Ｏｃｈｅｍ− Ｊ・）１９７０年、第１１９巻、第８０
５頁〕し、生じたＮ−ダンシル一Ｌ−ロイシンの量を概
算することによつて追跡することができる。こうして反
応条件を任意に変化することにより得られる効果を測定
することができる。一般に反応は酵素／基質比を広範囲
に変えても生じるが、酵素／基質の最小比は基質１００
０部に対して酵素１部であることが好ましい。
の濃度又は酵素／基質比を増すことによつて短縮される
。同様に培地のＰＨ又は温度の変化は分断時間に影響を
与える。反応の進行は、分断されたロイシンの量を測定
するためのアミノ酸自動分析器を用いて反応媒体を検査
するととによつてか、又は１−ジメチル−アミノナフタ
リン−５−スルホニルクロリドを用いて試料をダンシレ
ーシヨン（ＤａｎｓｙｌａｔｉＯｎ）〔ハートレイ（Ｈ
ａｒｔｌｅｙ）著「ビオケミカル・ジヤーナル」（Ｂｉ
Ｏｃｈｅｍ− Ｊ・）１９７０年、第１１９巻、第８０
５頁〕し、生じたＮ−ダンシル一Ｌ−ロイシンの量を概
算することによつて追跡することができる。こうして反
応条件を任意に変化することにより得られる効果を測定
することができる。一般に反応は酵素／基質比を広範囲
に変えても生じるが、酵素／基質の最小比は基質１００
０部に対して酵素１部であることが好ましい。
反応は培地のＰＨ値５〜１０及び温度１０℃〜４５℃で
生じる。比較的短かい時間、例えば１２時間で出発ポリ
ペプチドの所望分断を得るための好ましい条件は、出発
ポリペプチド濃度１岬／一以上、ＰＨ７〜９、温度２５
℃〜４０℃及び、基質１００部に対し酵素１部から基質
１０部に対し酵素１部までの酵素／基質比である。本発
明によるポリベプチドはポリペプチドを単離するための
任意の常法で反応混合物から単離することができるが、
ゲルクロマトグラフイを使用することが特に好ましい。
生じる。比較的短かい時間、例えば１２時間で出発ポリ
ペプチドの所望分断を得るための好ましい条件は、出発
ポリペプチド濃度１岬／一以上、ＰＨ７〜９、温度２５
℃〜４０℃及び、基質１００部に対し酵素１部から基質
１０部に対し酵素１部までの酵素／基質比である。本発
明によるポリベプチドはポリペプチドを単離するための
任意の常法で反応混合物から単離することができるが、
ゲルクロマトグラフイを使用することが特に好ましい。
出発ポリペプチドからロイシンを分断した後に残る水性
媒体は架橋デキストランゲル又はポリアクリルアミドゲ
ルのカラムを介してろ過し、カラムを、高真空下に凍結
乾燥した際に揮発する成分、例えばＰＨ７．２の酢酸ア
ンモニウム水溶液から成る緩衝液で溶離することにより
、溶離液の凍結乾燥によつて分離される所望生成物を得
ることができる。還元生成物が所望の場合には、本発明
によるポリペプチドをＰＨ７〜１０で水性緩衝液中にお
いてかつ酵素及ひ光の遮断下に還元することが好ましい
。
媒体は架橋デキストランゲル又はポリアクリルアミドゲ
ルのカラムを介してろ過し、カラムを、高真空下に凍結
乾燥した際に揮発する成分、例えばＰＨ７．２の酢酸ア
ンモニウム水溶液から成る緩衝液で溶離することにより
、溶離液の凍結乾燥によつて分離される所望生成物を得
ることができる。還元生成物が所望の場合には、本発明
によるポリペプチドをＰＨ７〜１０で水性緩衝液中にお
いてかつ酵素及ひ光の遮断下に還元することが好ましい
。
生成物は再びゲルクロマトグラフイを使用して分離する
ことができる。上記のように出発ポリペプチドはβ−又
はγーウロガストロンから、β一又はγ−ウロガストロ
ンをリシン特異性アミノエンドペプチダーゼと共に恒温
保持することにより得ることができる。
ことができる。上記のように出発ポリペプチドはβ−又
はγーウロガストロンから、β一又はγ−ウロガストロ
ンをリシン特異性アミノエンドペプチダーゼと共に恒温
保持することにより得ることができる。
この種の特に適当な酵素は、英国特許１２６３９５６号
明細書に記載されているような「ならたけ」（Ａｒｍｉ
ｌｌａｒｉａｍｅｌｌｅａ）の成熟した子実体から得ら
れるＡＭプロテアーゼであり、好ましい恒温保持条件は
ウロガストロン濃度１彎／ゴ以上、ＰＨ６〜９、温度２
０℃〜４０℃及び酵素／基質比１：８〜１：１００であ
る。恒温保持が完了した際、所望の生物学的に活性のポ
リペプチドを架橋デキストランゲル又はポリアクリルア
ミドゲルの使用下にゲルクロマトグラフイにより分離す
る。上記のように本発明によるポリペプチド及びその還
元生成物は、温血動物の酸性胃液分泌の有用な抑制剤で
ある。
明細書に記載されているような「ならたけ」（Ａｒｍｉ
ｌｌａｒｉａｍｅｌｌｅａ）の成熟した子実体から得ら
れるＡＭプロテアーゼであり、好ましい恒温保持条件は
ウロガストロン濃度１彎／ゴ以上、ＰＨ６〜９、温度２
０℃〜４０℃及び酵素／基質比１：８〜１：１００であ
る。恒温保持が完了した際、所望の生物学的に活性のポ
リペプチドを架橋デキストランゲル又はポリアクリルア
ミドゲルの使用下にゲルクロマトグラフイにより分離す
る。上記のように本発明によるポリペプチド及びその還
元生成物は、温血動物の酸性胃液分泌の有用な抑制剤で
ある。
この性質はハイデンハイム小胃を有しかつ胃液分泌をヒ
スタミンで刺戟した犬における酸性胃液の分泌を抑制す
る作用により証明される。このテストは生成物の生物学
的力価を決定するのに使用され、これはハイデンハイム
小胃を有しかつその胃酸分泌がヒスタミンの注入で分泌
の最大規準の６０〜８０％に刺戟された犬に静脈内注射
により投与した際胃酸の分泌を５０〜７０％抑制する生
成物の量として規定される。特殊な試料の生物学的力価
における若干の変動が異なる犬又は異なる機会に測定し
た場合に見い出されるが、その結果は投与量範囲として
最適に表現される。酸性胃液の分泌を抑制する生物学的
効果は十二指腸潰瘍の治療に有用であり、テスト条件下
に無視し得ない毒性効果は観察されなかつた。本発明に
よるポリペプチドは標準試験で潰瘍治癒性質を有する。
温血動物における酸性胃液分泌を抑制するために使用す
る場座、広範囲の投与量例えば０．０５〜１０Ｐｙ／Ｋ
ｇを使用することができ、これは所望される抑制情況及
び程度に依存する。
スタミンで刺戟した犬における酸性胃液の分泌を抑制す
る作用により証明される。このテストは生成物の生物学
的力価を決定するのに使用され、これはハイデンハイム
小胃を有しかつその胃酸分泌がヒスタミンの注入で分泌
の最大規準の６０〜８０％に刺戟された犬に静脈内注射
により投与した際胃酸の分泌を５０〜７０％抑制する生
成物の量として規定される。特殊な試料の生物学的力価
における若干の変動が異なる犬又は異なる機会に測定し
た場合に見い出されるが、その結果は投与量範囲として
最適に表現される。酸性胃液の分泌を抑制する生物学的
効果は十二指腸潰瘍の治療に有用であり、テスト条件下
に無視し得ない毒性効果は観察されなかつた。本発明に
よるポリペプチドは標準試験で潰瘍治癒性質を有する。
温血動物における酸性胃液分泌を抑制するために使用す
る場座、広範囲の投与量例えば０．０５〜１０Ｐｙ／Ｋ
ｇを使用することができ、これは所望される抑制情況及
び程度に依存する。
投与量は注射、特に静脈内又は皮下注射によつてか、又
は静脈内注入によつて投与することができる。単一静脈
内注射の効果は約１−時間持続し、注入による効果は注
入完了後約１１時間持続する。従つて酸性度を低水準に
保つには、投与を繰返すか、又は有効成分が一層遅延さ
れた期間に渡つて徐々に放出されるデボ処方物を注射す
ることが要求される。人間に使用する場合注射又は注入
により投与される代表的な単一投与量は１人当）５〜５
００ＰＶである。本発明によるポリペプチド又はその還
元生成物は薬剤組成物の形で投与することができ、従つ
て本発明の他の特徴によれば、前記のようなポリペプチ
ド又はその還元生成物と製薬学的に許容可能の稀釈剤又
は賦形剤とから成る薬剤組成物が得られる。
は静脈内注入によつて投与することができる。単一静脈
内注射の効果は約１−時間持続し、注入による効果は注
入完了後約１１時間持続する。従つて酸性度を低水準に
保つには、投与を繰返すか、又は有効成分が一層遅延さ
れた期間に渡つて徐々に放出されるデボ処方物を注射す
ることが要求される。人間に使用する場合注射又は注入
により投与される代表的な単一投与量は１人当）５〜５
００ＰＶである。本発明によるポリペプチド又はその還
元生成物は薬剤組成物の形で投与することができ、従つ
て本発明の他の特徴によれば、前記のようなポリペプチ
ド又はその還元生成物と製薬学的に許容可能の稀釈剤又
は賦形剤とから成る薬剤組成物が得られる。
好ましい組成物は非経口的投与に適したもの、例えば無
菌の注射可能な溶液又は懸濁液、及び無菌の注射可能な
デボ又は緩慢な放出処方物である。
菌の注射可能な溶液又は懸濁液、及び無菌の注射可能な
デボ又は緩慢な放出処方物である。
注射可能の溶液又は懸濁液は０．５〜５００ｔｔ７／７
ｎｅを含んでいてよく、一層稀釈された溶液が注入によ
ジ投与されるが、注入可能のデボ又は緩慢な放出処方物
にあつては１投与量当ジ有効成分２ｍｆまでを含んでい
てよい。特に好ましい無菌の注射可能な溶液は必要に応
じてＰＨ５〜９に緩衝されていてもよい等脹食塩又は等
脹デキストロースでもたらされ、かつ１〜１００Ｐｒ／
ｄを含んでいてもよい。上記の無菌の注射可能な組成物
は該組成物として製造及び貯蔵されるか、或いは使用直
前にその無菌性を保つベヒクル例えばバイアル又はアン
プルに封入された無菌成分の既知量例えば１０〜２００
μ７に、無菌の媒体例えば水を加えることにより製造す
ることもできる。
ｎｅを含んでいてよく、一層稀釈された溶液が注入によ
ジ投与されるが、注入可能のデボ又は緩慢な放出処方物
にあつては１投与量当ジ有効成分２ｍｆまでを含んでい
てよい。特に好ましい無菌の注射可能な溶液は必要に応
じてＰＨ５〜９に緩衝されていてもよい等脹食塩又は等
脹デキストロースでもたらされ、かつ１〜１００Ｐｒ／
ｄを含んでいてもよい。上記の無菌の注射可能な組成物
は該組成物として製造及び貯蔵されるか、或いは使用直
前にその無菌性を保つベヒクル例えばバイアル又はアン
プルに封入された無菌成分の既知量例えば１０〜２００
μ７に、無菌の媒体例えば水を加えることにより製造す
ることもできる。
既知量の無菌成分は、無菌媒体で稀釈した後、等脹溶液
を得るため十分量の無菌デキストロース又は塩化ナトリ
ウムを含んでいてもよい。次に本発明を実施例に基づき
詳述するが．これに限定されるものではなく、例中製造
者の登録商標に関する特殊なクロマトグラフイ材料は次
のようにして入手することができる：多孔性ポリアクリ
ルアミドゲルリビオーゲル（ＢｉＯｇｅｌ）Ｐ６，Ｂｉ
ＯＲａｄＬａｂＯ一Ｒａｔｒｉｅｓ社製、ＲｉｃｈｍＯ
ｎｄＣａｌｉ一ＦＯｒｎｉａＵＳＡ在、多孔性架橋デキ
ストランゲルリセフアデクス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ一
２５９ＰｈａｒｍａｃｉａＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａ１社
製、Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ在，カルボキシペプ
チダーゼＡ，カルボキシペプチダーゼＡ−ＤＦＰ，ＷＯ
ｒｔｈｉｎｇｔＯｎＢｉＯｃｈｅ−ＭｉｃａｌＣＯｒｐ
ＯｒａｔｉＯｎ社製，Ｆｒｅｅ一ＨＯｌｄ，Ｎ．Ｊ，Ｕ
ＳＡ在。
を得るため十分量の無菌デキストロース又は塩化ナトリ
ウムを含んでいてもよい。次に本発明を実施例に基づき
詳述するが．これに限定されるものではなく、例中製造
者の登録商標に関する特殊なクロマトグラフイ材料は次
のようにして入手することができる：多孔性ポリアクリ
ルアミドゲルリビオーゲル（ＢｉＯｇｅｌ）Ｐ６，Ｂｉ
ＯＲａｄＬａｂＯ一Ｒａｔｒｉｅｓ社製、ＲｉｃｈｍＯ
ｎｄＣａｌｉ一ＦＯｒｎｉａＵＳＡ在、多孔性架橋デキ
ストランゲルリセフアデクス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ一
２５９ＰｈａｒｍａｃｉａＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａ１社
製、Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ在，カルボキシペプ
チダーゼＡ，カルボキシペプチダーゼＡ−ＤＦＰ，ＷＯ
ｒｔｈｉｎｇｔＯｎＢｉＯｃｈｅ−ＭｉｃａｌＣＯｒｐ
ＯｒａｔｉＯｎ社製，Ｆｒｅｅ一ＨＯｌｄ，Ｎ．Ｊ，Ｕ
ＳＡ在。
クロマトグラフイーカラムの使用を含め各方法の場合に
、溶離液をウルトロラク（ＵｌｔｒＯ−Ｒａｃ）ＬＫＢ
７ＯＯＯフラクシヨンコレクタ一（ＬＫＢＩｎｓｔｒｕ
ｍｅｎｔｓＬｔｄ社製、ＣｒＯｙｄＯｎ，Ｓｕｒｒｅｙ
，ＵＯＫＯ在）を使用して一定の滴数よジ成るフラクシ
ヨンに集め、これらのフラクシヨンを２８０ｍμでＵ。
、溶離液をウルトロラク（ＵｌｔｒＯ−Ｒａｃ）ＬＫＢ
７ＯＯＯフラクシヨンコレクタ一（ＬＫＢＩｎｓｔｒｕ
ｍｅｎｔｓＬｔｄ社製、ＣｒＯｙｄＯｎ，Ｓｕｒｒｅｙ
，ＵＯＫＯ在）を使用して一定の滴数よジ成るフラクシ
ヨンに集め、これらのフラクシヨンを２８０ｍμでＵ。
吸収を測定することによジペプチド材料につき分析試験
した。次いで材料をフラクシヨンに集め、材料を次のよ
うにして生物学的活性度につき分析した：犬は単離され
た脱神経蓄嚢を有し、ヒスタミンを皮下注射して最大比
の約６０〜８０（ｆ）まで胃液を刺戟分泌させた〔通常
毎時０．４８ｄ中のヒスタミン（塩基として）６００μ
７の溶液の注入で十分である〕。
した。次いで材料をフラクシヨンに集め、材料を次のよ
うにして生物学的活性度につき分析した：犬は単離され
た脱神経蓄嚢を有し、ヒスタミンを皮下注射して最大比
の約６０〜８０（ｆ）まで胃液を刺戟分泌させた〔通常
毎時０．４８ｄ中のヒスタミン（塩基として）６００μ
７の溶液の注入で十分である〕。
既知量の試験材料を等脹食塩に溶解し、犬が均一な割合
で胃液を分泌した際に、この材料を単一静脈内注射で投
与した。胃液の分泌抑制は特定の投与量につき示した。
生物学的力価は数種の投与量で得られた結果から決定す
ることができる。
で胃液を分泌した際に、この材料を単一静脈内注射で投
与した。胃液の分泌抑制は特定の投与量につき示した。
生物学的力価は数種の投与量で得られた結果から決定す
ることができる。
アミノ酸分析は口カート（ＬＯｃａｒｔｅ）アミノ酸分
析器〔ＬＯｃａｒｔｅＬｔｄ社製、２４Ｅｍｐｅｒ０ｒ
ｓＧａｔｅ，Ｌ０ｎｄ０ｎＳ．Ｗ．７在〕を用いて実施
した。
析器〔ＬＯｃａｒｔｅＬｔｄ社製、２４Ｅｍｐｅｒ０ｒ
ｓＧａｔｅ，Ｌ０ｎｄ０ｎＳ．Ｗ．７在〕を用いて実施
した。
すべてのカラムクロマトグラフイ一は４℃で実施し、す
べての緩衝液はトルエンで飽和した。
べての緩衝液はトルエンで飽和した。
例１内部ジサルフアイド結合３個を有する単一のポリペ
プチド鎖から成り下記の割合で４７個のアミノ酸残基を
有しかつ下記の性質を示すポリペプチド（２１６μ７）
を０．１モルの重炭酸アンモニウム（１１６μｔ）に溶
かし、０．１モルの重炭酸アンモニウム（４μｔ）中の
カルボキシペプチダーゼＡ（カルボキシペプチダーゼＡ
−ＤＦＰ４μ７）の溶液を加えた。
プチド鎖から成り下記の割合で４７個のアミノ酸残基を
有しかつ下記の性質を示すポリペプチド（２１６μ７）
を０．１モルの重炭酸アンモニウム（１１６μｔ）に溶
かし、０．１モルの重炭酸アンモニウム（４μｔ）中の
カルボキシペプチダーゼＡ（カルボキシペプチダーゼＡ
−ＤＦＰ４μ７）の溶液を加えた。
混合物を３７℃で３時間恒温保持し、試料をアミノ酸分
析した。更に酵素（１２μ７）を加え、更に３時間恒温
保持し、試料をアミノ酸分析した。各分析値は反応混合
物中に遊離ロイシンが存在することを示し、第２の分析
値は出発ポリペプチドのロイシン含量の１／４に等しい
量を示した。すなわち酵素は出発ポリペプチドのＣ一末
端からロイシン残基１個を分断し、従つて出発ポリペプ
チド中４個のロイシン残基の代わに３個のロイシン残基
を有する点でのみそのアミノ酸比で出発ポリペプチドと
相違する４６個のアミノ酸残基を有するポリペプチドが
生じることを示す。こうして得られたポリペプチド溶液
の試料は単一測定に際して出発材料の０．６μＦ７／Ｋ
ｇに等しい投与量で抑制率４２Ｃｆ１７の生物学的活性
度を生じた。
析した。更に酵素（１２μ７）を加え、更に３時間恒温
保持し、試料をアミノ酸分析した。各分析値は反応混合
物中に遊離ロイシンが存在することを示し、第２の分析
値は出発ポリペプチドのロイシン含量の１／４に等しい
量を示した。すなわち酵素は出発ポリペプチドのＣ一末
端からロイシン残基１個を分断し、従つて出発ポリペプ
チド中４個のロイシン残基の代わに３個のロイシン残基
を有する点でのみそのアミノ酸比で出発ポリペプチドと
相違する４６個のアミノ酸残基を有するポリペプチドが
生じることを示す。こうして得られたポリペプチド溶液
の試料は単一測定に際して出発材料の０．６μＦ７／Ｋ
ｇに等しい投与量で抑制率４２Ｃｆ１７の生物学的活性
度を生じた。
出発物質として使用したポリペプチドは次のようにして
得られた：ＰＨ８．２の０．１モル重炭酸アンモニウム
緩衝液（２００ｐｔ）と０．０１モルの塩化マグネシウ
ム溶液（５０ｐｔ）との混合物中のβ−ウロガストロン
（ １．０岬）の溶液を、水（２００ｐｔ）中のＡＭプ
ロテアーゼ（６０ｐＶ）と共に３７℃で１６時間恒温保
持した。
得られた：ＰＨ８．２の０．１モル重炭酸アンモニウム
緩衝液（２００ｐｔ）と０．０１モルの塩化マグネシウ
ム溶液（５０ｐｔ）との混合物中のβ−ウロガストロン
（ １．０岬）の溶液を、水（２００ｐｔ）中のＡＭプ
ロテアーゼ（６０ｐＶ）と共に３７℃で１６時間恒温保
持した。
生．じた溶液を多孔性架橋デキストランゲル〔セフアデ
クス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−２５〕のカラム（３５×
１ｃｍ）に施し、カラムを流動比８−／Ｈｒで０．０５
モル酢酸アンモニウムで展開した。１ｍｅのフラクシヨ
ンを集め、ペプチド材料をフラクシヨン１２〜２０及び
３８〜５２で検出した。
クス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−２５〕のカラム（３５×
１ｃｍ）に施し、カラムを流動比８−／Ｈｒで０．０５
モル酢酸アンモニウムで展開した。１ｍｅのフラクシヨ
ンを集め、ペプチド材料をフラクシヨン１２〜２０及び
３８〜５２で検出した。
フラクシヨン３８〜５２の材料は生物学的に不活性であ
り、試料を酸、塩基又はロイシンアミノペプチダーゼで
加水分解した。
り、試料を酸、塩基又はロイシンアミノペプチダーゼで
加水分解した。
生じた溶液を分析した結果元のペプチドは次の割合、す
なわちＧｌｅｌ、Ｌｅｕｌ．Ｌｙｓｌ、Ｔｒｐ２、Ａｒ
ｇｌでアミノ酸を含むことを示した。ダンシレーシヨン
はＮ−末端でリシンが存在することを示した。フラクシ
ヨン１２〜２０からの材料は生物学的に活性であわ、こ
れらのフラクシヨンを合し、親水性とすると、次の性質
を有する白色の水溶性酸性ポリペプチドが生じた：１
単一測定に際しての生物学的活性度：出発材料０．７μ
Ｆ７／Ｋ９に等しい投与量で抑制率３０９６、２．水解
物の分析に際してのアミノ酸比：Ａｓｐ７、Ｓｅｒ３、
Ｇｌｕ４、ＰｒＯｌ，Ｇｌｙ４、Ａｌａ２、Ｖａｌ３、
Ｃｙｓ６、Ｍｅｔｌ、 工１ｅ２、Ｌｅｕ４、Ｔｙｒ５
、Ｈｉｓ２、Ｌｙｓｌ．Ａｒｇ２。
なわちＧｌｅｌ、Ｌｅｕｌ．Ｌｙｓｌ、Ｔｒｐ２、Ａｒ
ｇｌでアミノ酸を含むことを示した。ダンシレーシヨン
はＮ−末端でリシンが存在することを示した。フラクシ
ヨン１２〜２０からの材料は生物学的に活性であわ、こ
れらのフラクシヨンを合し、親水性とすると、次の性質
を有する白色の水溶性酸性ポリペプチドが生じた：１
単一測定に際しての生物学的活性度：出発材料０．７μ
Ｆ７／Ｋ９に等しい投与量で抑制率３０９６、２．水解
物の分析に際してのアミノ酸比：Ａｓｐ７、Ｓｅｒ３、
Ｇｌｕ４、ＰｒＯｌ，Ｇｌｙ４、Ａｌａ２、Ｖａｌ３、
Ｃｙｓ６、Ｍｅｔｌ、 工１ｅ２、Ｌｅｕ４、Ｔｙｒ５
、Ｈｉｓ２、Ｌｙｓｌ．Ａｒｇ２。
３ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水（３０：６：２
４：２０）での口紙クロマトグラフイでフエニルアラニ
ンに対し−０．９０の移動度を有する単一スポツト。
４：２０）での口紙クロマトグラフイでフエニルアラニ
ンに対し−０．９０の移動度を有する単一スポツト。
４ｐＨ２．１の酢酸／蟻酸（蟻酸２０ゴ、酢酸８０−を
水で１ｔにした）での口紙電気泳動法でε− ＤＮＰ−
リシンに対し１．５８の先端移動度を有するコメツト。
水で１ｔにした）での口紙電気泳動法でε− ＤＮＰ−
リシンに対し１．５８の先端移動度を有するコメツト。
５ｐＨ８．９の０．１モルトリスー塩酸緩衝液でのアク
リルアミドゲル電気泳動法でプロモフエノールブル一に
対し０．８１の移動度を有する単一スポツト。
リルアミドゲル電気泳動法でプロモフエノールブル一に
対し０．８１の移動度を有する単一スポツト。
生成物のダンシレーシヨンはＮ−末端でアスパラギン酸
が存在することを示した。
が存在することを示した。
例２
内部ジサルフアイド結合３個を有する単一のポリペプチ
ド鎖から成わ下記の割合で４７個のアミノ酸残基を有し
かつ例１に記載した性質を示すポリペプチド（ １．５
ｍｆＩ）を０．１モルの重炭酸アンモニウム（２００ｐ
ｔ）に溶かし、０．１モルの重・炭酸アンモニウム溶液
（６０μｔ）中のカルボキシペプチダーゼＡ（カルボキ
シペプチダーゼＡ一ＤＦＰ６Ｏｐｙ）の溶液を加えた。
ド鎖から成わ下記の割合で４７個のアミノ酸残基を有し
かつ例１に記載した性質を示すポリペプチド（ １．５
ｍｆＩ）を０．１モルの重炭酸アンモニウム（２００ｐ
ｔ）に溶かし、０．１モルの重・炭酸アンモニウム溶液
（６０μｔ）中のカルボキシペプチダーゼＡ（カルボキ
シペプチダーゼＡ一ＤＦＰ６Ｏｐｙ）の溶液を加えた。
混合物を３７℃で２０時間恒温保持し、次いで更に酵素
（６０ｐｙ）を加え、更に２０時間恒温保持した。生じ
る溶液を、０．０５モルの酢酸アンモニウムで平衡にし
た多孔性ポリアクリルアミドゲル〔ビオ−ゲルＰ６（Ｂ
ｉＯｇｅｌ− Ｐ６）：２００〜４００メツシユ）のカ
ラム（１００Ｘ０．９ｃｍ）に施した。カラムを同じ溶
剤で展開し、１−のフラクシヨンを集めた。生物学的に
活性の材料はフラクシヨン２７〜３４で検出され、これ
を合し、親水性化すると、次の性質を有する白色の水溶
性酸性ポリペプチドが生じた：１ 水解物の分析に際し
てのアミノ酸割合：Ａｓｐ７、Ｓｅｒ３、Ｇｌｕ４、Ｐ
ｒＯｌ．Ｇｌｙ４、Ａｌａ２、Ｖａｌ３、Ｃｙｓ６、Ｍ
ｅｔｌ、Ｉｌｅ２、Ｌｅｕ３、Ｔｙｒ５、Ｈｉｓ２、Ｌ
ｙｓｌ．Ａｒｇ２。
（６０ｐｙ）を加え、更に２０時間恒温保持した。生じ
る溶液を、０．０５モルの酢酸アンモニウムで平衡にし
た多孔性ポリアクリルアミドゲル〔ビオ−ゲルＰ６（Ｂ
ｉＯｇｅｌ− Ｐ６）：２００〜４００メツシユ）のカ
ラム（１００Ｘ０．９ｃｍ）に施した。カラムを同じ溶
剤で展開し、１−のフラクシヨンを集めた。生物学的に
活性の材料はフラクシヨン２７〜３４で検出され、これ
を合し、親水性化すると、次の性質を有する白色の水溶
性酸性ポリペプチドが生じた：１ 水解物の分析に際し
てのアミノ酸割合：Ａｓｐ７、Ｓｅｒ３、Ｇｌｕ４、Ｐ
ｒＯｌ．Ｇｌｙ４、Ａｌａ２、Ｖａｌ３、Ｃｙｓ６、Ｍ
ｅｔｌ、Ｉｌｅ２、Ｌｅｕ３、Ｔｙｒ５、Ｈｉｓ２、Ｌ
ｙｓｌ．Ａｒｇ２。
２ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水（３０：６：２
４：２０）中の口紙クロマトグラフイで単一スポツト
ＲＦＯ．６２３ｐＨ２．ｌの酢酸／蟻酸（蟻酸２０ｍｅ
，酢：酸８０？Ｎｅを水で１ｔにした）での口紙電気泳
動法でε− ＤＮＰ−リシンに対し１．６７の先端移動
度を有するコメツト。
４：２０）中の口紙クロマトグラフイで単一スポツト
ＲＦＯ．６２３ｐＨ２．ｌの酢酸／蟻酸（蟻酸２０ｍｅ
，酢：酸８０？Ｎｅを水で１ｔにした）での口紙電気泳
動法でε− ＤＮＰ−リシンに対し１．６７の先端移動
度を有するコメツト。
４ｐＨ８．９の０．１モルトリスー塩酸緩衝液でのアク
リルアミドゲル電気泳動法でプロモフエノールブル一に
対し０．７７の移動度を有する単一スポツト。
リルアミドゲル電気泳動法でプロモフエノールブル一に
対し０．７７の移動度を有する単一スポツト。
例３
例２で得られたポリペブチド（３００μ７）を水及び尿
素（２５７！１ｆ）に溶かし、エチレンジアミンテトラ
一酢酸（０．５ＷｉＩ）及びＰＨ８．６の１．５モルト
リス一塩酸緩衝液（２５μｔ）を加えた。
素（２５７！１ｆ）に溶かし、エチレンジアミンテトラ
一酢酸（０．５ＷｉＩ）及びＰＨ８．６の１．５モルト
リス一塩酸緩衝液（２５μｔ）を加えた。
溶液を水で６０μｔに稀釈し、酸素を含まない窒素で洗
い次いでメルカプトエタノール（１μｔ）を加えた。生
じる溶液を暗所で３時間保ち、次いで均一に２つに分割
した。第１分割分を多孔性ポリアクリルアミドゲル（ピ
オーゲルＰ６，２ＯＯ〜４００メツシユ）のカラム（１
００ｘ０．９ｍｅ）に施し、カラムを００５モル酢酸ア
ンモニウムで展開すると、シスチン残基がシステイン残
基に還元されたポリペプチドの溶液が生じた。
い次いでメルカプトエタノール（１μｔ）を加えた。生
じる溶液を暗所で３時間保ち、次いで均一に２つに分割
した。第１分割分を多孔性ポリアクリルアミドゲル（ピ
オーゲルＰ６，２ＯＯ〜４００メツシユ）のカラム（１
００ｘ０．９ｍｅ）に施し、カラムを００５モル酢酸ア
ンモニウムで展開すると、シスチン残基がシステイン残
基に還元されたポリペプチドの溶液が生じた。
第２分割分は水（１０μｔ）中の１４Ｃのヨードアセト
アミド（３．６ｍｆ）の溶液で室温で３０分間処理した
。
アミド（３．６ｍｆ）の溶液で室温で３０分間処理した
。
生じる溶液を多孔性架橋デキストランゲル（セフアデク
スＧ−２５）のカラム（３５×１ｃｍ）に施し、カラム
を０．０５モル酢酸アンモニウムで展開した。単一の放
射性生成物が検出され、この生成物は酸性水解物のアミ
ノ酸分析でシスチンよ勺はむしろカルボキシメチルシス
テインを生じ、従つてメルカプトエタノールとの反応は
、シスチン残基がシステイン残基に還元されたポリペプ
チドを生じたことを示す。例４ 例１又は２に記載したようなポリペプチド或いはもとの
シスチン残基がシステインに還元されているその還フじ
生成物を、発熱物質不含の５（Ｆ６ｗ／ｖデキストロー
ス溶液に溶かして、最終濃度を４０μｆ／ｍｌにした。
スＧ−２５）のカラム（３５×１ｃｍ）に施し、カラム
を０．０５モル酢酸アンモニウムで展開した。単一の放
射性生成物が検出され、この生成物は酸性水解物のアミ
ノ酸分析でシスチンよ勺はむしろカルボキシメチルシス
テインを生じ、従つてメルカプトエタノールとの反応は
、シスチン残基がシステイン残基に還元されたポリペプ
チドを生じたことを示す。例４ 例１又は２に記載したようなポリペプチド或いはもとの
シスチン残基がシステインに還元されているその還フじ
生成物を、発熱物質不含の５（Ｆ６ｗ／ｖデキストロー
ス溶液に溶かして、最終濃度を４０μｆ／ｍｌにした。
この溶液をバイアル中で無菌の膜口過系例えば０．２２
ｍμのミリポール（Ｍｉｌｌｌ−ＰＯｒｅは登録商標）
フイルタ一を介してそれぞれ２．５ｍｅの部分標本に分
散させた。次いで各バイアルの内容物を親水性化し、バ
イアルをキヤツプし、無菌条件で密封した。ポリペプチ
ドとデキストロースとの無菌混合物を含むバイアルを４
℃で貯蔵した。例５ 例４に記載したようにして調合したバイアルに、使用直
前に無菌の水２．５ｍｅを加えて、５％ｗ／ｖデキスト
ロース溶液中のポリペプチド４０μｆ／Ｍｅの無菌注射
溶液にした。
ｍμのミリポール（Ｍｉｌｌｌ−ＰＯｒｅは登録商標）
フイルタ一を介してそれぞれ２．５ｍｅの部分標本に分
散させた。次いで各バイアルの内容物を親水性化し、バ
イアルをキヤツプし、無菌条件で密封した。ポリペプチ
ドとデキストロースとの無菌混合物を含むバイアルを４
℃で貯蔵した。例５ 例４に記載したようにして調合したバイアルに、使用直
前に無菌の水２．５ｍｅを加えて、５％ｗ／ｖデキスト
ロース溶液中のポリペプチド４０μｆ／Ｍｅの無菌注射
溶液にした。
例６
例１又は２に記載したようなポリペプチド、或いはもと
のシスチン残基がシステインに還元されているその還元
生成物（１０Ｔｆ！ｆ）を発熱物質不含の水（５０ｍｅ
）に溶かし、溶液を無菌の膜口過系、例えば０．２２ｍ
μミリポールフイルタ一を介してアンプルに済過した。
のシスチン残基がシステインに還元されているその還元
生成物（１０Ｔｆ！ｆ）を発熱物質不含の水（５０ｍｅ
）に溶かし、溶液を無菌の膜口過系、例えば０．２２ｍ
μミリポールフイルタ一を介してアンプルに済過した。
各アンプルは０．５ｄを受入された。次いで各アンプル
の内容物を親水性化し、アンプルを無菌条件で密封した
。無菌のポリペブチドをそれぞれ１００μ７含むアンプ
ルを−２０℃に保つた。例７ 例６に記載したようにして製造したアンプル内容物を、
無菌の発熱物質不含の５％ｗ／ｖデキストロース溶液に
溶かして、５（Ｆ６ｗ／ｖデキストロース溶液中にポリ
ペプチド１〜５μｆ／ｍ！を含む溶液にした。
の内容物を親水性化し、アンプルを無菌条件で密封した
。無菌のポリペブチドをそれぞれ１００μ７含むアンプ
ルを−２０℃に保つた。例７ 例６に記載したようにして製造したアンプル内容物を、
無菌の発熱物質不含の５％ｗ／ｖデキストロース溶液に
溶かして、５（Ｆ６ｗ／ｖデキストロース溶液中にポリ
ペプチド１〜５μｆ／ｍ！を含む溶液にした。
この溶液は注入によジ投与するのに適している。注射に
適した溶液が必要な場合には、アンプルの内容物を無菌
の、発熱物質不含の５（ｆｌ）ｗ／ｖデキストロース溶
液に溶解させて、ポリペブチド５〜５０ｆ１７／ｍｌを
含む溶液にした。
適した溶液が必要な場合には、アンプルの内容物を無菌
の、発熱物質不含の５（ｆｌ）ｗ／ｖデキストロース溶
液に溶解させて、ポリペブチド５〜５０ｆ１７／ｍｌを
含む溶液にした。
更に５（ｆ）ｗ／Ｖデキストロース溶液は等脹食塩によ
つて代えることもできる。
つて代えることもできる。
Claims (1)
- １ 内部ジサルファイド結合３個を有する単一のポリペ
プチド鎖から成る白色の水溶性酸性ポリペプチドであり
、ダンシレーシヨンでＮ−末端にアスパラギン酸を有し
、分子量が約５５００であり、次の物理的性質：ｎ−ブ
タノール：酢酸：ピリジン：水（３０：６：２４：２０
）でのロ紙クロマトグラフィー：単一スポットＲ＿Ｆ０
．６２、ｐＨ２．１で酢酸／蟻酸でのロ紙電気泳動法：
ε−ＤＮＰ−リシンに対し１．６７の先端移動度を有す
る「コメツト」、ｐＨ８．９で０．１モルのトリス／塩
酸緩衝液でのアクリルアミドゲル電気泳動法：プロモフ
エノールブルーに対し０．７７の移動度でアノードに向
つて移動する単一スポット、を有し、水解物の分析に際
して次のアミノ酸比：アスパラギン酸７、セリン３、グ
ルタミン酸４、プロリン１、グリシン４、アラニン２、
バリン３、システイン６、メチオニン１、イソロイシン
２、ロイシン３、チロシン５、ヒスチジン２、リシン１
及びアルギニン２が得られる、生物学的力価が０．２〜
１μｇ／ｋｇの範囲内にあるポリペプチド又はシスチン
残基がシステイン残基に還元されている還元生成物を得
るに当り、アスパラギン酸７、セリン３、グルタミン酸
４、プロリン１、グリシン４、アラニン２、バリン３、
システイン６、メチオニン１、イソロイシン２、ロイシ
ン４、チロシン５、ヒスチジン２、リシン１及びアルギ
ニン２の割合で４７個のアミノ酸残基を有し、内部ジサ
ルファイド結合３個を有する単一ポリペプチド鎖を形成
し、次の性質：ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水（
３０：６：２４：２０）でのロ紙クロマトグラフィー：
フェニルアラニンに対し０．９０の移動度を有する単一
スポット、ｐＨ２．１で酢酸／蟻酸でのロ紙電気泳動法
：ε−ＤＮＰ−リシンに対し１．５８の先端移動度を有
するコメツト、ｐＨ８．９で０．１モルのトリス／塩酸
緩衝液でのアクリルアミド・ゲル・電気泳動法：プロモ
フェノール・ブルーに対し０．８１の移動度でアノード
に向つて移動する単一スポット、０．２〜１μｇ／ｋｇ
の範囲内の生物学的力価、を示すポリペプチドを、水性
媒体中でカルボキシペプチダーゼＡの作用下に曝し、所
望のポリペプチドを反応混合物から単離し、その後還元
生成物が所望の場合には、こうして得たポリペプチドを
、ジサルファイド結合を減少させるためペプチド化学で
常用の還元剤を用いて還元することを特徴とするポリペ
プチドの製法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB3960074A GB1461106A (en) | 1974-09-11 | 1974-09-11 | Gastric acid-inhibiting polypeptide |
| GB3960074 | 1974-09-11 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5154563A JPS5154563A (ja) | 1976-05-13 |
| JPS5950316B2 true JPS5950316B2 (ja) | 1984-12-07 |
Family
ID=10410443
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP50110462A Expired JPS5950316B2 (ja) | 1974-09-11 | 1975-09-11 | ポリペプチドの製法 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4035485A (ja) |
| JP (1) | JPS5950316B2 (ja) |
| BE (1) | BE833277A (ja) |
| DE (1) | DE2540545C2 (ja) |
| FR (1) | FR2284334A1 (ja) |
| GB (1) | GB1461106A (ja) |
| IL (1) | IL47962A0 (ja) |
| NL (1) | NL7510382A (ja) |
| SE (1) | SE7510082L (ja) |
| ZA (1) | ZA755170B (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4764593A (en) * | 1983-04-25 | 1988-08-16 | Amgen Inc. | Manufacture and expression of genes for urogastrone and polypeptide analogs thereof |
| WO1985002198A1 (en) * | 1983-11-01 | 1985-05-23 | Amgen | Microbial expression of type i transforming growth factor, polypeptide analogs thereof and hybrid egf/tgf polypeptides |
| GB8409960D0 (en) * | 1984-04-17 | 1984-05-31 | Searle & Co | Therapeutic method |
| US5219998A (en) * | 1990-06-04 | 1993-06-15 | Levin Robert H | Yeast-derived epidermal growth factor |
| US5434135A (en) * | 1990-08-02 | 1995-07-18 | Indu Parikh | Growth factor compositions, preparation and use |
| JP4954958B2 (ja) * | 2008-09-30 | 2012-06-20 | 住友大阪セメント株式会社 | 光導波路素子 |
-
1974
- 1974-09-11 GB GB3960074A patent/GB1461106A/en not_active Expired
-
1975
- 1975-08-12 ZA ZA00755170A patent/ZA755170B/xx unknown
- 1975-08-18 US US05/605,298 patent/US4035485A/en not_active Expired - Lifetime
- 1975-08-20 IL IL47962A patent/IL47962A0/xx unknown
- 1975-09-03 NL NL7510382A patent/NL7510382A/xx not_active Application Discontinuation
- 1975-09-10 SE SE7510082A patent/SE7510082L/xx unknown
- 1975-09-10 BE BE159920A patent/BE833277A/xx unknown
- 1975-09-10 FR FR7527754A patent/FR2284334A1/fr active Granted
- 1975-09-11 DE DE2540545A patent/DE2540545C2/de not_active Expired
- 1975-09-11 JP JP50110462A patent/JPS5950316B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BE833277A (fr) | 1976-03-10 |
| SE7510082L (sv) | 1976-03-12 |
| GB1461106A (en) | 1977-01-13 |
| IL47962A0 (en) | 1975-11-25 |
| FR2284334A1 (fr) | 1976-04-09 |
| NL7510382A (nl) | 1976-03-15 |
| FR2284334B1 (ja) | 1979-09-14 |
| DE2540545A1 (de) | 1976-03-25 |
| DE2540545C2 (de) | 1984-06-28 |
| AU8396075A (en) | 1977-02-17 |
| ZA755170B (en) | 1976-07-28 |
| JPS5154563A (ja) | 1976-05-13 |
| US4035485A (en) | 1977-07-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gregory et al. | The primary structure of human urogastrone | |
| Gregory | Isolation and structure of urogastrone and its relationship to epidermal growth factor | |
| Manning et al. | Solid-phase synthesis of [4-threonine]-oxytocin. More potent and specific oxytocic agent than oxytocin | |
| Chiu et al. | Purification and primary structure of the neuropeptide egg-laying hormone of Aplysia californica | |
| Kurosky et al. | Primary structure of cholera toxin β-chain: a glycoprotein hormone analog? | |
| KR0156565B1 (ko) | 뇨난포 자극호르몬 | |
| Behrens et al. | Biochemistry of the protein hormones | |
| KR20020073184A (ko) | 글루카곤 유사 펩티드 1 화합물을 용해시키는 방법 | |
| Fietzek et al. | Isolation and characterization of the cyanogen bromide peptides from the α2 chain of rat skin collagen | |
| EP1111053A3 (fr) | Fragment peptidique de la protéine g du virus respiratoire syncytial, agent immunogène, composition pharmaceutique le contentant et procédé de préparation | |
| US4656158A (en) | Peptide, and production and use thereof | |
| CA2006087C (en) | Polypeptides isolated from the venom of the spider hololena curta | |
| JPS5950316B2 (ja) | ポリペプチドの製法 | |
| US4032633A (en) | Polypeptides | |
| US4189426A (en) | Recombinant hormonal compositions and method | |
| US3903069A (en) | Polypeptides obtained by modification of porcine or bovine insulin | |
| RU2123499C1 (ru) | Аналоги антагонистов lhrh и способы их получения | |
| Sherman et al. | The tyrosine residues of the basic trypsin inhibitor of bovine pancreas. Spectrophotometric titration and iodination | |
| JP2641742B2 (ja) | 新規ペプチド及び抗菌剤 | |
| Grimek et al. | Isolation and characterization of the subunits of highly purified ovine follicle-stimulating hormone | |
| Ravdel et al. | 6-glycine-8-phenyllactic acid bradykinin. Its synthesis, biological activity, and splitting by kininase (carboxypeptidase N) | |
| Tamura-Takahashi et al. | Purification and properties of four biologically active components of whale luteinizing hormone | |
| JP2641744B2 (ja) | 新規ペプチド及び抗菌剤 | |
| Pellicone et al. | Amino-acid sequence determination of a hydrophobic region of bovine rhodopsin | |
| JPS6037090B2 (ja) | ポリペプチド、及びこのポリペプチドを主成分とする酸性胃液の分泌を抑制する薬剤組成物 |