JPS5950315B2 - ポリペプチドの製法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、酸性胃液の分泌を抑制する性質を有するポリ
ペプチドに関する。

人間の尿の抽出物が温血動物における酸性胃液の分泌抑
制の原因となることが公知になつてから久しくなりかつ
この活性成分の二つを純粋な形で単離することは西独特
許出願公開公報第２３５９５６４号に記載してある。

これら二種類の純粋成分はそれぞれβ−ウロガストロン
及びγ−ウロガストロンとして公知である。本発明の基
礎は、β一又はγ−ウロガストロンの酵素的減成によシ
新規ポリペプチドを生成し得ることならびに該新規ポリ
ペプチド及びその還元生成物は両者とも酸性胃液の有効
な分泌抑制剤であるという発見である。本発明によ１！
）Ｓ３個の分子内ジスルフイド結合を有し：ダンシレイ
シヨン（Ｄａｎｓｙｌａｔｉ−０ｎ）の際にＮ一末端に
アスパラギン酸を示しかつＣ一末端にロイシンを有し；
分子量約５５００を有し；次の物理的性質を示し：ｎ−
フタノ→レ：酢酸：ピリジン：水（３０：６：２４：２
０）を用いるペーパークロマトグラフイーフエニルアラ
ニンに関する移動度０．９０を有する単一スポツト：Ｐ
Ｈ２．ｌの酢酸／ギ酸を用いる済紙電気泳動法一ε−Ｄ
ＮＰ−リシンに関する前部移動度１．５８を有する１コ
メツＰ（ＣＯｍｅｔ）；ＰＨ８．９の０．１Ｍトリス一
塩酸緩衝液を用いるアクリルアミドゲル電気泳動法一プ
ロムフエノールブル一に関する移動度０．８１を有する
、陽極方向に移動する単一スポツト；水解物の分析で次
のアミノ酸比：アスパラギン酸７、セリン３、グルタミ
ン酸４、プロリン１、グリシン４、アラニン２、タミン
酸４、ラ゜口リン１、グリシン４、アラニンバリン３、
システイン６、メチオニン１、イソロイシン２、ロイシ
ン４、チロシン５、ヒスチジン２、リシン１、及びアル
ギニン２を与え；かつ０．２〜１μｇ／Ｋｇの範囲で生
物学的効力（後に定義する）を有する単一ポリペプチド
鎖よシ成る水溶性白色酸性ポリペプチドたるポリペプチ
ド又はシスチン残基がシステイン残基に還元された還元
生成物が供給される。

本発明の他の特徴によれば、β−ウロガストロン又はγ
−ウロガストロンに水性媒体中でリシン特異性アミノ−
エンドペプチダーゼの作用を受けさせ、反応混合物より
所望のポリペプチドを分離し、この後、還元生成物を所
望する場合には前記のようにして得られたポリペブチド
を、ペプチド化学で常用されるジスルフイド結合の還元
用還元剤、例えばチオール、例えばメルカプト−エタノ
ール又はジチオトレイトールで還元することより成る本
発明のポリペプチドの製法が与えられる。

適当なリシン特異性アミノ−エンドペプチダーゼの例は
、英国特許第１２６３９５６号明細書に詳細に記載され
かつ提案されているような、菌類ナラタケの成熟子実体
から得ることの？る酵素ＡＭプロテアーゼである。β一
又はγ−ウロガストロンにリシン特異性アミノーエンド
ペプチターゼの作用を受けさせることは、水性培地中に
易容の酵素を用いて実施するか、又は水性培地中に可溶
の又は可溶でない、担体に結合された酵素を用いて実施
することができる。

出発物質として使用せるウロガストロン、つまジβ一又
はγ−ウロガストロンと酵素との間の反応の割合及び程
度は、酵素／基質・比、培地の…及び温度、ウロガスト
ロンの濃度及び恒温保持時間に依存する。勿論一般には
ウロガストロンを分断するために要する時間は、ウロガ
ストロンの濃度か又は酵素／基質・比の増大によつて短
縮される。同様に培地のＰＨ又は温度の変化は分断時間
に影響を及ぼす。反応の進行は、ＰＨ６．５で虎紙電気
泳動法を用いて反応培地の試料を検査することによつて
あるいは１−ジメチルアミノ−ナフタレン−５−スルホ
ニルクロリドを用いて試料に〃ダンシレイシヨン〃（Ｄ
ａｎｓｙｌａｔｉＯｎ）法を受けさせ（ハートレイ（Ｈ
ａｒｔｌｅｙ）、ＢｌＯｃｈｅｍ．Ｊ．ｌ９７Ｏ，ｌｌ
９巻、８０５頁〕かつ生成されたＮα，Ｎε−ダンシル
一Ｌ−リシンの量を評価することによつて追跡すること
ができる。これによつて反応条件の任意の変化の効果を
確定することができる。一般に、反応は酵素／基質・比
の広い変化で進行するが、基質１０００部に対する酵素
１部という最小値が望ましい。

反応は、培地のＰＨ３〜１０、温度１０〜５０゜Ｃで進
行する。ウロガストロンの望ましい分断を、比較的短い
時間、例えば１２〜２４時間で得る有利な条件は、ウロ
ガストロンの濃度１Ｗ９／ｍ駈、ＰＨ６〜９、温度２０
〜４０゜Ｃ及び酵素１部／基質８部〜酵素１部／基質１
００部なる酵素／基質・比である。また培地中に金属イ
オン、例えば濃度１０−２〜１０−４モルで塩化物の形
でのカルシウム又はマグネシウムイオンを含有するのが
有利である。リシン特異性アミノ−エンドペプチダーゼ
のβ一又はγ−ウロガストロンに対する効果は勿論、リ
シン残基のアミノ側でβ一又はγ−ウロガストロンを分
断することである。

出発ウロガストロンが２個のリシン残基を含むのに、分
断はこれらリシン残基の中の１個で主として起る。β−
ウロガストロンからは、グルタミン酸残基１個、ロイシ
ン残基１個、リシン残基１個、トリプトフアン残基２個
及びアルギニン残基１個を含み、Ｎ一末端にリシンを有
するへキサペプチドが遊離さわ、かつγ−ウロガストロ
ンからは、グルタミン酸残基１個、ロイシン残基１個、
リシン残基１個及びトリプトフアン残基２個を含み、Ｎ
−末端にリシンを有するペンタペプチドが遊離される。
しかしもつと苛酷な若干の反応条件下では、他方のリシ
ン残基における分断も起シかつ生成物中に今一つのポリ
ペプチドを生ずる。β−又はγ−ウロガストロンからそ
れぞれヘキサー又はペンタペプチドを分断した後に残つ
ているポリペプチドは同一でありかつ本発明のポリペプ
チドを構成する。

このポリペプチドは、ポリペブチドを分離するための任
意の慣用法によつて反応混合物より分離することができ
るが、しかしゲルクロマトグラフイ一を使用するのが特
に有利である。すなわち、β一又はγ−ウロガストロン
それぞれからヘキサー又はペンタペプチドを分断した後
に残つている水性培地を、交サ結合されたデキストラン
ゲル又はポリアクリルアミドゲルのカーラムを通して濾
過しかつ前記カラムを高真空下での凍結乾燥時に揮発す
る成分よシ成る緩衝液、例えばＰＨ７．２を有する酢酸
アンモニウム水溶液で溶離して、所望の生成物（溶離液
を凍結乾燥することによつて単離）を与える。還元生成
物の要求される場合には、本発明のポリペプチドを、有
利にＰＨ７〜１０の緩衝水溶液中でかつ酸素及び光を排
除して還元する。

生成物は、再びゲルクロマトグラフイ一を用いることに
よつて単離することができる。前記のように、本発明の
ポリペプチド及びその還元生成物は、温血動物の酸性胃
液の分泌の有効な抑制剤である。

この性質は、ハイデンハイン小胃（その胃腺分泌はヒス
タミンで刺戟される）を備えた犬の酸性胃液の分泌を抑
制する本発明の前記生成物の作用によつて証明される。
この試験は、．該生成物の生物学的効力を決定するのに
用いられる。前記効力は、μｇ／Ｋｇで表わされ、ハイ
デンハイン小胃（その胃酸分泌は、ヒスタミンの注入に
よつて最大分泌水準の６０〜８０％まで刺戟される）を
備えた犬に静脈内注射によつて投与する際に前記胃酸分
泌の５０〜７０ｆ６抑制を惹き起す該生成物の量として
定義される。特定試料の生物学的効力を異なる犬に関し
かつ時を違えて測定する場合には、その効力に若干の変
動が認められる。それ故前記測定結果は用量範囲として
表わすのが最良である。酸性胃液分泌を抑制する生理学
的効果は−[ヮw腸潰瘍の治療に有効であり）かつ試験条
件下では重大な有毒作用は観察されなかつた。１た該ポ
リペプチドは標準試験で潰瘍癒合性を示す。

温血動物の酸性胃液の分泌を抑制するために使用する場
合には、環境及び要求された抑制程度によつて広い範囲
の用量、例えば０．０５〜１０Ｉｔｇ／Ｋｇを用いるこ
とができる。

該用量は注射、特に静脈内又は皮下注射によつて、又は
静脈内注入によつて投与することができる。１回の静脈
内注射の効果は約弓時間持続し、注入効果は注入終了後
約弓時間持続する、それ故に低水準の酸性維持は、該用
量を反復すること又は蓄積質調剤を注射し、この調剤よ
シ活性成分がよシ延長された期間にわたつて徐徐に解放
されることを要求する。

人間に使用する場合には、代表的な一回用量は、５〜
５００ｐｇ／注射又は注入によつて投与された人間であ
る。本発明のポリペプチド又は還元生成物は、製薬学的
組成物の形で投与することもでき、従つて本発明の他の
特徴によれば、上記定義のようなポリペプチド又は還元
生成物及び製薬学的認容性希釈剤又はキヤリヤ一より成
る製薬学的組成物が提供される。

有利な組成物は、非経口的投与用に適したもの、例えば
無菌注射可能の溶液又は懸濁液、及び無菌注射可能の蓄
積質又は緩徐解放性調剤である。

注射可能溶液又は懸濁液は０．５〜 ５００ｐｇ／一を
含有していてよく、もつと希薄な溶液は注入によつて投
与される。しかし注射可能の蓄積質又は緩徐解放性調剤
は１用量当シ活性成分２即まで含有していてよい。特に
有利な無菌注射可能の溶液は、等張塩類又は等張デキス
トロース中で製造さわ、必要ならばＰＨ５〜９に緩衝さ
れ、かつ１〜１００μｇ ／ｍｌを含有していてよい。
上記の無菌注射可能組成物は、製造されてそのままで貯
蔵してもよいし、あるいは該組成物は、使用直前に、無
菌媒体、例えば水を、無菌性を保持するベヒクル、例え
ばバイアル又はアンプルに封入された既知重量、例えば
１０〜 ２００ｐｇの無菌成分に加えることによつて製
造することもできる。

また既知重量の無菌成分は十分に無菌のデキストロース
又は塩化ナトリウムを含有して、無菌媒体で希釈した後
に等張溶液を与えることもできる。次に本発明を実施例
により説明するが、本発明はこれらの例に限定されるも
のではなく、例中では製造者の商標又は略号によつて呼
称される次のような特定クロマトグラフイ一材料が有用
である。

多孔性ポリアクリルアミドゲル、ピオゲルＰ６（ＢｉＯ
ｇｅｌＰ６）〔米国カリフオルニア州リツチモンド市在
、ビオ−ラード ラボラトリーズ（ＢｉＯ−ＲａｄＬａ
ｂＯｒａｔＯｒｉｅｓ）製造〕多孔性交サ結合デキスト
ランゲル、セフアデクスＧ−２５（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ
−２５）〔スウエーデン国ウプサラ（Ｕｐｐｓａｌａ）
在、フアルマシア フアイン ケミカルス ＡＢ（Ｐｈ
一ＡｒｍａｃｉａＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓＡＢ）製
造〕クロマトグラフイーカラムの使用を伴う各操作の場
合、溶離液を、ウルトロラツク（ＵｌｔｒＯ一Ｒａｃ）
ＬＫＢ７ＯＯＯフラクシヨンコレクタ一〔英国サリ一（
Ｓｕｒｒｅｙ）州グロートン（Ｃ−ＲＯｙｄＯｎ）市在
、ＬＫＢインストルメント（Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）
社〕を使用して一定数の滴数より成る７ラクシヨンとし
て分取し、これらフラクシヨンを、２８０ｍ１ｔで紫外
線吸収を測定することによつてペプチド物質に関して分
析し次にペプチド物質をフラクシヨンとして分取し、次
のように生物学的活性に関して分析した：除神経節胃底
襄を隔離した犬を用意し、かつヒスタミンの皮下注入を
用いて胃腺分泌を最大分泌率の約６０〜８０％まで刺戟
した〔普通ヒスタミン（主薬として表わす）６００μｇ
の溶液を毎時０．４８ｄ注入すれば十分であつた〕。

試験物質の既知量を等張塩類中に溶かし、かつ犬が定常
割合で胃液を分泌しつつある時、該物質の１回の静脈内
注射を施した。胃腺分泌の抑制を被検特定用量に関して
記録した。数種の異なる用量に関して得られた結果から
特異活性を測定することができる。

アミノ酸分析は、ロウカールト（ＬＯｃａｒｔｅ）アミ
ノ酸分析器〔ロウカールト社、ロンドンＳ．Ｗ．７、エ
ンペラースゲイト（ＥｍｐｅｒＯ−ＲｓＧａｔｅ）２４
在〕を用いて実施した。

すべてのカラムクロマトグラフイ一は４たＣで実施しか
つすべての緩衝溶液はトルエンで飽和させた。例１ ｐＨ８．２の０．１Ｍ重炭酸アンモニウム緩衝液（２０
０１ｔ１１）と０．０１Ｍ塩化マグネシウム溶液（５０
μｍ１）との混合物中のβ−ウロガストロン（１．０７
１９）の溶液を、水（２００１ｔ／ｌ）中のＡＭプロテ
アーゼ（６０μｇ）と一緒に３ｒｃで１６時間恒温保持
した。

生ずる溶液を多孔性交サ結合デキストランゲル（セフア
テクスＧ−２５）のカラム（３５×１（７））に適用し
かつこのカラムを流速８ｍ１／ｈで０．０５Ｍ酢酸アン
モニウムを用いて展開した。１ｍ１づつのフラクシヨン
を分取しかつフラクシヨン１２〜２０及び３８〜５２に
関してペプチド物質を検出した。

フラクシヨン３８〜５２の該物質は生物学的に不活性で
ありかつ試料は酸、塩基又はロイシンアミノペプチダー
ゼで加水分解された。

生ずる溶液の分析は、原ペプチドがアミノ酸を次の割合
：ＧＧｌｕｌ、Ｌｅｕｌ、Ｌｙｓｌ、Ｔｒｐ２、Ａｒｇ
ｌで含んでいることを示した。ダンシレイシヨンはＮ一
末端にリシンの存在することを示し九フラクシヨン１２
〜２０からの該物質は生物学的に活性であつて、これら
のフラクシヨンを一緒にしかつ凍結乾燥して、次の性質
を有する水溶性白色酸性ポリペプチドを与えた：１１回
の測定での生物学的活性： 出発物質０．７μＧＡ！に等しい用量で抑制３０％。

２水解物の分析によるアミノ酸比： ＡｓＰ７、Ｓｅｒ３、Ｇｌｕ４、ＰｒＯｌ、Ｇｌｙ４、
Ａｌａ２、Ａｌ３、Ｃｙｓ６、Ｍｅｔｌ．．Ｉｌｅ２、
Ｌｅｕ４、Ｔｙｒ５、Ｈｉｓ２、Ｌｙｓｌ、Ａｒｇ２。

３ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水（３０：６：２
４：２０）を用いるペーパークロマトグラフイ一で、フ
エニルアラニンに関する移動度０．０９を有する単一ス
ポツト。

４ｐＨ２．１の酢酸／ギ酸（ギ酸２０ｍ１１酢酸８０ｍ
１を水と一緒に調合して１１とした）を用いる戸紙電気
泳動法で、ε−ＤＮＰ−リシンに関する前部移動度１．
５８を有する１コメツトＶ（ｃ−０ｍｅｔ）。

５ｐＨ８．９のトリス一塩酸０．１Ｍ緩衝液を用いるア
クリルアミドゲル電気泳動法で、プロムフエノールブル
一に関する移動度０．８１を有する単一スボツト。

該物質のダンシレイシヨンは、Ｎ−末端におけるアスパ
ラギン酸の存在を示し、カルボキシペプチダーゼＡでの
消化はＣ−末端にロイシンの存在することを示した。

しかし該生成物のダンシレイシヨンは、Ｎ−末端にリシ
ンを有する少量のペプチドの存在することを示し、かつ
出発物質の２第目のリシン残基での分断によつて形成さ
れた少量のペプチドの存在することを示した。

例２ ｐＨ８．２の０．ＩＭ重炭酸アンモニウム緩衝液（２０
０ＩＬｉ）と０．ＩＭ塩化カルシウム溶液（２０μｌ）
との混合物中のγ−ウロガストロン（ １．８ｍ９）の
溶液を、ＡＭプロテア＝ゼ（１００μｇ）ど一緒に０．
ＩＭ重炭酸アンモニウム溶液（１００１ｔ１）中で３７
゜Ｃで３時間恒温保持した。

第二部分のＡＭプロテアーゼ（１００μｇ）を加えかつ
更に１６時一間恒温保持を続けた。生ずる溶液を、多孔
性交サ結合デキストランゲル（セフアデスクＧ−２５）
のカラム（ ３５Ｘ１．ＩＣＷＬ）に適用しかつこのカ
ラムを０．０５Ｍ酢酸アンモニウムを用いて流速１．７
ｍ１／ｈで展開した。滴数３０のフラクシヨンを分 一
取し、かつペプチド物質をフラクシヨン１５〜２４及び
４９〜６５に関して検索し九フラクシヨン４９〜．６５
のペプチド物質は生物学的に不活性であわかつ水解物の
分析により、該物質は次の割合でアミノ酸を含有するこ
とが判つ こた：Ｇｌｕｌ、Ｌｅｕｌ、Ｌｙｓｌ、Ｔｒ
ｐ２。

ダンシレイシヨンはＮ−末端にリシンの存在することを
示した。フラクシヨン１５〜２４からの該物質は生物学
的に活性であシ、かつこれらのフラクシヨンを−Ｌ緒に
しかつ凍結乾燥して水溶性の白色酸性ポリペプチドを与
えた。

これは例１で得られたものと同一である。例３ ０．０２５Ｍ重炭酸アンモニウム（ １．０ｍ１）中の
４β−ウロガストロン（１．７５ｍ９）の溶液を、Ａ
Ｍプロテアーゼ（３０μｇ）ど＝緒に水（１００μ ）
中で３７゜Ｃで３時間恒温保持し．た。

次に第二部分のＡＭプロテアーゼ（２０“ｇ）を加えか
つ恒温保持を更に１６時間続けた。生ずる溶液を、０．
０５Ｍ酢酸アンモニウムで平衡された多孔性ポリアクリ
ルアミドゲル（ビオゲルＰ６：２００〜４００メツシユ
）のカラム（１００ｘ０．９Ｃ！Ｆｎ）に適用した。こ
のカラムを酢酸アンモニウム溶液を用いて流速５ｍ１／
ｈで展開した。１ｍ１づつのフラクシヨンを分取しかつ
生物学的に活性なペプチド物質をフラクシヨン２４〜３
０に関して検出した。

これらフラクシヨンを一緒にかつ凍結乾燥して、例１の
生成物と同一の性質を有する水溶性白色酸性ポリペプチ
ドを与えた；１回の測定で出発物質の０．６μｇ／Ｋｇ
に等しい用量で抑制６７％の生物学的活性を示す。例４ 例３で得られたポリペプチド全部を水及び尿素（１００
〜）、エチレンジアミンテトラ酢酸（１即）中に溶かし
かつＰＨ８．６の１．５Ｍトリスー塩酸緩衝液（１００
μｌ）を加えた。

この溶液を水で希釈して２５０μｌとなし、酸素を含ま
ない窒素で洗浄し、次にジチオトレイトール（１０ｗ９
）を加えた。生ずる溶液を暗所に２０時間保ち、次に０
．０００２Ｍジチオトレイトールを含有する。。５Ｍ酢
酸アンモニウムで平衡された多孔性ポリアクリルアミド
ゲル（ビオゲルＰ６：２００〜４００メツシユ）のカラ
ム（１００×０．９閑）に適用した。

このカラムを酢酸アンモニウム溶液を用いて流速５ｍ１
／ｈで展開した。１ｍ１づつのフラクシヨンを分取しか
つフラクシヨン２４〜３３に関してペプチド物質を検出
した。

これらのフラクシヨンからの該物質は生物学的に活性で
あわ、これらフラクシヨンを一緒にしかつ凍結乾燥して
、シスチン残基がシステイン残基に還元されたポリペプ
チドを与えかつこのものは次の性質を有していた：１−
回の測定における生物学的活性：出発物質の０．６μｇ
／Ｋｇに等しい用量で抑制５９％。

２ 水解物の分析によるアミノ酸比： Ａｓｐ７、Ｓｅｒ３、Ｇｌｕ４、ＰｒＯｌ、Ｇｌｙ４、
Ａｌａ２、Ｖａｌ３、Ｃｙｓ６、Ｍｅｔｌ、Ｉｌｅ２、
Ｌｅｕ４、Ｔｙｒ５、ＨｉＳ２、Ｌｙｓｌ、Ａｒｇ２。

例５ 例１で記載したポリペプチド又はこのものの還元生成物
（初めのシスチン残基がシステインに還元される）を、
発熱性物質を含まないデキストロース溶液５ｑｂｗ／ｖ
に溶かして、最終濃度４０μｇ／ｍｌを与える。

この溶液を、滅菌膜涙過系、例えば０．２２ｍμｍミリ
ボア一Ｖ（ＭｉｌｌｉｐＯｒｅ）Ｆ過器（Ｍｉｌｌｌｐ
Ｏｒｅは商標）を通して、部分標本２．５ｍ１のバイア
ルに配量する。

次に各内容物を凍結乾燥しかつ無菌条件下でバイアルに
ふたをしかつ密封する。ポリペプチドとデキストロース
との無菌混合物を含むバイアルを４゜Ｃで貯蔵する。例
６ 例５に記載したように製造したバイアルに無菌水２．５
ｍ１を使用直前に加えて、デキストロース５％ｗ／ｖ溶
液中のポリペプチド４０μｇ／ηの無菌注射可能の溶液
を与えた。

例７例１に記載したポリペプチド又は初めのシスチン残
基がシステインに還元された前記ポリペプチドの還元生
成物（１０ワ）を、発熱物質を含まない水（５０Ｔｆ９
）に溶かし、かつこの溶液を、滅菌膜済過系、例えば０
．２２ｍＩｔ８ミリボア１一済過器（ミリボア一は商標
）を通して済過してアンプルに入れて各アンプルが０．
５ｍ１を受容するようにする。

次に各アンプルの内容物を凍結乾燥し、アンプルを無菌
条件下で密封する。無菌ポリペプチド１００１ｔｇをそ
れぞれ含むアンプルを−２０℃で保存する。例８ 例７のように製造したアンプルの内容物を発熱物質を含
まない無菌デキストロース５％ｗ／ｖ溶液に溶かしてデ
キストロース５０１）ｗ／ｖ溶液中にポリペプチド１〜
５μｇ／ｍｌを含有する溶液を与える。

この溶液は注入投与に適している。注射用に適する溶液
の要求される場合には、アンプルの該内容物を発熱物質
を含まない無菌デキストロース５％ｗ／ｖ溶液に溶かし
てポリペプチド５〜５０μｇ／ｍｌを含有する溶液を与
える。

また、デキストロース５％ｗ／ｖ溶液を等張塩類と代え
てもよい。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ３個の分子内ジスルフィド結合を有し；ダンシレイ
   シヨンの際にＮ−末端にアスパラギン酸を示しかつＣ−
   末端にロイシンを有し；分子量５５００を有し；次の物
   理的性質：ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水（３０
   ：６：２４：２０）を用いるペーパークロマトグラフィ
   ー−フェニルアラニンに関する移動度０．９０を有する
   単一スポット；ｐＨ２．１の酢酸／ギ酸を用いる濾紙電
   気泳動法−ε−ＤＮＰ−リシンに関する前部移動度１．
   ５８を有する′コメツト′；ｐＨ８．９の０．１Ｍトリ
   ス−塩酸緩衝液を用いるアクリルアミドゲル電気泳動法
   −プロムフェノールブルーに関する移動度０．８１を有
   する、陽極方向に移動する単一スポットを示し；水解物
   の分析で次のアミノ酸比：アスパラギン酸７、セリン３
   、グルタミン酸４、プロリン１、グリシン４、アラニン
   ２、バリン３、システイン６、メチオニン１、イソロイ
   シン２、ロイシン４、チロシン５、ヒスチジン２、リシ
   ン１、及びアルギニン２を与え；かつ０．２〜１μｇ／
   ｋｇの範囲で生物学的効力を有する単一ポリペプチド鎖
   より成る水溶性白色酸性ポリペプチドたるポリペプチド
   又はシスチン残基がシステイン残基に還元された還元生
   成物を製造するに当り、水性媒体中のβ−ウロガストロ
   ン又はγ−ウロガストロンにリシン特異性アミノ−エン
   ドペプチダーゼの作用を受けさせ、引続き反応混合物よ
   り所要のポリペプチドを分離し、この後還元生成物の所
   望される場合には、このようにして得られたポリペプチ
   ドを、ペプチド化学において常用されるジスルフィド結
   合の還元用還元剤で還元することを特徴とする前記ポリ
   ペプチド又はその還元生成物の製法。