JPS593358A - 抗原検出方法及び装置 - Google Patents
抗原検出方法及び装置Info
- Publication number
- JPS593358A JPS593358A JP9928883A JP9928883A JPS593358A JP S593358 A JPS593358 A JP S593358A JP 9928883 A JP9928883 A JP 9928883A JP 9928883 A JP9928883 A JP 9928883A JP S593358 A JPS593358 A JP S593358A
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- Japan
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- antigen
- immunoglobulin
- factor
- human
- immunoglobulin factor
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はりューマヂ性関節炎の病原部に関辿り−る抗原
の検出法に関し、リューマチ性関節炎のｉＬＬ判定法及
び上記抗原検出用診断装置に関する。
の検出法に関し、リューマチ性関節炎のｉＬＬ判定法及
び上記抗原検出用診断装置に関する。
本発明の方法は病気の経過及び／又は例えば金。
ペニシラミン又は細胞毒素薬剤による治療等の治療法へ
の反応の追跡に使用しつる。
の反応の追跡に使用しつる。
ジャーナル Ａブ イミュノロジ 第１１９巻、１９７
７年７月２９５〜３００頁の「ラジオイミュノアセイ
Ａブ ＩｇＧ アンド ＩＣＩＭ ルーマドイド
ファクタース リアクデイング ウィズヒユーマン Ｉ
（］ ＧＪと題する論文でカーソン仙はＩｇＧ及びＩ（
ＩＭリューマヂ囚了の検出法について説明している。し
かし、この方法はおおまかで非選択的であり作業者は説
明されている方法に従事する前に血清を分析しうるよう
多大の処理を行う必要がある。その得られる結果は本発
明の方法により得られる結果にはるかに劣る。
７年７月２９５〜３００頁の「ラジオイミュノアセイ
Ａブ ＩｇＧ アンド ＩＣＩＭ ルーマドイド
ファクタース リアクデイング ウィズヒユーマン Ｉ
（］ ＧＪと題する論文でカーソン仙はＩｇＧ及びＩ（
ＩＭリューマヂ囚了の検出法について説明している。し
かし、この方法はおおまかで非選択的であり作業者は説
明されている方法に従事する前に血清を分析しうるよう
多大の処理を行う必要がある。その得られる結果は本発
明の方法により得られる結果にはるかに劣る。
本発明の第１の目的は略未処理のヒト体液からりューマ
ヂ性関節炎の病因論に関係する抗原の検出を生体外で行
う方法を提供することにあり、この方法は ａ）抗原を純粋な形で獲得し、 １） ）抗原と交差反応を示さない容易に検出しうる抗
免疫グロブリンを獲得し、 Ｃ）体液中に存在する抗原に対重る抗体が抗原と複合す
るよう抗原を体液で処理し、 ｄ）処理した抗原を容易に検出しろる抗免疫グロブリン
因子で処理する という段階からなっていて、抗免疫グロブリン因子が複
合抗体のみに結合づるために、結合抗免疫グロブリン因
子の存在及び複合抗体の存在が検出しうる。
ヂ性関節炎の病因論に関係する抗原の検出を生体外で行
う方法を提供することにあり、この方法は ａ）抗原を純粋な形で獲得し、 １） ）抗原と交差反応を示さない容易に検出しうる抗
免疫グロブリンを獲得し、 Ｃ）体液中に存在する抗原に対重る抗体が抗原と複合す
るよう抗原を体液で処理し、 ｄ）処理した抗原を容易に検出しろる抗免疫グロブリン
因子で処理する という段階からなっていて、抗免疫グロブリン因子が複
合抗体のみに結合づるために、結合抗免疫グロブリン因
子の存在及び複合抗体の存在が検出しうる。
用語「略未処理のヒト体液」はその重要部分が除去され
ておらず、不可溶化１９Ｇ、２−メルカプトエタノール
、コンカナバリンＡによる又はイミュノアブソブション
、ペプシン消化又は熱処理等の前処理により破壊されて
ない血清、リンパ液。
ておらず、不可溶化１９Ｇ、２−メルカプトエタノール
、コンカナバリンＡによる又はイミュノアブソブション
、ペプシン消化又は熱処理等の前処理により破壊されて
ない血清、リンパ液。
全面又は滑液等のヒトの体液を意味する。この用語には
希釈又は緩衝剤で処理した体液をも含ませることにづる
。
希釈又は緩衝剤で処理した体液をも含ませることにづる
。
用語「リューマヂ性関節炎の病原論に関連する抗原」は
木質的には集合等の物理的又は化学的阻止をほどこした
Ｆｃ（ＲＡ）抗原又はその断片を意味する。用語［純粋
な形でＪは上記容易に検出しうる抗免疫グロブリン因子
と交差反応を示さない如きものであることを意味する。
木質的には集合等の物理的又は化学的阻止をほどこした
Ｆｃ（ＲＡ）抗原又はその断片を意味する。用語［純粋
な形でＪは上記容易に検出しうる抗免疫グロブリン因子
と交差反応を示さない如きものであることを意味する。
用語［容易に検出しうる抗免疫グロブリン因子Ｊは、放
射性ラベリング、蛍光性又は化学ルミネレンス性マーカ
の付加、酸素によるタッギング又は磁気粒子、可視微小
球又は遊離基を使用することで検出しうる又は検出しう
るようにできる抗免疫グ［Ｊプリン又はその断片を意味
り′る。放射性ラベリングが好ましい。抗免疫グロブリ
ン因子は勿論それが結合づる抗体に応じて選択される。
射性ラベリング、蛍光性又は化学ルミネレンス性マーカ
の付加、酸素によるタッギング又は磁気粒子、可視微小
球又は遊離基を使用することで検出しうる又は検出しう
るようにできる抗免疫グ［Ｊプリン又はその断片を意味
り′る。放射性ラベリングが好ましい。抗免疫グロブリ
ン因子は勿論それが結合づる抗体に応じて選択される。
ヒト１（ＩＧの場合適当な抗免疫グロブリン因子はヒツ
ジＩａＧ抗ヒト？！］ＧＦａｂである。
ジＩａＧ抗ヒト？！］ＧＦａｂである。
本発明の第２の目的は上記抗原の標本及び容易に検出し
うる抗免疫グロブリン因子を吸着さける土台面からなる
上述の方法を実施づる装置を提供でるにある。装置は本
発明の方法を実施する間土台面へ適用づる（緩衝溶液等
の）非特異的な結合を減少させる薬剤を含む。
うる抗免疫グロブリン因子を吸着さける土台面からなる
上述の方法を実施づる装置を提供でるにある。装置は本
発明の方法を実施する間土台面へ適用づる（緩衝溶液等
の）非特異的な結合を減少させる薬剤を含む。
土台面は複数の縦孔ヌは例えばセファデックスをつめた
カラムを形成しであるトレイ等の大型の面ばかりでなく
ラテックス又はコ【］イド性Ｍ濁液のそれの如き小型の
面でもよい。好ましい装置ではアメリカ合衆国］ネチカ
ット州アービン、スコツトランド及びハムデンのリンプ
ロ デビジョンオブ ７０− ラボラトリ製造の放射線
照射多数孔ポリ塩化ビニルトレイが使用される。
カラムを形成しであるトレイ等の大型の面ばかりでなく
ラテックス又はコ【］イド性Ｍ濁液のそれの如き小型の
面でもよい。好ましい装置ではアメリカ合衆国］ネチカ
ット州アービン、スコツトランド及びハムデンのリンプ
ロ デビジョンオブ ７０− ラボラトリ製造の放射線
照射多数孔ポリ塩化ビニルトレイが使用される。
本発明の方法の大要は好ましくは、適当な吸着性を有す
る土台面を特異的抗原で被覆して抗原を上記の面に吸着
せしめ、土台面を緩衝液で洗浄し、試験すべき体液を洗
浄した土台面につりで抗原に対づる如何なる抗体も吸着
されている抗原ど複合するようにし、不結合抗体全てを
除去するように緩衝液で土台面を洗浄し、抗免疫グロブ
リン因子をつけ、不結合抗免疫グロブリンを除去づるよ
う緩衝液で洗浄し、次いで複合抗体ど結合したため上記
土台面に残った抗免疫グロブリン因子を評価しＣ選択さ
れた抗原ど結合し従って体液中に存在する抗体を計数す
るという段階からなる。
る土台面を特異的抗原で被覆して抗原を上記の面に吸着
せしめ、土台面を緩衝液で洗浄し、試験すべき体液を洗
浄した土台面につりで抗原に対づる如何なる抗体も吸着
されている抗原ど複合するようにし、不結合抗体全てを
除去するように緩衝液で土台面を洗浄し、抗免疫グロブ
リン因子をつけ、不結合抗免疫グロブリンを除去づるよ
う緩衝液で洗浄し、次いで複合抗体ど結合したため上記
土台面に残った抗免疫グロブリン因子を評価しＣ選択さ
れた抗原ど結合し従って体液中に存在する抗体を計数す
るという段階からなる。
好ましくは緩衝液はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含
む低リン酸塩緩衝液又はＢＳＡを含むグリシン塩性緩衝
液である。ＢＳＡ緩衝液が好ましいとはいえ、洗浄剤、
ゼラチン及び伯の形式の動物アルブミン等の非特異的結
合を減少「しめる他の薬剤を使用してもよい。
む低リン酸塩緩衝液又はＢＳＡを含むグリシン塩性緩衝
液である。ＢＳＡ緩衝液が好ましいとはいえ、洗浄剤、
ゼラチン及び伯の形式の動物アルブミン等の非特異的結
合を減少「しめる他の薬剤を使用してもよい。
上記の如く、抗免疫グロブリン因子は体液中に存在を検
出すべき抗原とは交差反応を示してはならない。これは
最初に選択された抗免疫グ［コブリン因子を選択された
抗原に働か＋ｉ選択された抗原と結合する因子を除去し
たその結果の抗免疫グロブリン因子を収集するか、又は
高紬度免疫グロブリンに対して抗免疫グロブリン因子を
働かせて結合した因子のみを収集することで保証される
。
出すべき抗原とは交差反応を示してはならない。これは
最初に選択された抗免疫グ［コブリン因子を選択された
抗原に働か＋ｉ選択された抗原と結合する因子を除去し
たその結果の抗免疫グロブリン因子を収集するか、又は
高紬度免疫グロブリンに対して抗免疫グロブリン因子を
働かせて結合した因子のみを収集することで保証される
。
上）本の如く、選択した抗原は選択された抗免疫グロブ
リン因子とは交差反応を示してはならない。
リン因子とは交差反応を示してはならない。
これは抗原を抗免疫グロブリン因子に働かけて、抗免疫
グロブリン因子と結合重る因子を除去したその結果の抗
原を収集づることで保証される。
グロブリン因子と結合重る因子を除去したその結果の抗
原を収集づることで保証される。
本発明によればヒトの体液中の抗体の存在が非常に正確
に検出できる。Ｉ（ＩＧ、Ｉ（ＩＭ、ＩＱ△。
に検出できる。Ｉ（ＩＧ、Ｉ（ＩＭ、ＩＱ△。
ＩｇＤ及びＩＵＥの検出及び区別ばかりでなく、これら
の免疫グロブリンのリブクラス間の、及びし鎖（ｌｉｇ
ｈｔ ｃｈａｉｎ ）の型の間の、及び抗原結合部位
の特定の構造間の判定１ら可能である。
の免疫グロブリンのリブクラス間の、及びし鎖（ｌｉｇ
ｈｔ ｃｈａｉｎ ）の型の間の、及び抗原結合部位
の特定の構造間の判定１ら可能である。
本発明の方法の理解のために以下図面とともに実施例の
説明をする。第１図は上述の如ぎプラスチックス製多数
孔トレイ中の縦孔で画成された土台面１を示す。面１は
期限を超過したどのヒト血漿からも容易に得られる純粋
ＰＣＩ（ＩＧ抗原を縦孔中に導入することでまず被覆さ
れる。Ｆｃｌ。
説明をする。第１図は上述の如ぎプラスチックス製多数
孔トレイ中の縦孔で画成された土台面１を示す。面１は
期限を超過したどのヒト血漿からも容易に得られる純粋
ＰＣＩ（ＩＧ抗原を縦孔中に導入することでまず被覆さ
れる。Ｆｃｌ。
Ｇ抗原は抗免疫グロブリン因子と交差反応を起さないも
のを前もって選択しておく。抗原は面１に吸着される。
のを前もって選択しておく。抗原は面１に吸着される。
第１図には４つのかかる抗原が長い半径方向の線で示さ
れている。面１は次いで例えばＢＳＡを含む低リン酸塩
緩衝液で洗浄される。
れている。面１は次いで例えばＢＳＡを含む低リン酸塩
緩衝液で洗浄される。
これは吸着されなかった抗原を洗い流してそれ以上面１
ど結合重るのを防ぐためである。こうして緩衝液は被覆
となるがこれは図中でＢＳＡと記号がつけられた短い半
径方向の線として示されている。次いで体液（この場合
は血清）が縦孔中に入れられる。もしこれがリューマチ
因子（ＲＦ）抗体を含むならば、これらの坑体はＦＣＩ
（ＩＧ抗原と結合する。血清中に存在する仙の抗体は結
合しないので再び緩衝液で余剰血清を洗浄すると抗原と
結合した図中でＲＦと記号をつけたＲＦ抗体だけを残し
て結合しなかった抗体はＪべて洗い流される。次に放射
能でラベリングした抗免疫グルプリン因子を含む緩衝液
を面１につりる。放射能ｅラベリングした抗免疫グロブ
リン因子はＰＣＩ（ＩＧ抗原ど交差反応を起さないよう
前ちって選択しであるのでＲＦ抗体にのみ結合しうるた
め緩衝液で洗浄覆るとＲＦ抗体と結合しである放射能で
ラベリングした抗免疫グロブリン因子のみが残る。
ど結合重るのを防ぐためである。こうして緩衝液は被覆
となるがこれは図中でＢＳＡと記号がつけられた短い半
径方向の線として示されている。次いで体液（この場合
は血清）が縦孔中に入れられる。もしこれがリューマチ
因子（ＲＦ）抗体を含むならば、これらの坑体はＦＣＩ
（ＩＧ抗原と結合する。血清中に存在する仙の抗体は結
合しないので再び緩衝液で余剰血清を洗浄すると抗原と
結合した図中でＲＦと記号をつけたＲＦ抗体だけを残し
て結合しなかった抗体はＪべて洗い流される。次に放射
能でラベリングした抗免疫グルプリン因子を含む緩衝液
を面１につりる。放射能ｅラベリングした抗免疫グロブ
リン因子はＰＣＩ（ＩＧ抗原ど交差反応を起さないよう
前ちって選択しであるのでＲＦ抗体にのみ結合しうるた
め緩衝液で洗浄覆るとＲＦ抗体と結合しである放射能で
ラベリングした抗免疫グロブリン因子のみが残る。
次にガンマ線削数器で結合放射性抗免疫グロブリン因子
の数をｉｔ数して結合Ｒ［抗体の数が確認される。図面
では抗免疫グ【コブリン因子はヒツジ（Ｆａｂ’ ）
２ １（ｌ Ｇ抗ヒトｌ０ＧＦａｂとして示されている
。
の数をｉｔ数して結合Ｒ［抗体の数が確認される。図面
では抗免疫グ【コブリン因子はヒツジ（Ｆａｂ’ ）
２ １（ｌ Ｇ抗ヒトｌ０ＧＦａｂとして示されている
。
本発明の実施例を次の例を参照しつつ以下説明するが、
本発明はこれらにとどまるものではない。
本発明はこれらにとどまるものではない。
」１
Ａ：蟲ｊ目（旦」二［１氏；Ｆａ ａ日１１−通常のヒ
ト血漿は輸血センタから得られた。血漿は４０％塩化カ
ルシウムを（血清ｉｏｏｍ２に対し１ｍ２）使用して凝
固され、バクテリア増加を防ぐため１ｌｌｌＩｌの１０
％アジ化ナトリウムが加えられた。血清はナイロンメツ
シュにより凝固物からしぼりとられ免疫グロブリンは飽
和硫酸アンモニウムを使用して血清から３倍沈殿させら
れた。最終沈殿物は最小量の蒸溜水で再溶解されＰＢＳ
に対し透析された。溶液は次に遠心分離され上部をパパ
インにより酵素対たん白化を１ｍ（ｌの酵素：１００１
１１（ｌのたん白質にして０，０４Ｍ２メルノＪプロエ
タノール及び０．００２Ｍ Ｎａ ２ ＥＤＴ−への
存在下で３７°Ｃで３時間３０分かりて消化された。
ト血漿は輸血センタから得られた。血漿は４０％塩化カ
ルシウムを（血清ｉｏｏｍ２に対し１ｍ２）使用して凝
固され、バクテリア増加を防ぐため１ｌｌｌＩｌの１０
％アジ化ナトリウムが加えられた。血清はナイロンメツ
シュにより凝固物からしぼりとられ免疫グロブリンは飽
和硫酸アンモニウムを使用して血清から３倍沈殿させら
れた。最終沈殿物は最小量の蒸溜水で再溶解されＰＢＳ
に対し透析された。溶液は次に遠心分離され上部をパパ
インにより酵素対たん白化を１ｍ（ｌの酵素：１００１
１１（ｌのたん白質にして０，０４Ｍ２メルノＪプロエ
タノール及び０．００２Ｍ Ｎａ ２ ＥＤＴ−への
存在下で３７°Ｃで３時間３０分かりて消化された。
消化物は４℃でＧ１５０カラムにより分離された。
ＦＣ／Ｆａｂビーク（分子量５０，０００）が蓄エラレ
タ。
タ。
この蓄えられｌ〔部分はｐ＋−＋ ７．６の０．０１
Ｍリン酸塩緩衝液内へ透析され、同じ緩衝液を使用して
ワットマンＣＭ５２セルロースカラムを通過させられた
。Ｆａｂはこの）Ｊラムで遅延したがＦｃはしなかった
。このＦＣピークは０．０１ Ｍ 、 ｐ＋ＩＢのリ
ン酸塩緩衝液に透析された後ワラ１〜マンＤＥ５２カラ
ムを通過させられた。ＦＣはこの緩衝液で力ラム中に一
保持され０．０１ ＭリンＭ塩緩衝液ｐ１］８−１−０
．３Ｍ塩塩化上トリウム使用して溶離された。
Ｍリン酸塩緩衝液内へ透析され、同じ緩衝液を使用して
ワットマンＣＭ５２セルロースカラムを通過させられた
。Ｆａｂはこの）Ｊラムで遅延したがＦｃはしなかった
。このＦＣピークは０．０１ Ｍ 、 ｐ＋ＩＢのリ
ン酸塩緩衝液に透析された後ワラ１〜マンＤＥ５２カラ
ムを通過させられた。ＦＣはこの緩衝液で力ラム中に一
保持され０．０１ ＭリンＭ塩緩衝液ｐ１］８−１−０
．３Ｍ塩塩化上トリウム使用して溶離された。
溶離され１＝ １” ｃ ｗ４４乏は次いでＰＢＳに透
析され親和性カラム、つまりヒツジＩＱＧ抗ヒトＩｇＧ
Ｆａｂカラムを透過させて依然として残っている不純物
痕跡を除去した。純化したＦＣはそれから一７０℃で貯
蔵された。
析され親和性カラム、つまりヒツジＩＱＧ抗ヒトＩｇＧ
Ｆａｂカラムを透過させて依然として残っている不純物
痕跡を除去した。純化したＦＣはそれから一７０℃で貯
蔵された。
使用された緩衝液
０Ｍカラム
リンＭｍｌｌｔｉｉｌ ｐ＋−１７，６，０，０１Ｍヲ
使用材料 ０．１Ｍリン酸塩緩衝液、つまり無水Ｎａ
２ ＨＰＯａ ３．４４ｇＮａ Ｈ２ＰＯ４２
１１ｚ ＯＯ，８３（１−”ＤＥカラム リン酸塩緩衝液＋１１−１８．０． ０．０１ Ｍヲ使
用ストック用０．１Ｍリン酸塩緩衝液 ＤＩ−１を水酸化ナトリウムで８．０に調節好ましい実
施例ではＦＣは使用に先立ち集合させられる。これを行
うための好ましい方法はＰＢＳリンＭ塩緩衝液へのＦｃ
希薄溶液を数時間（例えば１晩）の間凍結乾燥すること
である。集合の程度は集合したＦｃが標準抗補体活性度
分析でモルモットの補体を固定覆る能力で評価できる。
使用材料 ０．１Ｍリン酸塩緩衝液、つまり無水Ｎａ
２ ＨＰＯａ ３．４４ｇＮａ Ｈ２ＰＯ４２
１１ｚ ＯＯ，８３（１−”ＤＥカラム リン酸塩緩衝液＋１１−１８．０． ０．０１ Ｍヲ使
用ストック用０．１Ｍリン酸塩緩衝液 ＤＩ−１を水酸化ナトリウムで８．０に調節好ましい実
施例ではＦＣは使用に先立ち集合させられる。これを行
うための好ましい方法はＰＢＳリンＭ塩緩衝液へのＦｃ
希薄溶液を数時間（例えば１晩）の間凍結乾燥すること
である。集合の程度は集合したＦｃが標準抗補体活性度
分析でモルモットの補体を固定覆る能力で評価できる。
集合ＦＣは非集合ＦＣよりも本発明の方法及び装置にお
いてかなり効果的である。
いてかなり効果的である。
Ｆｃの集合に凍結乾燥がもたらづ効果は非常に驚くべき
ものがあることに注意すべきである。凍結乾燥によって
はＦＣに重大な変化が起らないど思われる。
ものがあることに注意すべきである。凍結乾燥によって
はＦＣに重大な変化が起らないど思われる。
Ｂ ： （Ｆａｂ） ２ １（ｌ Ｇヒツジ抗ヒトＩ
ｇＧＦａｂの週’Ｊｆ 英国、バーミンガム、イミューノ ダイアグノスチツク
リ４ノーチ ラボラドリース（［ＤＲＬ＞から購入さ
れたヒツジ抗ヒ１〜Ｉ（ＩＧＦａｂは抗血清から免疫グ
ロブリンのみを沈殿させるために飽和硫酸アンモニウム
で３回処理された。沈殿物はｐＨ７，２のリン酸塩緩衝
含塩液（ＰＢＳ）中で再懸濁化され、次いで０，１Ｍ酢
酸塩緩衝液ｐＨ４内に透析された。３：１００の酵素対
／ｊ ／υ白白化ペプシンが加えられ３７℃で１８時間
消化が行われた。
ｇＧＦａｂの週’Ｊｆ 英国、バーミンガム、イミューノ ダイアグノスチツク
リ４ノーチ ラボラドリース（［ＤＲＬ＞から購入さ
れたヒツジ抗ヒ１〜Ｉ（ＩＧＦａｂは抗血清から免疫グ
ロブリンのみを沈殿させるために飽和硫酸アンモニウム
で３回処理された。沈殿物はｐＨ７，２のリン酸塩緩衝
含塩液（ＰＢＳ）中で再懸濁化され、次いで０，１Ｍ酢
酸塩緩衝液ｐＨ４内に透析された。３：１００の酵素対
／ｊ ／υ白白化ペプシンが加えられ３７℃で１８時間
消化が行われた。
消化物は次にＰＢＳに透析され遠心分離された。
その上部はレファデックス０１５０カラムを通過さセラ
レ、（Ｆａｂ′）２ヒーク（分子ｍ ｉｏｏ、ｏｏｏ）
が分離され蓄えられた。
レ、（Ｆａｂ′）２ヒーク（分子ｍ ｉｏｏ、ｏｏｏ）
が分離され蓄えられた。
調製物は親和性クロマ］−グラフィでさらに純粋化され
た、つまり蓄えられた（１”ａｂ’）２ピークはヒトＩ
ｇＧＦａｂセファローズカラムを通過さゼられた。結合
した物質は０．６２８Ｍグリシン塩酸吐２．８により溶
離されて氷上の２ Ｍ Ｔ ｒｉｓ塩酸内に東められ次
いでｐＨ７，２、０，１Ｍノ１）１３Ｓに透析されｌζ
。
た、つまり蓄えられた（１”ａｂ’）２ピークはヒトＩ
ｇＧＦａｂセファローズカラムを通過さゼられた。結合
した物質は０．６２８Ｍグリシン塩酸吐２．８により溶
離されて氷上の２ Ｍ Ｔ ｒｉｓ塩酸内に東められ次
いでｐＨ７，２、０，１Ｍノ１）１３Ｓに透析されｌζ
。
それからぞれは分取されて一７０℃に置かれ７Ｃ，１Ｎ
実に（Ｆａｂ’ ）２がＦＣと交差反応を示さない（あ
るＧ）は別の言い方ではＦａｔ＋どのみ反応を示ず）よ
うにするため、上述の如（（Ｆａｂ’ ） ２がヒ１〜
ＩｇＧｔ？ファ目−ズカラムを通過さμられた。
実に（Ｆａｂ’ ）２がＦＣと交差反応を示さない（あ
るＧ）は別の言い方ではＦａｔ＋どのみ反応を示ず）よ
うにするため、上述の如（（Ｆａｂ’ ） ２がヒ１〜
ＩｇＧｔ？ファ目−ズカラムを通過さμられた。
保持されたＦａｂを溶離するためワラ１へマンカラムを
逆の順序、つまり０Ｍ５２の前にＤ［５２を使用した点
を除けばＦＣを得るために使用されたのと同じ手段でＩ
（ＩＧＦａｂが得られた。「二ａｂの純度は略ＦＣを含
まない程度のものである。
逆の順序、つまり０Ｍ５２の前にＤ［５２を使用した点
を除けばＦＣを得るために使用されたのと同じ手段でＩ
（ＩＧＦａｂが得られた。「二ａｂの純度は略ＦＣを含
まない程度のものである。
組１１」１Ｌｏ、ＩＭ 、 ｐｌ−１４１℃調製す
るには 氷酢酸 ４．７ｍ ｆｌ 酢酸ナトリウム ２，４５（１（３Ｈ２０）蒸溜水を
加えて１２にする。
るには 氷酢酸 ４．７ｍ ｆｌ 酢酸ナトリウム ２，４５（１（３Ｈ２０）蒸溜水を
加えて１２にする。
ＴＲｌ５緩衝液 ２Ｍ、 Ｉ）Ｈ８，２１００１１１
ｅ中に ＴＲＩ Ｓ １２．１ｇ ４ Ｎ ＨＣＩ １１．４４＋ｎｅグリシン塩酸
０．６２８Ｍ、 ｌ）Ｈ２，８グリシン ２モル
濃度 ３１４ｍ２ 塩Ｈ４Ｎ ’５０ｍｅ 蒸溜水を加えて１乏にする。
ｅ中に ＴＲＩ Ｓ １２．１ｇ ４ Ｎ ＨＣＩ １１．４４＋ｎｅグリシン塩酸
０．６２８Ｍ、 ｌ）Ｈ２，８グリシン ２モル
濃度 ３１４ｍ２ 塩Ｈ４Ｎ ’５０ｍｅ 蒸溜水を加えて１乏にする。
ＰＢＳ ｐｌ−１７，２ＮａＣｌ
８．５ｇ Ｎ ａ ２ ＋−Ｉ Ｐ Ｏ４１，０７ＱＮａ Ｈ
２ＰＯａ Ｏ，３９（］蒸溜水を加
えて１２にする。
８．５ｇ Ｎ ａ ２ ＋−Ｉ Ｐ Ｏ４１，０７ＱＮａ Ｈ
２ＰＯａ Ｏ，３９（］蒸溜水を加
えて１２にする。
ヒツジ（１”ａｌｌ’＞２抗ヒ１へγ（Ｕ及びα）のラ
ベリング 試 薬 ウシ血清アルブミン（’１３ｓΔ）１０％溶液ヒツジ（
Ｆａｌ）’）２抗ヒ１−γ（たん白質）１０μ乏のＮａ
Ｉ 中のＩ （ｆ’Ｊａｌ ）１ｍＣｉｍＣミ
クロラミン１（新紅なもの） ０．０４ｇを１−ツズ緩衝液（下記参照）２５ｍｅに溶
かす。
ベリング 試 薬 ウシ血清アルブミン（’１３ｓΔ）１０％溶液ヒツジ（
Ｆａｌ）’）２抗ヒ１−γ（たん白質）１０μ乏のＮａ
Ｉ 中のＩ （ｆ’Ｊａｌ ）１ｍＣｉｍＣミ
クロラミン１（新紅なもの） ０．０４ｇを１−ツズ緩衝液（下記参照）２５ｍｅに溶
かす。
使用の前に１〜ツズ緩衝液で１：１ｏに希釈する。
２亜硫酸す１ヘリウム溶液
２亜硫酸ナトリウム０．０７５Ｑを２５ｍｅのトップ緩
衝液に溶かず。
衝液に溶かず。
緩衝液
１、 ストック用低すン酸ＪＭＩｌ衝液Ａルｌ〜リン酸
水素２すトリウム（無水物）（Ｎ ａ ２ トｌＰ
Ｏ４） １０．２ｇオル１〜リン酸２水素す１
−リウム （Ｎａｌ−１２ＰＯ４２１−１２０）
４．３６０塩化す・トリウム（Ｎａ Ｃｌ ）
８７Ｊｇ蒸溜水を加えて１１？、にする。
水素２すトリウム（無水物）（Ｎ ａ ２ トｌＰ
Ｏ４） １０．２ｇオル１〜リン酸２水素す１
−リウム （Ｎａｌ−１２ＰＯ４２１−１２０）
４．３６０塩化す・トリウム（Ｎａ Ｃｌ ）
８７Ｊｇ蒸溜水を加えて１１？、にする。
水酸化ナトリウム＋０．１Ｍリン酸塩でＩ）ｌ−１７，
２に調節する。
２に調節する。
２、「実用」低リン酸塩緩衝液
ストック用低リン酸塩緩衝液 １００ｍ１１１０％ＢＳ
Δ ｉｏｍ２１０％アジ化ブトリウム
１０ｍ２蒸溜水＋０．０１ Ｍリン酸塩を加え
て１２に１′る。
Δ ｉｏｍ２１０％アジ化ブトリウム
１０ｍ２蒸溜水＋０．０１ Ｍリン酸塩を加え
て１２に１′る。
被覆用緩衝液はＢ Ｓ Ａを何ら加えない実用緩衝液で
ある。
ある。
うｌりと之シ仁広拮−
１、た／Ｖ白質をマイクロフユージで１分間遠心分離し
上部２０μ２を反応管に入れる。
上部２０μ２を反応管に入れる。
２、 新鮮なりロラミンＴを１０μ℃加える。
３．１０μＪｌａ（三１ｍｃｉ）のＩ″′を加える。
４、 よく混合する。
５．１分間待つ。
６、１０μ乏の２亜硫酸ナトリウム溶液を加えて反応を
とめる。
とめる。
７、５０μ２の１３３ Ａを加える。
８、 ファーマシアＩ） Ｄ −１０カラム（１ファデ
クスＧ−２５Ｍでプレパックされており約１０ｍｅのト
ツズ緩価液で前もって洗浄しである）上に注意して注ぎ
、トップ溶液で洗い流づ。
クスＧ−２５Ｍでプレパックされており約１０ｍｅのト
ツズ緩価液で前もって洗浄しである）上に注意して注ぎ
、トップ溶液で洗い流づ。
９、５０ｇ℃のＢ Ｓ△を既に入れである試験管内に１
６Ｘ１ｍｅのフラクションを溶離する。
６Ｘ１ｍｅのフラクションを溶離する。
１０、 最高温の２本の試験管（人体４番目及び５番
目の試験管）を蓄える。
目の試験管）を蓄える。
１１、 実用低リン酸塩緩衝液で約２０ｍ ｆｌに希
釈し１００μ２のＢＳＡを加える。
釈し１００μ２のＢＳＡを加える。
１２、 鉛容器に入れて４℃で貯蔵りる。
得られたＦｃ１ｏＧ抗原は低リン酸塩緩衝液で濃度が１
５μＣＪ ／ｍ ＥになるＪ：うに希釈された。
５μＣＪ ／ｍ ＥになるＪ：うに希釈された。
２、 リンプロトレイの１対の吸着性縦孔は縦孔当り５
０ｇ℃のこの希釈抗原で室温で１時間か（）て被覆され
た。
０ｇ℃のこの希釈抗原で室温で１時間か（）て被覆され
た。
３、 被覆を乾燥するため抗原が吸引された。
４、 これらの２つの縦孔及び抗原で処理しなかつた別
の２つの同等な吸着性リングロ縦孔をウシ血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）を含む低リン酸塩緩衝液で３回洗浄した。
の２つの同等な吸着性リングロ縦孔をウシ血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）を含む低リン酸塩緩衝液で３回洗浄した。
縦孔を備えるプレートは自然乾燥させられた。
５、 実用緩衝液（ＢＳＡを含む低リン酸塩緩衝液）で
体積にしてｌ：１６０に希釈したＩｏＧリューマチ因子
を試験する体液（この場合は血清）５０ｇ℃は１対の縦
孔の両方に入れられた。
体積にしてｌ：１６０に希釈したＩｏＧリューマチ因子
を試験する体液（この場合は血清）５０ｇ℃は１対の縦
孔の両方に入れられた。
６、 縦孔を備えるプレー１へは約４℃で約１８時間放
置された。
置された。
７、 不結合材料（つまり余剰血清及びＲＦ抗体以外の
抗体）は吸引され縦孔はツイーン２０（湿謀剤）を加え
た実用緩衝液（つまりＢＳＡを含む低リン酸塩緩衝液）
で３回再洗浄された。
抗体）は吸引され縦孔はツイーン２０（湿謀剤）を加え
た実用緩衝液（つまりＢＳＡを含む低リン酸塩緩衝液）
で３回再洗浄された。
８．４つの縦孔の各々は前もって調製されているツイー
ンを加えられ略６０，０００ｃ、ｐ９ｍの放射性ヨウ素
１″′で放射性ラベリングされた上記実用緩衝液で希釈
された試験抗免疫グロブリン因子（ヒツジ（Ｆａｂ’
） ２ ＩＱ Ｇ抗ヒｌ−１＜］ ＧＦａｂ）Ｆ処理さ
れた。縦孔の放置時間は約１時間であった。不結合放射
性抗免疫グロブリン因子は吸引され実用緩衝液で３回再
洗浄されｋ。
ンを加えられ略６０，０００ｃ、ｐ９ｍの放射性ヨウ素
１″′で放射性ラベリングされた上記実用緩衝液で希釈
された試験抗免疫グロブリン因子（ヒツジ（Ｆａｂ’
） ２ ＩＱ Ｇ抗ヒｌ−１＜］ ＧＦａｂ）Ｆ処理さ
れた。縦孔の放置時間は約１時間であった。不結合放射
性抗免疫グロブリン因子は吸引され実用緩衝液で３回再
洗浄されｋ。
９、 プレートは室温で自然乾燥された後裁断され、ガ
ンマ線Ｍ数器で裁断片からの敢用線を計数されＩご 。
ンマ線Ｍ数器で裁断片からの敢用線を計数されＩご 。
例２及び３
ＩｇＡ又はＩ（ＩＭリューマヂ因子の存在を試験づるた
め、例１で使用したのと正確に類似する技術が使用され
た。相違点は抗免疫グロブリン因子としてヒツジ（Ｆａ
ｔ）’ ）２１＋］ Ｇ抗ヒｌ−１（ｌ Ａ又はＩｇＭ
がそれぞれ使用されたことと、抗免疫グロブリン因子の
純粋化がそれぞれＩＣＩＡ及び［Ｍを使用して行われた
ことであるのみであった。
め、例１で使用したのと正確に類似する技術が使用され
た。相違点は抗免疫グロブリン因子としてヒツジ（Ｆａ
ｔ）’ ）２１＋］ Ｇ抗ヒｌ−１（ｌ Ａ又はＩｇＭ
がそれぞれ使用されたことと、抗免疫グロブリン因子の
純粋化がそれぞれＩＣＩＡ及び［Ｍを使用して行われた
ことであるのみであった。
１先
直径約３ミクロンのボリスヂレン粒子からラテックス懸
濁液を調製する。既知の体積の、例えば８００μ！のこ
のラテックス粒子懸濁液は沈殿して−いるかもしれない
ラテックス粒子を再混合Ｊるため超音波振動させられる
。
濁液を調製する。既知の体積の、例えば８００μ！のこ
のラテックス粒子懸濁液は沈殿して−いるかもしれない
ラテックス粒子を再混合Ｊるため超音波振動させられる
。
次にこれはｐ）ｌ ８，２の０．５２ Ｍグリシン含塩
液で２回洗浄される。次いでラテックス粒子ＩＩ濁液は
遠心分離され２０ｍｆｌのグリシン含塩液に戻され、そ
して抗原Ｆｃ１ＧＧ（例１と同様に純粋化したもの）が
１０１１１ Ｑ ／Ｉ ｅの濃度になるように加えられ
る。懸濁液は室温で約３０分間混合され、次いでラテッ
クス粒子はグリシン含塩液又は同様な緩衝液で２回洗浄
される。ラテックス粒子は今度はヒト抗原ＰＣＩ（ＩＧ
が結合しなかったラテックス粒子の表面をブロックする
０、１％のウシ血清アルブミン（［３３Δ）を含むＥＩ
Ｈｇ、２の２０ｍ８゜の０，２７ Ｍグリシン含塩液に
再び戻される。溶液中の被覆ラテックス粒子は例えばア
ジ化ナトリウム等の抗菌物質が加えられるならば貯蔵可
能である。
液で２回洗浄される。次いでラテックス粒子ＩＩ濁液は
遠心分離され２０ｍｆｌのグリシン含塩液に戻され、そ
して抗原Ｆｃ１ＧＧ（例１と同様に純粋化したもの）が
１０１１１ Ｑ ／Ｉ ｅの濃度になるように加えられ
る。懸濁液は室温で約３０分間混合され、次いでラテッ
クス粒子はグリシン含塩液又は同様な緩衝液で２回洗浄
される。ラテックス粒子は今度はヒト抗原ＰＣＩ（ＩＧ
が結合しなかったラテックス粒子の表面をブロックする
０、１％のウシ血清アルブミン（［３３Δ）を含むＥＩ
Ｈｇ、２の２０ｍ８゜の０，２７ Ｍグリシン含塩液に
再び戻される。溶液中の被覆ラテックス粒子は例えばア
ジ化ナトリウム等の抗菌物質が加えられるならば貯蔵可
能である。
試験を行う体液（この場合血清）は約１５分間被覆ラテ
ックス粒子と反応させられる。その後、ラテックス粒子
は緩衝液、つまり０．１％［３８八を含むｐＨ８，２の
０．２７ Ｍグリシン含塩液で２回洗浄される。これに
よりヒト抗原ＦＣＩｇＣにＪ、り被覆された粒子に結合
しなかった試験血清はどれも洗い流される。ラテックス
粒子の体積は初めの体積に近づく。
ックス粒子と反応させられる。その後、ラテックス粒子
は緩衝液、つまり０．１％［３８八を含むｐＨ８，２の
０．２７ Ｍグリシン含塩液で２回洗浄される。これに
よりヒト抗原ＦＣＩｇＣにＪ、り被覆された粒子に結合
しなかった試験血清はどれも洗い流される。ラテックス
粒子の体積は初めの体積に近づく。
ヒト以外の動物のＩ（ＩＧ抗体はヒト１１７Ｇをヒツジ
に接種して調製される。ヒツジ（ｒａｔ］’）２１（Ｉ
Ｇ抗ヒトＩｏＦａｂの収集ど純粋化（例１と同様）の後
、ある量の（Ｆａｂ’ ＞２ ｒｇＧヒツジ抗ヒ１〜
ＩｇＧＦａｂがラテックスに加えられ室温で約１時間放
置された後にラテックスの凝集の程度を観察す゛る。こ
れは視覚ににつて行りつ−Ｃもよいし、凝集粒子の大き
さを測定覆るクールター計数器の如き粒子泪数器を使用
してもＪ、い。比濁分析等の凝集の程度を決定する伯の
方法を使用してもよい。
に接種して調製される。ヒツジ（ｒａｔ］’）２１（Ｉ
Ｇ抗ヒトＩｏＦａｂの収集ど純粋化（例１と同様）の後
、ある量の（Ｆａｂ’ ＞２ ｒｇＧヒツジ抗ヒ１〜
ＩｇＧＦａｂがラテックスに加えられ室温で約１時間放
置された後にラテックスの凝集の程度を観察す゛る。こ
れは視覚ににつて行りつ−Ｃもよいし、凝集粒子の大き
さを測定覆るクールター計数器の如き粒子泪数器を使用
してもＪ、い。比濁分析等の凝集の程度を決定する伯の
方法を使用してもよい。
抗免疫グロブリン因子は試験血清のＩ（ＩＧリューマチ
囚了が結合した被覆粒子に結合するだけだから隣接覆る
粒子は互いに凝集する。これは加えられた抗体が凝集剤
として働くからである。よって、凝集の程度は存在する
Ｉ（ＩＧリコーマヂ因子に比例づる。
囚了が結合した被覆粒子に結合するだけだから隣接覆る
粒子は互いに凝集する。これは加えられた抗体が凝集剤
として働くからである。よって、凝集の程度は存在する
Ｉ（ＩＧリコーマヂ因子に比例づる。
凝集の程度を決定覆る代わりに、前述の如くラテックス
粒子又は面がＴｏＭリューマチ因子自由試験血清と反応
した後、ある量のヒツジ抗体をヒト抗原ＦｃＩ（ＩＧに
加える前にタツギングしてしよい。タツギングは放射性
のものでもよいし抗体を加える前に酵素と結合させても
よい。前省においてはヒト抗原Ｆｃ１ｇＧ被覆面へ結合
した試験血清への抗体の結合の程度はガイガー又は類似
の計数器により決定される。後者においてはこの結合の
程度はまず緩ｗＩＪ液で洗浄し、次いで、着色剤を加え
た復色の変化を観察することで決定される。
粒子又は面がＴｏＭリューマチ因子自由試験血清と反応
した後、ある量のヒツジ抗体をヒト抗原ＦｃＩ（ＩＧに
加える前にタツギングしてしよい。タツギングは放射性
のものでもよいし抗体を加える前に酵素と結合させても
よい。前省においてはヒト抗原Ｆｃ１ｇＧ被覆面へ結合
した試験血清への抗体の結合の程度はガイガー又は類似
の計数器により決定される。後者においてはこの結合の
程度はまず緩ｗＩＪ液で洗浄し、次いで、着色剤を加え
た復色の変化を観察することで決定される。
放射能又は色の変化の程度が試験血清中のＩＯＧリュー
マチ因子の存在を示す。
マチ因子の存在を示す。
結合抗体を測定した後では結果を評価するだめの整理を
する。例えば上記例１でＬよｔ１数結果は試験血清を入
れた２つの縦孔からの計数値の平均をとり、これから基
準値としてＢＳＡのみを入れた２つの縦孔からの翳１数
値の平均を引き、そしてこれと例えば正常な量のＲＦ抗
体を含む血液を有する４人の正常人から得られた血清を
使用して得た同様の平均値の差と比較して指数を決定し
て評価する。この指数は次の如く表される。
する。例えば上記例１でＬよｔ１数結果は試験血清を入
れた２つの縦孔からの計数値の平均をとり、これから基
準値としてＢＳＡのみを入れた２つの縦孔からの翳１数
値の平均を引き、そしてこれと例えば正常な量のＲＦ抗
体を含む血液を有する４人の正常人から得られた血清を
使用して得た同様の平均値の差と比較して指数を決定し
て評価する。この指数は次の如く表される。
リューマヂ因子指数−（試験血清ｃ、ｐ、ｍ、 −Ｂ
ＳΔ基準値ｃ、ｐ、ｍ、） ／ （平 均（正常ｃ、ｐ、ｍ、−Ｂ Ｓ△ 基準１直ｃ、ｐ、ｍ ） ） 正常のりコーーマヂ因子指数は正常の血清の平均から標
準偏差の３イ８以内にあるようなものどじで定義される
。
ＳΔ基準値ｃ、ｐ、ｍ、） ／ （平 均（正常ｃ、ｐ、ｍ、−Ｂ Ｓ△ 基準１直ｃ、ｐ、ｍ ） ） 正常のりコーーマヂ因子指数は正常の血清の平均から標
準偏差の３イ８以内にあるようなものどじで定義される
。
各多数孔プレー１〜は通常９６個の縦孔を有するが９６
個以上又は以下の孔４有するプレー１〜を使用してもよ
い。各試験には２対の縦孔が必要であるから９６個の縦
孔を有づるブレー１へを使用覆るなら各分析で２４の異
なる血清を試験しうる。各分析でＲＦ指数の計算を容易
にづるために１つの正常血清が試験される。各分析では
分析の有効性を確めるため典型的なリューマチ性関節炎
の患者から得ちれ／ｊ血清試料につき試験が行われる。
個以上又は以下の孔４有するプレー１〜を使用してもよ
い。各試験には２対の縦孔が必要であるから９６個の縦
孔を有づるブレー１へを使用覆るなら各分析で２４の異
なる血清を試験しうる。各分析でＲＦ指数の計算を容易
にづるために１つの正常血清が試験される。各分析では
分析の有効性を確めるため典型的なリューマチ性関節炎
の患者から得ちれ／ｊ血清試料につき試験が行われる。
この方法による結果の評価には分析間の変動がないので
異なる機会に１ｑられた結果を比較刀ることができる。
異なる機会に１ｑられた結果を比較刀ることができる。
上述の指数化により実験データから意味のある結果を非
常に正確に導くことができ、特にリコーマヂ因子レベル
の増加の非常に信頼しつる検出が可能である。
常に正確に導くことができ、特にリコーマヂ因子レベル
の増加の非常に信頼しつる検出が可能である。
乳ｉ
例１の手続きが二重に検査される相当数の血清について
行なわれた。病院から供給された血清には様々な臨床的
診断がされていたが臨床的診断は診断試験を行う作業者
には試験が完了するまで知らされなかつｌＣ０ 結 果 結果は絶対量によるＲ「の測定値よりも」上述の指数と
して示された。（＝ｌ属の図面に第２図に示したＲＦグ
ラフには標準偏差の３倍での区切を示ずＲＦ指数約１．
４で水平線が引かれている。正常な結果は全て標準偏差
の３倍以下のものとして定義さ れ ）こ 。
行なわれた。病院から供給された血清には様々な臨床的
診断がされていたが臨床的診断は診断試験を行う作業者
には試験が完了するまで知らされなかつｌＣ０ 結 果 結果は絶対量によるＲ「の測定値よりも」上述の指数と
して示された。（＝ｌ属の図面に第２図に示したＲＦグ
ラフには標準偏差の３倍での区切を示ずＲＦ指数約１．
４で水平線が引かれている。正常な結果は全て標準偏差
の３倍以下のものとして定義さ れ ）こ 。
活動的な腐食性リューマチ性関節炎の患者から得られた
結果の１００％は標準偏差の３倍の区切より上にあり仙
の条ｆｌはいずれも積極的な効果をおよぼさなかった。
結果の１００％は標準偏差の３倍の区切より上にあり仙
の条ｆｌはいずれも積極的な効果をおよぼさなかった。
換言すれば高水準のＩ（ＩＧリユーマヂ囚因子つまり通
常個体群の９９．３８％よりも高い値）は活動的な腐食
性リューマチ性関節炎店者の血清だ（）に限られていた
。
常個体群の９９．３８％よりも高い値）は活動的な腐食
性リューマチ性関節炎店者の血清だ（）に限られていた
。
しばしば起る臨床上の問題であるリューマチ性関節炎と
Ｓ ｌ−Ｅとの区別はこの試験にＪ、り容易に行われた
。リューマチ性関節炎に乾疵をイノ１発している患者と
真に乾瘤性の関節炎患者の判別にも成功した。
Ｓ ｌ−Ｅとの区別はこの試験にＪ、り容易に行われた
。リューマチ性関節炎に乾疵をイノ１発している患者と
真に乾瘤性の関節炎患者の判別にも成功した。
試験の結果からりューマヂ性関節炎の早期診断つまり発
病１か列以内の診断が可能であることが示されｌ〔。こ
れらの早期症例を臨床的に追跡し−にところ分析ににる
診断が立証された。
病１か列以内の診断が可能であることが示されｌ〔。こ
れらの早期症例を臨床的に追跡し−にところ分析ににる
診断が立証された。
活動的な関節炎の条件についての小児からの血清試験の
研究も完結した。若年リューマチ性関節炎でＩｇＧリュ
ーマチ因子以外の条件は見いだされなかった。
研究も完結した。若年リューマチ性関節炎でＩｇＧリュ
ーマチ因子以外の条件は見いだされなかった。
本発明による装置は好ましくは次のものを含む。
プレートの縦孔に既に被覆をした、又は被覆をするリン
プロプレートＦｃ 緩衝液、 ０．１Ｍリン酸塩溶液、ツイーン及びＢＳ
Ａ放射性ラベリングされた抗体 対照用陽性血清 ４例の正常血清 説明書 好ましい１−レイが付属図面の第３図に示しである。第
３図でＮ１〜Ｎ４は正常な対照標準を表し、Ｅは高水準
対照例を表し、丁１〜Ｔ１９は試験１〜１つを表１゜ １史 第３図に示した１〜レイを使用し調製後４週間の装置で
例１の方法を行ったところ次の結果が得られ１こ。
プロプレートＦｃ 緩衝液、 ０．１Ｍリン酸塩溶液、ツイーン及びＢＳ
Ａ放射性ラベリングされた抗体 対照用陽性血清 ４例の正常血清 説明書 好ましい１−レイが付属図面の第３図に示しである。第
３図でＮ１〜Ｎ４は正常な対照標準を表し、Ｅは高水準
対照例を表し、丁１〜Ｔ１９は試験１〜１つを表１゜ １史 第３図に示した１〜レイを使用し調製後４週間の装置で
例１の方法を行ったところ次の結果が得られ１こ。
結果の判定は次のように行なわれｌζ。
Ｒ［指数 判 定
注意：試験試料のＲＦ指数の判定は、それが同一数が有
効である。
効である。
分析の再現性は次の通りであった。
第１図はプラスチックス製多数孔トレイ中の縦孔で画成
された土台面を示Ｊ図、第２図はりューマヂ因子の指数
を示づグラフ、第３図は本発明の一実施例に使用される
トレイを承り図である。 １・・・土台面、ＢＳＡ・・・ウシ血清アルブミンを含
む緩衝液被覆、ＲＦ・・・リューマブ因子抗体。 特許出願人 アゲロブｌ］デュイ ニス １．−図面の
浄書（内容に変更なし） １３［１１（４６１（２ａｌ １４１ＦＩＧ
、２゜ ＦＩＧ、 ３ 。 手続補正書 昭和５８年７月８［１ 特許庁長官 若 杉 和 夫 殿 １、事件の表示 昭和５８年 特許願 第９９２８８号 ２、発明の名称 抗原検出方法及び装置 ３、補正をする者 特許出願人 住 所 スイス国 １２１１ ジュネーブ ２５ シー
ピー ２４０番地 名 称 アグロプロデュイ ニス ニー代表者 アール
エム キルビントン （国籍 スイス国） ４、代理人 住 所 〒１０２ 東京都千代田区麹町５丁目７番地
５、補正命令の日イｑ ６、補正の対象 図面。 ７、補正の内容 図面（浄書）を別紙の通り補完力る。
された土台面を示Ｊ図、第２図はりューマヂ因子の指数
を示づグラフ、第３図は本発明の一実施例に使用される
トレイを承り図である。 １・・・土台面、ＢＳＡ・・・ウシ血清アルブミンを含
む緩衝液被覆、ＲＦ・・・リューマブ因子抗体。 特許出願人 アゲロブｌ］デュイ ニス １．−図面の
浄書（内容に変更なし） １３［１１（４６１（２ａｌ １４１ＦＩＧ
、２゜ ＦＩＧ、 ３ 。 手続補正書 昭和５８年７月８［１ 特許庁長官 若 杉 和 夫 殿 １、事件の表示 昭和５８年 特許願 第９９２８８号 ２、発明の名称 抗原検出方法及び装置 ３、補正をする者 特許出願人 住 所 スイス国 １２１１ ジュネーブ ２５ シー
ピー ２４０番地 名 称 アグロプロデュイ ニス ニー代表者 アール
エム キルビントン （国籍 スイス国） ４、代理人 住 所 〒１０２ 東京都千代田区麹町５丁目７番地
５、補正命令の日イｑ ６、補正の対象 図面。 ７、補正の内容 図面（浄書）を別紙の通り補完力る。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）略未処理のヒ１〜体液からりューマヂ性関節炎の
病因部に関係づる抗原の検出を生体外で行う方法であっ
て、 ａ）抗原を純粋な形で獲得し、 ｂ）抗原と交差反応を起さない容易に検出しうる抗免疫
グロブリン因子を獲得し、 Ｃ）体液中に存在する抗原に対りる抗体が抗原と複合覆
るよう抗原を体液で処即し、 ｄ）処理しｌｃ抗原を容易に検出しうる抗免疫グロブリ
ン因子で処理する 段階からなり、抗免疫グロブリン因子が複合抗体のみに
結合するために結合抗免疫グロブリン因子の存在及び複
合抗体の存在を検出覆る方法。 （２抗原はヒト抗免疫グロブリンのＦｑＶｆｉ片からな
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 （３）ＦＣが集合させられていることを特徴とする特許
請求の範囲第２項記載の方法。 （４）集合が凍結乾燥によって行われることを特徴とす
る特許請求の範囲第３項記載の方法。 （５） 該容易に検出しろる抗免疫グロブリン因子は
ヒト以外の動物（Ｆａｂ’ ＞ ２ Ｉ（ｌ Ｇ抗
ヒ１〜［ＧＦａｂ、１０ Ａ、［ｏＤ、Ｉ’ｌｌ Ｍ及
び［（ＩＥからなる群から選択されることを特徴とする
特許請求の範囲第１項記載の方法。 （６） 抗免疫グロブリン因子はヒツジ（Ｆａｂ’）
。 １（ｌ Ｇ、抗ヒト＋（］ＧＦａｂ及びＩ（ＩＡからな
る群から選択されることを特徴とする特許請求の範囲第
５項記載の方法。 の 選択された抗原と交差反応を示さない抗免疫グロブ
リンを製造する準備段階で抗免疫グロブリンは該抗原に
対し働かされることを特徴とする特許請求の範囲第１項
記載の方法。 （８）選択された抗免疫グロブリン因子と交差反応を示
さない抗原を製造する準備段階で抗原は該抗免疫グロブ
リン因子に対し働かされることを特徴とする特許請求の
範囲第１項記載の方法。 （９）該処理段階の各々の後で非特異的結合を減少せし
める薬剤を使用り−ることを特徴とする特許請求の範囲
第１項記載の方法。 〈１０） 土台面に抗原を吸着さけてｔｊなうことを
特徴とする特許請求の範囲第１ ｓＨ記載の方法。 （１１） 該土台面は吸着性放射線照用プラスチック
ス面からなることを特徴とする特許請求の範囲第１０項
記載の方法。 （１２） Δを試験した体液中の結合抗体の １００
万あたりの計数値、Ｂを抗原で処理しない対照標準中の
結合抗体の１００万あたりのｉｔ ｖｌＩＵ 、 Ｃを
該抗原の量が異常でないことが知られている体液中の結
合抗体の１００万あたりの剖数値として反応の指数が 指数−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−３＞ でバ１算されることを特徴とする特許請求の範囲第１項
記載の方法。 （１３） 略未処理のヒト体液からリューマチ性関節
炎の病原部に関係するＦｃ抗原の検出を生体外で行う方
法であって、 ａ）抗原と交差反応を示さない容易に検出しうる抗免疫
グロブリン因子を獲得し、 ｂ）抗免疫グロブリン因子と交差反応を示さない集合Ｆ
ｃ抗原を獲得し、 Ｃ）抗原を吸着性プラスチックス面に固定させ、ｄ）抗
原を体液で処理して体液中に存在する抗原に対リ−る抗
体が抗原と複合するようにし、ｅ）不結合抗体を面から
洗い流し、 ｆ）処理した抗原を容易に検出しうる抗免疫グロブリン
因子で処理して抗免疫グロブリン因子が複合抗体にのみ
結合することで、結合抗免疫グロブリン因子の存在及び
複合抗体の存在が検出されるようにする 段階からなる検出方法。 （１４） プラスチックス面はイノディエイト（１ｎ
ｎｏｄｅａｔｅ ）されていることを特徴とする特許請
求の範囲第１３項記載の方法。 （１５） 略未処理のヒト体液からリューマチ関節炎
の病原部に関係する抗原の体外での検出法を実施するだ
めの、該抗原の試料及び容易に検出しうる抗免疫グロブ
リン因子を吸着させる土台面からなる装置。 （１６） 土台面は吸着性放射線照射プラステックス
製多数孔トレイのものであることを特徴とする特許請求
の範囲第１５項記載の装置。 （１１） 土台面はラテックス懸濁液の表面であるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１５項記載の方法。 （１８） 略未処理のヒト体液からりューマヂ性関節
炎の病原部に関連する抗原の体外での検出法を実施覆る
ための、吸着性プラスチックス面と、検出づべき抗原と
交差反応を示さない放射性ラヘリングされた抗免疫グロ
ブリン因子と、抗免疫グロブリン因子と交差反応を示さ
ず該プラスチックス面に吸着される検出すべき抗原の試
料と、検出すべき抗原を含むことが知られている対照標
準体液と、検出ターベき抗原を含むことが知られていな
い１又は複数の体液試料とからなる装置。 （１９） プラスチックス面は放Ｉ７Ｉ線照射塩化／
ポリビニルであることを特徴とする特Ｊ［請求の範囲第
１８項記載の装置。 （２０） 抗原はヒトＩｏＧのＦｃ断片であることを
特徴とする特許請求の範囲第１８項記載の装置。 （２１） 該Ｆｃは集合されていることを特徴とする
特許請求の範囲第１９項記載の装置。 （２２） 説明書を含むことを特徴とする特Ｗ［請求
の範囲第１８項記載の装置。 （２３） 非特異的結合剤はウシ血清アルブミンのリ
ン酸塩含有溶液からなることを特徴とする特許請求の範
囲第１８項記載の装置。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8216155 | 1982-06-03 | ||
| GB8216155 | 1982-06-03 | ||
| GB8221458 | 1982-07-24 | ||
| GB8300293 | 1983-01-06 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS593358A true JPS593358A (ja) | 1984-01-10 |
| JPH0547781B2 JPH0547781B2 (ja) | 1993-07-19 |
Family
ID=10530817
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9928883A Granted JPS593358A (ja) | 1982-06-03 | 1983-06-03 | 抗原検出方法及び装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS593358A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60260857A (ja) * | 1984-06-08 | 1985-12-24 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 固相免疫測定法用成形品 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2001171A (en) * | 1977-07-15 | 1979-01-24 | Behringwerke Ag | Carrier bound immunoglobulin fission product and its use use in immumologic analyses |
| JPS5530692A (en) * | 1978-08-17 | 1980-03-04 | Behringwerke Ag | Method of immunological measuring |
-
1983
- 1983-06-03 JP JP9928883A patent/JPS593358A/ja active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2001171A (en) * | 1977-07-15 | 1979-01-24 | Behringwerke Ag | Carrier bound immunoglobulin fission product and its use use in immumologic analyses |
| JPS5530692A (en) * | 1978-08-17 | 1980-03-04 | Behringwerke Ag | Method of immunological measuring |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60260857A (ja) * | 1984-06-08 | 1985-12-24 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 固相免疫測定法用成形品 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0547781B2 (ja) | 1993-07-19 |
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