JPS5929068B2 - α−Ｌ−アミノ酸アニリド化合物 - Google Patents
α−Ｌ−アミノ酸アニリド化合物Info
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- JPS5929068B2 JPS5929068B2 JP51063784A JP6378476A JPS5929068B2 JP S5929068 B2 JPS5929068 B2 JP S5929068B2 JP 51063784 A JP51063784 A JP 51063784A JP 6378476 A JP6378476 A JP 6378476A JP S5929068 B2 JPS5929068 B2 JP S5929068B2
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- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規なα−Ｌ−アミノ酸アニリド化合物に関し
、更に詳しくは一般式 ＣＨ２（Ｉ） Ｈ２Ｎ−ＣＨ−ＣＯＮＨ□Ｒ （式中、Ｘはイソプロピル基またはベンジルチオ基を示
し、Ｒは水酸基、メトキシ基またはジメチルアミノ基を
示す。
、更に詳しくは一般式 ＣＨ２（Ｉ） Ｈ２Ｎ−ＣＨ−ＣＯＮＨ□Ｒ （式中、Ｘはイソプロピル基またはベンジルチオ基を示
し、Ｒは水酸基、メトキシ基またはジメチルアミノ基を
示す。
但し、Ｘがイソプロピル基で、Ｒがジメチルアミノ基の
場合を除く。）を有するＬ−ロイシン誘導体およびＬ−
システイン誘導体およびその酸付加塩に関する。本発明
に係る前記一般式（Ｉ）を有する化合物はロイシンアミ
ノペプチダーゼまたはシスチンアミノペプチダーゼ（オ
キシトンアーゼ）の優れた基質として使用される。
場合を除く。）を有するＬ−ロイシン誘導体およびＬ−
システイン誘導体およびその酸付加塩に関する。本発明
に係る前記一般式（Ｉ）を有する化合物はロイシンアミ
ノペプチダーゼまたはシスチンアミノペプチダーゼ（オ
キシトンアーゼ）の優れた基質として使用される。
これらの酵素は、ある種の肝疾患或いはある種の妊娠中
の異状において血液中に増大が認められ・る酵素で、適
当な酵素基質を用いて血液中の酵素活性を測定すること
により、臨床上有意義な診断・ に対する知見を得るこ
とができる。
の異状において血液中に増大が認められ・る酵素で、適
当な酵素基質を用いて血液中の酵素活性を測定すること
により、臨床上有意義な診断・ に対する知見を得るこ
とができる。
従来、この目的のための基質としてＬ−ロイシン パラ
−ニトロアニリド或いは５−ベンジルーＬ−システイン
パラ−ニトロアニリドが夫々使用されていた。
−ニトロアニリド或いは５−ベンジルーＬ−システイン
パラ−ニトロアニリドが夫々使用されていた。
しかしながら、これらの化合物はフ 酵素反応を行なう
ための緩衝液に極めて難容であり、安定した測定値を得
るための濃度に溶解させるためには界面活性剤を加える
などの特別な操作を必要とした。本発明者等は溶解性の
よい安定な測定値の得ら５ れる化合物について種々研
究を重ねた結果、前記一般式（Ｉ）を有する化合物が優
れた基質であることを見い出した。
ための緩衝液に極めて難容であり、安定した測定値を得
るための濃度に溶解させるためには界面活性剤を加える
などの特別な操作を必要とした。本発明者等は溶解性の
よい安定な測定値の得ら５ れる化合物について種々研
究を重ねた結果、前記一般式（Ｉ）を有する化合物が優
れた基質であることを見い出した。
フーー
本発明に係る前記一般式（１）を有する化合物は常法に
よつて製造することができるが、一例をあげると次の通
りである。
よつて製造することができるが、一例をあげると次の通
りである。
例えばアミノ基を保護された一般式（式中、Ｘは前述し
たものと同意義を有する。
たものと同意義を有する。
）を有するアミノ酸を活性化剤の存在下でパラ置換アニ
リンと反応させるか、前記一般式（）を有するアミノ酸
のカルボキシル基における反応性誘導体をパラ置換アニ
リンと反応させ次いで反応生成物よりアミノ基の保護基
を除去させることによつて得ることができる。活性化剤
或いは反応性誘導体としては通常のペプチド合成の際に
使用しうるものを特に限定なく使用することができる。
例えばシンクロヘキシルカルボジイミド、カルボニルジ
イミダゾール等の活性化剤、混合酸無水物、活性エステ
ル等の反応性誘導体があげられる。アミノ基の保護基と
しては後に緩和な条件で除去しうる基で通常のペプチド
合成に使用しうる基例えば臭化水素、接触還元で除去し
うるベンジルオキシカルボニル基、ヒドラジンで除去し
うるフタリル基、弱い酸性条件下で除去しうるＴｅｒｔ
−プトキシカルボニル基、ホルミル基、弱い塩基性条件
下で除去しうるトリフルオルアセチル基等があげられる
。保護基を除去された遊離のアミノ酸アニリドは所望に
よつて常法によつて種々の鉱酸、有機酸による酸付加塩
に変換することができる。血液中の酵素活性は、適当な
緩衝液中で酵素と基質とを接触させ、酵素反応によつて
遊離したパラ置換アニリンを定量することによつて測定
される。次に実施例および試験例をあげて本発明を更に
具体的に説明するが、本発明はこれによつて限定される
ものではない。
リンと反応させるか、前記一般式（）を有するアミノ酸
のカルボキシル基における反応性誘導体をパラ置換アニ
リンと反応させ次いで反応生成物よりアミノ基の保護基
を除去させることによつて得ることができる。活性化剤
或いは反応性誘導体としては通常のペプチド合成の際に
使用しうるものを特に限定なく使用することができる。
例えばシンクロヘキシルカルボジイミド、カルボニルジ
イミダゾール等の活性化剤、混合酸無水物、活性エステ
ル等の反応性誘導体があげられる。アミノ基の保護基と
しては後に緩和な条件で除去しうる基で通常のペプチド
合成に使用しうる基例えば臭化水素、接触還元で除去し
うるベンジルオキシカルボニル基、ヒドラジンで除去し
うるフタリル基、弱い酸性条件下で除去しうるＴｅｒｔ
−プトキシカルボニル基、ホルミル基、弱い塩基性条件
下で除去しうるトリフルオルアセチル基等があげられる
。保護基を除去された遊離のアミノ酸アニリドは所望に
よつて常法によつて種々の鉱酸、有機酸による酸付加塩
に変換することができる。血液中の酵素活性は、適当な
緩衝液中で酵素と基質とを接触させ、酵素反応によつて
遊離したパラ置換アニリンを定量することによつて測定
される。次に実施例および試験例をあげて本発明を更に
具体的に説明するが、本発明はこれによつて限定される
ものではない。
実施例 １
Ｌ−ロイシン パラ−ヒドロキシアニリドＡ．Ｎ−ベン
ジルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシン パラ−ヒドロキ
シアニリドビス一（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ
ロイシン）・ジピペリジン塩７．１７に１規定硫酸６０
ｍ１および塩化メチレン１００ｍ１を加え、室温で１時
間攪拌する。
ジルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシン パラ−ヒドロキ
シアニリドビス一（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ
ロイシン）・ジピペリジン塩７．１７に１規定硫酸６０
ｍ１および塩化メチレン１００ｍ１を加え、室温で１時
間攪拌する。
塩化メチレン層を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た後、減圧濃縮すると無色油状のＮ−ベンジルオキシカ
ルボニル−Ｌ−ロイシン５，８８ｙが得られる。これを
テトラヒドロフラン１２０ｍ１に溶かし、ｐ−アミノフ
エノール２．３ｙを加えて氷冷する。シンクロヘキシル
カルボジイミド４．５７をテトラヒドロフラン１０Ｗ１
１に溶かした冷溶液を加え、１時間攪拌した後室温で一
夜放置する。析出せるジシクロヘキシルウり？沢去し、
▲液を減圧下で濃縮する。残渣を酢酸エチル１００ｍ１
に溶かし、１規定塩酸、水および５０％炭酸ナトリウム
水溶液で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧濃
縮する。シロツプ状の残渣をエチルエーテル３０ｍ１に
溶かし、１日放置すると無色の結晶としてこの工程の目
的化合物５．４６７が得られる。融点９４〜９６゜ｃ０
元素分析値 Ｃ２ＯＨ２４Ｏ４Ｎ２ 計算値 Ｃ、６７．４０；Ｈ、６．７９；Ｎｌ７．８６ 実測値 Ｃｌ６７．３ｌ；Ｈ、７．０５；Ｎｌ７．５５ ｂ．Ｌ−ロイシン パラ−ヒドロキシアニリドＮ−ベン
ジルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシン パラ−ヒドロキ
シアニリド３．５６７をメタノール７０ｍ１に溶かし、
これに１規定塩酸１０ｍ１を加える。
た後、減圧濃縮すると無色油状のＮ−ベンジルオキシカ
ルボニル−Ｌ−ロイシン５，８８ｙが得られる。これを
テトラヒドロフラン１２０ｍ１に溶かし、ｐ−アミノフ
エノール２．３ｙを加えて氷冷する。シンクロヘキシル
カルボジイミド４．５７をテトラヒドロフラン１０Ｗ１
１に溶かした冷溶液を加え、１時間攪拌した後室温で一
夜放置する。析出せるジシクロヘキシルウり？沢去し、
▲液を減圧下で濃縮する。残渣を酢酸エチル１００ｍ１
に溶かし、１規定塩酸、水および５０％炭酸ナトリウム
水溶液で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧濃
縮する。シロツプ状の残渣をエチルエーテル３０ｍ１に
溶かし、１日放置すると無色の結晶としてこの工程の目
的化合物５．４６７が得られる。融点９４〜９６゜ｃ０
元素分析値 Ｃ２ＯＨ２４Ｏ４Ｎ２ 計算値 Ｃ、６７．４０；Ｈ、６．７９；Ｎｌ７．８６ 実測値 Ｃｌ６７．３ｌ；Ｈ、７．０５；Ｎｌ７．５５ ｂ．Ｌ−ロイシン パラ−ヒドロキシアニリドＮ−ベン
ジルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシン パラ−ヒドロキ
シアニリド３．５６７をメタノール７０ｍ１に溶かし、
これに１規定塩酸１０ｍ１を加える。
１０％パラジウム一炭素触媒０，６７を使用し、室温で
２時間接触還元する。
２時間接触還元する。
触媒を沢去し、沢液を減圧で濃縮すると無色の油状物が
得られる。このものを水５ｍｊに溶かし、これに濃アン
モニア水を加えて塩基性（ＰＨ８）にし、析出してくる
油状物を酢酸エチル５０ｍ１で抽出する。酢酸エチル層
を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後減圧濃縮する。
固体状の残渣を酢酸エチルから再結晶すると無色針状晶
として目的化合物１．３５７が得られる。融点１３６−
１３８１Ｃ０〔α〕１げ＋７３．２ 元素分析値 Ｃｌ２Ｈｌ８Ｏ２Ｎ２ 計算値 Ｃｌ６４．８４；Ｈｌ８．ｌ６；Ｎｌｌ２．６
Ｏ 実測値 Ｃｌ６４、６６；Ｈ，８．２４；Ｎｌｌ２．４
６ 実施例 ２ Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン パラ−ジメチルアミノ
アニリドＡ．Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｓ−ベン
ジル−Ｌ−システイン パラ−ジメチルアミノアニリド
Ｎ−Ｎ−ジメチルーパラーフエニレンジアミン・ジ塩酸
塩３．１５７を塩化メチレン６０ｍ１１１に懸濁させ、
氷冷下トリエチルアミン３．０４７およびＮ−ベンジル
オキシカルボニル−Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン３．
４５７を加えて溶かす。
得られる。このものを水５ｍｊに溶かし、これに濃アン
モニア水を加えて塩基性（ＰＨ８）にし、析出してくる
油状物を酢酸エチル５０ｍ１で抽出する。酢酸エチル層
を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後減圧濃縮する。
固体状の残渣を酢酸エチルから再結晶すると無色針状晶
として目的化合物１．３５７が得られる。融点１３６−
１３８１Ｃ０〔α〕１げ＋７３．２ 元素分析値 Ｃｌ２Ｈｌ８Ｏ２Ｎ２ 計算値 Ｃｌ６４．８４；Ｈｌ８．ｌ６；Ｎｌｌ２．６
Ｏ 実測値 Ｃｌ６４、６６；Ｈ，８．２４；Ｎｌｌ２．４
６ 実施例 ２ Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン パラ−ジメチルアミノ
アニリドＡ．Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｓ−ベン
ジル−Ｌ−システイン パラ−ジメチルアミノアニリド
Ｎ−Ｎ−ジメチルーパラーフエニレンジアミン・ジ塩酸
塩３．１５７を塩化メチレン６０ｍ１１１に懸濁させ、
氷冷下トリエチルアミン３．０４７およびＮ−ベンジル
オキシカルボニル−Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン３．
４５７を加えて溶かす。
この溶液にジシクロヘキシルカルボジイド２．３ｙを塩
化メチレン１０ｍ１に溶かした冷溶液 １を加え１時間
攪拌する。室温で更に５時間攪拌し、析出したシンクロ
ヘキシルウレアを沢去する。沢液を水洗し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥する。溶液より溶剤を留去し、得られた
残渣をメタノールより再結晶すると、この工程の目的
２化合物３．５８７が針状晶として得られる。融点１６
９〜１７０℃ｏ元素分析値 Ｃ２６Ｈ２９Ｏ３Ｎ３Ｓ 計算値 Ｃ、６７．１４；Ｈ、６．２９；Ｎ、９．０４
：Ｓ、６．８９． 実測値 Ｃ、６７．０７：Ｈ、６．２７：Ｎｌ８．９８
：Ｓｌ７．２３． ｂ．Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン パラ−ジメチルア
ミノアニリドＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｓ−ベン
ジ ｊル一Ｌ−システイン パラ−ジメチルアミノアニ
リド１．８ｙにアニソール１ｍ１と２５％臭化水素一酢
酸溶液１０ｄとを加えてよく振り混ぜる。
化メチレン１０ｍ１に溶かした冷溶液 １を加え１時間
攪拌する。室温で更に５時間攪拌し、析出したシンクロ
ヘキシルウレアを沢去する。沢液を水洗し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥する。溶液より溶剤を留去し、得られた
残渣をメタノールより再結晶すると、この工程の目的
２化合物３．５８７が針状晶として得られる。融点１６
９〜１７０℃ｏ元素分析値 Ｃ２６Ｈ２９Ｏ３Ｎ３Ｓ 計算値 Ｃ、６７．１４；Ｈ、６．２９；Ｎ、９．０４
：Ｓ、６．８９． 実測値 Ｃ、６７．０７：Ｈ、６．２７：Ｎｌ８．９８
：Ｓｌ７．２３． ｂ．Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン パラ−ジメチルア
ミノアニリドＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｓ−ベン
ジ ｊル一Ｌ−システイン パラ−ジメチルアミノアニ
リド１．８ｙにアニソール１ｍ１と２５％臭化水素一酢
酸溶液１０ｄとを加えてよく振り混ぜる。
１５分後に全溶した溶液に乾燥エーテルを加え、析出し
た白色の粉末状沈澱を沢取し、乾燥エーテルでよく洗う
。
た白色の粉末状沈澱を沢取し、乾燥エーテルでよく洗う
。
この粉末を酢酸エチル３０ｍ１に懸濁させ、５％水酸化
ナトリウム水溶液を静かにかきまぜながら加えてアルカ
リ性とする。有機層を分取し、５％炭酸水素ナトリウム
水溶液および水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥する
。溶液より溶剤を留去すると無色の油状物が得られる。
このものは放置すると結晶化する。エタノールより再結
晶すると白色針状晶として目的化合物０．９９ｙが得ら
れる。融点９１〜９３℃。〔α〕Ｍ＋１２３，２が（Ｃ
′−１．０１、０．５規定塩酸）元素分析値 Ｃｌ８Ｈ
２３ＯＮ３Ｓ 計算値 Ｃｌ６５．５Ｏ；Ｈｌ７．Ｏ３；Ｎｌｌ２．７
３；Ｓｌ９．７２． 実測値 Ｃｌ６５．３２；Ｈｌ６．９６；Ｎｌｌ２．５
５；ＳｌｌＯ．２ｌ． 実施例 ３ Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン パラ−メトキシアニリ
ドＮ−ベンジルオキシカルボニル一Ｓ−ベンジルＬ−シ
ステイン６．９２ｙおよびパラーアニシジン２．７１ｙ
を塩化メチレン１００ｍ１に溶かし、氷冷下シンクロヘ
キシルカルボジイミド４．５４７を塩化メチレン１５ｍ
１に溶かした冷溶液を加える。
ナトリウム水溶液を静かにかきまぜながら加えてアルカ
リ性とする。有機層を分取し、５％炭酸水素ナトリウム
水溶液および水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥する
。溶液より溶剤を留去すると無色の油状物が得られる。
このものは放置すると結晶化する。エタノールより再結
晶すると白色針状晶として目的化合物０．９９ｙが得ら
れる。融点９１〜９３℃。〔α〕Ｍ＋１２３，２が（Ｃ
′−１．０１、０．５規定塩酸）元素分析値 Ｃｌ８Ｈ
２３ＯＮ３Ｓ 計算値 Ｃｌ６５．５Ｏ；Ｈｌ７．Ｏ３；Ｎｌｌ２．７
３；Ｓｌ９．７２． 実測値 Ｃｌ６５．３２；Ｈｌ６．９６；Ｎｌｌ２．５
５；ＳｌｌＯ．２ｌ． 実施例 ３ Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン パラ−メトキシアニリ
ドＮ−ベンジルオキシカルボニル一Ｓ−ベンジルＬ−シ
ステイン６．９２ｙおよびパラーアニシジン２．７１ｙ
を塩化メチレン１００ｍ１に溶かし、氷冷下シンクロヘ
キシルカルボジイミド４．５４７を塩化メチレン１５ｍ
１に溶かした冷溶液を加える。
約３０分後反応混合物にテトラヒドロフラン５０ｍ１を
加え３時間攪拌を続ける。析出せるシンクロヘキシルウ
レアを沢去し、沢液を減圧濃縮する。残留せる固体をメ
タノールより再結晶するとＮ−ベンジルオキシカルボニ
ル−Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン パラ−メトキシア
ニリド７，１７が得られる。上のようにして得られた化
合物３，０７にアニソール３．０７および２５％臭化水
素一酢酸溶液２０ｍ１を加え、室温で１５分間よく振り
まぜる。
加え３時間攪拌を続ける。析出せるシンクロヘキシルウ
レアを沢去し、沢液を減圧濃縮する。残留せる固体をメ
タノールより再結晶するとＮ−ベンジルオキシカルボニ
ル−Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン パラ−メトキシア
ニリド７，１７が得られる。上のようにして得られた化
合物３，０７にアニソール３．０７および２５％臭化水
素一酢酸溶液２０ｍ１を加え、室温で１５分間よく振り
まぜる。
乾燥工ーテル一石油エーテル（１：１）２００ｍｊを加
え、ドライアイス−アセトン寒剤で冷却し、傾瀉法で析
出せる油状物を採取し、これに酢酸エチル３０ｍ１およ
び水３０ｍ１を加える。粉末炭酸ナトリウムで中和し、
有機層を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧
で溶剤を留去する。油状の残渣をシリカゲルを使用した
カラムクロマトグラフイ一（２Ｘ３０（Ｖ７！、展開溶
剤ベンゼン一酢酸エチル）で精製する。酢酸エチルが２
０％程度のところで溶離される部分を集め減圧にて濃縮
乾固し残渣を酢酸エチル−石油エーテルより再結晶する
と目的化合物１．６７が得られる。融点７６〜８３℃〔
α〕賀＋１２３．８が（Ｃ−１．０３、１規定塩化水素
一酢酸）。
え、ドライアイス−アセトン寒剤で冷却し、傾瀉法で析
出せる油状物を採取し、これに酢酸エチル３０ｍ１およ
び水３０ｍ１を加える。粉末炭酸ナトリウムで中和し、
有機層を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧
で溶剤を留去する。油状の残渣をシリカゲルを使用した
カラムクロマトグラフイ一（２Ｘ３０（Ｖ７！、展開溶
剤ベンゼン一酢酸エチル）で精製する。酢酸エチルが２
０％程度のところで溶離される部分を集め減圧にて濃縮
乾固し残渣を酢酸エチル−石油エーテルより再結晶する
と目的化合物１．６７が得られる。融点７６〜８３℃〔
α〕賀＋１２３．８が（Ｃ−１．０３、１規定塩化水素
一酢酸）。
元素分析値 Ｃｌ７Ｈ２ＯＯ２Ｎ２Ｓ
計算値 Ｃ，６４．５３；Ｈｌ６．３７；Ｎｌ８．８５
：ＳｌｌＯ．ｌ３． 実測値 Ｃ、６４，５９；Ｈ、６．３５；Ｎ、８．８２
；Ｓ、１０．２３． 実施例 ４ Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン パラ−ヒドロキシアニ
リドＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｓ−ベンジルーＬ
−システイン６．９２７およびパラーアミノフエノール
２．４ｙを乾燥テトラヒドロフラン１２０ｍ１に溶かし
、氷冷する。
：ＳｌｌＯ．ｌ３． 実測値 Ｃ、６４，５９；Ｈ、６．３５；Ｎ、８．８２
；Ｓ、１０．２３． 実施例 ４ Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン パラ−ヒドロキシアニ
リドＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｓ−ベンジルーＬ
−システイン６．９２７およびパラーアミノフエノール
２．４ｙを乾燥テトラヒドロフラン１２０ｍ１に溶かし
、氷冷する。
これにシンクロヘキシルカルボジイミド４，５４Ｖをテ
トラヒドロフラン１５ｍ１に溶かした冷溶液を加え、室
温で一夜撹拌する。析出したシンクロヘキシルウレアを
ｆ去し、ｆ液を減圧で濃縮する。残渣に水５０ｍ１を加
えると褐色をおびた粉末状の物質が得られる。これを沢
取するとＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｓベンジル−
Ｌ−システイン パラ−ヒドロキシアニリド９．１５７
が得られる。上のようにして得られた化合物４．３７ｙ
にアニソール３ＷＬ１および２５％臭化水素一酢酸溶液
３０ｍ１を加え、室温で１５分よく攪拌すると全溶する
。
トラヒドロフラン１５ｍ１に溶かした冷溶液を加え、室
温で一夜撹拌する。析出したシンクロヘキシルウレアを
ｆ去し、ｆ液を減圧で濃縮する。残渣に水５０ｍ１を加
えると褐色をおびた粉末状の物質が得られる。これを沢
取するとＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｓベンジル−
Ｌ−システイン パラ−ヒドロキシアニリド９．１５７
が得られる。上のようにして得られた化合物４．３７ｙ
にアニソール３ＷＬ１および２５％臭化水素一酢酸溶液
３０ｍ１を加え、室温で１５分よく攪拌すると全溶する
。
この溶液に乾燥エーテル一石油エーテル（２：ｌ）３０
０ｍ１を加え、析出した油状物を傾瀉法で採取する。こ
の油状物を乾燥エーテルで洗つた後真空デシケータ一中
で乾燥する。このものを水３０ｍ１に溶かし、不溶物を
ｆ去し、ｆ液を粉末状の炭酸水素ナトリウムで中和する
と油状物が析出する。この油状物を酢酸エチルで抽出し
、有機層を水洗し無水硫酸ナトリウムで乾燥する。溶液
より溶剤を減圧で留去し、残留せる油状物をシリカゲル
を使用したカラムクロマトグラフイ一（ワコーゲルＣ−
２００１１２３７；展開溶剤クロロホルム−エタノール
一酢酸９５：５：３を６００ｄ次いで２０：５：１を１
０００ｍ０で精製する。得られた油状物を少量の酢酸エ
チルに溶かしエーテルを加えると褐色の油状物が析出す
る。油状物を残して上澄液を傾瀉法にて採取する。この
操作を３回くり返し、上澄液を合し（約２００Ｗ１ｉ）
、これにｎ−ヘキサン５０ｍ１を加えると白濁する。暫
時放置して析出せる結晶を沢取し、ｎ−ヘキサンで洗う
と目的化合物０．７７が得られる。傾瀉法におい ぐて
得られた油状物を真空で乾固し、酢酸エチルエーテルよ
り再結晶すると目的化合物１，６５ｙが得られる。融点
９３〜９７℃。〔α〕貨＋１１５．９９（Ｃ−１．２２
、０．５規定塩醍。
０ｍ１を加え、析出した油状物を傾瀉法で採取する。こ
の油状物を乾燥エーテルで洗つた後真空デシケータ一中
で乾燥する。このものを水３０ｍ１に溶かし、不溶物を
ｆ去し、ｆ液を粉末状の炭酸水素ナトリウムで中和する
と油状物が析出する。この油状物を酢酸エチルで抽出し
、有機層を水洗し無水硫酸ナトリウムで乾燥する。溶液
より溶剤を減圧で留去し、残留せる油状物をシリカゲル
を使用したカラムクロマトグラフイ一（ワコーゲルＣ−
２００１１２３７；展開溶剤クロロホルム−エタノール
一酢酸９５：５：３を６００ｄ次いで２０：５：１を１
０００ｍ０で精製する。得られた油状物を少量の酢酸エ
チルに溶かしエーテルを加えると褐色の油状物が析出す
る。油状物を残して上澄液を傾瀉法にて採取する。この
操作を３回くり返し、上澄液を合し（約２００Ｗ１ｉ）
、これにｎ−ヘキサン５０ｍ１を加えると白濁する。暫
時放置して析出せる結晶を沢取し、ｎ−ヘキサンで洗う
と目的化合物０．７７が得られる。傾瀉法におい ぐて
得られた油状物を真空で乾固し、酢酸エチルエーテルよ
り再結晶すると目的化合物１，６５ｙが得られる。融点
９３〜９７℃。〔α〕貨＋１１５．９９（Ｃ−１．２２
、０．５規定塩醍。
ノ元素分析値 Ｃｌ６Ｈｌ８Ｏ２Ｎ２Ｓ−％ＣＨ３ＣＯ
２Ｈ−％Ｈ２Ｏ計算値 Ｃ、６０．７１：Ｈｌ６．ｌ８
；Ｎｌ８．５８：Ｓｌ９．８２． 実測値 Ｃｌ６Ｏ．８６；Ｈｌ５，７４：Ｎｌ８．４Ｏ
；Ｓｌ９．５ｌ． 試験例 １ ヒト血清中のシスチンアミノペプチダーゼ活性の測定Ｓ
−ベンジル−Ｌ〜システイン バラ−ヒドロキシアニリ
ド７５▼をジオキサン３ｍ１および０．１２規定塩酸２
１１ｔの混合液に溶かし基質液とする。
２Ｈ−％Ｈ２Ｏ計算値 Ｃ、６０．７１：Ｈｌ６．ｌ８
；Ｎｌ８．５８：Ｓｌ９．８２． 実測値 Ｃｌ６Ｏ．８６；Ｈｌ５，７４：Ｎｌ８．４Ｏ
；Ｓｌ９．５ｌ． 試験例 １ ヒト血清中のシスチンアミノペプチダーゼ活性の測定Ｓ
−ベンジル−Ｌ〜システイン バラ−ヒドロキシアニリ
ド７５▼をジオキサン３ｍ１および０．１２規定塩酸２
１１ｔの混合液に溶かし基質液とする。
０．１Ｍトリエタノールアミン−クエン酸緩衝液（ＰＨ
７．４、ツウイン８０を１６２５％含む）１００ｍ１に
上記基質液を加えて基質緩衝液とする。
７．４、ツウイン８０を１６２５％含む）１００ｍ１に
上記基質液を加えて基質緩衝液とする。
基質緩衝液１ｍ１を試験管にとり、３７℃に加温し、ヒ
ト血清０．０５ＷＬ１を加えインキユベートする。３０
分後反応停止呈色液（後記）５ｍ１を加え２０分室温に
放置した後６６０ｎｍにて吸光度を測定する。
ト血清０．０５ＷＬ１を加えインキユベートする。３０
分後反応停止呈色液（後記）５ｍ１を加え２０分室温に
放置した後６６０ｎｍにて吸光度を測定する。
別に上記操作中ヒト血清の代りに水０，０５ｍ１を使用
する以外は全く同様にしてブランク値とする。この両値
の差からヒト血清中のシスチンアミノペプチダーゼ活性
が得られる。こうして得られたヒト血清中のシスチンア
ミノペプチダーゼの該基質に対するＫｍ値は０．４２ｍ
Ｍであつた。反応停止呈色液：ナトリウム ペンタシア
ノアミノフエロエート２７を水２０ｍ１に溶かし、０．
３％過酸化水素水６０１１１を加え、更に１０％炭酸水
素ナトリウム水溶液２０ｍ１を加える。この溶液に低分
子デキストリン４ｙを加えて溶かし呈色原液とする。こ
の原液１ｍ１に０．２５Ｍ乳酸緩衝液（ＰＨ４．５、１
％塩化ナトリウムを含む）５０ｍ１を加えて反応停止呈
色液とする。試験例 ２ ヒト血清中のロイシンアミノペプチダーゼ活性の測定Ｌ
−ロイシン パラヒドロキシアニリド９０Ｗ９をメチル
セルソルブ３ｍ１および０．２５規定塩酸２ｍ１の混合
液に溶かし基質液とする。
する以外は全く同様にしてブランク値とする。この両値
の差からヒト血清中のシスチンアミノペプチダーゼ活性
が得られる。こうして得られたヒト血清中のシスチンア
ミノペプチダーゼの該基質に対するＫｍ値は０．４２ｍ
Ｍであつた。反応停止呈色液：ナトリウム ペンタシア
ノアミノフエロエート２７を水２０ｍ１に溶かし、０．
３％過酸化水素水６０１１１を加え、更に１０％炭酸水
素ナトリウム水溶液２０ｍ１を加える。この溶液に低分
子デキストリン４ｙを加えて溶かし呈色原液とする。こ
の原液１ｍ１に０．２５Ｍ乳酸緩衝液（ＰＨ４．５、１
％塩化ナトリウムを含む）５０ｍ１を加えて反応停止呈
色液とする。試験例 ２ ヒト血清中のロイシンアミノペプチダーゼ活性の測定Ｌ
−ロイシン パラヒドロキシアニリド９０Ｗ９をメチル
セルソルブ３ｍ１および０．２５規定塩酸２ｍ１の混合
液に溶かし基質液とする。
０．１Ｍトリエタノールアミン一塩酸緩衝液（ＰＨ８］
、ツウイン８０を０．５％含む）１００ｍ１に上記基質
液を加えて基質緩衝液とする。
、ツウイン８０を０．５％含む）１００ｍ１に上記基質
液を加えて基質緩衝液とする。
基質緩衝液１１１１を試験管にとり、３７℃に加温し、
ヒト血清０．０５ｍ１を加えてインキユベートする。３
０分後反応停止呈色液（前記）５ｍ１を加えて２０分室
温に放置した後６６０ｎｍにて吸光度を測定する。
ヒト血清０．０５ｍ１を加えてインキユベートする。３
０分後反応停止呈色液（前記）５ｍ１を加えて２０分室
温に放置した後６６０ｎｍにて吸光度を測定する。
別に上記操作中ヒト血清の代りに水０．０５ｍ１を使用
する以外は全く同様にしてブランク値とする。この両値
の差からヒト血清中のロイシンアミノペプチダーゼ活性
が得られる。このようにして測定されたヒト血清中のロ
イシンペプチダーゼの該基質に対するＫｍ値は０．４３
ｍＭである。
する以外は全く同様にしてブランク値とする。この両値
の差からヒト血清中のロイシンアミノペプチダーゼ活性
が得られる。このようにして測定されたヒト血清中のロ
イシンペプチダーゼの該基質に対するＫｍ値は０．４３
ｍＭである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘはイソプロピル基またはベンジルチオ基を示
し、Ｒは水酸基、メトキシ基またはジメチルアミノ基を
示す。 但し、Ｘがイソプロピル基で、Ｒがジメチルアミノ基の
場合を除く。）を有するα−Ｌ−アミノ酸アニリドおよ
びその酸付加塩。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP51063784A JPS5929068B2 (ja) | 1976-06-01 | 1976-06-01 | α−Ｌ−アミノ酸アニリド化合物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP51063784A JPS5929068B2 (ja) | 1976-06-01 | 1976-06-01 | α−Ｌ−アミノ酸アニリド化合物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS52148031A JPS52148031A (en) | 1977-12-08 |
| JPS5929068B2 true JPS5929068B2 (ja) | 1984-07-18 |
Family
ID=13239339
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51063784A Expired JPS5929068B2 (ja) | 1976-06-01 | 1976-06-01 | α−Ｌ−アミノ酸アニリド化合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5929068B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56110653A (en) * | 1980-02-06 | 1981-09-01 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | L-leucyl-4-n,n-dialkylaminoanilide derivative and its preparation |
| JPS5942350A (ja) * | 1982-09-01 | 1984-03-08 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規な合成基質を用いるＬ‐ロイシンアミノペプチダーゼおよびγ‐グルタミルトランスペプチダーゼからなる群より選ばれるペプチダーゼの活性測定法 |
| JPS6117550A (ja) * | 1985-06-24 | 1986-01-25 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規な合成基質 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5530787A (en) * | 1978-08-25 | 1980-03-04 | Mitsubishi Electric Corp | High voltage digital control circuit |
-
1976
- 1976-06-01 JP JP51063784A patent/JPS5929068B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS52148031A (en) | 1977-12-08 |
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