JPS5928494A - 薄膜法による生物および化学発光量の測定方法 - Google Patents
薄膜法による生物および化学発光量の測定方法Info
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- JPS5928494A JPS5928494A JP13743782A JP13743782A JPS5928494A JP S5928494 A JPS5928494 A JP S5928494A JP 13743782 A JP13743782 A JP 13743782A JP 13743782 A JP13743782 A JP 13743782A JP S5928494 A JPS5928494 A JP S5928494A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明なよ、きわめて微量、の試料よシ発生する生物
ｉグ仁は化学発）Ｃ（生物または化学ルミネッセンス）
を薄膜−１二で高感度に測定できるようにしだ薄膜法に
よる生物および化学発光量の測定方法に門ずるものでを
ンる。
ｉグ仁は化学発）Ｃ（生物または化学ルミネッセンス）
を薄膜−１二で高感度に測定できるようにしだ薄膜法に
よる生物および化学発光量の測定方法に門ずるものでを
ンる。
従来の生物または化学発光量の測光は公知文献（ＵＳ
ＰＡＴ ３７６４２１４）に記載されているごと〈
第１図に示す透明な容器イ（プラスチックスや各種のガ
ラス製）中で発光試料と発光試薬とを反応させ、発生す
る光を、前記容器の周囲（第１１戊１（リ）、または底
部（第１図０］））に光電子増倍管口の受光部ハを配設
して測定していた。
ＰＡＴ ３７６４２１４）に記載されているごと〈
第１図に示す透明な容器イ（プラスチックスや各種のガ
ラス製）中で発光試料と発光試薬とを反応させ、発生す
る光を、前記容器の周囲（第１１戊１（リ）、または底
部（第１図０］））に光電子増倍管口の受光部ハを配設
して測定していた。
しかし、このような従来法によると、（１）容器内部で
起こる発光は、容器壁周囲で起こる発光に比較して光電
子増倍管の受光部ハからの距離が：遠く々るばか！｝で
なく、容器壁周囲の溶液に頭部さｉｔてしまうため受光
動量が悪いこと、（２）光電子増倍管の受光部ハの全面
に発光百聞を拡大するには、大きな容器を用いる８四が
あυ、従って発光試料及び発光試薬も多旦に心安とする
こと、（３）生物・化学発光にｒ５＋１考する発光試別
及び発光量り１≦を１※ｆ１１１；さぜた後は、発光持
続時間が短かい揚台が多いので選やかに発光を測光する
ことを要するが、容器内で両者を攪拌して均一にするに
は時間が〃＼かり、また、これらは単独であっても溶液
状態にするだけで不安定となシ分解してしまうので、結
局強い発光を測光することができず、｛炙出効率が低下
してしまう等の欠点があった。
起こる発光は、容器壁周囲で起こる発光に比較して光電
子増倍管の受光部ハからの距離が：遠く々るばか！｝で
なく、容器壁周囲の溶液に頭部さｉｔてしまうため受光
動量が悪いこと、（２）光電子増倍管の受光部ハの全面
に発光百聞を拡大するには、大きな容器を用いる８四が
あυ、従って発光試料及び発光試薬も多旦に心安とする
こと、（３）生物・化学発光にｒ５＋１考する発光試別
及び発光量り１≦を１※ｆ１１１；さぜた後は、発光持
続時間が短かい揚台が多いので選やかに発光を測光する
ことを要するが、容器内で両者を攪拌して均一にするに
は時間が〃＼かり、また、これらは単独であっても溶液
状態にするだけで不安定となシ分解してしまうので、結
局強い発光を測光することができず、｛炙出効率が低下
してしまう等の欠点があった。
そこでこの発明は、発光試料と発光試薬とを反応させる
に際し１、あらかじめ発光量Ｆｌ、また（づ：発光試薬
のいずれか一方ｆ：発光測定用乎板上に薄膜状（Ｃ分散
させた後、他の一方を前記薄膜上に添加して反応させ、
発生ずる発光を光電子増倍管によシ受光することにより
、発光試料が重層して発光するために生ずる九の損失を
少なくすると共に発光試料に可能な限り光電子増倍管の
受光部を接近さすて受光効率を高くするようにした薄膜
法に、Ｌる生物・化学発光１の測光方法を提供すること
を目的として開発したものである。
に際し１、あらかじめ発光量Ｆｌ、また（づ：発光試薬
のいずれか一方ｆ：発光測定用乎板上に薄膜状（Ｃ分散
させた後、他の一方を前記薄膜上に添加して反応させ、
発生ずる発光を光電子増倍管によシ受光することにより
、発光試料が重層して発光するために生ずる九の損失を
少なくすると共に発光試料に可能な限り光電子増倍管の
受光部を接近さすて受光効率を高くするようにした薄膜
法に、Ｌる生物・化学発光１の測光方法を提供すること
を目的として開発したものである。
この発明に用いる発光に’ｌ’・ｌと発ゲＣ試薬と金載
（６して反応さ吐る発〕′（４αＩｌｌ ）ｌ用平板（
以下斤に平板という）Ｉｌ′、３−１単なる平１ｎ１的
な平版であってもよいが、２ｒ５２図のように、平板の
周囲に低いガイド２を有する測光用容器１の力が、試料
や試薬を載置するのに便利である。この測光用容器１（
平板）の拐質Ｃ」１、不透明体であれば、゛第３図（１
）の如く必ず容器１の上部に）“Ｃ１宙、子増倍管３の
受光部４を配設して、容器１上の発光を受光することを
要するが、透明体であれば容器１の上部に限らず、第３
図（ＩＪ）の如く下部に光電子増倍管３の受光部４を配
設しても容器１上の発光を測光することができる。
（６して反応さ吐る発〕′（４αＩｌｌ ）ｌ用平板（
以下斤に平板という）Ｉｌ′、３−１単なる平１ｎ１的
な平版であってもよいが、２ｒ５２図のように、平板の
周囲に低いガイド２を有する測光用容器１の力が、試料
や試薬を載置するのに便利である。この測光用容器１（
平板）の拐質Ｃ」１、不透明体であれば、゛第３図（１
）の如く必ず容器１の上部に）“Ｃ１宙、子増倍管３の
受光部４を配設して、容器１上の発光を受光することを
要するが、透明体であれば容器１の上部に限らず、第３
図（ＩＪ）の如く下部に光電子増倍管３の受光部４を配
設しても容器１上の発光を測光することができる。
また、この発明でいう発光試料とは血液尿などの体液、
ホモジネートされた組Ｒ）ｉζ、海水、３５１ Ｌ７１
．排水等であり、これらの試料に含′まれる、微生！ｉ
４酸素、蛋白質、ホルモン、 Ａ’ｌ’Ｐ等をこの発明
による測光方法によシ分析するものである。しかして前
記容器１上に薄膜状に分散させる発光試料またＱ、シ、
発光試薬は少くとも一方が液体であれば固体であっても
そのまま用いることができるので不安定な試料まだは試
薬の分解を防止することができる。この、（易自薄膜を
形成する担体として透明または不透明の各種の口紙を用
いると口紙ごと容器１上に載置でき、才だ試料、試薬の
保存にも便利である。
ホモジネートされた組Ｒ）ｉζ、海水、３５１ Ｌ７１
．排水等であり、これらの試料に含′まれる、微生！ｉ
４酸素、蛋白質、ホルモン、 Ａ’ｌ’Ｐ等をこの発明
による測光方法によシ分析するものである。しかして前
記容器１上に薄膜状に分散させる発光試料またＱ、シ、
発光試薬は少くとも一方が液体であれば固体であっても
そのまま用いることができるので不安定な試料まだは試
薬の分解を防止することができる。この、（易自薄膜を
形成する担体として透明または不透明の各種の口紙を用
いると口紙ごと容器１上に載置でき、才だ試料、試薬の
保存にも便利である。
次に、この発明に係る簿膜による生物・化学発）′Ｃ１
の測光方法による測光例について述べると次のとおシで
ある。
の測光方法による測光例について述べると次のとおシで
ある。
〈測光例１〉 目的＝９．生物中のＡＴＰを測定するこ
とによシ微生物固体数の計測 ■ ｎ１測すべき微生物の浮遊した試験液を１３％径の
８μセルロースエステルプレフィルタ−膜で口過しだ後
、前記膜を生理食塩水で２度洗浄し、洗ン了１０液を合
せる。
とによシ微生物固体数の計測 ■ ｎ１測すべき微生物の浮遊した試験液を１３％径の
８μセルロースエステルプレフィルタ−膜で口過しだ後
、前記膜を生理食塩水で２度洗浄し、洗ン了１０液を合
せる。
（ル のの口液を、１３％径の０．２２ μポリカーボ
ネート膜で口過し、容器は４に理食塙水で洗い落とし、
膜」二に微生物を集める。
ネート膜で口過し、容器は４に理食塙水で洗い落とし、
膜」二に微生物を集める。
◎ 膜上にｌ Ｑ ｍ７ ／ ｍｅアビラーゼ（０，０
３Ｍ −Ｃａｅ４２中）を滴下し微生物に１１１胞膜上
のＡＴＰな除去する。
３Ｍ −Ｃａｅ４２中）を滴下し微生物に１１１胞膜上
のＡＴＰな除去する。
ｏｎｆＡ ヲ１ｌｌｌｌ 光用容器上ＶＣ載せ、０ 、
Ｉ Ｎ −Ｈ，ｌ１０３２（１μｔを滴下し５分間放
置する。その後２０μｔの０．１５ Ｒ４Ｎａ２５Ｏ＋
１をＷｚ下する。
Ｉ Ｎ −Ｈ，ｌ１０３２（１μｔを滴下し５分間放
置する。その後２０μｔの０．１５ Ｒ４Ｎａ２５Ｏ＋
１をＷｚ下する。
（功 測光容器の上部を光電子Ｊｌ；’、１倍管の受光
部に近接セントした後４０μｔのル・ンフエリン嗜ルシ
フェラーゼ試察（ｐＨＢ、２ 、０．２５Ｍ−ＴＲＩＳ
緩衛液、 １０Ｍ−Ｍｇ５Ｏ＋１ 、１０ Ｍ−フ
レランド試薬）を滴下して発光量をｎ１測する。
部に近接セントした後４０μｔのル・ンフエリン嗜ルシ
フェラーゼ試察（ｐＨＢ、２ 、０．２５Ｍ−ＴＲＩＳ
緩衛液、 １０Ｍ−Ｍｇ５Ｏ＋１ 、１０ Ｍ−フ
レランド試薬）を滴下して発光量をｎ１測する。
く測光例２〉 目的：抗体を結合したセファローズメン
グレインディスクを利用したペルオキシダーゼの酵素免
疫発光測定法。
グレインディスクを利用したペルオキシダーゼの酵素免
疫発光測定法。
■ 抗体を結合したセファローズを塗布した膜上にペル
オキシダーゼをラベルした抗ハ１１と検液を７”Ｎ Ｔ
Ｌ ２１１＠ ｉｆ］〜Ｋ ｌｊｋ Ｊ、ｆ ７ａパ
１■ Ｏ・１８Ｍ−リン酸緩衝液で１
ｊμ面を洗浄しンｒ後、膜を測光容器上に載せる。
オキシダーゼをラベルした抗ハ１１と検液を７”Ｎ Ｔ
Ｌ ２１１＠ ｉｆ］〜Ｋ ｌｊｋ Ｊ、ｆ ７ａパ
１■ Ｏ・１８Ｍ−リン酸緩衝液で１
ｊμ面を洗浄しンｒ後、膜を測光容器上に載せる。
０１１ｑ上に５０μｔの０．２％ピロガロール（０，１
８Ｍリン酸緩衝液ｐＨ６，５中）を滴下しブζ後、測光
容器の上部を光電子増倍管の受光部に近接セントする。
８Ｍリン酸緩衝液ｐＨ６，５中）を滴下しブζ後、測光
容器の上部を光電子増倍管の受光部に近接セントする。
■ ５０μｔの０．３７ 夕（ｌ２０２ （０，１８−
リン酸緩衝ｌｐＨ６，５中）を滴下し発光Ｎを計測する
。
リン酸緩衝ｌｐＨ６，５中）を滴下し発光Ｎを計測する
。
く測光例３〉 目的：生体内クレアテ／＝ｒナーゼ活性
測定法。
測定法。
３ Ｑ ｖｔＭ−クレアチンリン酸および２ｍＭ −Ａ
Ｉ）Ｐを含む平板上に試料を１０μを添加し、装置［を
内で３７℃１０分間反応させだ後２）シｔΔ１−ルシフ
エリ／−ルシフェラーゼを加え、生成したＡＴＰのジ（
−光量から間接的に酵素活性値（：測定する。
Ｉ）Ｐを含む平板上に試料を１０μを添加し、装置［を
内で３７℃１０分間反応させだ後２）シｔΔ１−ルシフ
エリ／−ルシフェラーゼを加え、生成したＡＴＰのジ（
−光量から間接的に酵素活性値（：測定する。
上記測光（ｆｌ！に卦りる各試薬のＷＬｊ整たらびに液
量の組合ぜは限定されるものではなく任へにス１ばれた
蟻度の試液と適焔な液Ｊｉ−の組合せが可能である。
量の組合ぜは限定されるものではなく任へにス１ばれた
蟻度の試液と適焔な液Ｊｉ−の組合せが可能である。
寸た、坏発明の測光法は、反応デーブルーヒに複数個の
平板（反１ｉｉ、；槽）全配設し、これに試料寸たｉ、
］： ｆ’・（塾の自１（・υ方性４ム的、光電子増倍
管、コ／ピユータ−等を組合せて多数の試料を連続的に
測光できる自動測光装作、に応用できる。
平板（反１ｉｉ、；槽）全配設し、これに試料寸たｉ、
］： ｆ’・（塾の自１（・υ方性４ム的、光電子増倍
管、コ／ピユータ−等を組合せて多数の試料を連続的に
測光できる自動測光装作、に応用できる。
前記したようしく−１このり１＼明に係る生物・化学発
光測光方法によれｔ」：微少ｆｉ％の試料による発光を
きわめて効率よく測光できるという効北をイｊする。
光測光方法によれｔ」：微少ｆｉ％の試料による発光を
きわめて効率よく測光できるという効北をイｊする。
Claims (1)
- 発光β（ｒｌと発光試薬とを反応さぜるに際し、あらか
じめ発光試別または発光試薬のいずれが一方を、発光ｉ
ｉ′ｌｊｌ定川平板上に用膜状に分散さぜだ後、他の一
方を前記薄膜上に添加して反応させ、発生ずる発光ｈｌ
、を光重２子増倍管によシ受）ｃすることを特徴とする
書膜法による生物および化学発光量の測２ビ方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13743782A JPS5928494A (ja) | 1982-08-09 | 1982-08-09 | 薄膜法による生物および化学発光量の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13743782A JPS5928494A (ja) | 1982-08-09 | 1982-08-09 | 薄膜法による生物および化学発光量の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5928494A true JPS5928494A (ja) | 1984-02-15 |
Family
ID=15198599
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13743782A Pending JPS5928494A (ja) | 1982-08-09 | 1982-08-09 | 薄膜法による生物および化学発光量の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5928494A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999023245A1 (fr) * | 1997-11-04 | 1999-05-14 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Methode d'analyse d'enzymes |
-
1982
- 1982-08-09 JP JP13743782A patent/JPS5928494A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999023245A1 (fr) * | 1997-11-04 | 1999-05-14 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Methode d'analyse d'enzymes |
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