JPS59228156A - 核酸塩基配列自動決定装置 - Google Patents
核酸塩基配列自動決定装置Info
- Publication number
- JPS59228156A JPS59228156A JP58102599A JP10259983A JPS59228156A JP S59228156 A JPS59228156 A JP S59228156A JP 58102599 A JP58102599 A JP 58102599A JP 10259983 A JP10259983 A JP 10259983A JP S59228156 A JPS59228156 A JP S59228156A
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- JP
- Japan
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- gel
- nucleic acid
- migratory
- solution
- molecular weight
- Prior art date
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- Granted
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44717—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は、核酸の塩基配列決定法の装置化に係り、特に
その自動化、迅速化に好適な分離１分取技術に関する。
その自動化、迅速化に好適な分離１分取技術に関する。
従来、核酸の塩基配列決定は、専ら、マキサム・ギルバ
ート法（Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｇｙｍｏｌｏｇｙ Ｖｏ
ｌ。
ート法（Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｇｙｍｏｌｏｇｙ Ｖｏ
ｌ。
６５ 、 ｐＩ）、 ４９５−７０（転）により行われ
て来た。この方法では、放射性同位体で標識された核酸
を化学的に断片化した後、電気泳動法にて、長さの異な
る断片をゲル支持体中で分子童顔に整列後、ゲル支持体
をガラス板よυはがし、このオートラジオグラムを撮る
事で放射性断片を含む泳動帯の検出を行い、配列を決定
するが、このゲル支持体の取シ扱いには熟練が必要であ
シ、分離、検出工程の装置化が望まれている。
て来た。この方法では、放射性同位体で標識された核酸
を化学的に断片化した後、電気泳動法にて、長さの異な
る断片をゲル支持体中で分子童顔に整列後、ゲル支持体
をガラス板よυはがし、このオートラジオグラムを撮る
事で放射性断片を含む泳動帯の検出を行い、配列を決定
するが、このゲル支持体の取シ扱いには熟練が必要であ
シ、分離、検出工程の装置化が望まれている。
本発明の目的は、ゲル支持体に対し、手動操作を施す事
なく、電気泳動分離された核酸断片の連続的検出を可能
とする手段を提供することにある。
なく、電気泳動分離された核酸断片の連続的検出を可能
とする手段を提供することにある。
本発明では、検出同定すべき核酸断片に対し、電気泳動
方向と垂直な方向に電場をかけ、泳動支持体より、これ
を連続的に流出させ、個別に定量することを特徴とする
。
方向と垂直な方向に電場をかけ、泳動支持体より、これ
を連続的に流出させ、個別に定量することを特徴とする
。
以下、本発明の一実施例を第１図により説明する。本装
置は、２枚のガラス板３に挾まれた泳動分離用ゲル２、
その両端を浸す電極液槽１、高電正直流電源９、泳動帯
溶出用緩衡液槽７及び同緩衝液に電位勾配を与える低圧
直流電源１０と放射能検出器６を構成手段とする。
置は、２枚のガラス板３に挾まれた泳動分離用ゲル２、
その両端を浸す電極液槽１、高電正直流電源９、泳動帯
溶出用緩衡液槽７及び同緩衝液に電位勾配を与える低圧
直流電源１０と放射能検出器６を構成手段とする。
放射性同位体で標識された核酸試料をゲル２の負極側に
乗せ、ゲルの両端を電極液１に接しさせ５０■／ｃｍ（
ゲル長）程度の電圧９で泳動すると、同一分子量を持つ
成分はそれぞれ泳動帯４を形成しつつ負極より正極（図
では上方よシ下向）に向かい、分子量の対数にはソ反比
例した移動度で泳動する。一方、ゲル正極端よシいく分
負極端側に寄った付近のガラス板の穴１１′ｔ−通じ、
ゲル内液と同じ組成の泳動帯溶出用緩衝液７をゆつくシ
と流すと共に、これに泳動方向の電位勾配を大きくは乱
さない程度の電圧１０をかける。その結果、分離された
泳動帯４は回収され５、放射能検出器６を通過し、放射
線量が測定された後、廃液として貯蔵される８゜ 〔発明の効果〕 本発明は従来法に比し、次の４長所を有す。
乗せ、ゲルの両端を電極液１に接しさせ５０■／ｃｍ（
ゲル長）程度の電圧９で泳動すると、同一分子量を持つ
成分はそれぞれ泳動帯４を形成しつつ負極より正極（図
では上方よシ下向）に向かい、分子量の対数にはソ反比
例した移動度で泳動する。一方、ゲル正極端よシいく分
負極端側に寄った付近のガラス板の穴１１′ｔ−通じ、
ゲル内液と同じ組成の泳動帯溶出用緩衝液７をゆつくシ
と流すと共に、これに泳動方向の電位勾配を大きくは乱
さない程度の電圧１０をかける。その結果、分離された
泳動帯４は回収され５、放射能検出器６を通過し、放射
線量が測定された後、廃液として貯蔵される８゜ 〔発明の効果〕 本発明は従来法に比し、次の４長所を有す。
１、一般に電気泳動法では、本発明の場合も含めゲル両
端は１ｔ４ｍ液に対し開放状態にあるので、配列決定用
ＤＮＡ変性ゲルに言まれる高濃度（８モル程度）尿素は
電極液中に拡散すると共に、多少負極側に泳動される。
端は１ｔ４ｍ液に対し開放状態にあるので、配列決定用
ＤＮＡ変性ゲルに言まれる高濃度（８モル程度）尿素は
電極液中に拡散すると共に、多少負極側に泳動される。
これによシ生ずるゲル正極端付近の尿素濃度低下によシ
、その付近の電位勾配が急になる等の結果、泳動帯の圧
縮が起こυ、分離が悪くなる。この現象に対し、従来法
では防ぐ手立が無かったが、本発明では、ゲル正極端よ
シ少し負極端に寄った所からゲル内組成と同じ組成を持
つ緩衝液で泳動帯を溶出するので、泳動帯圧縮の影響を
避けられ、分離能が向上した。
、その付近の電位勾配が急になる等の結果、泳動帯の圧
縮が起こυ、分離が悪くなる。この現象に対し、従来法
では防ぐ手立が無かったが、本発明では、ゲル正極端よ
シ少し負極端に寄った所からゲル内組成と同じ組成を持
つ緩衝液で泳動帯を溶出するので、泳動帯圧縮の影響を
避けられ、分離能が向上した。
２、従来法では泳動後、ゲルをガラス板よりはがし、オ
ートラジオグラムを撮るため、低分子量成分が充分展開
する泳動条件下では、高分子量成分は、泳動距離不足か
らゲルの負極端側に圧縮されたまま残り、塩基配列決定
不能となる。
ートラジオグラムを撮るため、低分子量成分が充分展開
する泳動条件下では、高分子量成分は、泳動距離不足か
らゲルの負極端側に圧縮されたまま残り、塩基配列決定
不能となる。
逆に、高分子量成分の分離を良くするために長時間泳動
すると、低分子量成分は正極端よシ流出してしまうので
検出できない。これは試料の浪費であシ、かつ必要以上
の放射能汚染の原因となる。これに対し本発明では、泳
動を継続しつつ、ゲル末端で泳動帯を検出するので、−
回の試行で低分子量成分から高分子量成分に至るｌ〕広
い分子量領域（１〜１０００塩基）の泳動帯１、 の検出がｉｊＪ’能となり、試料の浪費も防げた。
すると、低分子量成分は正極端よシ流出してしまうので
検出できない。これは試料の浪費であシ、かつ必要以上
の放射能汚染の原因となる。これに対し本発明では、泳
動を継続しつつ、ゲル末端で泳動帯を検出するので、−
回の試行で低分子量成分から高分子量成分に至るｌ〕広
い分子量領域（１〜１０００塩基）の泳動帯１、 の検出がｉｊＪ’能となり、試料の浪費も防げた。
３、従来法では泳動終了後、オートラジオグラムを撮っ
ていたが、本発明では泳動分離と並行して、検出′する
ため、配列決定に要する時間の短縮ができだ。
ていたが、本発明では泳動分離と並行して、検出′する
ため、配列決定に要する時間の短縮ができだ。
４、本装置では、実験者の洲線被曝を最小限に抑えられ
ると共に、放射性標識物を溶液の形で回収できるので、
廃棄物の後処理も簡便である。
ると共に、放射性標識物を溶液の形で回収できるので、
廃棄物の後処理も簡便である。
第１図は本発明の一実施例の構成を示す側断面図である
。
。
Claims (1)
- 放射性同位体による標識処理済核酸断片を、電気泳動法
により分子量分離し核酸塩基配列を決定する装置におい
て、電気泳動支持体の正極端より上部において、泳動分
離方向とは直角方向に核酸断片を含む泳動帯を連続的に
流出させ、分別回収し、これを検出、同定することを特
徴とする核酸塩基配列自動決定装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58102599A JPS59228156A (ja) | 1983-06-10 | 1983-06-10 | 核酸塩基配列自動決定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58102599A JPS59228156A (ja) | 1983-06-10 | 1983-06-10 | 核酸塩基配列自動決定装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59228156A true JPS59228156A (ja) | 1984-12-21 |
| JPH0420140B2 JPH0420140B2 (ja) | 1992-03-31 |
Family
ID=14331698
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58102599A Granted JPS59228156A (ja) | 1983-06-10 | 1983-06-10 | 核酸塩基配列自動決定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59228156A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS612077A (ja) * | 1984-03-29 | 1986-01-08 | ザ・ボ−ド・オブ・リ−ジエンツ・オブ・ザ・ユニバ−シテイ・オブ・ネブラスカ | Ｄｎａ塩基配列の決定方法およびその装置 |
| EP0356160A2 (en) * | 1988-08-24 | 1990-02-28 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Capillary device |
-
1983
- 1983-06-10 JP JP58102599A patent/JPS59228156A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS612077A (ja) * | 1984-03-29 | 1986-01-08 | ザ・ボ−ド・オブ・リ−ジエンツ・オブ・ザ・ユニバ−シテイ・オブ・ネブラスカ | Ｄｎａ塩基配列の決定方法およびその装置 |
| EP0356160A2 (en) * | 1988-08-24 | 1990-02-28 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Capillary device |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0420140B2 (ja) | 1992-03-31 |
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