JPS59224566A - 腫瘍ゲンに関連する再配列ｄｎａ断片の検出方法 - Google Patents

腫瘍ゲンに関連する再配列ｄｎａ断片の検出方法

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JPS59224566A
JPS59224566A JP59032717A JP3271784A JPS59224566A JP S59224566 A JPS59224566 A JP S59224566A JP 59032717 A JP59032717 A JP 59032717A JP 3271784 A JP3271784 A JP 3271784A JP S59224566 A JPS59224566 A JP S59224566A
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dna
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tumor gene
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JP59032717A
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フイリツプ・レダ−
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    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
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    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は腫瘍ゲンに関連する再配列ＤＮＡ断片の検出に
関し、一層詳細には、該検出に用いるプローフニ関する
。かかる再配列を検出することに原因となる構成的に再
配列した腫瘍ゲンを検出するのにも有用である。
バーキットリンパ腫や慢性の骨髄性白血病等の咄乳動物
の癌における悪性細胞の多くは、再配列或は転座染色体
が存在し、かかる染色体の一部（バーキットリンパ腫の
場合、転座腫瘍ゲンはｍｙｃ遺伝子として知られている
）はその正常な染色体位置により抗体分子の２つのタン
白質鎖の内の重い方に暗号規定する範囲に移動すること
が報告された。サイエンス、′！１８巻、９８３−９８
５（１９８２）ｌアダムス等、Ｐｒｏｅ　、Ｎａｔｌ、
Ａｅａｄ。
５ｃ１０合衆国、７９巻、６９６６−６９７０（１９８
２）。
ある種の染色体転座は、特定のヒトやネズミ（ｍｕｒｌ
ｎｅ　）　　の白血病及びリンパ腫に極めて特有のもの
であるから、該染色体転座の発生はこれらの細胞の悪性
形質転換に不可欠であると考えられる。これについては
、「ネーチャー」２９４巻、５１３−５１８（１９８１
）にフレインにより、及び「サイエンス」２１６巻、７
４９−’７５１（１９８２）にローリ−により指摘され
ている。
ヒトのバーキットリンパ腫やネズミの形質細胞腫細胞で
は、これらの転座は、免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子が
配Ｗぎれる染色体を含むと述べられてきた。事実、ヒト
では、これらの転座は免疫グロブリン遺伝子を暗号化す
るそれらの染色体セグメントを正確に含む（即ち、バー
キットリンパ腫では、相互側Ｗくは８ｑ２４及び１４ｑ
５２（Ｉｇ）（）、２ｐ１５（ｋ）又は２２（１１１（
λ）を含む）。
鳥類のＭＣ−２９ウイルス性形質転換遺伝子の同族体で
あるヒ）ｃ−ｍｙｃ遺伝子を染色体８の横じま（バンド
）ｑ２４、即ち特有のバーキット転座についてのブレー
クポイントに置き、かつｅ−ｍ）ｒｅを含有するか或は
ｅ−Ｉｎ７ｅに関連するＤＮＡ断片をバーキット細胞系
において再配置することがしばしばある。バーキットリ
ンパ腫細胞の全′Ｃが再配列を表示するわけではないが
、かかる再配列を示すものが事実悪性であることは確か
である。
本発明は、試料細胞及び正常対照細胞からのＤＮＡを固
体支持体に固定させ、該固定ＤＮＡを、悪性細胞中で染
色体再配列を受ける標ＭＤＮＡ断片で雑種形成させて該
試料細胞中に再配列が存在するか否かを決定することか
ら成る生物学的試料中の悪性細胞の同定方法から成る。
再配列されるＤＮＡ断片、即ちヒ）ｃ−ｍｙｃ断片を、
鳥類のｖ−ｍｙｃ遺伝子（２，８Ｋｂ　Ｂａｍ　Ｈ１断
片）でふるい分けされた無作為のヒトの胚肝ライブラリ
ーから誘導し、かつり胃−ンを発生させた。
ｔ５Ｋｂｓ＠ｔ１断片をサブクローン化し、適当な制限
酵素消化、ブ四ツ）　（ｂｌｏｔ　）　　雑種形成、ヘ
テロ〜複式遺伝地図作製（ｍａｐｐｉｎｇ　）によって
表示してＡｌｕシーケンスを無くし、かつＭＣ２９Ｖ　
−ｍｙｅ遺伝子の５′位へのプローグ相同によって決ま
るようなｃ−’ｍｙｅ遺伝子の５１位を表わした。
このサブクレーンをＳｓｔ　１で消化し、１．５Ｋｂ挿
入物をプラスミドシーケンスから分離した。ｔ５Ｋｂ断
片を従来方法によって３２ｐで椋鎗して雑種形成プロー
ブとして用いた。ｉ、５Ｋｂ断片を含有するプラスミド
をアメリカンタイプカルチャーコレクションに寄託し、
１９１３！１年１月５１日付でＡＴＣＣ番号３９２８６
としてＳ詔されている。
プローブを用いて悪性の細胞を検出する場合には、被検
査細胞の試料、例えは生体標本或は血液標本等を溶解し
て、ＤＮＡを抽出し、制限エンドヌクレアーゼで消化し
、アガロース中で電気泳動させて断片を分離し、かつ細
ＪＪＱ　Ｄ　Ｎ　Ａ断片を従来方法によって固体支持拐
上に固定させる。次に、固定されたＤＮＡ試料を標ＨＤ
Ｎｈ断片プローブで雑種形成検定させる。対照と同じ位
置のみならず更に再配列或は転座した位置においても同
様に雑種形成を示すそれらの試料は忍性である。
実施例 キーチャー２９８巻、４７４−６（１９８２）にルノア
ール等によって記載されるようなヒトバーキットリンパ
）庫細胞糸の１２種の異る菌株をフランス、リヨン、イ
ンターナシミナルエージェンシーフオーリサーチオンキ
ャンサーから得、かつ各菌株からのゲノムＤＮＡをネー
チャー２９４巻、５５６−５４０（１９８１）にヒータ
ー等によって説明されるように調製した。使用した細胞
系及び各細胞系における染色体転座は次の通りであった
：　ＢＬ２２（８１１４）ＢＬ！１１（８＋１４）＋Ｒ
ａｊｉ（８＋１４）ｔｓｅｒａｐｈｉｎａ（８１４）＋
ＢＬ４２（８＋１４）＋Ｌｙ６５　（８ｑ−）ｔＢＪＡ
Ｂ（無し）＋ＪＢＬ２（８＋２）＋Ｌｙ６６（８＋２）
＋ＢＬ２（８＋２２）、正常なヒトの白血球を対照とし
て用いた。
各ＤＮＡ検体を制限エンドヌクレアーゼＥｅｏＲ１で消
化し、０．８％アガロースゲル中で電気泳動にかけて断
片を分離した。分離された断片を、次に、アルカリ水溶
液で変性し、ゲル帯（５ｔｒＩｐ　）からニトロセルロ
ースろ紙に移し、ＪｏＭｏｌｅｃ、Ｂｌｏｌ。
２８巻、５０５−５１７（１９７５）、サザーン記載の
ように減圧中で焼いてろ過帯（’　ｆｌｌｔｅｒ　５ｔ
ｒ１ｐ　）の上に固定させた。次に、各検体を、ホルム
アミド４０％及び５ｘ　５ＳＣ（ＳＳＣは塩化すトリウ
ム０・１５Ｍ水溶液、クエン酸ナトリウム０．１５　Ｍ
水溶液）を含有する標識プローブの溶液で４７℃におい
て８時間雑種形成させ、Ｄ、１％ＳＤＳ　（ナトリウム
ドデシルスルフェート）を含有する０１ＳＳＣで洗浄し
、特異結合されたり或は雑種形成されたプルーブのすべ
てを除き、かつオートラジオグラフィーを行わせる。
正常のヒト対照を含む全ての検体は、プローブの再配列
しないｃ−ｍｙｃの対立コピーに相当する１　２、５　
Ｋｂ　ｇｃｏ　Ｒ１断片への雑種形成を示した。
加えて、プローブはＢＬ２２　、　Ｂｌ、５１　、Ｅ員
ｊｉ、Ｌｙ６５及びＪＢＬ２中のこの遺伝子のその他の
対立コピーの再配列を表わす別の帯を検出した。同じ細
胞系からの他のＤＮＡ検体を、制限内ヌクレアーゼＢａ
ｍＨ１がＥｅｏ　Ｒ１に１ｉｔき換えた以外は同じ方法
で処理した。この方法はＲａｊｌ、ＢＬ２２、Ｌｙ６５
（１）再配列を確認し、かつ加えて５ｅｒＩＬｐｈｉｎ
ａ及びＢＬ４２の再配列を示すものであった。
腫瘍ゲンをＤＮＡ断片の転座によって再配列しえば慢性
の骨髄性白血病の悪性細胞の場合に得られる。
１□　　４エ　憾゛） 一ノ′ 手続補正ｄ４ 昭和５９年４月１８日 特許庁長官　若　杉　和　夫　殿 事ｆｌ　（１’）表示　昭和５９年特　前箱３２７１７
　　弓補１；をする者 ’ｉＪＴ件との関係　　　　　　　　　　　特許出願人
代理人 補正の対象 補正の内容　　別紙の通り １、　明ａ書４頁下から２行の「プローグ」を「プルー
ブＪに訂正する。
２、　同７頁１行の「５×」を「５倍の」に訂正する。
３、　同同５行の「０１」を７０．　Ｉ　Ｍ　Ｊに訂正
する。
４　同量下から５行の（−Ｂａｍ　Ｈ１が」を１Ｂａｍ
Ｈ１を」に訂正する。

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）試料細Ｈ３及び正常対照細胞からのＤＮＡを固体
    支持体に固定させ、 該固定ＤＮＡを、悪性細胞中で染色体再配列を受けるＤ
    ＮＡの標識断片で雑種形成させて該試料［Ｊ中に再配列
    が存在するか否かを決定することから成る生物学的試料
    中の腫瘍ゲンに関連する再配列ＤＮＡ断片の検出方法。
  2. （２）前記細胞がヒト由来のものである特許請求の範囲
    第１項記載の方法。
  3. （３）前記悪性細胞がバーキットリンパ腫＃１７胞であ
    り、前記ＤＮＡ断片がプラスミドＡＴＣＣ９号５９２８
    ６からのｔ　５　Ｋｂ断片である特許請求の範囲第２項
    記載の方法。
JP59032717A 1983-02-25 1984-02-24 腫瘍ゲンに関連する再配列ｄｎａ断片の検出方法 Pending JPS59224566A (ja)

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US06/469,797 US4542096A (en) 1983-02-25 1983-02-25 Detecting rearranged human c-myc DNA fragments associated with oncogenes

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JP59032717A Pending JPS59224566A (ja) 1983-02-25 1984-02-24 腫瘍ゲンに関連する再配列ｄｎａ断片の検出方法

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CA1214092A (en) 1986-11-18
EP0117727A3 (en) 1988-01-20
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