JPS59222766A - 体液中のヘモグロビン定量法 - Google Patents
体液中のヘモグロビン定量法Info
- Publication number
- JPS59222766A JPS59222766A JP9567383A JP9567383A JPS59222766A JP S59222766 A JPS59222766 A JP S59222766A JP 9567383 A JP9567383 A JP 9567383A JP 9567383 A JP9567383 A JP 9567383A JP S59222766 A JPS59222766 A JP S59222766A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- solution
- hemoglobin
- added
- acetic acid
- body fluid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/725—Haemoglobin using peroxidative activity
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
１１発明の背景
ｌ上■
本発明は、血漿、血清や尿などの体液中に存在するヘモ
グロビンの改良された定邦−法に関するものである。
グロビンの改良された定邦−法に関するものである。
血液は血液循環器具等と接触した際赤血球が破壊されて
溶血する可能性がある。そこでこれら血液と直に接する
医療器具においてはできるだけ溶血を起させないことが
要求される。溶血の程度は血漿中のヘモグロビンを定量
することにより判定され、上記医療器具製品の品質評価
の指標とされる。従って本発明の定量法は医療器具製品
の品質評価等に利用される。
溶血する可能性がある。そこでこれら血液と直に接する
医療器具においてはできるだけ溶血を起させないことが
要求される。溶血の程度は血漿中のヘモグロビンを定量
することにより判定され、上記医療器具製品の品質評価
の指標とされる。従って本発明の定量法は医療器具製品
の品質評価等に利用される。
′°′−１−′１１゛よひ山 へ
体液中の微量のヘモグロビンは、ヘモグロビンのもつペ
ルオキシダーゼ様活性（過酸化水素を水と酸素に分解す
る反応を促進する作用）を測定することにより定量され
る。ペルオキシダーゼ様活性の測定には還元性発色試薬
が用いられるがこの発色試薬として従来ベンジジンや０
−トリジン等が使用されてきた。しかし、ベンジジンに
は変異原性かあり現在製造・販売が禁止されており、ま
た０−トリジンにも同様に変異原性があり、さらに発色
に時間がかかる欠点を有する。これらの問題を解決する
方法としてスタンデフγ（ｓｔａｎｄｅｆｅｒ）は３．
３′、５．５′−テトラメチルベンジジン（以下ＴＭＢ
と称することがある。）を用いる方法を提案している（
Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、 Ｖｏｌ。
ルオキシダーゼ様活性（過酸化水素を水と酸素に分解す
る反応を促進する作用）を測定することにより定量され
る。ペルオキシダーゼ様活性の測定には還元性発色試薬
が用いられるがこの発色試薬として従来ベンジジンや０
−トリジン等が使用されてきた。しかし、ベンジジンに
は変異原性かあり現在製造・販売が禁止されており、ま
た０−トリジンにも同様に変異原性があり、さらに発色
に時間がかかる欠点を有する。これらの問題を解決する
方法としてスタンデフγ（ｓｔａｎｄｅｆｅｒ）は３．
３′、５．５′−テトラメチルベンジジン（以下ＴＭＢ
と称することがある。）を用いる方法を提案している（
Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、 Ｖｏｌ。
２３、Ｎｏ、４．ｐ、７４８−７５１，１８７７）。
スタンデフγ等の方法によれば、血漿中のヘモグロビン
は以下の操作により測定される。
は以下の操作により測定される。
（Ａ）ブランクの吸光度Ｅ’ｏの測定
過酸化水素溶液に被検血漿を加えて３７°Ｃ１こ保持し
、ヘモグロビンのベルオキシターセ様ｒ、号＋！ｌを□
失格ｙせる（以下、この操作を不活化処理とｌ、Ｎう）
。これにＴＭＢ溶液を加えて室温で反ｊ５させ、酢酸を
加えた後６６０ｎｍでブランクの吸光１翌Ｅ′ｏを測定
する。
、ヘモグロビンのベルオキシターセ様ｒ、号＋！ｌを□
失格ｙせる（以下、この操作を不活化処理とｌ、Ｎう）
。これにＴＭＢ溶液を加えて室温で反ｊ５させ、酢酸を
加えた後６６０ｎｍでブランクの吸光１翌Ｅ′ｏを測定
する。
（Ｂ）スタンタートの吸光度Ｅ′ｓの４１１１定過酸化
水素溶液に被検血漿を加えて３７°Ｃで不活化処理し、
これにＴＭＢ溶液および既知濃度Ｃ′Ｓのヘモグロビン
を加え、室温で反応させ、耐二酸を加えた後６６０ｒ＋
ｍでスタンター１・゛の吸光度Ｅ′ｓを測定する。
水素溶液に被検血漿を加えて３７°Ｃで不活化処理し、
これにＴＭＢ溶液および既知濃度Ｃ′Ｓのヘモグロビン
を加え、室温で反応させ、耐二酸を加えた後６６０ｒ＋
ｍでスタンター１・゛の吸光度Ｅ′ｓを測定する。
（Ｃ）サンプルの吸光度Ｅ′ｘの測定
過酸化水素溶液を３７°Ｃ下に保持し、これ（こＴＭ
Ｂ溶液および被検血漿を加え、室温で反１庇；させ、酢
酸を加えた後６６０ｎｍでサンプルの吸光１Ｊ５Ｅ’ｘ
を測定する。被検血漿中のヘモグロビン濃度Ｃ′ｘを次
の式から算出する。
Ｂ溶液および被検血漿を加え、室温で反１庇；させ、酢
酸を加えた後６６０ｎｍでサンプルの吸光１Ｊ５Ｅ’ｘ
を測定する。被検血漿中のヘモグロビン濃度Ｃ′ｘを次
の式から算出する。
］二記のスタンデフγ等の方法は、過酸化水素溶液に被
検血漿を加えて３７°Ｃで不活化処理を行う点に特徴を
有する。この操作を行うと被検血漿中のヘモグロビンは
ペルオキシダーゼ様活性を失うため、これに既知量のヘ
モグロビンを加えることによって被検血漿と等しい発色
聞書活性をもぢさらに既知量のヘモグロビンを含むスタ
ンダードが得られる。
検血漿を加えて３７°Ｃで不活化処理を行う点に特徴を
有する。この操作を行うと被検血漿中のヘモグロビンは
ペルオキシダーゼ様活性を失うため、これに既知量のヘ
モグロビンを加えることによって被検血漿と等しい発色
聞書活性をもぢさらに既知量のヘモグロビンを含むスタ
ンダードが得られる。
スタンデフγ等の方法は安全な発色試薬を使用する点で
１ｐれているが、反面、血漿のベルオキシターゼ阻害作
用の補正に不活化処理を採用しているため、操作が複雑
で所要時間が長く、誤差の入り込む機会が多い。また後
に詳述する如く、ベルオキシダーセ阻害作用の補正法が
不完全で測定結果が期待される値よりやや高い値を示す
という欠点を有する。さらに、スタンデフ７等は、不活
化処理を行なうブランクとスタンタートには０．５％の
過酸化水素溶液を使用し、不活化処理を行なわないサン
プルには０１．１％の過酸化水素溶液を使用しており、
これは不活化処理によって過酸化水素が分解されその濃
度が低下することを考虜して不活化処理を行なわないサ
ンプルの過酸化水素の濃度を低くしたものと思われる。
１ｐれているが、反面、血漿のベルオキシターゼ阻害作
用の補正に不活化処理を採用しているため、操作が複雑
で所要時間が長く、誤差の入り込む機会が多い。また後
に詳述する如く、ベルオキシダーセ阻害作用の補正法が
不完全で測定結果が期待される値よりやや高い値を示す
という欠点を有する。さらに、スタンデフ７等は、不活
化処理を行なうブランクとスタンタートには０．５％の
過酸化水素溶液を使用し、不活化処理を行なわないサン
プルには０１．１％の過酸化水素溶液を使用しており、
これは不活化処理によって過酸化水素が分解されその濃
度が低下することを考虜して不活化処理を行なわないサ
ンプルの過酸化水素の濃度を低くしたものと思われる。
ところが、検体中の過酸化水素濃度が変化すると、ＴＭ
Ｂの発色は複雑に変化し、過酸化水素の分解の程度によ
って測定結果が真の値よりも高くなったり低くなったり
する可能性がある。
Ｂの発色は複雑に変化し、過酸化水素の分解の程度によ
って測定結果が真の値よりも高くなったり低くなったり
する可能性がある。
Ｉｌ、発明の目的
そこで本発明の目的は上記の欠点のない体液中のへモグ
ロヒン定量法を提供することにある。
ロヒン定量法を提供することにある。
即ち、本発明は、安全な発色試薬を用いる体液中のヘモ
グロビン定量法を提供することを目的とする。本発明は
、さらに不活化処理を必要とせす、操作が簡便な体液中
のへモグロヒン定準法を提供することを目的とする。
グロビン定量法を提供することを目的とする。本発明は
、さらに不活化処理を必要とせす、操作が簡便な体液中
のへモグロヒン定準法を提供することを目的とする。
本発明はさらに、正確な測定値を与える体液中のヘモグ
ロビン定量法を提供することを目的とする。
ロビン定量法を提供することを目的とする。
」−記の目的を達成するために、本発明は以下の構成か
らなる。
らなる。
（１）３．３′、５．５’−テトラメチルベンジジンお
よび過酸化水素を含む溶液に微量の被検体液（Ｒ容量部
）を加え、−・定時間放置後反応停止液を加え、該溶液
の吸光度Ｅｘを測定し、他方、３．３′、５．５′−テ
トラメチルベンジジンおよび過酸化水素を含む溶液に微
量の被検体液（Ｒ容量部）および既知濃度Ｃｓを有する
ヘモグロビン標べ１液（Ｒ容量部）を加え、一定時間放
置後反応停止前を加え、該溶液の吸光度Ｅｓを測定し、
次の式から被検体液中のヘモグロビン濃度ＣＸを９出す
ることを特徴とする体液中のヘモグロビンの定量法。
よび過酸化水素を含む溶液に微量の被検体液（Ｒ容量部
）を加え、−・定時間放置後反応停止液を加え、該溶液
の吸光度Ｅｘを測定し、他方、３．３′、５．５′−テ
トラメチルベンジジンおよび過酸化水素を含む溶液に微
量の被検体液（Ｒ容量部）および既知濃度Ｃｓを有する
ヘモグロビン標べ１液（Ｒ容量部）を加え、一定時間放
置後反応停止前を加え、該溶液の吸光度Ｅｓを測定し、
次の式から被検体液中のヘモグロビン濃度ＣＸを９出す
ることを特徴とする体液中のヘモグロビンの定量法。
Ｅ ｓ Ｅ ｘ
（２）前記３．３′、５．５′−テトラメチルベンジジ
ンおよび過酸化水素を含む溶液が酢酸の溶液であり、前
記反応停止液が酢酸溶液である第１ ＪＪ４記載の体液
中のヘモグロビン定量法。
ンおよび過酸化水素を含む溶液が酢酸の溶液であり、前
記反応停止液が酢酸溶液である第１ ＪＪ４記載の体液
中のヘモグロビン定量法。
（３）吸光度の測定波長が６６０ｎｍである第１項また
は第２項記載の体液中のへモグロヒン定ｈｔ法。
は第２項記載の体液中のへモグロヒン定ｈｔ法。
■３発明の詳細な説明
血漿等の体液にはヘモグロビンのベルオキシターゼ様活
性を阻害する作用があるため、ヘモグロビン水溶液でつ
くった検量線を体液中のヘモグロビン足場に適用するこ
とはできない。そこで本発明の方法は、既知濃度のヘモ
グロビンを加えた被検体液とこれを加えなかった被検体
液との吸光度の差から被検体液中のヘモグロビンを定ｈ
；する。第１図に本発明の方法の原理を説明するための
模式図を示す。ヘモグロビン水溶液を用いて検量線を作
成すると、第１図の破線（１）のようになるが、体液中
では体液のペルオキシダーゼ活性阻害作用のため、この
直線より傾きの小さな実線（２）で示すような検量線に
なる。
性を阻害する作用があるため、ヘモグロビン水溶液でつ
くった検量線を体液中のヘモグロビン足場に適用するこ
とはできない。そこで本発明の方法は、既知濃度のヘモ
グロビンを加えた被検体液とこれを加えなかった被検体
液との吸光度の差から被検体液中のヘモグロビンを定ｈ
；する。第１図に本発明の方法の原理を説明するための
模式図を示す。ヘモグロビン水溶液を用いて検量線を作
成すると、第１図の破線（１）のようになるが、体液中
では体液のペルオキシダーゼ活性阻害作用のため、この
直線より傾きの小さな実線（２）で示すような検量線に
なる。
いま、微量の被検体液を過酸化水素溶液およびＴＭＢ溶
液と反応させた場合の吸光度をＥｘ、微量の被検体液に
既知濃度Ｃｓを有するヘモグロビン椋準溶液を加えたも
のと過酸化水素溶液およびＴＭＢ溶液とを反応させたも
のの吸光度をＥｓとすると、第１図から明らかなように
、検量線の傾これより被検体液中のヘモグロビン濃度Ｃ
ｘは、次の式で求められる。
液と反応させた場合の吸光度をＥｘ、微量の被検体液に
既知濃度Ｃｓを有するヘモグロビン椋準溶液を加えたも
のと過酸化水素溶液およびＴＭＢ溶液とを反応させたも
のの吸光度をＥｓとすると、第１図から明らかなように
、検量線の傾これより被検体液中のヘモグロビン濃度Ｃ
ｘは、次の式で求められる。
ｓ
５−Ｅｘ
尚、被検体液の吸光度Ｅｘを測定する際に、厳密にいえ
ば次に用いるヘモグロビン標準液と同量のブランク（例
えば水）を試料に加えるべきであるが、この量は、微量
であり、ＴＭＢ溶液、過酸化水素溶液、反応停止液等信
の試薬の量に比べて極めて小さいので上記のブランクを
加えなくてもＥｘの測定結果に実質的な影響を与えない
。
ば次に用いるヘモグロビン標準液と同量のブランク（例
えば水）を試料に加えるべきであるが、この量は、微量
であり、ＴＭＢ溶液、過酸化水素溶液、反応停止液等信
の試薬の量に比べて極めて小さいので上記のブランクを
加えなくてもＥｘの測定結果に実質的な影響を与えない
。
本発明の方法を実施するには、先ず被検体液の吸光度Ｅ
ｘを測定する。即ち、ＴＭＢの酢酸溶液に過酸化水素の
水溶液を加え、これに微量の被検体液（Ｒ容量部）を加
え、室温で一定時間放置した後酢酸溶液のような反応停
止液を加え６６０ｎｍで被検体液の吸光度Ｅｘを測定す
る。次に標準液の吸光度Ｅｓを測定する。即ち、ＴＭＢ
の酢酸溶液に過酸化水素の水溶液を加え、この溶液に微
１ｌｉ−の被検体液（Ｒ容量部）および既知濃度Ｃｓを
有するヘモグロビン標準液（Ｒ容量部）を加え、室温に
一定時間放置した後酢酸のような反応停止液を加え、６
６０ｎｍで標べ１液の吸光度Ｅｓを４１１１定する。得
られた測定値ＥｘおよびＥｓおよびヘモグロビン標準液
の既知濃度Ｃｓを＋８１１記式に代入して被検体液中の
ヘモグロビン濃度を算出する。
ｘを測定する。即ち、ＴＭＢの酢酸溶液に過酸化水素の
水溶液を加え、これに微量の被検体液（Ｒ容量部）を加
え、室温で一定時間放置した後酢酸溶液のような反応停
止液を加え６６０ｎｍで被検体液の吸光度Ｅｘを測定す
る。次に標準液の吸光度Ｅｓを測定する。即ち、ＴＭＢ
の酢酸溶液に過酸化水素の水溶液を加え、この溶液に微
１ｌｉ−の被検体液（Ｒ容量部）および既知濃度Ｃｓを
有するヘモグロビン標準液（Ｒ容量部）を加え、室温に
一定時間放置した後酢酸のような反応停止液を加え、６
６０ｎｍで標べ１液の吸光度Ｅｓを４１１１定する。得
られた測定値ＥｘおよびＥｓおよびヘモグロビン標準液
の既知濃度Ｃｓを＋８１１記式に代入して被検体液中の
ヘモグロビン濃度を算出する。
本発明の定量法が適用される検体としては、血漿、血清
、リンパ液、腹水、尿等の体液があげられる。
、リンパ液、腹水、尿等の体液があげられる。
次に実施例を示して本発明の方法をさらに具体的に説明
する。
する。
実施例
ヘパリンを添加した生血を生理食塩水で希釈してヘマト
リット値を２０％に調整し、３又ずつ塩化ビニル樹脂製
血液保存バッグに分注した。
リット値を２０％に調整し、３又ずつ塩化ビニル樹脂製
血液保存バッグに分注した。
血液保存バッグ全体を３７°Ｃの恒温水槽内に沈め、バ
ッグに接続しであるチューブにより血液循環回路を形成
し、この回路中に供試ポンプを接続した。回路の全長は
２３０ｃｍとした。
ッグに接続しであるチューブにより血液循環回路を形成
し、この回路中に供試ポンプを接続した。回路の全長は
２３０ｃｍとした。
またポンプチューブの部分は供試ポンプに適合するもの
を使用した。１ｍ液が３７°Ｃに達した時点で供試ポン
プの運転を開始した。流速は２００ｍ１ ／ ｍ ｉ
ｎとした。
を使用した。１ｍ液が３７°Ｃに達した時点で供試ポン
プの運転を開始した。流速は２００ｍ１ ／ ｍ ｉ
ｎとした。
ポンプ運転開始直前、１時間後、３時間後、６時間後に
それぞれ血液回路中に設けられたサンプリングポートよ
り採血し、１２００Ｇ、１ｏ分間遠心分離して得た血漿
中のヘモグロビン量を下記の如くして定量した。
それぞれ血液回路中に設けられたサンプリングポートよ
り採血し、１２００Ｇ、１ｏ分間遠心分離して得た血漿
中のヘモグロビン量を下記の如くして定量した。
ＴＭＢ ｌ ｇを９０％（Ｖ／Ｖ）酢酸１００ｍｊ２に
溶かす。このＴＭＢ溶液１文に０．５％過酸化水素水溶
液１ｍ文を加え次いで被検血漿２０川文を加えた。この
溶液を室温で２０分間放置し、１０％（Ｖ／Ｖ）酢酸１
０ｍ文を加えた後、６６０ｎｍで吸光度を測定した。他
方ＴＭＢ溶液１ｍ文に０．５％過酸化水素水溶液１１１
１ｆＬを加えた溶液に被検血漿２０ｐＬ文およびヘモグ
ロビン濃度２０ｍ立／ｄ文のヘモグロビン標準水溶液２
０用文を加え、室温に２０分間放置した後ｉｏ％（Ｖ／
Ｖ）酢酸１０ｍＭを加え、６６０ｎｍで吸光度を測定し
た。上記の４１１１定で得られた吸光度から被検面ｙ↓
中のヘモグロビン濃度を算出した。
溶かす。このＴＭＢ溶液１文に０．５％過酸化水素水溶
液１ｍ文を加え次いで被検血漿２０川文を加えた。この
溶液を室温で２０分間放置し、１０％（Ｖ／Ｖ）酢酸１
０ｍ文を加えた後、６６０ｎｍで吸光度を測定した。他
方ＴＭＢ溶液１ｍ文に０．５％過酸化水素水溶液１１１
１ｆＬを加えた溶液に被検血漿２０ｐＬ文およびヘモグ
ロビン濃度２０ｍ立／ｄ文のヘモグロビン標準水溶液２
０用文を加え、室温に２０分間放置した後ｉｏ％（Ｖ／
Ｖ）酢酸１０ｍＭを加え、６６０ｎｍで吸光度を測定し
た。上記の４１１１定で得られた吸光度から被検面ｙ↓
中のヘモグロビン濃度を算出した。
コントａ−ルとして血液循環を行なわず恒温水槽内に沈
めただけの血液保存バッグからも同様に採血して血漿ヘ
モグロビンを定量した。
めただけの血液保存バッグからも同様に採血して血漿ヘ
モグロビンを定量した。
３種類のポンプＡ、Ｂ、Ｃについて同時に行なった測定
の結果を表１に示す。表１から、ポンプＡが最も赤血球
の損傷が少なく、次いでポンプＢであり、ポンプＣはか
なり損傷を与えており、医療器具製品としての品質が劣
っていることを示している。
の結果を表１に示す。表１から、ポンプＡが最も赤血球
の損傷が少なく、次いでポンプＢであり、ポンプＣはか
なり損傷を与えており、医療器具製品としての品質が劣
っていることを示している。
表１
血漿ヘモグロビン定量結果
（単位ｍ ｇ ／ ｄす）
ｒｖ 発明の作用効果
本発明の方法によれば、第１に、安全な発色試薬を用い
る体液中のヘモグロビン定量法が提供される。即ち、本
発明においては発色試薬として３．３′、５．５′−テ
トラメチルベンジジンを使用するが、このものには変異
原性等の毒性がなく、人体に対して安全である。
る体液中のヘモグロビン定量法が提供される。即ち、本
発明においては発色試薬として３．３′、５．５′−テ
トラメチルベンジジンを使用するが、このものには変異
原性等の毒性がなく、人体に対して安全である。
本発明の方法によれば、第２に、正確な体液中のヘモグ
ロビン定徹法が提供される。
ロビン定徹法が提供される。
即ち、ヘモグロビンを含まない同一の血漿に既知液のヘ
モグロビンを加えてつくったサンプルを本発明の方法と
、スタンデフγ等の従来法とでそれぞれ定φし、その結
果を第２図に示す。第２図は、横軸に、加えたヘモグロ
ビン隈をとり、縦軸にｆｌ１１定したヘモグロビン量を
とったものである。
モグロビンを加えてつくったサンプルを本発明の方法と
、スタンデフγ等の従来法とでそれぞれ定φし、その結
果を第２図に示す。第２図は、横軸に、加えたヘモグロ
ビン隈をとり、縦軸にｆｌ１１定したヘモグロビン量を
とったものである。
定早法が完全であれば傾きｌの直線となるはすである。
本発明の定、１法においては傾きが略ｌの直線（３）と
なったのに対して、スタンデフ７等の方法においては傾
き約１．２の直ａ（４）となり、２０％もの高価を示し
た。
なったのに対して、スタンデフ７等の方法においては傾
き約１．２の直ａ（４）となり、２０％もの高価を示し
た。
この結果からも、本発明の定量法は、血漿のもつペルオ
キシダーゼ様活性阻害の補正に関してスタンデファ等の
方法より優れており、より正確な定量法であることが明
らかであろう。
キシダーゼ様活性阻害の補正に関してスタンデファ等の
方法より優れており、より正確な定量法であることが明
らかであろう。
さらに本発明によれば、第３に、操作が簡便な体液中の
ヘモグロビンの定量法が提供される。
ヘモグロビンの定量法が提供される。
本発明の方法においては不活化処理を行なわず、またブ
ランクのような補正用の検体を必要としないので測定操
作がより単純化され、所要時間も短縮されるので、より
迅速な測定が可能である。
ランクのような補正用の検体を必要としないので測定操
作がより単純化され、所要時間も短縮されるので、より
迅速な測定が可能である。
第１図は、本発明の体液中のヘモグロビン定量法の原理
を示す模式図である。 第２図は、血漿ヘモグロビンの定置結果を示すグラフで
ある。
を示す模式図である。 第２図は、血漿ヘモグロビンの定置結果を示すグラフで
ある。
Claims (3)
- （１）３．３′、５．５′−テトラメチルベンジジンお
よび過酸化水素を含む溶液に微量の被検体液（Ｒ容量部
）を加え、一定時間放置後反応停止液を加え、該溶液の
吸光度Ｅｘを測定し、他方、３．３′、５．５’−テト
ラメチルベンジジンおよび過酸化水素を含む溶液に微量
の被検体液（Ｒ容量部）および既知濃度Ｃｓを有するヘ
モグロビン標準液（Ｒ容量部）を加え、一定時間放置後
反応停止液を加え、該溶液の吸光度Ｅｓを測定し、次の
式から被検体液中のヘモグロビン濃度ＣＸを算出するこ
とを特徴とする体液中のヘモグロビン定量方法。 ５−Ｅｘ - （２）前記３．３′、５．５′−テトラメチルベンジジ
ンおよび過酸化水素を含む溶液が酢酸の溶液であり、前
記反応停止液が酢酸溶液である特許請求の範囲第１項記
載の体液中のヘモグロビン定量法。 - （３）吸光度の測定波長が６６０ｎｍである特許請求の
範囲第１項または第２項記載の体液中のヘモグロビン定
量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9567383A JPS59222766A (ja) | 1983-06-01 | 1983-06-01 | 体液中のヘモグロビン定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9567383A JPS59222766A (ja) | 1983-06-01 | 1983-06-01 | 体液中のヘモグロビン定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59222766A true JPS59222766A (ja) | 1984-12-14 |
| JPH0129424B2 JPH0129424B2 (ja) | 1989-06-09 |
Family
ID=14144017
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9567383A Granted JPS59222766A (ja) | 1983-06-01 | 1983-06-01 | 体液中のヘモグロビン定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59222766A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5427951A (en) * | 1990-12-14 | 1995-06-27 | British Technology Group Limited | Diagnostic test for determining the antioxidant status of a sample |
| WO2002021142A1 (fr) * | 2000-09-07 | 2002-03-14 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Procede de quantification de l'hemoglobine totale et de la glycohemoglobine |
| US9170265B2 (en) | 2008-11-13 | 2015-10-27 | Mode Diagnostics Limited | Electrode, electrochemical sensor and apparatus, and methods for operating the same |
| CN106841190A (zh) * | 2017-03-22 | 2017-06-13 | 西北师范大学 | 以TMB为显色剂的Ag+可视化检测方法 |
-
1983
- 1983-06-01 JP JP9567383A patent/JPS59222766A/ja active Granted
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5427951A (en) * | 1990-12-14 | 1995-06-27 | British Technology Group Limited | Diagnostic test for determining the antioxidant status of a sample |
| WO2002021142A1 (fr) * | 2000-09-07 | 2002-03-14 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Procede de quantification de l'hemoglobine totale et de la glycohemoglobine |
| US9170265B2 (en) | 2008-11-13 | 2015-10-27 | Mode Diagnostics Limited | Electrode, electrochemical sensor and apparatus, and methods for operating the same |
| CN106841190A (zh) * | 2017-03-22 | 2017-06-13 | 西北师范大学 | 以TMB为显色剂的Ag+可视化检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0129424B2 (ja) | 1989-06-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Foster et al. | A single-reagent manual method for directly determining urea nitrogen in serum | |
| Beach et al. | An enzymatic method for glucose determination in body fluids | |
| Fales et al. | Some applications and limitations of the enzymic, reducing (Somogyi), and anthrone methods for estimating sugars | |
| Koepsell et al. | Microdetermination of pyruvic and α-ketoglutaric acids | |
| Gloster et al. | Observations on an enzymic method for the estimation of pyruvate in blood | |
| Doumas et al. | Measurement of direct bilirubin by use of bilirubin oxidase. | |
| Ellison et al. | Buffer capacities of human blood and plasma | |
| CN104714040B (zh) | 血清中葡萄糖氧化酶双试剂测定方法 | |
| US3890099A (en) | Colorimetric assay for urea | |
| Stewart | Evaluation of a reagent-strip method for glucose in whole blood, as compared with a hexokinase method. | |
| JPS59222766A (ja) | 体液中のヘモグロビン定量法 | |
| US3801466A (en) | Uric acid assay and reagents therefor | |
| CN111289501A (zh) | 一种基于间接比色法检测no的试剂盒及其制备使用方法 | |
| US4131429A (en) | Urea assay | |
| US4211531A (en) | Colorimetric cholesterol assay | |
| Levinson | Kinetic centrifugal analyzer and manual determination of serum urea nitrogen, with use of o-phthaldialdehyde reagent. | |
| US4095948A (en) | Determination of uric acid | |
| CN108169155B (zh) | 一种血液样本分析测试系统 | |
| CN107941722B (zh) | 血液样本分析测试系统 | |
| McGann et al. | The effect of hemolysis on the van den Bergh reaction for serum bilirubin | |
| Brunton et al. | An assessment of a reflectance meter system for measurement of plasma or blood glucose in the clinic or side ward | |
| Morin et al. | An improved dimethylaminobenzaldehyde procedure for determining urea | |
| Seal et al. | Comparison of Commercially Available Radial Immunodiffusion Kits for the Determination of Serum α 1-Antitrypsin Concentrations | |
| Meites et al. | Two ultramicro-scale methods for plasma uric acid analysis with uricase | |
| Ruiz et al. | Determination of plasma lipid hydroperoxides by an NADPH/NADP+ coupled enzyme reaction system. Evaluation of a method |