JPS59198970A - ハイブリドーマ細胞系 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （発明の分野） 本発明はハイブリッド細胞系および抗体製造における該
細胞系の利用に関するものである。より詳細には、本発
明はヒトハイブリドーマの生成およびそれによるモノク
ローナル抗体の産生に関するものである。

（従来技術） １９７５年にケーラー（Ｋ６ｈｌｅｒ　）とミルスタイ
ン（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ　）はモノクローナル抗体を分泌
するマウスハイブリドーマ細胞系を産出する方法を確立
した（ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ　）、２５６．４９５
　（１９７５）　）。マウスハイブリドーマ細胞系の研
究は急速に進歩したが、その理由は融合させる相手とな
る誘発性マウスプラズマ細胞腫（１ｎｄｕｃｉｂｌｅ　
ｍｏｕｓｅ　ｐｌａｓｍａｃｙ−ｔｒ＞ｍａｓ　　）の
入手が容易であることに少なくともある程度は起因する
ものである。容易に入手可能なマウス骨髄腫は生体内（
ｉｎ　　ｖｉｖｏ　）で自由自在に誘発させ、試験管内
（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　）で増殖させることができる。例
えば、米国特許第４，１７２，１２４号、同第４，１９
６，２６５号、同第４．３６１，５０９号、同第１１，
３６１，５４９刊および同第４．３６１．．５５０号；
ケーラー他、ｌ＞ｕ　ｒ　Ｊ、Ｉｒｒｍｕｎｏ　Ｉ　０
．６．５　］　］　（１９７６）；ミルスタイン他、土
イチャー、２６６．５５０　（１，９７７）　；コブロ
ウスキ（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ　）他、Ｐｒｏｃ、　Ｎａ
ｔｌ、　Ａｃａｄ。

５ｃｉ０．７４．２９８５　（１９７７）：ウエルシュ
（Ｗｅｌｓｈ　　）、ネイチャー、２５６．４９５（１
９７７）　；メルチャーズ（Ｍｅｌｃｈｅｒｓ　）他線
［リンパ球ハイブリドーマ。微生物学および免疫学にお
ける最近の話題（１，ｙｍｐｈｏｃｙｔｅＨｙｂｒｉｄ
ｏｍａｓ、Ｃｕｒｒｅｎｔ　　Ｔｏｐｉｃｓ　　ｉｎ　
　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄ　　Ｔｍｎｕｎｏｌ
ｏｇｙ　）　Ｊ、第８１巻、スプリンガ−−７ｆｆ−７
ラーク（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　−Ｖｅｒｌａｇ　）、ベル
リン、１９７８を参照。

モノクローナル抗体に関する研究の多くはヒトー′マウ
スハイブリドーマの産出に係わるものであった。例えは
、クローチェ（Ｃｒｏｃｅ　）他、Ｐｒｏｃ、　Ｎａ１
ｌ、　Ａｃａｄ　　５ｃｉ−１７５，３４１６（１９７
９）；レイン（Ｌａｎｅ　）他、ユニー沖世工、１５５
．３３３　（１９８２）　：およびピッカリング（Ｐｉ
ｃｋｅｒｉｎｇ　）他、Ｊ、Ｔｍｍｔ−＋ｎｏ１０．１
２８．４０６　（１９８２）を参照。ヒトモノクローナ
ル抗体を分泌する種間ハイブリドーマに関する主要な問
題は安定性の欠如である。

このようなハイブリドーマは特にヒト染色体を失う傾向
を有している。この件に関しては、クローチェ他、Ｂｕ
ｒ、　Ｊ、　Ｉｍｒｒｒｕｎｏｌ、、１０．４８６　（
１９８０）　全参照。マウス−マウスハイブリドーマに
おいて認められるように、種内細胞ハイブリッドはこの
ような不安定性を示さない。

ヒト−ヒトハイブリドーマ細胞系の開発は遅れていたが
、その理由は主として適当なヒト骨髄腫細胞系が入手困
難なためである。

１９６８年以降報告された新規のヒト骨髄腫細胞系は１
種のみである。カブラス（Ｋａｐｒａｓ　）　　−他、
サイエフ　ス（５ｃｉｅｎｃｅ　）、２１６．９９７（
１９８２）参照。

しかしながら、ヒト−ヒトハイブリドーマに関する研究
が全く行たわわなかったという訳ではない。例えば、オ
ルソン（０１ｓｓｏｎ）　他、Ｐｒｏｃ、Ｎａ１１．Ａ
ｃａｄ、　５ｃｉ０．７７．５４２９　（１９８０）、
およびクローチェ他、ネイチャー、２８８．４８８　（
１９８０）はヒトモノクローナル抗体を分泌するヒトハ
イブリドーマの生成を報告しＪこ。使用さねたヒト骨髄
腫細胞ばそわぞわヒトＢ細胞系Ｕ　２６６およびＧＭ１
５００の突然変異体であった。また、英国特許明細書Ｇ
Ｂ２．０８６，９３７　Ａを参照。さらに、ＡＲＨ−７
７プラズマ細胞白血病由来系の高速増殖突然変異体［基
づくヒト−ヒトハイブリドーマ系がエドワーズ（Ｅｄｗ
ａｒｄｓ　）他、Ｅｕｒ、　Ｊ、　ｈｒｍｕｎｏｌ、。

１２．６４１　（１９８２）匠記瞳さねた。

このように、より効率的にヒトハイブリドーマ細胞系を
産出するために、リンパ球、特にヒトリンパ球と融合す
ることのできるヒト骨髄腫細胞系が要望さねている。

（発明の目的） 本発明の目的は上記要望に鑑み、連続的に増殖する、す
なわち永続する新規なヒト骨髄腫由来細胞系を提供する
ことにある。

また本発明の目的は、新規な永続するヒト骨髄腫由来細
胞系のヒポキサンチン燐酸リボシル基転移酵素欠損突然
変異体であってリンパ球とハイブリッド化させることの
できる突然変異体を提供することにある。

さらに本発明の目的は、リンパ球および骨髄腫由来細胞
からハイブリッド細胞系を産出する改良された方法を提
供することにある。

また本発明の目的は、ヒト骨髄腫由来細胞系の細胞を、
免疫源を感作させたリンパ球に融合することによって得
られるノ・イブリッド細胞系を提供することにある。

さらに本発明の目的は、ノ＼イブリッド細胞系によるモ
ノクローナル抗体の製造法を提供することにある。

また本発明の目的は、リンパ球をトランスフェクション
するための改良された方法を提供することにある。

とわらの目的および他の目的は本明細書および特許請求
の範囲を考慮することにより当業者にとって明らかとな
るであろう。

（発明の構成および主たる作用） 本発明は、アメリカ模式菌培養収集（ｔｈｅＡｍｅｒｉ
ｃａｎ　　Ｔｙｐｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　　Ｃｏ１１ｅ
ｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、１２３０１　Ｐａｒｋｌａｗ
ｎ　Ｉ）ｒｉｖｅ　１Ｒｎｃｋｖｉｌｌｅ、　Ｍａｒｙ
　−１ａｎｄ　）　　に寄託さｉｌだＡＴＣＣ登録番号
ＣＲ，Ｌ−８２２０を・有する、はぼ純粋なヒト骨髄腫
由来細胞系を提供するものである。

また本発明は、Ａ　’ｒ’　ＣＣ登録番号ＣＲ，Ｌ　−
８２２０を有するヒト骨髄腫由来細胞系の娘系（ｄａｕ
ｇｈｔｅｒ　１ｉｎｅ　）を提供するものである。

なお本発明において、ＡＴＣＣ登録番号ＣＲＬ−８２２
０を有する細胞系から突然変異もしくはハイブリッド化
等によって派生する細胞系は前者の娘系と考えらねる。

本発明の一天施態様は突然変異細胞系を提供するもので
あり、この突然変異細胞系はリンパ球とハイブリッド化
することが可能であッテ、ＡＴＣＣ登録番号ＣＲＬ−８
２２０を有する細胞系を維持できないような条件下でも
増殖可能であるような該細胞系とは異なった特性を少な
くとも１つ有している。このような突然変異細胞系にお
いてヒポキサンチン燐酸リボシル基転移酵素を欠損させ
ることも可能である。このような細胞系の一例はアメリ
カ模式菌培養収集に供託された、ＡＴＣＣ登録番号ＣＲ
Ｌ−８２２１を有する細胞系である。

本発明の別の実施態様においては、免疫源を感作させた
リンパ球に突然変異細胞系を融合させて得た細胞から生
成されたハイブリッド細胞系が提供される。前記突然変
異細胞系はＡＴＣＣ登録番号ＣＲＩ、−８２２０を有す
る細胞系に由来し、リンパ球とハイブリッド化すること
が可能であり、ＡＴＣＣ登録番号ＣＩ’（Ｌ−８２２０
を有する細胞系を維持できないような条件下でも増殖可
能であるような該細胞系とは異なった特性を少な（とも
１つ有している。このような突然変異細胞系においてヒ
ボキサンチン燐酸リボシル基転移酵素を欠損させること
も可能である。このような細胞系の一例はアメリカ模式
菌培養収集に寄託さ牙］た、ＡＴＣＣ登録番号ＣＲ，Ｌ
−８２２１を有する細胞系である。好ま（〜い実施態様
において前記リンパ球はヒトリンパ球である。

本発明のもう１つの実施態様においては、好ましくはヒ
トリンパ球であるリンパ球に前記ハイブリッド細胞系の
細胞が融合される。

本発明のまた別の実施態様においては前記）・イブリッ
ド細胞系の細胞を、ＡＴＣＣ登録番号ＣＲ，Ｌ　−８２
２０を有する細胞系と異なる少なくとも１つの特性を回
復するように逆選択（ｂａｃｋ　−５ｅｌｅｃｔ　）　
している。前記少な（とも１つの特性はヒポキサンチン
燐酸リボシル基転移酵素欠損性とすることができる。こ
のようＫして得ら」する逆選択細胞から突然変異体を派
出し、好ましくはヒトリンパ球であるリンパ球と融合さ
せることもできる。

さらに本発明は、リンパ球を骨髄腫由来細胞に融合させ
て抗体産生融合細胞ハイブリッドを得ることからなるハ
イブリッド細胞系の製造法において、Ａ　Ｔ　ＣＣ登録
番号ＣＲＬ　−８２２０を有するヒト骨髄腫由来細胞系
に由来する細胞を細胞突然変異促進手段で処理した後、
この処理された細胞を前記骨髄腫由来細胞系と異なる少
なくとも１つの特性を有する細胞を同定する適当な試薬
で選択することによって得た、突然変異細胞系であって
ＡＴＣＣ登録番号ＣＩ（Ｌ−８２２０を有する細胞系の
維持が不可能な条件下でも増殖可能である永続骨髄腫由
来細胞系に由来するヒト骨髄腫由来細胞を用いることを
特徴とする改良さねた方法を提供する。本発明の一実施
態様において、このような突然変異細胞系はヒポキサン
チン燐酸リボシル基転移酵素を欠損したものである。本
発明の別の実施態様において前記突然変異細胞系は、Ａ
ＴＣＣ登録番号ＣＲＬ−８２２１を有するヒポキサンチ
ン燐酸リボシル基転移酵素欠損細胞系である。本発明の
一実施態様において前記細胞突然変異促進手段はエチル
メタンスルフォン酸塩であり、前記選択用の試薬は６−
チオグアニンである。好ましい実施態様において前記リ
ンパ球はヒトリンパ球である。

さらに本発明は、ＡＴＣＣ登録番号ＣＲＬ−８２２０’
ｉ有する細胞系に由来し、リンパ球とのハイブリッド化
が可能であり、前記細胞系の維持が不可能な条件下にお
いても増殖が可能な前記細胞系と異なる少なくとも１つ
の特性を有する突然変異細胞系の細胞を、免疫源を感作
させたリンパ球に、このような細胞の融合促進手段の存
在下において融合せしめることからなるハイブリッド細
胞製造法を提供する。とのような突然変異細胞系はＡＴ
ＣＣ登録番号Ｃ４Ｌ−８２２１を有する細胞系等、ヒボ
キザンチン燐酸すボシル基転移酵素欠損細胞系とするこ
とができる。本発明の一実施態様において、前記融合促
進手段はポリエチレングリコールである。本発明の別の
実施態様において、前記リンパ球は試験管内で感作“さ
れる。好ましい実施態様において、前記リンパ球はヒト
ＩＪンバ球である。他の実施態様においては前記ハイブ
リッド細胞系の細胞を、免疫源を感作させたリンパ球に
、とのような細胞の融２合促進手段の存在下において融
合させることにより、ハイブリッド細胞系が産出さＪす
る。

また本発明は、前記ハイブリッド細胞系の細胞を培地中
で培養した後に該細胞の産生じた抗体を該培地から分離
することからなる抗体製造法を提供する。

さらに本発明はリンパ球のトランスフェクション法にお
いて、ＡＴＣＣ登録番号ＣＲ，Ｌ−８２２０を有する細
胞系の細胞に由来するデオキシリボ核酸を使用すること
を特徴とする改良さ、ｌまた方法を提供する。

また本発明は、前記ハイブリッド細胞系により製造され
るモノクローナル抗体を提供する。

（発明の効果） Ａ　Ｔ　ＣＣ登録番号ＣＲＴ、８２２０を有するヒト骨
髄腫細胞は抗体を産生ずることのできるハイブリッド細
胞系もしくはハイブリドーマを生成す右上で有用である
。一方、こうして得られるハイブリッド細胞系はリンパ
球の増殖、制御および分化；リンパ球に表現される遺伝
子座の決定；および新生物変性の生化学的要因の検査等
の研究モデルとして有用である。このようなハイブリッ
ド細胞系から産生されるモノクローナル抗体は実験的お
よび臨床的免疫学、分子生物学および細胞生物学におい
て実用的であり、臨床分析、特に体液および組織中にお
ける微量のハプテンおよび抗原の免疫検定に有用である
。

（好ましい実施例の説明） 本発明により、連続的に増殖する（すなわち永続的な）
ヒト骨髄腫由来細胞系が樹立された。この細胞系は多発
性骨髄腫を有すると診断さねた６４才の白人男性より得
た末梢血液リンパ球の培養液に由来するものでＡ　ＨＭ
−■と命名された。

この患者から得た血清を分析すると、高いＩｇＱ値（１
１，２００ｍｇ　／　ｃａｌ、平常値は６６０〜１７６
０　ｍｙ／ｃＪ／）　）オヨび若干高イＩｇＡ値（６０
０ｍ９／ｄｌ、平常値は６０〜３２０ｍ９／ｄｌ；）が
認められた。また血清電気泳動によって、ラムダＬ鎖を
有するＩｇＧ型のＭ成分（ａｎ　Ｍ　−ｃｏｍｐｏｎｅ
ｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＩｇＧ　ｔｙｐｅ　ｗｉｔｈ　ｌ
ａｍｂｄａｌｉｇｈｔ　ｃｈａｉｎｓ　）の存在するこ
とが明らかとなった。骨髄を生検すると、プラズマ細胞
様を呈する細胞による腫瘍に冒さＪｌていることが認め
られた。

この患者より得た血液をフィコル勾配（ａＦｉｃｏｌｌ
　ｇｒａｄｉｅｎｔ　）土で分別した。界面の細胞は洗
浄し、２０％の牛脂仔血清と２ｍＭのグルタミンと５０
　ｔｄ！　／　ｍｌＪのゲンタマイシンとを含有するＲ
Ｐ％ｉＩ　１６４０培地中に浮遊させた。

こうして得た培養液は湿潤した５％ＣＯ２雰囲気中（Ｆ
おいて３７℃で６週間培養した。この培養期間の〕υ後
において、培養液中に細胞の凝集が観察され、こＪｌら
は実在するリンパ芽球と考えらＪまた。こ才９らの細胞
を採取し、１０ｍ１の新鮮な培地に再び浮遊させ、３７
℃で８日間培養した。こうして得た培養液に含まわる総
生細胞数は７　Ｘ　１０５個であり、こＪｌらの細胞は
新鮮ソ、ｆ培地匠再び接打した。そして、継代比率１：
１０〜１．１５で連続して継代を行なった。このＡＩ−
ＩＭ−Ｔと命名さ牙また細胞系は１２力月間培地中で連
続継代した。倍加時間は２４〜４８時間であると思わね
る。

この細胞系は供給細胞（ｆｅｅｄｅｒ　ｃｅｌｌｓ　）
　　の不在下で限界稀釈することによってクローニング
しＩこ。

光学および電子顕微鏡の示すところによりばＡ　ＨＭ　
−Ｉはヒトリンパ芽球細胞系であると思わ」する。この
細胞は付着性もしくは固着依存性ではなく、浮遊培養液
中で増殖する。

培養液中において細胞は凝集する傾向があり、数十個の
細胞からなる凝集塊となることがある。接種濃度５×１
０細胞／　ｍｌの細胞系は大体６日後に２×１０細胞／
　ｍｌに増殖する。

老廃したＡ　Ｉ−Ｉ　Ｍ　−Ｉ培養液上澄を免液沈降さ
せたところ、この細胞系はラムダし鎖を有するＩｇＡを
分泌することが明らかとなった。

細胞表面上にはＩｇＡｌの１１鎖が検出された。

ＩｇＧは培養液上澄中においても細胞表面上においても
検出さ、ｌ′Ｉなかった。

２つのヒトＢリンパ球標織、すなわちトＩＬＡ−ＤＲお
よびＢｌ（メタンｘ　ンコ（５ｔａｓｈｅｎｋｏ）他、
Ｊ、　Ｔｍｍｕｎｏｌｏ、１２５．１６７８　Ｃ１９８
０）　）がＡ　Ｉ（Ｍ　−Ｉ細胞の表面上に検出された
。また酵素分析匠よっても、この細胞系がヒト由来のも
のであることが確認された。Ａ　Ｉ−Ｉ　Ｍ　−■は以
下のヒト酵素、すなわちヌクレオシドフォスフォリラー
ゼ、グルコース−６−燐酸脱水素酵素、リンゴ酸脱水素
酵素、マンノース燐酸異性化酵素、ペプチターゼＢ１ア
スパラギン酸アミン基転移酵素および乳酸脱水素酵素を
含むことが認めらねた。

Ａ　Ｉ−（Ｍ−Ｉのヒボキザンチン燐酸すボシル基転移
酵素欠損（ＨＰＲ，Ｔ欠損）突然変異体はエチルメタン
スルフォン酸塩を用いる公知の突然変異誘発法によって
樹立した。突然変異の誘発後、６−チオグアニン葡７．
５　Ｘ　１０　’Ｍ金含有る培地中でこの濃度を１．　
Ｘ　１０　’Ｍまで緩慢に増加させながら細胞を増殖さ
せることによってＩ−Ｉ　Ｐ　Ｒ，Ｔ欠損変種を選択し
た（ウェルシュ（＼’Ｖｅｌｓｈ　）、ネイチャー、２
５６．４９５（１９７７）　）。Ｉ−ＩＰＲ，Ｔ欠損突
然変異体はＡ）ＩＭ−ｒと異なり、ヒポキサンチン（Ｉ
Ｘｌ、ＯＭ）とアミノプリテン（４Ｘ　１０−７Ｍ　）
とチミジン（１６ＸＩＯ’Ｍ）とを含有する培地（＋−
Ｉ　Ａ　Ｔ培地）中では増殖しない。

現在までＫ　Ａ　ＨＭ　−ＴのＩ（Ｐ　ＲＴ欠損突然変
異体は５０〜１００種樹立された。このような突然変異
体の１つでＡ　Ｉ−Ｉ　Ｎ　−３Ｄ　３と命名さ、ｈた
ものは詳細に研究さＪまた。一般Ｋ、ＡＨＭ−３Ｄ３は
ヒト末梢血管リンパ球、該リンパ球から分離さねた８９
７７球、およびヒトリンパ節に由来するリンパ球と融合
することができる。

細胞系ＡＲＭ−ＩおよびＡＩ−ＴＭ−３Ｄ３は１９８３
年３月１０日にアメリカ模式菌培養収集（ｔｈｅ　Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏｌ　Ｉ
ｅｃｔｉｏｎ。

１２３０１　Ｐａｒｋｌａｗｎ　Ｄｒｉｖｅ、　Ｒｏｃ
ｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ。

２０８５２　）に供託さね、そわぞれＡＴＣＣ登録番号
ＣＲＬ−８２２０およびＣＲＬ−８２２１として登録さ
れた。

本発明は、ＡＴＣＣ登録番号ＣＲ，Ｌ−８２２０を有す
る細胞系であるＡ　Ｉ−（Ｍ　＝Ｉの全ての娘系を一般
に包含するものである。ＡＨＭ−Ｉかも突然変異もしく
はハイブリッド化等によって派生した細胞はＡＨＭ−Ｉ
の娘系であると考えられる。本発明において１派生した
細胞」とはＡＨＭ−Ｉ細胞系をその系統に含む細胞系全
てを意味する。

上述のようにＡ、ＨＭ−Ｉから突然変異によって細胞系
を派生させることができる。このような突然変異は自然
突然変異であっても公知の方法である細胞突然変異促進
手段の使用によるものであってもよい。踊記手段として
は様々なものが当業者に公知であるが、一般に使用さＪ
するのはエチルメクンスルフオン酸塩である。しかしな
がら、紫外性照射、メチルメタンスルフォン酸塩、Ｎ−
メチル−Ｎ／−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、およ
びエチルニトロソ尿素等、他の手段を使用することもで
きる。ジャコピ（Ｊａｋｏｂｙ　）およびバスタン（Ｐ
ａ５ｔａｎ　）編、［酵素学の方法。細胞培養（Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ　Ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　Ｃｅｌ　Ｉ　
Ｃｕｌ　−１ｕｒｅ　）Ｊ、第５８巻、アカデミツクプ
レス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　）、ニューヨー
ク、１９７９、ｐ、　３０８参照。望まれる特性を有す
る細胞のスクリーニングを容易にするため、典型的には
適当な試薬で細胞を選択する。例えば、前記特性がヒポ
キザンチン燐酸すボシル基転移酵素欠損性である場合に
適当な試薬の典型的なものは６−チオグアニンである。

Ａ　Ｉ（Ｍ　−Ｉから突然変異によって得もねる細胞系
の特性はリンパ球とのハイブリッド化もしくは融合にお
ける適性を除いて一般に重要ではない。しかしながら、
実用上、このような突然変異細胞系はＡ、　Ｉ（Ｍ　−
Ｉを維持できない条件下でも増殖する（すなわち、連続
培養が可能である）ようにＡ　ｌ−（Ｍ　−Ｉと異なっ
た少なくとも１つの特性を有するべきである。

この特性により、突然変異細胞をＡ　ｌ−Ｉ　Ｍ　−Ｉ
細胞から容易に分離することが可能になる。

このような特性として様々なものが当業者に公知である
が、特に有用かつよく知られている特性はヒポキサンチ
ン燐酸リボシル基転移酵素欠損性である。Ａ、　Ｉ（Ｍ
　−Ｉから派生し、ヒポキサンチン燐酸リボシル基転移
酵素欠損性を示す突然変異細胞系の一例はＡＴＣＣ登録
番号ＣＲＬ−８２２１を有する細胞系Ａ　ＨＭ−３Ｄ３
である。

またＡＨＭ−Ｉからハイブリッド化によって細胞系を派
生することも可能である。この場合、一般に公知の方法
により、融合促進手段の存在下でＡ、　ＨＭ　−Ｉ突然
変異細胞系由来の細胞をリンパ球に融合させる。％に好
ましい融合促進手段は分子量的１０００のポリエチレン
グリコールである。もちろん他の手段、例えば電場パル
ス（タイシー（Ｔｃ１ｓｓｉｅ　）他、−１Δ」二乙ヱ
エ、２１６．５３７（１９８，２））およびセイダイウ
イルス（ダビッドソン（Ｄａｖｉｄ−ｓｏｎ）　、エク
スペ１メンタルセルリサーチ（Ｅｘ−ｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌ　Ｃｅ旦Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　）　、５５．４２４（１
，９６９）　）等を使用することも可能である。

あらゆる突然変異細胞系に由来する細胞を使用すること
が可能であるが、　Ａ、　Ｉ（Ｍ　−３Ｄ　３等、ヒボ
キサンチン燐酸リボシル基酵素欠損性を有する突然変異
細胞系が特に有用である。

使用さ牙するリンパ球の由来は一般に重要でない。すな
わち、こわらのリンパ球はマウス、ラット、ヒトするい
は他種のリンパ球とすることができる。ある種の適用、
例えば体液中の微量なハプテンもしくは抗原の免疫検定
に使用さ牙するモノクローナル抗体の製造等には、マウ
スもしくはラットのリンパ球が好ましいかも知ねない。

しかしながら、他の場合にはヒトリンパ球が望まねるこ
とが多く、一般にヒトリンパ球の使用が好ましい。

リンパ球の供給源も重要ではない。リンパ球がヒト由来
のものである場合には、末梢血液リンパ球、末梢血液リ
ンパ球から分離された８９７７球、あるいはリンパ節も
しくは牌臓から分離されたリンパ球とすることができる
。

ハイブリッド細胞系をモノクローナル抗体の製造に使用
しようとする場合にはリンパ球を免疫源に感作させるこ
とが典型的である。

本発明において「免疫源」とは抗原およびハプテンの双
方を意味するものである。このような感作は当業者に公
知の方法で行なわれる。

実用上、ヒト由来のリンパ球を用いて試験管内で感作を
行なうことが典型的である。また、ヒト以外のリンパ球
を用いる場合には生体内で感作を行なうことが典型的で
ある。

場合Ｖ（よっては、ＡＨＭ−１と妥なる少な（とイ、１
つの特性、例えばヒボキザンチン燐酸すボシル基転移酵
素久損性を回復させるよ５　ｙｃ突然変異細胞系から公
知の方法により細胞を逆選択することが望ましいかも知
牙１ない。

例えばシュルマン（Ｓｈｕｌｍａｎ　）他、ネイチャニ
、２７６．２６９　（１９７８）を参照。こうして得ら
Ａする回復さＪまた細胞をさらに突然変異させると、回
復さ」また細胞を維持できない条件下でも増殖できるよ
うに前記細胞とは異なった少な（とも１つの特性を有し
ており、リンパ球とハイブリッド化することのできる新
しい突然変異細胞系を産出することができる。そして、
この新しい突然変異細胞系は上述のよ５［免疫源匠感作
させたリンパ球と融合させることができる。

Ａ　ＨＭ　−Ｔ細胞から得られるデオキシリボ核酸は公
知の方法によってリンパ球のトランスフェクションに用
いることができる。例えばジョナク（Ｊｏｎａｋ　）他
、ハイプリドーマ立乃±吐凸町り、ユ、１２４　（１９
８２）およびクーパー（Ｃｏｏｐｅｒ　）、サイエンス
、２１８．８０１（１，９８２）を参照。

以下に示す非制限的な実施例により本発明の詳細な説明
する。％に断わりのない限り、温度は摂氏であり、割合
は重量％である。

正常な血液をフイコル勾配遠心分離（Ｆｉｃｏｌ　１ｇ
ｒａｄｉｅｎｔ　ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ）　し
て得た１子方個のヒト末梢血液リンパ球をＩ　Ｘ　１０
７個のＡ　ｌ（Ｍ−３Ｄ３細胞と混合し、得もねた細胞
混合物はｓｏｏｘｇで１０分間遠心分離することにより
ペレット化した。ペレットは徐々に粉砕し、３７°まで
加熱した。分子量１００００３７％ポリエチレングリコ
ール（コツホ−ライト７　ｙｊ−”　７トリ一ズ社（Ｋ
ｏｃｈ　−Ｌｉｇｈｔ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。

Ｌｉ　（１、）製）　（１，５ｍｌを粉砕ペレツ１−［
５０秒間にわたって伶拌しながら添加した。こうして得
らねた融合混合物は５．０ｍｌの無血清Ｈ，ＰＭＩ　−
１６４０培地（Ｒ，ＰＩｌｖ＋Ｔ　−１６４０、２ｍＭ
のグルタミン、５０　ｊｊ　／　ｍｌのゲンタマイシン
、および５×１０　へ４の２−メルカプトエタノール）
で２分間にわたって徐々に稀釈した。次の１分間ｒ（わ
たって、さらＫ　５．　Ｏｍｌのｏ１１記培地を添加し
た。■・９合理合物は遠心分νｉ「シ、ｋ…４胞を５０
ｍ１の無血清培地で２回洗浄した。そして、細胞を５×
１０　細胞／ｍｚの濃度で、２０％牛脂仔血清を含有す
るＲＰＭＴ−１，６／１０培地中に浮遊させた。

５０１ｔｌの上記細胞浮遊液（２，５Ｘ１０　　細胞）
をそ」１ぞ４１２４時間前［４Ｘ　１０　　個のＢａ１
ｂ　／　ｃマウス腹膜浸出細胞と５０μｌの２０％牛脂
仔血清含有ＲＰＭＩ　−１６４０培地からなる培養液を
接種しておいた９６ウエルマイクロタイタープレート（
ａ　　９６−ｗｅｌｌｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ　ｐｌａｔ
ｅ）の各ウェル中に分散した。

プレートは湿潤５％ＣＯ２を保つ培養器内で３７℃にお
いて一晩培養した。−晩の培養後、２倍濃縮トＴＡＴ（
２Ｘ１０’Ｍのヒポキサンチン、８Ｘ１０Ｍのアミノプ
リテン、および３．２Ｘ１０−５Ｍのチミジン）を補給
した１００μｌの血清含有培地を各ウェルに添加し、さ
ら［５日間培養した。その後、１日置きに培地の一部を
新鮮な通常濃度ＨＡＴ培地と交換することによって培養
液を補給した。

融合後３〜４週間目において培地のいくつかには活発に
増殖する細胞が存在しており、ＡＨＭ−３Ｄ３とヒトリ
ンパ球との間の融合が成功したことが示された。これら
の融合細胞産生物はＡＨＭ−３Ｄ３が増殖しないＨＡＴ
含有培地中においても増殖し続けた。

正常なヒト末梢血液リンパ球の他、ヒトリンパ節由来の
リンパ球、および８９７７球に富んだ末梢血液リンパ球
群をＡ　Ｉ−Ｉ　Ｍ　−３Ｄ　３と融合した。ＷＩ表は
これら３つの実験結果を要約するものである。

第、１表 １　　末梢血液リンパ球　７２　　　５　　　１　／　
１．８Ｘ１０６２　　リンパ節由来リンパ球　８１　　
　１４　　　　１／７．２Ｘ］０５３　　府内血液由来
Ｂリンパ球　１３　　　　６　　　　１／２．５Ｘ１０
５現在までに行なわ、ｌまた融合実験の示すところによ
」１ばＡ　ＩＩ　Ｍ　−３Ｄ　３と末梢血液リンパ球と
の融合頻度は供給したリンパ球１〜３Ｘ１０　　個に対
して１回であった。一方、リンパ節細胞に対する融合頻
度は供給リンパ球７Ｘ１０　〜１×１０　個に対して１
回であった。分離したＢ細胞を使用する場合、融合頻度
は供り、３９７７球２〜３　ｘ　１０”個に対して１回
に増加し、マウス融合系とほぼ匹敵する値となり、報告
さねた最新のヒト−ヒトハイブリッド形成率、すなわち
供給リンパ球１０６〜１０８個に対して１回という値（
エドワーズ（Ｅｄｗａｒｄｓ）他、ヨーロッパ免疫字詰
（Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ立り肋見凹旦見１
Ｌ）、ユ、６４１．（１９８２））よりも明らかに優ね
ている。

実施例１で得た１０個のハイブリドーマに対して、母細
胞系ＡＨＭ−３Ｄ３により製造されたものとは異なる免
疫グロブリンの合成試験を行なった。各ハイプリドーマ
細胞系ノ細胞は、５μＣｉ　／　ｍ７の＋４ｃ−標識ロ
イシンを添加した無ロイシンＲＰ　Ｍ　Ｉ　−１，６４
０培地中で４８時間培養した。各培養液の上澄は分離し
、公知の方法によって様々な免疫グロブリンアイソタイ
プ特異性抗血清を用いる免疫沈降（ｉｍｍｕｎｏｐｒｅ
ｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ　）を行なった。

こうして得た免疫沈澱物は洗浄し、１０％のグリセロー
ルと２％のドデシル硫酸ナトリウムと５％の２−メルカ
プトエタノールとを含有するｐＨ６，８のトリスＨＣ７
緩衝液を添加し、２分間煮沸することにより溶離させた
。

そして試旧ニ対し、０．１９２Ｍのグリシンと０１％の
ドデシル硫酸ナトリウムとを含有する０、２５　Ｍ、　
ｐＨ８，３のトリス緩衝液中の５〜２０ポリアクリルア
ミド勾配ゲル上で電気泳動を行なった。電気泳動の後、
５０％のメタノールと１０％の氷酢酸とを含む０１２５
％クーマシーブルー水溶液でゲルを染色固定した。

そして、ゲルはジメチルスルフオキシドに浸漬して水分
を除去した。ジメチルスルフオキシドは、２５−ジフェ
ニルオキサゾール（ｐｐｏ）を２２２％（重量／体積）
含むジメチルスルフオキシド溶液で置換した。環境温度
で２時間培養を行なった後、ＰＰＯ溶液を除去し、蒸留
水で１時間置換した。そしてゲルは乾燥し、−７０℃に
おいて一晩にわたり、デュポ７フイトニングプラス■（
Ｄｕｐｏｎｔ　ＬｉｇｈｔｅｎｉｎｇＰｌｕＳ＠））増
感紙上ノヨダック（Ｋｏｄａｋ　）　ＸＡ、Ｒ−５Ｘ線
フイルムに露出した。

ゲルから得た電気泳動パターンにより、１０個のハイブ
リドーマ細胞系のうち９個までが、カッパＬ　＠　（ｋ
ａｐｐａ　ｌｉｇｈｔ　ｃｈａｉｎｓ　）を有するＩｇ
Ｍ分子を分泌することが明らかになった。

１０査目のハイブリドーマはカッパＬ鎖を有するＩｇＡ
分子を分泌した。こ、１１．ｃ対し、ＡＨＭ−３Ｄ３は
ラムダし鎖を有するＩｇＡを分泌するものである。

第１頁の続き ｏＩｎｔ、　Ｃ１，３識別記号　　　庁内整理番号（Ｃ
１２Ｐ　　２１１００ Ｃ１２Ｒ１／９１　） ０発　明　者　マイケル・アレン・ハーベイアメリカ合
衆国ニューヨーク州 ペインテッド・ポスト・ウェス ト・ヒル・ロード２０２ ０発　明　者　アルバート・オーガスト・ループラー アメリカ合衆国ニューヨーク州 コーニング・ボッ・ロード・ピ ーオー・ボックス９６エー・アー ル・ディー・ナンバー３ ４２５−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ］）　　Ａ’ｌ”ＣＣ登録査号ＣＲＬ−８２２０を有す
   るほぼ純粋なヒト骨髄腫由来細胞系、 ２）　　ＡＴＣＣ登録名号ＣＲ，Ｌ　−８２２０を有す
   るほぼ純粋なヒト骨髄肺由来細胞系から派生した細胞系
   。 ３）　前記ヒト骨髄腫由来細胞系から突然変異によって
   派生したことを特徴とする特許請求の範囲第２項記載の
   細胞系。 ４）　リンパ球とノ・イブリッド化することが可ね！キ
   であり、前記ヒト骨髄昨由来ｉ、…胞系を維持できない
   条件下においても増殖できるような、該細胞系とは異な
   った少なくとも１つの特性を有することを特徴とする特
   許請求の範囲第３項記載の細胞系。 ５）　前記少なくとも１つの特性がヒポキサンチン燐酸
   リボシル基転移酵素欠損性であることを特徴とする特許
   請求の範囲第４項記載の細胞系。 ６）　　ＡＴＣＣ登録番号ＣＲＬ−８２２１を有するこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第５項記載の細胞系。 ７）　前記ヒト骨髄腫由来細胞系からハイブリッド化に
   よって派生したことを特徴とする特許請求の範囲第２項
   記載の細胞系。 ８）　前記ヒト骨髄腫由来細胞系から派生し、かつ該細
   胞系の維持が不可能な条件下においても増殖できるよう
   な該細胞系とは異なった少な（とも１つの特性を有する
   突然変異細胞系の細胞を、免疫源に感作させたリンパ球
   と融合させてなることを特徴とする特許請求の範囲第７
   項記載の細胞系。 ９）　前記突然変異細胞系の少なくとも１つの特性がヒ
   ポキサンチン燐酸リボシル基転移酵素欠損性であること
   を特徴とする特許請求の範囲第８項記載の細胞系。 １０）　　前記突然変異細胞系がＡＴＣＣ登録番号ＣＲ
   ，Ｌ　−８２２１を有するものであることを特徴とする
   時的゛請求の範囲第９項記載の細胞系。 １１）　　前記リンパ球がヒトリンパ球であることを特
   徴とする特許請求の範囲第１０項記載の細胞系。 】２）　　前記ヒト骨髄腫由来細胞系から派生し、かつ
   該細胞系の維持が不可能な条件下でも増殖できるような
   該細胞系とは異なった少な（とも１つの特性を有する突
   然変異細胞系の細胞を、免疫源に感作させたリンパ球と
   融合させてなるハイブリッド細胞系の細胞を、免疫源に
   感作させたリンパ球と融合させてなることを特徴とする
   特許請求の範囲第７項記載の細胞系。 １３）　　前記突然変異細胞系の少な（とも１つの特性
   がヒボキサンチン燐酸リボシル基転移酵素欠損性である
   ことを特徴とする特許請求の範囲第１２項記載の細胞系
   。 １４）　　前記突然変異細胞系がＡＴＣＣ登録番号ＣＩ
   ’（Ｌ−８２２１を有するものであることを特徴とする
   特許請求の範囲第１３項記載の細胞系。 １５）　　前記リンパ球がヒトリンパ球であることを特
   徴とする特許請求の範囲第１４項記載の細胞系。 １６）　　前記ハイブリッド細胞系の細胞が、ＡＴＣＣ
   登録召号ＣＲ，Ｉ、−８２２１を有する細胞系とは異な
   った少な（とも１つの特性を回復するように逆選択され
   たものであることを特徴とする特許請求の範囲第１２項
   記載の細胞系。 １７）　　前記少なくとも１つの特性がヒポキサンチン
   燐酸リボシル基転移酵素欠損性であることを特徴とする
   特許請求の範囲第１６項記載の細胞系。 １８）　　前記骨髄腫由来細胞から派生し、かつ該細胞
   系を維持できない条件下でも増殖できるような該細胞系
   とは異なった少なくとも１つの特性を有する突然変異細
   胞系の細胞を、免疫源匠感作させたリンパ球ど融合させ
   てなる細胞系から前記骨髄腫由来細胞系とは異なった少
   な（とも１つの特性を回復するように逆選択された細胞
   を、免疫源に感作させたリンパ球と融合させてなるハイ
   ブリッド細胞系の突然変異細胞系であって、リンパ球と
   ハイブリッド化することが可能であり、前記ハイブリッ
   ド細胞系を維持できない条件下でも増殖できるｔうな該
   ハイブリッド細胞系とは異なった少なくとも１つの特性
   を有することを特徴とする特許請求の範囲第７項記載の
   細胞系。 １９）　　前記ハイブリッド細胞系とは異なった少なく
   とも１つの特性がヒポキサンチン燐酸リボシル基転移酵
   素欠損性であることを特徴とする特許請求の範囲第１８
   項記載の細胞系。 ２０）　　前記骨髄腫由来細胞から派生し、かつ該細胞
   系を維持できない条件下でも増殖できるような該細胞系
   とは異なった少な（とも１つの特性を有する突然変異細
   胞系の細胞を、免疫源に感作させたリンパ球と融合させ
   てなる細胞系から前記骨髄腫由来細胞系とは異なった少
   な（とも１つの特性を回復するように逆選択さねた細胞
   を、免疫源に感作させたリンパ球と融合させてなるハイ
   ブリッド細胞系の突然変異細胞系である、リンパ球とハ
   イブリッド化することが可能であり、前記ハイブリッド
   細胞系を維持できない条件下でも増殖できるような該ハ
   イブリッド細胞系とは異なった少なくとも１つの特性を
   有する突然変異細胞系の細胞を、免疫源に感作させたリ
   ンパ球と融合させてなることを特徴とする特許請求の範
   囲第７項記載の細胞系。 ２１）　　前記骨髄腫由来細胞から派生し、かつ該細胞
   系を維持できない条件下でも増殖できるような該細胞系
   とは異なった少なくとも１つの特性を有する突然変異細
   胞系の細胞を、免疫源に感作させたリンパ球と融合させ
   てなる細胞系から前記骨髄腫由来細胞系とは異／、ヘ一
   つだ少なくとも１つの特性を回ゆするように逆選択さね
   た細胞を、免疫源に感イｌ［させたリンパ球と融合させ
   てなる）・イブリッド細胞系の突然変異細胞系である、
   リンパ球とハイブリッド化することが可能。 であり、前記ノ・イブリッド細胞系を維持できない条件
   下でも増殖できるような該ノ・イブリッド細胞系とは異
   なった少なくとも１つの特性を有する突然変異細胞系の
   細胞を。 免疫源ｒｒ感作させたリンパ球と融合させて／、ｃるハ
   イブリッド細胞系の細胞を、免疫源匠感作させたリンパ
   球と融合させてなることを特徴とする特許請求の範囲第
   ７項記載の細胞系。 ２２〕リンパ球を骨髄腫由来細胞と融合し、抗体産生融
   合細胞ハイブリッドを得ることからなるハイブリッド細
   胞系の製造法において、 ＡＴＣＣ登録番号ＣＲ，Ｌ　−８２２０を有するヒト舎
   髄腫由来細胞系の細胞を細胞突然変異促進手段で処理し
   、処理した該細胞を前記ヒト骨髄腫由来細胞の維持が不
   可能な条件下においても増殖できるような該ヒト骨髄腫
   由来細胞とは異なった少な（とも１つの特性を有する細
   胞を同定するに適した試薬で処理することによって選択
   した細胞から得た永続的なヒト骨髄肺由来細胞系に由来
   するヒト骨髄腫由来細胞を使用することを特徴とする方
   法。 ２３）　　前記少な（とも１つの特性がヒポキザンチン
   燐酸すボシル基転移酵素欠損性であることを特徴とする
   特許請求の範囲第２２項記載の方法。 ２４）　　前記融合促進手段がエチルメタンスルフォン
   酸塩であり、前記試薬が６−チオグアニンであることを
   特徴とする特許請求の範囲第２３項記載の方法。 ２５）　　前記突然変異細胞系がＡ　Ｔ　ＣＣ登録番号
   ＣＲＬ−８２２１を有するものであることを特徴とする
   特許請求の範囲第２／Ｉ項記載の方法、 ２６）　　前記リンパ球がヒトリンパ球であることを特
   徴とする特許請求の範囲第２５項記載の方法。 ２７）　　突然変異細胞系の細胞を、免疫源に感作させ
   たリンパ球と、該細胞の融合促進手段の存在下において
   融合することからなるノ・イブリッド細胞系の製造法に
   おいて、 前記突然変異細胞系が、ＡＴＣＣ登録番号ＣＩＩ　１．
   −８２２０を有するほぼ純粋なヒト骨髄腫由来細胞系か
   ら派生し、リンパ球とのハイブリッド化が可能であり、
   該ヒト骨髄腫由来細胞系の維持が不可能な条件下におい
   ても増殖できるような該ヒト骨髄腫由来細胞系とは央な
   った少なくとも１つの特性を有するものであることを特
   徴とする方法、 ２８）　　前記突然変異細胞系の少な（とも１つの特性
   がヒポキサンチン燐酸リボシル基転移酵素欠損性である
   ことを特徴とする特許請求の範囲第２７項記載の方法。 ２９）　　前記突然変異細胞系がＡＴＣＣ登録番号ＣＲ
   Ｌ−８２２１を有するものであることを特徴とする特許
   請求の範囲第２８項記載の方法。 ３０）　　前記融合促進手段がポリエチレングリコール
   であることを特徴とする特許言肯求の範囲第２９項記載
   の方法。 ３１）　　前記リンパ球がヒトリンパ球であることを特
   徴とする特許請求の範囲第２９項記載の方法。 ３２）　　前記リンパ球の感作を試験管内で行なうこと
   を特徴とする特許請求の範囲第２７項もしくは第３１項
   に記載の方法。 ３３）　　ハイブリッド化された細胞系を、免疫源に感
   作させたリンパ球と融合することからなる新規なハイブ
   リッド細胞系の製造法において、 前記ハイブリッド化さＪまた細胞系が、ＡＴＣＣ登録番
   号ＣＲＩ、−８２２０を有するほぼ純粋なヒト骨髄腫由
   来細胞系から派生し、かつ該ヒト骨髄肺由来細胞系の維
   持が不り］能な条件下においても増殖できるような該ヒ
   ト骨髄肺由来細胞系とは異なった少な（とも１つの特性
   を有する突然変異細胞糸の細胞を、免疫源に感作させた
   リンパ球に融合してなるものであることを特徴とする方
   法。 ３７Ｉ）　　前記突然変異細胞系の少なくとも１つの特
   性がヒボギザンチン燐酸すボシル基転移酵素欠損性であ
   ることを特徴とする特許請求の範囲第３３項記載の方法
   。 ３５）　　前記突然変異細胞系がＡＴＣＣ登録番号ＣＲ
   Ｌ−８２２１を有するものであることを特徴とする特許
   請求の範囲第３４項記載の方法。 ３６）　　Ａ　Ｔ　ＣＣ登録番号ＣＲ，Ｌ−８２，２０
   を有するほぼ純粋なヒト骨髄腫由来細胞系から派生し、
   かつ該細胞系の維持が不可能な条件下においても増殖で
   きるような該細胞系とは異なった少なくとも１つの特性
   を有する突然変異細胞系の細胞を、免疫源に感作させた
   リンパ球と融合して得たハイブリッド細胞系の細胞を培
   地中で培養し、前記細胞の産生じた抗体を前記培地から
   分離することからなる抗体製造法。 ３７）　　前記突然変異細胞系の少なくとも１つの特性
   がヒポキザンチン燐酸すボシル基転移酵素欠損性である
   ことを特徴とする特許請求の範囲第３６項記載の方法。 ３８）　　前記突然変異細胞系がＡＴＣＣ登録番号ＣＲ
   Ｌ　−８２２］を有するものであることを特徴とする特
   許請求の範囲第３７項記載の方法。 ３９）　　Ａ、ＴＣＣ登録番号Ｃ４Ｌ−８２２０を有す
   るほぼ純粋なヒト骨髄腫由来細胞から派生し、かつ該細
   胞系の維持が不可能な条件工匠おいても増殖できるよう
   な該細胞系とは異フエつだ少なくとも１つの特性を有す
   る突然変異細胞系の細胞を、免疫源匠感作させたリンパ
   球と融合して得たハイブリッド細胞系の細胞を、免疫源
   に感作させたリンパ球と融５合してなる細胞系の細胞を
   培地中で培養し、前記細胞の産生じた抗体を前記培地か
   ら分離することからなる抗体製造法。 ４０）　　前記突然変異細胞系の少なくとも１つの特性
   がヒポキサンチン燐酸リボシル基転移酵素欠損性である
   ことを特徴とする特許請求の範囲節３９項記載の方法。 ４１）　　Ａ　Ｔ　ＣＣ登録番号ＣＲＬ−８２２０を有
   するほぼ純粋なヒト骨髄腫由来細胞系の細胞より荘ら、
   ｌするデオキシリボ核酸を用いることを特徴とするリン
   パ球のトランスフェクション法。 ４２）　　Ａ　Ｔ　ＣＣ登録番号ＣＩ（Ｌ−８２２０を
   有するほぼ純粋なヒト骨髄腫由来細胞系から派生したハ
   イブリッド細胞系によって産生されたことを特徴とする
   モノクローナル抗体。 ４３）　　前記ハイブリッド細胞系が、前記骨髄腫由来
   細胞系から派生し、かつ前記骨髄腫由来細胞系の維持が
   不可能な条件下においても増殖できるような前記骨髄腫
   由来細胞系とは異なった少な（とも１つの特性を有する
   突然変異細胞系の細胞を、免疫源に感作させたリンパ球
   と融合させてなるものであることを特徴とする特許請求
   の範囲第４２項記載の抗体。 ４４）　　前記突然変異細胞系の少な（とも１つの特性
   がヒポキサンチン燐酸リボシル基転移酵素欠損性である
   ことを特徴とする特許請求の範囲第４３項記載の抗体。 ４５）　　前記突然変異細胞系がＡＴＣＣ登録番号ＣＲ
   Ｌ−８２２１を有するものであることを特徴とする特許
   請求の範囲第４４項記載の抗体。 ４６）前記リンパ球がヒトリンパ球であることを特徴と
   する特許請求の範囲第４５項記載の抗体。 ４７）　　前記ハイブリッド細胞系が、前記骨髄腫由来
   細胞系から派生し、かつ前記骨髄腫由来細胞系の維持が
   不可能な条件下においても増殖できるような前記骨髄腫
   由来細胞系とは異なった少なくとも１つの特性を有する
   突然変異細胞系の細胞を、免疫源に感作させたリンパ球
   と融合させて得た細胞系の細胞を、免疫源に感作させた
   リンパ球と融合させてなるものであることを特徴とする
   特許請求の範囲第４２項記載の抗体。 ４８）　　前記ハイブリッド細胞系が、前記骨髄腫由来
   細胞系から派生し、かつ前記骨髄腫由来細胞系の維持が
   不可能な条件下においても増殖できるような前記骨髄腫
   由来細胞系とは異なった少な（とも１つの特性を有する
   突然変異細胞系の細胞を、免疫源に感作させたリンパ球
   と融合させてなる細胞系から前記骨髄腫由来細胞系とは
   異なった少なくとも１つの特性を回りするように逆選択
   さねた細胞を、免疫源に感作させたリンパ球と融合させ
   て得た細胞系の突然変異細胞系である、リンパ球とハイ
   ブリッド化することが可能であり、前記融合させて得た
   細胞系の維持が不可能な条件下においても増殖できるよ
   うな前記融合させて得た細胞系とは異なった少なくとも
   １つの特性を有する細胞系の細胞を、免疫源に感作させ
   たリンパ球と融合させてなるものであることを特徴とす
   る特許請求°の範囲第４２項記載の抗体。 ４９）　　前記ハイブリッド細胞系が、前記骨髄腫由来
   細胞系から派生し、かつ前記骨髄腫由来細胞系の維持が
   不可能な条件下においても増殖できるような前記骨髄腫
   由来細胞系とは異なった少なくとも１つの特性を有する
   突然変異細胞系の細胞を、免疫源に感作させたリンパ球
   と融合させてなる細胞系から前記骨髄腫由来細胞系とは
   異なった少なくとも１つの特性を回復するように逆選択
   さ牙１だ細胞を、免疫源に感作させたリンパ球と融合さ
   せて得た細胞系の突然変異細胞系である、リンパ球とノ
   ・イブリッド化することが可能であり、前記融合させて
   得た細胞系の維持が不可能な条件化においても増殖でき
   るようなＭｉｉ記融合させて得た細胞系とは異なった少
   ｌぶくとも１つの特性を有する細胞系の細胞を、免疫源
   に感作させたリンパ球とｈｌＪ１合させてなる細胞系の
   細胞を、免疫源に感作させたリンパ球と融合させてなる
   ものであることを特徴とする特許請求の範囲第４２項記
   載の抗体。