JPS59135895A - 抗生物質の生産を促進する機能を有する化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はセファロスポリンＣの生産を促進する機能を有
する化合物に関するものである。

現在、我国はもとより全世界に於て極めて多種類の医薬
用抗生物質が抗細菌性化学療法剤とじて使用されており
、中でもセファロスポリン系抗生物質はその５０％以上
を占有する主要なものであるが、大部分は抗生物質生産
菌の一種であるＣｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ　ａｃｒ
ｅｍｏｎｉｕｒｎの発酵生産物セファロスポリンＣを原
料とし、７−アミツセフアロス；ｊｒラン酸（７−ＡＣ
Ａ　）を経由する化学合成によって製造される半合成抗
生物質であることが知られている。而して、前記セファ
ロスポリンＣの発酵生産は、我国に於ても数社により行
なわれているが、極めて収率が低いため生産が需要に追
いつかず、多］、の７　”　、ＡＣＡが輸入され、その
７−　ＡＣＡによりセファロスポリン系抗生物質が合成
さ′ｉ′シていルノカ現状であり、従って発酵生産での
セファロスポリンＣの収率をいかに向上させるがという
ことがセファロスポリン系抗生物質製造上の解決すべき
課題となっている。

而して、Ｃ，ａｃｒｅｍｏＩｌｉｕｍ　Ｉｃよるセファ
ロスポリンＣの生産性は、該菌の無性ｊ胞子である分節
用ｔの形成と密接な関係を有していることが内外の研究
グループにより報告されている。即ち、Ｎａ５ｈと）（
ａｂｃｒは１９７１年に該菌の菌子が胞子へと分化して
いく割合と該閑によるβ−ラクタム抗生物質（セファロ
スポリンＣとズニシリンＮ）の合計生産量とが良い相関
関係にあることを報告；−又、松材らは該菌の胞子形成
能とセファロスポリンＣ生産量との１１１１に良い相関
関係を見出している１、本発明の発明者ら（１永く微生
物の器官分化と二次代謝産物との関係について研究を続
けている者で一以前よりＣ，ａｃｒｅｕｏｎｉｕｍの培
養液中に胞子全分化誘導する活性物質が存在し、これを
単離して培養液中に添加すｉｚば胞子を分化誘導し゛Ｃ
セファロスフ」セリンＣの生産量が増加するｉｉＪ能性
がある事を指摘していたのであるが、今回その単離精製
に成功して本発明を完成させたもので、本発明の抗生物
質の生産を促進する機能を有する化合物は、下記の物理
化学的性質を有することを／特徴とするものである。

（１）分子量 本発明化合物のトリメチルシリル誘導体の質捕分析スＲ
クトラムを第１図に、又−゛アセチル誘導体の質；１１
：分析スペクトラムを第２１Δにそれぞれ示す、− これらスペクトシム中のσ〕／Ｚ値から本発明化合物の
分子量は二２４２と計算される。

（２）分子式 トリメチルシリルミ誘導体νこついて高分解能質量分析
を行ってその同位体存在比を測定することにより、本発
明化合物の分子式ばＣ７゜１．（４４０５Ｎ２と決定さ
れる。

（：３）核磁気共１賠 水素１弓子核についてｔｌｉｌｌ定した核両気共１ｅ１
吸収スヘクトラム４−第６シ］　Ｈこ示ず。

１４）紫外部吸収 異るＰＪ−１下に於ける紫外部吸収スベクトラノ・を第
４図に示す。

（５）円１稲光二色性（ＣＤ　） 本発明化合物の円編ｙ（−二色性スペクトラムを第５図
に示″ｔ。

（６戸林−性 高速液体クロマトグラフに於て、複数の１１↓体に対し
て単一ピークを示す。

即ち、本発明化合物ばＣ，ａｃｒｅｎｏｍｉｕｍ　の二
次代謝産物であり、極めて微量であるために構造決定を
する捷でには至っていないが、これをトリメチルシリル
化及びアセチル化して誘導体と力し、核磁気共鳴吸収ス
ー４クトル（以下、Ｎ　Ｎｉ　Ｒスー；クトルという）
を測定したところ、それらにそ力、それデトラートリメ
チルシリル体及びトリアセチル体であることが６（ｆ、
認されたので、次いで質量分析スベク）ル（以下〜マス
スイクトルという）を測定したところ、トリメチルシリ
ル体はｒ＋ｙ’Ｚ　４４０に〜又、アセチル体はｍ／Ｚ
　３６８にそれぞれピークを示すことから（第１図及び
第２図参照）、本発明化合物の分子Ｑｌ−１２４２と計
算することができる。

父、本発明化合物の分子式は−ｆ？ｉＪ記トリメチルシ
リル体の高分解能マススペクトルを測定し、観測したピ
ークの同位体存在比′ｆｅＸｆ−出してこれに各構成元
素の質Ｍをあてはめることによ！Ｊ　Ｃｌ０Ｉ（１４０
５ＮＺと決定することができる。

更に一種々の溶媒を用いて測定したＮ　ＨＲスベクトラ
ム（第６図参照）によれば、Ｄ２０を溶ｆｌ粱とした場
合メチル基〜へナロ原子の結合１７たメチレルを溶媒と
すると１プロトンずつに分離し一更にＤ　Ｍ　Ｓ　Ｏｋ
溶媒とし／こ観測から４．５７’Ｊ至５　ｐｐｍに他の
シグナルがイｆ在１〜ないことが６１［認さオｔブこ、
−・力、本発明化合物の紫外部吸収、スばクトラム（第
４図シ珍照）は、中性で測定した椙合は２１５１ｍ、２
４２　ｎｒｎ、３０２　ｎｍに吸収極大’Ｃ７仁１／　
−酸性（ＰＩ−１２）では３０２　ｎｍの吸収極太ｆｉ
３０８１ｍに長波長シフトし一又、アルカリ性（ＰＨ１
２）では２１５’ｎｍの吸収極大が２３０　ｎｍＫ−３
０２ｎｍの吸収極大が５２　Ｑ　ｎｍにそれぞｉｔ長波
長シフトし、これらのシフトｐａｔ非可逆的であった。

こｈらの事実から、本発明化合物のクロムフォアには塩
基性官能基が共役１７ていることが示唆される４、父、
本発明のＣＤスにクトラムは第５図に示す通りであり、
これら各種のスばクトラムは本発明化合１勿」Ｉのもの
で、いずれも本発明化合１勿の部分構造を推定する手段
として有用される。

以上のような物理化学的性質全治する本発明化合物は−
Ｃ，ａｃｒｅｎｏｍｉｕｍの培養液中から次のようにし
て単離精製することができる５、 即ち、オずＣ−、ａ−ｃ、　ｒ−ｅ−２λｏｕｉ児すの
培養濾液を活性炭カラムクロマトグラフィーに付し〜水
性ア十トンを溶出溶媒と１−て展開し、活性を有する分
画を得、次いでＩ）　Ｅ　、Ａ、　Ｅセファデックス（
Ｅ頂品名）のカラムクロマトグラフィーに伺して０．Ｉ
　Ｎの酢酸を溶出溶媒として展開し、活性全イエする分
画ケ得〜これを更に水性メタノール溶解部と不溶部とに
分離するのであり、この時点でに該メタノール溶解部に
強い分節胞子形成活性及びセファロスポリン生産促進活
性が認められるが、末だ単一化合物ではない。

次いで前記メタノール溶解部ケ七ファデックス（）−１
０（商品名）のカラムクロマトグラフィーに付し、水を
溶媒として展開１〜、他の活性物：ｑ５　ｆ、＋含む分
画Ａと本発明化合物を含む分画Ｂとに分離するのであり
へ本発明化合物は該分画Ｂヶ更にＤＥＡＥセファデック
スＡ−２５（商品名）等のカラムクロマトグラフィーに
付し、酢目夕溶液により展開して最終的に単離されたも
ので、各種担体を用いｆｃ高速液体クロマトグラフ（以
下、Ｈ、Ｐ　Ｌ　Ｏトイウ）による分析ですべて単一の
ピークに示すので、純粋な単一化合物と考えることがで
きる。

而して、このようにしてイｎられた本発明化合物は〜前
記分画Ａ中の他の活性物質２５０μり／ＩＩＴｔの共存
下、０．０６μ？という低濃度で本来胞子を形成できな
いような培養条件下にあるＣ　ａ−一一乃υ〕−尺の分
節胞子形成を誘導し、この結果から予想坏れるように、
前記他の活性物質の共存下、０．０３μ？／ｍＡという
低濃度でＣ−、ａ−ｃｒｅ−μ懸坤甲の一ヒフアロスポ
リンＣ生産を促進し、本発明化合物添加群は未添加群に
比較して約６倍のセファロスポリンＣ全生産したのであ
る。

尚〜本発明化合物はそれ単独では分節胞子全形成したり
セファロスポリンＣの生産を促進したすせず、前記他の
活性物質の共存下に於て初めて前記効果を発揮するもの
で、前記他の活１″ト物質（１本発明化合物の活性化を
図るものではないかと考えられ、従って本発明化合物は
１１！２の化合物と組合せてもセファロスポリンＣの生
産を促進する可能性があると考えられる。因に、前記他
の活ぜＬ物質のみでは何等の効果を示さないことが明ら
かとなっているから、当該他の活性物質が単独でセファ
ロスポリンＣの生産を促進するとは考えられない。

次に本発明を完成するに至る寸での実験例について′述
べる。

災、嵌例１　本発明化合物の単に Ｃ，ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　Ａ　Ｔ　ＣＣ１４５５５の
培養’ｉＸｉ　液２００ｔを濾過した後、濾液を活性炭
のカラムクロマトグラフィーＶこ付して水性アでトンを
溶出溶媒とし展開してアセトンを１０９６含む溶媒で溶
出される分画百：得、これをＤ　Ｅ　Ａ　Ｅセファデッ
クス（商品名）ＯＨ壓のカラムクロマトグラフィーに伺
して０．１規定酢酸によジ俗出さｉする分１１ｊ１を得
、これを水性メタノールで扱い水性メタノール’ｔｊ′
：　Ａ’４部と水性メタノール不浴部とに分離した。

次に前６己水性メタノールｆｒ１月Ｗ部台・セファデツ
クス（１−１０（商品名）のカラムクロマトグラフィー
に付し、先に溶出する本発明以外の活性物を含む分画Ａ
ｆｒ１５−５７〜後れて溶出する本発明化合物を含む分
画Ｂ　ｆ　７９３　ｍ’ｓ得るので、該本発明化合物を
含む分画Ｂ　ｉ−Ｄ　Ｅ　Ａ　ＥセファデックスＡ−２
５（商品名）ＡＣＯ−型により二度精製し、次にリクロ
ソルゾＲ，Ｐ　−１８（商品名）全周（八たＨ　ｌ）　
Ｌ　Ｃｆｌこよりキ１ノ製し、更に又クレオシルＣａ１
４．及びデベロシルＯＳ　、Ｄ　（いずれも商品名）′
ｊｆ−用いたＩ（ＰＬ　Ｃに付して零光明化合物ケ得た
のであり、ｔ（ｐ　’［ｉ　ｃのチャートはいずれも酢
−ビークを示し。

た。尚、この実験により単一性の確認六）また本発明化
合物の収ｉげ、２００　／−の培妥濾液から７００μ７
であった〜 実験例２　本発明化合物の活性 本発明化合物を含む分画Ｂ　ｊｌユ、ｉ［ゆｊするにつ
れて以下に示すように分＃胞子形成活性及びセファロス
ポリンＣ生産促進活性を強め、木尾明化合物が嘔雛され
るに至ってそれらの活性に最ｊ島に達し、・ζ　、ｊ■
、’ｒ４　Ｌ：ｌ′１ｉｉｉケＬ子形成活性は閉子が分
節胞子（・て変化すると菌体がすみやかに沈降して培養
液が黄色く着色するので、これを肉眼で観察することに
より判定し、又、セファロスポリンＣ生産促進活性はＨ
Ｐ　Ｌ　Ｃにより一総合的抗菌性（セファロスポリンＣ
とペニシリンＮとによる抗菌性）は８ａ１ｍｏｕｅｌｌ
ａ　ｑａｌｌｉｎａｒｕｍ　ｋ被検菌とするペーパーデ
ィスク法により行った。

尚、セファロスポリンＣ生産量と総合的抗菌性のコント
ロールに対する比率が異るのは、被検菌として用いた５
−１ｑ町サー嬰ノー−思すのセファロスポリンＣとズニ
シリンＮとに対する感受性の差によるものと考えられる
。

又一本実験では七フーアデツクス几Ｐ−１８で精製した
本発明化合物を用いたが、更に他の担体音用いたＨ　Ｐ
　Ｌ　Ｃにより精製したもの分用いれば〜一層低濃度で
同様の活性を示すことが期待される。

代理人　　小　　泉　　良　　邦 手　　続　　補　　任−■ 閉子［１５７年１１月ｉ　日 特パ′「片長′自　　名　　杉　　オＥ１　　　夫　　
殿１事件の表示 昭卸５７年特許願第１７４５００−号 ２発明の名ｆ］、 わｉ生物性の生産を促進する機能を不する化合物五袖ｉ
ト苓・する渚 用例との関係　　ｔｌ′５言′ト出願人東京都文京区向
１〒１−２［１−６ファミー刀本郷１４０２イイ限＋ｔ
＋　　エム・ニス・ンー 代表者　　宮　　　尾　　興　　平 ４代　［１人 郵便番号　１０５ 東京都涛区新橋２丁目５番６号 （２）同じく「発明の詳細な説明」の欄６補正の内容 添附利払のとおり 補　　正　　の　　内　　容 （１）本願の１特許請求の範囲」を添附利払のとおり袖
ｉ）−する （２）本願の「発明の詳糺Ｉｆｒ曲明」に於て、明細書
第４貞第１行を。

と■（ａｘ　ｂ　ｅ　ｒは１９７１年に計画の菌糸が胞
子へと分 に補圧する。

に補正する。

（４）同じく、第５貞第６行、第６自第１１？ｊ及び第
１２行のｌ−ｍ／Ｚ　ｊを、 ｍ／　７゜ に補正する。

（５）同じく、第５負第７行の［同位体存在比−１を精
密な質Ｍ に袖１Ｆ、する。

（６）■じく、卯６頁第２行、第８頁第６行のｒｃ。

へ９１刀Ｏ甲ｊ−Ｗ甲」を覧 Ｃ、ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ こ補正する。

（７）　ＰＩじく、ｎ゛６頁第１７行の［−同位体存在
比をη−出」を。

着席な質部を沖１定 に補正する。

（８）回じく、第７頁第３行の［ン基、メチｌ／ン基か
・・」を、 ン基が各１つ、メチン基が・・・ に補正する。

（９目７ｔｌじく、同頁第６行のｒＤＭｓＯＪを、重１
）　Ｍ　Ｓ　Ｏ Ｋネ１１正する− （ＩｆＪ同じく、回頁第１５行の「゛非可逆的」を、ｐ
ｉ浄的 Ｖ（補正する。

θυ−１しく、同頁第１７行の１−塩基性官能基」を。

解離性′１能基 ＶＣ相１圧する。

α− Ｃ、ａＬｒ＜１ｍｏｎｉｕｍ に補正する。

０同じく、同貞第８行の「セファテックス」金、セファ
テックスＡ−２５ に補ｉ１−する、 θ４同じく、旭９貞第２行の１−酢酸沁液」を、水 に補１トする、 ００回し−く、ｆＰ、９頁第１０行及び第１３行の１−
Ｃ９ａ、ｃｒｏｎｏｎｌｕｍ　、１を。

Ｃ、１３−ＣＬｑｍ、９ｎ、−＞ｕｍ に袖ｉＴ：する。

０→同じく、第１０百第１５行乃ヤ第１６イイの［セフ
ァテックス（商品名）ＯＨ型−１を、セファテックスＡ
−２５（商品名）ＯＨ−型に判１ｍする。

αη同１″、く、第＋Ｉｆ＋第６１−ｊのｒ　ＡＣＯ−
型」を。

ＡＣＯ−型 に袖ｉＥする。

θ枠同じく、同貞第９行のｒ　ＯＳ　Ｉ）　Ｊを、ＩＪ
Ｓ１ にネ山ｉトする。

（ｌ軸回じく、同頁第２０行の［第イ」を。

菌糸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１に袖１■−する。

は）同じく、第１２頁第２行の１これを肉眼−１を、こ
れ全肉眼及０・顕微鏡 に補正する。

Ｑυ同じく、Ｎ白糖６行のｒ　Ｓａ　１ｍｏｕｅ　ｊｌ
ａ　Ｉａ−ｊｌ　ｉ　ｒ＋ａ−ｒ−ｕｍ　、１を、 □ Ｓり酉２択１−坏簡上朋リー鳥史　　　　　　　　　　
　　　　１に補正する。

翰同じく、第１３頁及び第＋４’ｉ’、＄四をそれぞれ
添附別紙のとおり補正する （ト）同じく、第１５負第６行のｒ　３．ｑａｌｌｉｎ
ａ、ｒｕｍ　ｊを。

Ｓ　−ｇａ　ｌ　ｌ　ｉｎａｒｕｍ に補正する。

（ハ）凹じく、同頁第６行の［セファデックス−１を。

リクロソルフ に補止する。

（ハ）同じく、同頁第８行乃至第９行の記載を。

用いたＨ　Ｐ　Ｌ　ＣＫより精製したものを用いると、
一層像濃度で同様の活性を示した。

Ｋ補正する。

特許請求の範囲 １．１記の物理化学的性質をイｊすることを特徴とする
抗η物質の生産をイＷ進する煕奸を有する什合０°　　
　　　　　　　　　　　　１ （１）分子量 本発明化合物のトリメチルシリル誘導体の質量分相スペ
クトラムを第１図に、又、了セチル誘導体の質覇分１ｉ
スペクトラムを第２図にそれぞれ示す。

これらスペクトラム中のｍ、／ｚ値から本発明化合物の
分子量は２４２と計算される。

（２）分子式 トリメチルシリル誘導体について高分解能質量分析を行
ってその精密で９量を測定することにより、本発明化合
物の分子式はＣ＋ｎ　ＨＩ４０量％と決定される。

（３）核徂う気４１嶋 水累陽子杉について測定した核磁気共鳴吸収スペクトラ
ムを第３図に示す。

（４）紫外部吟収 異るＩ））（、−Ｆしく−於ける紫外１ＸＩＸ＋虞、収
スペクト・）ノ、を第４−′］に示す、 （５）円偏光二色性（Ｃ１）’） 本発明什＠物の円偏光二色性スペクトラムを第５図関九
す。

（６）卯−性 高速沼一体りＬ′：ｌマドグラフに於て、複数Ｃ）打」
１本に対して、ｌ’ｉ−ヒ−りを示ず。

２、　　Ｃ，ｅ−１すｔａｌｏｓ四η−Ｖ堅ａｃｒｅｒ
４ｔｏｎｉｕ＋ｍ　簀にりわ’ｒ’、　！４５１勿１屑
生産菌を培養し７、培養濾液からクロマトクラフ等う頒
宜の手段によりＩｖ−Ｉ離桔製ｌ〜たことを特徴とする
特訂請寸の範囲第１項記載の抗牛物儒の４ｉ年を（ＩＮ
進する枠部を千する化合物。

一〒■−続辛市Ｔ巨書：（方式） ％式％ １、事件の表示 昭和５７年　特許願　第１７４３００号２、発明の名称 抗生物質の生産を促進する機能を有する化合物３補屯を
オろ考 事イ／１との関係　　特許出煕人 東京都文京１メ、向斤］、−２０−６ フアミール本郷１４０２ 有限今冬１　エム・ニス・シー 代表者　　宮　　　尾　　　興　　　平　　　　・　　
、。　、−・１２代　理　人　　　　　　　　　　　　
　−・′郵便番じ　１０５ 東京都港区新橋２−「［１５番６号　大村ビル６５０２
　　　小　　　泉　　　良　　　邦、″、＜６、べ・電
話　東京、９□−６８８５−８０２８゛・　ダ′５゜浦
止命令の目イ・１ 昭和５９年２月８［］（発送日　昭和５９年２月２８ト
１）６、補正の対象 明細書の「図面の簡ｑ１、な説明」の欄７、補正の内容 本願の明細書の第１５頁第９行の後に、「図面の簡１）
５な説明ｊの欄を１に記のよう１こ伺力Ｉ）する。

Δ己 ４、図面の簡単な説明 第１図は本発明化合物のトリメチルシリル誘導体の〒ｑ
量分析スペタ１〜ラム本・示ずザヤーＩ〜、第：２図は
本発明化合物のアセデル話２尊体の質−ｈ支分十バスベ
ターーラｌ、を小１チ’？−１−５第３図（３１，本発
明化合物の核磁気共鳴吸収スベクＩ・）１１を示」゛−
ヂ〜、　　ｉ−１第４１図は同しく紫外部１羨収スベタ
Ｉ−ラ１５を示すチャー１へ、第５図は１司しく円編ソ
Ｌ”色・１１１人ベイノ１へラムを示・［チャー　トで
ある。

５５１−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の物理化学的性質を有することを特徴とする抗
   生物質の生産を促進する機能を有する化合物。 （１）分子量 本発明化合物のトリメチルシリル誘導体の質量分析スペ
   クトラムを第１図に、又、アセチル誘導体の質量分析ス
   ペクトラムを第２図にそれぞれ示す。 これらスにクトラム中の＋１１／′ｚ値から本発明化合
   物の分子量は２４２と計算される。 （２）分子式 トリメチルシリル誘導体について高分解能質量分析を行
   ってその同位体存在比を測定することにより、本発明化
   合物の分子式はｃ、ＯＨｌ　４　ｏ、　Ｎ２と決定され
   る。 （３）核磁気共鳴 水素陽子核について測定した核磁気共鳴吸収スペクトラ
   ムを第６図に示す。 （４）紫外部吸収 異るＰＨ下に於ける紫外部吸収スペクトラムを第４図に
   示す。 （５）円偏光二色性（ＣＤ　） 本発明化合物の円偏光二色性スペクトラムを第５図に示
   す。 （６）単一性 高速液体クロマトグラフに於て、複数の担体に対１−で
   単一ピークを示す。 菌を培養し一培養濾液からクロマトグラフ等適宜の手段
   により単離精製したことを特徴とする特許請求の範囲第
   １項記載の抗生物質の生産を促進する機能を有する化合
   物。