JPS5871887A - 細胞融合法 - Google Patents
細胞融合法Info
- Publication number
- JPS5871887A JPS5871887A JP56168953A JP16895381A JPS5871887A JP S5871887 A JPS5871887 A JP S5871887A JP 56168953 A JP56168953 A JP 56168953A JP 16895381 A JP16895381 A JP 16895381A JP S5871887 A JPS5871887 A JP S5871887A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fusion
- cells
- agent
- cell fusion
- acrylate
- Prior art date
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- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
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- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は細胞の融合法に関する。より詳細に述べると、
本発明は水溶性高分子の存在下におけるモノマーによる
細胞の融合法に関する。
本発明は水溶性高分子の存在下におけるモノマーによる
細胞の融合法に関する。
近年、細胞工学および遺伝子工学の発展に伴い細胞融合
の技術が盛んに使用されるようになってきた。免疫学に
おいては抗原を攻撃するような抗体を生産する特異な細
胞と増殖性の活発なガン細胞とを融合させて大量に抗体
を生産させ、それを治療用に使用し動物実験では可成り
の成果をおさめている。そのほかにも細胞の融合技術は
動物細胞の融合においては有用なものの生産や植物細胞
では品種の改良などに応用されている。
の技術が盛んに使用されるようになってきた。免疫学に
おいては抗原を攻撃するような抗体を生産する特異な細
胞と増殖性の活発なガン細胞とを融合させて大量に抗体
を生産させ、それを治療用に使用し動物実験では可成り
の成果をおさめている。そのほかにも細胞の融合技術は
動物細胞の融合においては有用なものの生産や植物細胞
では品種の改良などに応用されている。
所で、細胞を融合させるには融合させようとする細胞同
志の橋渡しをする物質が必要であって、これを１融合剤
”と称している。融合剤に対応するものとしてセダイウ
イルスと化学的な物質がある。融合剤に最も要求される
ことは効率よく系内の細胞全部を融合出来ることである
。現在までに種々の融合剤が開発されてきたが理想的な
ものはいまだ完成されていない。然しなから、多くの融
合剤がその効果を試験されている。その中で現在量も融
合を誘発し易いとされ、広範に使われている融合剤はポ
リエチレングリコール（ＤＥＧ）である。細胞の融合剤
になるものは、まず細胞を凝集させ且つ細胞膜を破壊す
ることなく適度に細胞膜を刺激（活性化）するようなも
のが適してい為。
志の橋渡しをする物質が必要であって、これを１融合剤
”と称している。融合剤に対応するものとしてセダイウ
イルスと化学的な物質がある。融合剤に最も要求される
ことは効率よく系内の細胞全部を融合出来ることである
。現在までに種々の融合剤が開発されてきたが理想的な
ものはいまだ完成されていない。然しなから、多くの融
合剤がその効果を試験されている。その中で現在量も融
合を誘発し易いとされ、広範に使われている融合剤はポ
リエチレングリコール（ＤＥＧ）である。細胞の融合剤
になるものは、まず細胞を凝集させ且つ細胞膜を破壊す
ることなく適度に細胞膜を刺激（活性化）するようなも
のが適してい為。
ＰＥＧ でも融合率は細胞の種類によって多少異なるが
１０〜３０チ程度である。また、ＡとＢの異種細胞の融
合を行なっても、同種細胞同志の融合および２つ以上の
細胞の融合が起り、目的とするＡとＢからなる二つの細
胞が融合する確率は低い。
１０〜３０チ程度である。また、ＡとＢの異種細胞の融
合を行なっても、同種細胞同志の融合および２つ以上の
細胞の融合が起り、目的とするＡとＢからなる二つの細
胞が融合する確率は低い。
従って、高率で融合を起し、且つ二つの細胞からなる融
合体をつくる様な融合剤を発見することはきわめて意義
がある。
合体をつくる様な融合剤を発見することはきわめて意義
がある。
本発明者等は、種々の細胞を種々の基材上で培養する研
究を進めて゛いるうちに細胞同志を高率で融合する融合
方法が必要になった。そこで主としてガラス化性モノマ
ーを中心に細胞を高率で融合する融合剤を探索した結果
ＰＥＧ よりも可成り高率で融合を起すモノマーを発見
した。然しなから、モノマーのみを用いて細胞同志の融
合を行おうとすると細胞が融合する前にほとんどの細胞
が失活するという欠点がある。そのためにモノマー単独
で細胞の融合を行う場合には１分以内というきわめて短
い時間に融合を完結する必要がある。然しなから、この
ような短い時間で均一に融合操作を行うことはかなり困
難である。従って、失活細胞を生成させることなく融合
を十分確実に行うだめには融合時間を延長させるための
保護剤が必要となる。本発明では保護剤として水溶性高
分子を使用することを特徴とするものである。即ち、本
発明の目的は、細胞の失活を防止するポリマーと融合剤
としてのモノマーを使用して細胞を融合する方法を提供
することである。本発明に従えば、融合を１０分以内に
行えば、細胞を失活させることなく効率よく融合を完結
することが出来る。更に、本発明に従うことによって融
合時間が延長出来るため、融合剤が細胞膜表面に十分拡
散していき、細胞同志の接触も十分起きて融合効率が増
加する。
究を進めて゛いるうちに細胞同志を高率で融合する融合
方法が必要になった。そこで主としてガラス化性モノマ
ーを中心に細胞を高率で融合する融合剤を探索した結果
ＰＥＧ よりも可成り高率で融合を起すモノマーを発見
した。然しなから、モノマーのみを用いて細胞同志の融
合を行おうとすると細胞が融合する前にほとんどの細胞
が失活するという欠点がある。そのためにモノマー単独
で細胞の融合を行う場合には１分以内というきわめて短
い時間に融合を完結する必要がある。然しなから、この
ような短い時間で均一に融合操作を行うことはかなり困
難である。従って、失活細胞を生成させることなく融合
を十分確実に行うだめには融合時間を延長させるための
保護剤が必要となる。本発明では保護剤として水溶性高
分子を使用することを特徴とするものである。即ち、本
発明の目的は、細胞の失活を防止するポリマーと融合剤
としてのモノマーを使用して細胞を融合する方法を提供
することである。本発明に従えば、融合を１０分以内に
行えば、細胞を失活させることなく効率よく融合を完結
することが出来る。更に、本発明に従うことによって融
合時間が延長出来るため、融合剤が細胞膜表面に十分拡
散していき、細胞同志の接触も十分起きて融合効率が増
加する。
以下、本発明の構成を詳細に説明する。
先ず、遠心分離して血清入り培地を除去した１００〜３
００Ｘ１０ 個／ｄの細胞（セルパック）〔Ａ３群の
一般式で表わされる融合剤としてモノあるいはジのアク
リレートあるいはモノあるいはジメタクリレートおよび
［Ｂ１群に例示した保護剤としての水溶性高分子を溶解
した溶液を試験管をゆっくり回しながら加えた後３７℃
に加温して細胞同志を十分融合する。その後、１０ゴの
培地を加えて遠心分離によって水溶性高分子と融合剤を
除去する。水溶性高分子および融合剤を除去した系に血
清を含む培地中で融合細胞の増殖をはかることによって
本発明は更に発展させることが出来る。
００Ｘ１０ 個／ｄの細胞（セルパック）〔Ａ３群の
一般式で表わされる融合剤としてモノあるいはジのアク
リレートあるいはモノあるいはジメタクリレートおよび
［Ｂ１群に例示した保護剤としての水溶性高分子を溶解
した溶液を試験管をゆっくり回しながら加えた後３７℃
に加温して細胞同志を十分融合する。その後、１０ゴの
培地を加えて遠心分離によって水溶性高分子と融合剤を
除去する。水溶性高分子および融合剤を除去した系に血
清を含む培地中で融合細胞の増殖をはかることによって
本発明は更に発展させることが出来る。
本発明を実施するに当って使用される融合剤のモノマー
濃度は４０〜５０重量％が望ましい。然しなからモノマ
ーの濃度はモノマーの分子量に多分に依存して決定され
る。即ち、モノマーの分子量が太きいと溶解した場合に
系内の粘度が高くなり過ぎ、逆に融合効率が低下する。
濃度は４０〜５０重量％が望ましい。然しなからモノマ
ーの濃度はモノマーの分子量に多分に依存して決定され
る。即ち、モノマーの分子量が太きいと溶解した場合に
系内の粘度が高くなり過ぎ、逆に融合効率が低下する。
従って、モノマーの分子量が大きい場合は４０％程度の
濃度が望ましい。保護剤となる水溶性高分子の濃度は５
〜１０重量％が望ましく、モノマーの分子量が高いとき
は保護剤のポリマー濃度は５％程度に低くくした方がよ
い。融合時間は５〜１０分程度程度ましく、短か過ぎる
と融合が完結しない。本発明に従えば、動物細胞および
植物細胞の同種卦よび異種細胞同志が高率で融合される
。従って、本発明は細胞の種類等に拘束されない。
濃度が望ましい。保護剤となる水溶性高分子の濃度は５
〜１０重量％が望ましく、モノマーの分子量が高いとき
は保護剤のポリマー濃度は５％程度に低くくした方がよ
い。融合時間は５〜１０分程度程度ましく、短か過ぎる
と融合が完結しない。本発明に従えば、動物細胞および
植物細胞の同種卦よび異種細胞同志が高率で融合される
。従って、本発明は細胞の種類等に拘束されない。
本発明で保護剤として使用されるモノマーは下記〔Ａ３
群の一般式で示されるアクリレートあるいはジアクリレ
ートである。
群の一般式で示されるアクリレートあるいはジアクリレ
ートである。
［”Ａ１群、
ここに例示したアクリレートおよびジアクリレートのオ
キシエチレン基のｎは１０以上である。
キシエチレン基のｎは１０以上である。
ｎが９以下の場合水溶性高分子の存在下でも融合能が全
くなく、細胞゛も失活する。特にｎの数を特定するなら
ばｎ＝２３およびｎ＝５０である。ｎ＝２３の場合は水
溶性高分子の存在下ではじめて融合を起すようになる。
くなく、細胞゛も失活する。特にｎの数を特定するなら
ばｎ＝２３およびｎ＝５０である。ｎ＝２３の場合は水
溶性高分子の存在下ではじめて融合を起すようになる。
ｎ＝５０の場合は、水溶性高分子が存在しない場合でも
細胞の失活がほとんどなく融合させることが出来る。
細胞の失活がほとんどなく融合させることが出来る。
本発明で保護剤として使用される水溶性高分子は下記〔
３３群に例示される； ポリアクリル酸ソーダ、ポリビニルアルコール、ポリビ
ニルピロリドン、ポリアクリルアミド、繊維素グリコー
ル酸ナトリウム、ポーリーＤＬ−アラニン、ポリーＬ−
アルギニン塩酸塩、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリーＬ
−ヒスティジン、ポリーＤ−リシン臭化水素塩、ポリ３
−ヒドロキシプロピル−Ｌ−グルタミン、ホリーＤ Ｌ
−ＩＪシン臭化水素塩、ポリーＬ−リシン臭化水素塩、
ポリーＬ−リシン塩酸塩、ポリーＬ−オリニチン臭化水
素塩、ポリ−トープロリン、ポリーＬ−チロシン、ポリ
Ｎ−メチルグリシン等。保護剤は上に例示したものの池
水に溶解する水溶性高分子であれば。
３３群に例示される； ポリアクリル酸ソーダ、ポリビニルアルコール、ポリビ
ニルピロリドン、ポリアクリルアミド、繊維素グリコー
ル酸ナトリウム、ポーリーＤＬ−アラニン、ポリーＬ−
アルギニン塩酸塩、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリーＬ
−ヒスティジン、ポリーＤ−リシン臭化水素塩、ポリ３
−ヒドロキシプロピル−Ｌ−グルタミン、ホリーＤ Ｌ
−ＩＪシン臭化水素塩、ポリーＬ−リシン臭化水素塩、
ポリーＬ−リシン塩酸塩、ポリーＬ−オリニチン臭化水
素塩、ポリ−トープロリン、ポリーＬ−チロシン、ポリ
Ｎ−メチルグリシン等。保護剤は上に例示したものの池
水に溶解する水溶性高分子であれば。
合成高分子、半合成高分子、天然高分子のいずれでもよ
い。
い。
以下実施例を揚げ本発明の構成および効果を具体的に説
明する。
明する。
〔実施例１〕
ポリビニルピロリドン０．ＩＰおよびメトキシポリエチ
レングリコールメタクリレート ０．４ＰをＭＥＭ培地０．５ｆ中に溶解し、それを遠心
分離し血清入り培地を除去して試験管を除々に回転させ
ながらセルパックしたＭｏ１ｔ Ｔ −ｃｅｌ’ｌ中に
添加し、５分間３７℃でインキュベーションした。その
後、１０ｄの培地をかえ、遠心分離してポリマーと融合
剤を除去した。融合率は４３．７％にも達し、そのうち
の７０％以上が２つの細胞から成る融合体を生成した。
レングリコールメタクリレート ０．４ＰをＭＥＭ培地０．５ｆ中に溶解し、それを遠心
分離し血清入り培地を除去して試験管を除々に回転させ
ながらセルパックしたＭｏ１ｔ Ｔ −ｃｅｌ’ｌ中に
添加し、５分間３７℃でインキュベーションした。その
後、１０ｄの培地をかえ、遠心分離してポリマーと融合
剤を除去した。融合率は４３．７％にも達し、そのうち
の７０％以上が２つの細胞から成る融合体を生成した。
〔実施例２〕
ポリビニルピロリドン５０岬を含むＭＥＭ培地溶液０．
６ｙにメトキシポリエチレングリコールメＭ−５０Ｇ）
の０．４１を溶解した。その溶液を予め遠心分離によっ
て血清入り培地を除去したＭｏ１ｔＴ−Ｃｅｌｌのセル
パックに試験管を回し１ながら加え、１０分間３７℃で
インキュベーションした。その後１０ｍの培地を加え、
遠心分離してポリマーと融合剤（モノマー）を除去した
。融合率は４５．３チに達し、そのうちの７７％が２つ
の細胞から成っていた。
６ｙにメトキシポリエチレングリコールメＭ−５０Ｇ）
の０．４１を溶解した。その溶液を予め遠心分離によっ
て血清入り培地を除去したＭｏ１ｔＴ−Ｃｅｌｌのセル
パックに試験管を回し１ながら加え、１０分間３７℃で
インキュベーションした。その後１０ｍの培地を加え、
遠心分離してポリマーと融合剤（モノマー）を除去した
。融合率は４５．３チに達し、そのうちの７７％が２つ
の細胞から成っていた。
点−。
これら実施例１および２の結果は、従来のＰＥ（）によ
る融合よりも１５％はど高い効率で融合が起き、また有
用物質などの産生に有利な２つの細胞からなる融合体の
割合が著しく多い。
る融合よりも１５％はど高い効率で融合が起き、また有
用物質などの産生に有利な２つの細胞からなる融合体の
割合が著しく多い。
特許出願人 日本原子力研究所
（外２名）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、同種又は異種同志の細胞を融合する方法において；
下記の一般式であられされる細胞融合剤としてのモノ（
メタ）クリレート又はジ（メタ）クリレートおよび保護
剤としての水溶性高分子から実質的に成る系中で同種又
は異種の細胞を混合することから成る細胞融合法； ＣＨ３０−（ＣＨ２ＣＨ２−○キＣ−０Ｈ＝ ＣＨ２１ 但し；ｎは１０以上の整数。 ２ メタクリレートがメトキシポリエチレングリコール
メタクリレート である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、 メタクリレートがメトキクポリエチレングリコー
ルメタクリレート である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４、細胞融合剤の濃度が４０〜５０重量％であ′る特許
請求の範囲第１項記載の方法。 ５、保護剤の濃度が５〜１０重量％である特許請求の範
囲第１項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56168953A JPS5871887A (ja) | 1981-10-22 | 1981-10-22 | 細胞融合法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56168953A JPS5871887A (ja) | 1981-10-22 | 1981-10-22 | 細胞融合法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5871887A true JPS5871887A (ja) | 1983-04-28 |
| JPS6153037B2 JPS6153037B2 (ja) | 1986-11-15 |
Family
ID=15877602
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56168953A Granted JPS5871887A (ja) | 1981-10-22 | 1981-10-22 | 細胞融合法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5871887A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4677066A (en) * | 1982-12-27 | 1987-06-30 | Mitsui Petrochemical Industries, Ltd. | Method for promoting fusion of plant protoplast |
-
1981
- 1981-10-22 JP JP56168953A patent/JPS5871887A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4677066A (en) * | 1982-12-27 | 1987-06-30 | Mitsui Petrochemical Industries, Ltd. | Method for promoting fusion of plant protoplast |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6153037B2 (ja) | 1986-11-15 |
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