JPS5859954A - ヨ−ドチロニン化合物の誘導体および遊離ヨ−ドチロニン化合物の分析におけるそれらの使用 - Google Patents
ヨ−ドチロニン化合物の誘導体および遊離ヨ−ドチロニン化合物の分析におけるそれらの使用Info
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- JPS5859954A JPS5859954A JP14602581A JP14602581A JPS5859954A JP S5859954 A JPS5859954 A JP S5859954A JP 14602581 A JP14602581 A JP 14602581A JP 14602581 A JP14602581 A JP 14602581A JP S5859954 A JPS5859954 A JP S5859954A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はヨードチロニン化合物の誘導体および遊離ヨー
ドチロニン化合物の分析にそれを使用する方法に関する
、本発明の新規誘導体は一般式 を有する化合物である。
ドチロニン化合物の分析にそれを使用する方法に関する
、本発明の新規誘導体は一般式 を有する化合物である。
式中、ｘｌ、ｘｌ、！”オヨびＦ（７）各々ハ独立ニＣ
１、Ｂｒ、 ＩまタハＨｔ” アル、ただし、Ｘｉ、Ｘ
”、ｘｍオよびｘ４の少なくとも一つは工であり、ｘｌ
、ｘｌ、ｒおよび！４の少なくとも二つはハロゲンであ
る。
１、Ｂｒ、 ＩまタハＨｔ” アル、ただし、Ｘｉ、Ｘ
”、ｘｍオよびｘ４の少なくとも一つは工であり、ｘｌ
、ｘｌ、ｒおよび！４の少なくとも二つはハロゲンであ
る。
ＲはＯＨ，アミ７基、アルキルアミノ基、ジアルキルア
ミノ基またはアルコキシル基である。
ミノ基またはアルコキシル基である。
各２は独立に−（”％）ｎ’％または一〇Ｍ、ＣＯＲで
あり、ｎは１，２または３である。
あり、ｎは１，２または３である。
各Ｒ基の種類は他に対して無関係である。好ましくはＲ
基の全部がヒドロキシル基である。
基の全部がヒドロキシル基である。
好ましくは２は分子中で０，１または２の場所で−（０
％ ）ｎ ”ｓであり、残りの場所で−ＣＩ、ＯＲであ
る。
％ ）ｎ ”ｓであり、残りの場所で−ＣＩ、ＯＲであ
る。
化合物はヨードチロニン化合物とアミノ酢酸化合物のア
ミドである。
ミドである。
意図とするコードチロニン化合物には下記のものを含む
。
。
ジーヨードチロニン ＩＨＩＨト
リーヨードチロニン Ｔ３１ＨＩＩリバースト
リーヨードチロニン ｒ−Ｔ３ Ｉ Ｉ
Ｉ Ｈチロキシン Ｔ４
Ｉ Ｉ Ｉ Ｉ意図とするアミノ酢酸化
合物には下記のものニトリロトリ酢酸 ＮＴＡ
０ −特に興味ある重要なも
のはチロキシンと釦Ｔムのアミド（以下〒４・ＥＤＴＡ
と称する）である。
リーヨードチロニン Ｔ３１ＨＩＩリバースト
リーヨードチロニン ｒ−Ｔ３ Ｉ Ｉ
Ｉ Ｈチロキシン Ｔ４
Ｉ Ｉ Ｉ Ｉ意図とするアミノ酢酸化
合物には下記のものニトリロトリ酢酸 ＮＴＡ
０ −特に興味ある重要なも
のはチロキシンと釦Ｔムのアミド（以下〒４・ＥＤＴＡ
と称する）である。
これらの化合物は不整炭素原子を有し、従って光学的に
活性である。本発明はＬ−異性体、Ｄ−異性体および両
者の混合物を目的とする。
活性である。本発明はＬ−異性体、Ｄ−異性体および両
者の混合物を目的とする。
天然に生成するヨードチロニン化合物はＬ−異性体であ
る。以下に説明する方法に使用するため、本発明による
化合物のＤ−異性体は特に有利な性質を有する。
る。以下に説明する方法に使用するため、本発明による
化合物のＤ−異性体は特に有利な性質を有する。
ａ−ロツパ特許第００２６１０３号明細書には１種以上
の天然バインダーに結合した甲状腺ホルモンも含有する
生物学的流体中の遊離甲状腺ホルモンの濃度を測定する
方法が記載されており、この方法は、 （ａ）流体の試料を甲状腺ホルモンのラベル付き誘導体
および甲状腺ホルモンに対する特定バインダーと混合し
、 （ｂｌ遊離甲状腺ホルモン、そのラベル付き誘導体およ
び特定バインダーの間で反応を行なわせ、（６１必要な
らば特定バインダーに結合して来た甲状腺ホルモンおよ
びそのラベル付き誘導体の部分をかく結合していない部
分から分離し、（ｄ）特定バインダーに結合しているま
たは結合していない甲状腺ホルモンのラベル付き誘導体
の量を測定し、 （ｅ）生物学的流体中の遊離甲状腺ホルモンの濃度測定
のため上記測定値を使用する ことによって行ない、甲状腺ホルモンのラベル付き誘導
体を、添加した特定バインダーに対し強力に結合するが
、生物学的流体中の天然バインダーに対しては全く結合
しないか、甲状腺ホルモンに対するよりも非常に弱く結
合するよう選択することよりなる。
の天然バインダーに結合した甲状腺ホルモンも含有する
生物学的流体中の遊離甲状腺ホルモンの濃度を測定する
方法が記載されており、この方法は、 （ａ）流体の試料を甲状腺ホルモンのラベル付き誘導体
および甲状腺ホルモンに対する特定バインダーと混合し
、 （ｂｌ遊離甲状腺ホルモン、そのラベル付き誘導体およ
び特定バインダーの間で反応を行なわせ、（６１必要な
らば特定バインダーに結合して来た甲状腺ホルモンおよ
びそのラベル付き誘導体の部分をかく結合していない部
分から分離し、（ｄ）特定バインダーに結合しているま
たは結合していない甲状腺ホルモンのラベル付き誘導体
の量を測定し、 （ｅ）生物学的流体中の遊離甲状腺ホルモンの濃度測定
のため上記測定値を使用する ことによって行ない、甲状腺ホルモンのラベル付き誘導
体を、添加した特定バインダーに対し強力に結合するが
、生物学的流体中の天然バインダーに対しては全く結合
しないか、甲状腺ホルモンに対するよりも非常に弱く結
合するよう選択することよりなる。
甲状腺ホルモンはチロキシンおよびトリーヨードチロニ
ンから選択する。
ンから選択する。
特定バインダーは一般に甲状腺ホルモンに対する抗体で
あるか、多分適当な生物学的材料から分離した天然に生
成する蛋白質バインダーである。
あるか、多分適当な生物学的材料から分離した天然に生
成する蛋白質バインダーである。
甲状腺ホルモンのラベル付き誘導体は天然甲状腺ホルモ
ンバインダーに結合するのを阻止するため化学的に変性
し一一方では特定分析用バインダーには結合する≠の能
力を残しておく。
ンバインダーに結合するのを阻止するため化学的に変性
し一一方では特定分析用バインダーには結合する≠の能
力を残しておく。
同時に、この誘導体は才た放射性原子（または原子群）
、発蛍光団、光発色間、酵素または化学発光団の如き物
理的マーカーも含有するかまたはそれに結合している。
、発蛍光団、光発色間、酵素または化学発光団の如き物
理的マーカーも含有するかまたはそれに結合している。
放射性ラベル付けを使用するとき、沃素−１２５が好適
な同位体であるが、他のものも当業者には容易に思いつ
くであろう。この甲状腺ホルモンのラベル付き誘導体は
、添加した特定分析用バインダ一番こ対するよりも生物
学的試料の天然の甲状腺ホルモンバインダーに対して非
常に強くなく結合する（あるいは全く結合しない）こと
が必須の要件である。しかし、生物学的試料中の天然の
甲状腺ホルモン７バインダーの少量の弱く結合する成分
に対する甲状腺ホルモンのラベル付き誘導体の結合はこ
の方法を必ずしも無効にすることはないＯ ラベル付き誘導体は天然結合性蛋白質に対して有意に結
合しないから、特定バインダーとの反応のため遊離甲状
腺ホルモンと競争させるのに実質的に全部を利用できる
。そのため特定バインダーの低濃度の使用が可能であり
、しかもなお満足できる投与量応答曲線を得ることがで
きる。特定バインダーの低濃度の使用は、それが系中の
天然蛋白質バインダーからの甲状腺ホルモンの著しい除
去をもたらすことのないことで有利である。
な同位体であるが、他のものも当業者には容易に思いつ
くであろう。この甲状腺ホルモンのラベル付き誘導体は
、添加した特定分析用バインダ一番こ対するよりも生物
学的試料の天然の甲状腺ホルモンバインダーに対して非
常に強くなく結合する（あるいは全く結合しない）こと
が必須の要件である。しかし、生物学的試料中の天然の
甲状腺ホルモン７バインダーの少量の弱く結合する成分
に対する甲状腺ホルモンのラベル付き誘導体の結合はこ
の方法を必ずしも無効にすることはないＯ ラベル付き誘導体は天然結合性蛋白質に対して有意に結
合しないから、特定バインダーとの反応のため遊離甲状
腺ホルモンと競争させるのに実質的に全部を利用できる
。そのため特定バインダーの低濃度の使用が可能であり
、しかもなお満足できる投与量応答曲線を得ることがで
きる。特定バインダーの低濃度の使用は、それが系中の
天然蛋白質バインダーからの甲状腺ホルモンの著しい除
去をもたらすことのないことで有利である。
チロキシン（Ｔ４）は、３種の天然に生成するＴ４−結
合性蛋白質ＴＢＧ５ＴＢＰＡおよびアルブミンに主とし
て結合した人間の血液流中に移送される。これらの各々
に結合したＴ４の百分率はそれぞれ約７０％、２０〜２
５％および５〜ＩＯＸである。この特定分析のためのト
レーサーの合成に当って、分析におけるＴＢＧおよびＴ
ＢＰＡに対するトレーサーの結合は零であるか、または
これらの二つの蛋白質に対するＴ４の結合よりも非常に
少ないことが重要である。この特定分析において、血清
アルブミンとのトレーサーの結合必要量は、厳密性が少
ない、何故なら少ない百分率の′ｒ４がアルブミンに結
合するたけであり、空のアルブミン結合位置の数は、そ
れらに結合したＴ４を有する位置の数に比して非常に大
であるからである。これはトレーサーの実質的な量が、
結合している！４の置換なし１と血清アルブミンに結合
できることを意味する。
合性蛋白質ＴＢＧ５ＴＢＰＡおよびアルブミンに主とし
て結合した人間の血液流中に移送される。これらの各々
に結合したＴ４の百分率はそれぞれ約７０％、２０〜２
５％および５〜ＩＯＸである。この特定分析のためのト
レーサーの合成に当って、分析におけるＴＢＧおよびＴ
ＢＰＡに対するトレーサーの結合は零であるか、または
これらの二つの蛋白質に対するＴ４の結合よりも非常に
少ないことが重要である。この特定分析において、血清
アルブミンとのトレーサーの結合必要量は、厳密性が少
ない、何故なら少ない百分率の′ｒ４がアルブミンに結
合するたけであり、空のアルブミン結合位置の数は、そ
れらに結合したＴ４を有する位置の数に比して非常に大
であるからである。これはトレーサーの実質的な量が、
結合している！４の置換なし１と血清アルブミンに結合
できることを意味する。
チロキシン分子の多くの可能な変性が上述したヨーロッ
パ特許第７９３３０７２号に論じられているが、実施例
中で試験されている化合物はｌ−１２５でラベル付けし
たＮ−アセチル−チロキシン−メチルエステルである。
パ特許第７９３３０７２号に論じられているが、実施例
中で試験されている化合物はｌ−１２５でラベル付けし
たＮ−アセチル−チロキシン−メチルエステルである。
ここにで４・ＢＤＴＡがｌ−１２５でラベル付けしたと
き、上記試験において使用するためのＮ−アセチル−チ
ロキシン−メチルエステルの性質よりも−いたことに大
きくすぐれている性質を有することを見出した、そして
これが本発明の基礎をなす。
き、上記試験において使用するためのＮ−アセチル−チ
ロキシン−メチルエステルの性質よりも−いたことに大
きくすぐれている性質を有することを見出した、そして
これが本発明の基礎をなす。
これらについて特記すると次のとおりである。
１、 Ｎ−アセチル−チロキシン−メチルエステルは、
分析バッファー中への稀釈時間中にのみ有用な分析結果
を与えるだけで−ある。水と接触したとき加水分解する
ようであり、従ってキット中の液体試薬として供給でき
ない。一方！４・ＢＤＴＡは水中で安定である。
分析バッファー中への稀釈時間中にのみ有用な分析結果
を与えるだけで−ある。水と接触したとき加水分解する
ようであり、従ってキット中の液体試薬として供給でき
ない。一方！４・ＢＤＴＡは水中で安定である。
２、 Ｎ−アセチル−チロキシン−メチルエステルはポ
リスチレン分析管に対しかなり結合する。
リスチレン分析管に対しかなり結合する。
これは所望以上の高いプラン結果を生ぜしめる。一方Ｔ
４・１ｉＤＴＡは分析管に結合する着しい傾向は示さな
い。
４・１ｉＤＴＡは分析管に結合する着しい傾向は示さな
い。
３、 Ｎ−アセチル−チロキシン−メチルエステルはカ
シなりテＢＧに結合し、またはアルブミンに対しても結
合すると思わ、れる。一方！４・ＩｉＤ？Ａは？ＢＧに
対する著しい結合傾向は示さない（後掲実施例２参照） ４、血清試料を水またはバッファーで稀釈し、次いで全
〒４分析で分析したとき、測定される全〒４値は試料の
稀釈に比例して減少する。
シなりテＢＧに結合し、またはアルブミンに対しても結
合すると思わ、れる。一方！４・ＩｉＤ？Ａは？ＢＧに
対する著しい結合傾向は示さない（後掲実施例２参照） ４、血清試料を水またはバッファーで稀釈し、次いで全
〒４分析で分析したとき、測定される全〒４値は試料の
稀釈に比例して減少する。
人間血清試料の遊離〒４濃度は一定限界内で稀釈によっ
て影響を受けないことが理論的番こ示されている（ Ｊ
、 Ｈ，Ｈ０Ｏｐｐ＠ｎｈｅｉｍ＠ｒおよびＭ、 Ｉ、
５ｕｒｋ＊の、Ｊ、Ｃ１１ｎ、ｌｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
ｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ第２４巻第７８
５頁〜第７９４頁１９６４年参照）。
て影響を受けないことが理論的番こ示されている（ Ｊ
、 Ｈ，Ｈ０Ｏｐｐ＠ｎｈｅｉｍ＠ｒおよびＭ、 Ｉ、
５ｕｒｋ＊の、Ｊ、Ｃ１１ｎ、ｌｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
ｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ第２４巻第７８
５頁〜第７９４頁１９６４年参照）。
このことをヨーロッパ特許１３７９３３０７２号の分析
法を用いて試験したとき、Ｎ−アセチル−チロキシン−
メチルエステル薯と対しては僅かにこれが当てはまるだ
けであったが、テ４・１ＤＴＡに対しては非常に正確に
当てはまることが判った。
法を用いて試験したとき、Ｎ−アセチル−チロキシン−
メチルエステル薯と対しては僅かにこれが当てはまるだ
けであったが、テ４・１ＤＴＡに対しては非常に正確に
当てはまることが判った。
従って本発明はヨーロッパ特許第００２６１０３号の・
方法において、ラベル付けした後本発明の化合物を使用
することも含む。
方法において、ラベル付けした後本発明の化合物を使用
することも含む。
本発明による化合物は既知の方法で容易に作られる。ア
ミノ酢酸化合物を酸無水物の形に変換し、これをヨード
チロニン化合物のアミ７基と反応させることができる。
ミノ酢酸化合物を酸無水物の形に変換し、これをヨード
チロニン化合物のアミ７基と反応させることができる。
生成物は酸性溶液中で沈澱させ、クロマトグラフィーで
精製できる。エステルおよびアミドは標準化学反応を丸
いて作ることができる。
精製できる。エステルおよびアミドは標準化学反応を丸
いて作ることができる。
下記実施例は本発明を説明する。
実施例 １
磁気撹拌機、コンデンサーおよび乾燥管（塩化カルシウ
ム）を備えた２５０−丸底フラスコ中に８０ｗｄのピリ
ジン（水酸化カリウムから蒸溜して乾燥した）を加えた
。２９．１２ ｆのエチレンジアミンテトラ酢酸を加え
、続いて３７．６−の無水酢酸を加えた。懸蜀液を７時
間６５〜８０℃で撹拌加熱した。混合物を一昼夜冷却し
白色固体を炉別した。固体を１回２００Ｈの乾燥ピリジ
ンで洗浄し、４０ｇ１ｔずつ４回エーテルで洗浄した。
ム）を備えた２５０−丸底フラスコ中に８０ｗｄのピリ
ジン（水酸化カリウムから蒸溜して乾燥した）を加えた
。２９．１２ ｆのエチレンジアミンテトラ酢酸を加え
、続いて３７．６−の無水酢酸を加えた。懸蜀液を７時
間６５〜８０℃で撹拌加熱した。混合物を一昼夜冷却し
白色固体を炉別した。固体を１回２００Ｈの乾燥ピリジ
ンで洗浄し、４０ｇ１ｔずつ４回エーテルで洗浄した。
白色固体をマニホールドで乾燥し、デシケータ−中に保
存した。収量１８Ｆ、融点１９３〜１９７℃（分解）。
存した。収量１８Ｆ、融点１９３〜１９７℃（分解）。
１− （ａ’ 、 ５’−ジ−ヨード−４’−（３”、
５“−ジ−ヨード−４１−ヒドロキシフェノキシ）−フ
キジメチル−４−オキソ−３，６，９−トリアザウンデ
ン酸−１１（Ｔ４・ＩＤＴＡ ）の製造１０−の乾燥ピ
リジン中に１．５Ｆのチロキシンナ） ＩＪウム塩塩水
水塩懸濁し、烈しく撹拌した。
５“−ジ−ヨード−４１−ヒドロキシフェノキシ）−フ
キジメチル−４−オキソ−３，６，９−トリアザウンデ
ン酸−１１（Ｔ４・ＩＤＴＡ ）の製造１０−の乾燥ピ
リジン中に１．５Ｆのチロキシンナ） ＩＪウム塩塩水
水塩懸濁し、烈しく撹拌した。
三ツロフラスコに、栓、温度計および乾燥管（塩化カル
シウム）を備えたコンデンサーを設けた、１００−の乾
燥ピリジンを加え、溶媒を烈しく撹拌し、９５℃に加熱
した。
シウム）を備えたコンデンサーを設けた、１００−の乾
燥ピリジンを加え、溶媒を烈しく撹拌し、９５℃に加熱
した。
２、Ｏｆの１．２−ビス−（２，６−シオキソー４−モ
ルホリニル）−エタンを熱溶媒中に溶解した。撹拌しつ
つ、広口管を用いて５分間でほぼ８等分したチロキシン
ナトリウム塩５水塩の懸濁液を熱溶液に加えた。溶液を
更に３分間９５℃で保ち、次いで室温に冷却した。
ルホリニル）−エタンを熱溶媒中に溶解した。撹拌しつ
つ、広口管を用いて５分間でほぼ８等分したチロキシン
ナトリウム塩５水塩の懸濁液を熱溶液に加えた。溶液を
更に３分間９５℃で保ち、次いで室温に冷却した。
１５０Ｈの水を加え、エチレンジアミンテトラ酢酸の沈
澱を開始させた。混合物を一夜放置し、枦遇し、残渣を
ピリジンで洗浄した。炉液および洗浄液を一緒にし、ロ
ータリー蒸発機上に圧送して乾燥し、次いでマニホルド
に圧送して痕跡量のピリジンを除去した。形成された固
体をＩＭのアンモニア３５５５ｇ中に最溶解し、溶液を
遠心分離して不溶性材料を除去した。透明黄色溶液を１
５ｍｇ以下の濃塩酸でｐＨｌに調整し、固体を沈澱させ
た。白色沈澱を沖過し、ｐ液がｐＨ〉４となるまで水洗
した。固体を凍結乾燥した。
澱を開始させた。混合物を一夜放置し、枦遇し、残渣を
ピリジンで洗浄した。炉液および洗浄液を一緒にし、ロ
ータリー蒸発機上に圧送して乾燥し、次いでマニホルド
に圧送して痕跡量のピリジンを除去した。形成された固
体をＩＭのアンモニア３５５５ｇ中に最溶解し、溶液を
遠心分離して不溶性材料を除去した。透明黄色溶液を１
５ｍｇ以下の濃塩酸でｐＨｌに調整し、固体を沈澱させ
た。白色沈澱を沖過し、ｐ液がｐＨ〉４となるまで水洗
した。固体を凍結乾燥した。
粗製生成物１．５８５３ｊｌＦを２ＭのＮｕ、水溶液（
約３００〜／ｄ）５．５−に溶解した。・２ＭのＮＨｓ
水溶液の最初の添加時に白色固体は黒色に変り始めた、
しかし更に２ＭのＮＨ，水溶液を加えると、黄色／褐色
着色透明溶液となった。
約３００〜／ｄ）５．５−に溶解した。・２ＭのＮＨｓ
水溶液の最初の添加時に白色固体は黒色に変り始めた、
しかし更に２ＭのＮＨ，水溶液を加えると、黄色／褐色
着色透明溶液となった。
粗製生成物を３２メルクシリ力５７１７分取プレートに
付与し、プレート１個について粗製生成物５０１Ｆとな
るようにした。各プレートをｎ−ブタノール／水／酢酸
（６０／２５／１５）中にとおした。プレートを上から
２分の１ｂ内に入ったとき、それらをタンクから取り出
し、室・温の空気流中に入れ乾燥した。
付与し、プレート１個について粗製生成物５０１Ｆとな
るようにした。各プレートをｎ−ブタノール／水／酢酸
（６０／２５／１５）中にとおした。プレートを上から
２分の１ｂ内に入ったとき、それらをタンクから取り出
し、室・温の空気流中に入れ乾燥した。
紫外線の下で４または５個の帯が見られ、一つは基線上
にあり一つはＲ４０，７５（これはＴ４であった）にあ
り、２または３個の帯の群がその間にあり、それはこの
群の上の二つの間で区別するのは難かしかった。所望の
帯を、中央群の最も遅いところを取り出した。
にあり一つはＲ４０，７５（これはＴ４であった）にあ
り、２または３個の帯の群がその間にあり、それはこの
群の上の二つの間で区別するのは難かしかった。所望の
帯を、中央群の最も遅いところを取り出した。
取り出したシリカを０．２ ＭのＮＨ，水溶液（１プレ
ートについて１０−の０．２ＭのＮＨ，水溶液）で洗浄
した。これは洗浄に全体で３２０−の０．２誠のＮＨｓ
水溶液を必要とした、そして黄色の透明溶液が得られた
。次いで溶液を濃ＨＣＩでＰＨ２の酸性基こし、かくし
て白色沈澱を生成させ、溶液の脱色を行なった。沈澱を
遠心分離して得、２０−の水で３回洗浄するか、上澄液
のｐＨが約７になるまで洗浄した。次いで白色固体を真
空マニホルドで凍結乾燥した。乾燥生成物の収量は８５
５岬であった。
ートについて１０−の０．２ＭのＮＨ，水溶液）で洗浄
した。これは洗浄に全体で３２０−の０．２誠のＮＨｓ
水溶液を必要とした、そして黄色の透明溶液が得られた
。次いで溶液を濃ＨＣＩでＰＨ２の酸性基こし、かくし
て白色沈澱を生成させ、溶液の脱色を行なった。沈澱を
遠心分離して得、２０−の水で３回洗浄するか、上澄液
のｐＨが約７になるまで洗浄した。次いで白色固体を真
空マニホルドで凍結乾燥した。乾燥生成物の収量は８５
５岬であった。
上記生成物を３−の２ＭのＮ−水溶液に溶解し、１６個
のセルロース（アナケム、アビセル？。
のセルロース（アナケム、アビセル？。
厚さ１０００μｌ１１）分取プレートに付与した。各プ
レートをｎ−ブタノール／水／酢酸（６０／２５／１５
）中化とおした。これらのプレートはシリカ分取プレー
トよりもかなり早く処理した。プレートを処理したとき
、それらを室温で。
レートをｎ−ブタノール／水／酢酸（６０／２５／１５
）中化とおした。これらのプレートはシリカ分取プレー
トよりもかなり早く処理した。プレートを処理したとき
、それらを室温で。
空気流中で乾燥した。紫外線の下で唯一つの帯が見られ
た、しか、し紫外線下に見える帯の直上に、裸眼で見え
る黄色帯が存在した。紫外線下に見える帯を除去し、セ
ルロースを各プレート毎に１０−の０．２ＭのＮ−水溶
液で洗い、全体で１６０−の３ＭのＮＯ，水溶液を用い
た。集めた黄色溶液を次いで濃ＨＣＩを用いてＰＨ２の
酸性にし、白色沈澱を生起させ、溶液の脱色を行なった
。
た、しか、し紫外線下に見える帯の直上に、裸眼で見え
る黄色帯が存在した。紫外線下に見える帯を除去し、セ
ルロースを各プレート毎に１０−の０．２ＭのＮ−水溶
液で洗い、全体で１６０−の３ＭのＮＯ，水溶液を用い
た。集めた黄色溶液を次いで濃ＨＣＩを用いてＰＨ２の
酸性にし、白色沈澱を生起させ、溶液の脱色を行なった
。
沈澱を遠心分離し、上澄液を捨て、沈澱を一緒にし、管
１個について２０Ｗｔｔの水で洗浄した。
１個について２０Ｗｔｔの水で洗浄した。
−緒にした沈澱を上澄液のｐＨか約７になるまで洗浄し
た。残った白色固体を凍結乾燥した。この材料は、ｎ−
ブタノール／水／酢酸（６０／２５／１５ ）で処理し
たときシリカＴＬＣで単一スポットを与えた。収量８９
．２１Ｆ。
た。残った白色固体を凍結乾燥した。この材料は、ｎ−
ブタノール／水／酢酸（６０／２５／１５ ）で処理し
たときシリカＴＬＣで単一スポットを与えた。収量８９
．２１Ｆ。
炭素 ２８．５６ ２７．９７２７．９７２７．８４
２７．９３水素 ２．４０ ２，４７ ２，５７２．３
４ ２．４６窒素 ４，００ ３．７４ ３．６８ ３
，７４ ３．７２分光データは化合物の構造を確認した
。紫外線スペクトルはチロキシンのスペクトルと同じで
あった。！Ｒスペクトルは次の如き特徴を有していた。
２７．９３水素 ２．４０ ２，４７ ２，５７２．３
４ ２．４６窒素 ４，００ ３．７４ ３．６８ ３
，７４ ３．７２分光データは化合物の構造を確認した
。紫外線スペクトルはチロキシンのスペクトルと同じで
あった。！Ｒスペクトルは次の如き特徴を有していた。
波数（ｏ−） 強 度 註３５５０〜２５
５０ Ｍ（ブロード）０−Ｈ２９２０および２８
５０ＷＣ−Ｈ １７２０Ｍ−８Ｃ−０ １６２５Ｓ ｃ＝。
５０ Ｍ（ブロード）０−Ｈ２９２０および２８
５０ＷＣ−Ｈ １７２０Ｍ−８Ｃ−０ １６２５Ｓ ｃ＝。
１５８５ 肩 芳香族Ｃ−Ｃ１５
５Ｑ ＮＮＪＩおよびＣ−Ｎ組合せ１５０
５ Ｗ 芳香族Ｃ＝Ｃ１４５
５Ｍ 芳香族Ｃ＝Ｃ１４４０８ＣＯ。
５Ｑ ＮＮＪＩおよびＣ−Ｎ組合せ１５０
５ Ｗ 芳香族Ｃ＝Ｃ１４５
５Ｍ 芳香族Ｃ＝Ｃ１４４０８ＣＯ。
１３９５ Ｓ ｃ−ｏとＯＨ
の組合せ１３２０ Ｗ Ｃ−
１？１２３５ ｍ−５ １０５０ｗ フェノール 実施例 ２ ペンタンの製造 乾燥管（塩化カルシウム）を備えたフラスコ中の９．５
−の無水酢酸および８．４ ｍのピリジン中の６．３５
ｆのジエチレントリアミンペンタ酢酸の懸濁液を時々撹
拌しながら５日間室温で保った。黄色生成物を戸別し、
５ｏ−のジエチルエーテルで洗浄し、乾燥した。
の組合せ１３２０ Ｗ Ｃ−
１？１２３５ ｍ−５ １０５０ｗ フェノール 実施例 ２ ペンタンの製造 乾燥管（塩化カルシウム）を備えたフラスコ中の９．５
−の無水酢酸および８．４ ｍのピリジン中の６．３５
ｆのジエチレントリアミンペンタ酢酸の懸濁液を時々撹
拌しながら５日間室温で保った。黄色生成物を戸別し、
５ｏ−のジエチルエーテルで洗浄し、乾燥した。
生成物はＩＲ分光分析で表記化合物として同定した。融
点１７５〜１８０℃、収量４，５６９゜チロキシンナト
リウム塩（１００■）を５０−のピリジン中に懸濁し、
撹拌し、９０℃に加熱した。大部分の固体が溶解した。
点１７５〜１８０℃、収量４，５６９゜チロキシンナト
リウム塩（１００■）を５０−のピリジン中に懸濁し、
撹拌し、９０℃に加熱した。大部分の固体が溶解した。
ＤテＰＡ４８６■から誘導されたビス酸無水物を加え、
急速に溶解し、混合物を１０分間９０°Ｃで保った。次
いで混合物を室温に冷却した。２．５時間後、２−の水
を加え、混合物を一夜放置した。小さい沈澱を戸別し、
捨てた。溶媒を蒸発させて黄白色固体を得た。
急速に溶解し、混合物を１０分間９０°Ｃで保った。次
いで混合物を室温に冷却した。２．５時間後、２−の水
を加え、混合物を一夜放置した。小さい沈澱を戸別し、
捨てた。溶媒を蒸発させて黄白色固体を得た。
精製はテＬＣプレート数を減じてテ４・ｇＤＴＡに対す
る精製法と同じ方法で行なった。収量６．３岬。
る精製法と同じ方法で行なった。収量６．３岬。
生成物はシリカゲルプレート上で、ブタン−１−オール
／水／酢酸（６０／２５／１５）で処理して０．１９の
Ｒｆを有していた。
／水／酢酸（６０／２５／１５）で処理して０．１９の
Ｒｆを有していた。
７化合物はそのＩＲおよびＵＴ／スペクトルで同定した
。
。
実施例 ３
ルー１− （３’ 、 ５’−ジ−ヨード−４’ −（
３’−ミニルー４−オキソ−３，６，９−）リアザウン
デンカン酸−１１（Ｔ３・ＩＤＴＡ ）の製造この製造
は２．００６ＰのＦｉＤＴＡビス酸無水物（実施例１参
照）および１．４９６Ｆの〒３（そのナトリウム塩とし
て）を用い、ＴＡ・ＥＤＴＡの製造と同じ方法で行なっ
た。
３’−ミニルー４−オキソ−３，６，９−）リアザウン
デンカン酸−１１（Ｔ３・ＩＤＴＡ ）の製造この製造
は２．００６ＰのＦｉＤＴＡビス酸無水物（実施例１参
照）および１．４９６Ｆの〒３（そのナトリウム塩とし
て）を用い、ＴＡ・ＥＤＴＡの製造と同じ方法で行なっ
た。
得られた収量の約半分の粗製生成物７００岬を用い、マ
たシリカゲルとセルロースＴＬＣプレートの比例的に減
少した数を用い実施例１に記載した如くしてクロマトグ
ラフ精製も行なった、収量３２．５■。
たシリカゲルとセルロースＴＬＣプレートの比例的に減
少した数を用い実施例１に記載した如くしてクロマトグ
ラフ精製も行なった、収量３２．５■。
化合物はＩＲおよびＵＶスペクトル分析で同定した、前
述した如きＴＡ・ＥＤＴＡのスペクトルと殆んど区別が
できないスペクトルを与えた。化合物の種類は、化合物
がＴ３自体に等しいかそれより良好な結合である抗血清
（低いＴ４交叉反応度を有する）に対するその結合によ
って確認した。
述した如きＴＡ・ＥＤＴＡのスペクトルと殆んど区別が
できないスペクトルを与えた。化合物の種類は、化合物
がＴ３自体に等しいかそれより良好な結合である抗血清
（低いＴ４交叉反応度を有する）に対するその結合によ
って確認した。
実施例 ４
ＴＢＧまたはプレアルブミンに対する予備沈澱した抗血
清（結合試薬）をＴＢＧまたはプレアルブミンの血清源
で培養した。かくして結合試薬上にＴ４結合性蛋白質を
遊離させた。形成された錯体にトレーサー Ｉ−ＴＡを
加え、かくして精製した。ＴＢＧまたはプレアルブミン
からの、ＴＡおよびＴＡ・ＩＮ）ＴＡの濃度を変えるこ
とによるトレ−サー ｌ−７４の置換を研究することが
できた。
清（結合試薬）をＴＢＧまたはプレアルブミンの血清源
で培養した。かくして結合試薬上にＴ４結合性蛋白質を
遊離させた。形成された錯体にトレーサー Ｉ−ＴＡを
加え、かくして精製した。ＴＢＧまたはプレアルブミン
からの、ＴＡおよびＴＡ・ＩＮ）ＴＡの濃度を変えるこ
とによるトレ−サー ｌ−７４の置換を研究することが
できた。
結果は二つの〒４結合性蛋白質に対するＴ４とテ４・Ｎ
Ｄ？Ａの間の結合親和性の差を評価するため使用できる
。
Ｄ？Ａの間の結合親和性の差を評価するため使用できる
。
２、方法
ホスフェートバッファー＋ ０．０５ Ｘ’ＢＳＡ中の
１５Ｎトンキーアンチシープおよび２ＸテＢＧ抗血清 上記溶液の同量を混合し、４℃で一夜回転し、かくして
結合剤試薬の最終濃度を７５％のトンキーアンチシープ
とＩＸの？ＢＧ抗血清とした。
１５Ｎトンキーアンチシープおよび２ＸテＢＧ抗血清 上記溶液の同量を混合し、４℃で一夜回転し、かくして
結合剤試薬の最終濃度を７５％のトンキーアンチシープ
とＩＸの？ＢＧ抗血清とした。
９００ ｒｏｍ＋で遠心分離し、傾瀉し、新しいバッフ
ァー中に再懸濁して２回試薬の洗浄を行なった。
ァー中に再懸濁して２回試薬の洗浄を行なった。
樹脂除去人間血清１ｍおよび上記結合試薬２０−を室温
で１時間混合した。遠心分離、傾瀉および新しいバッフ
ァー中（ホスフェート＋０．５％ＢＳＡ ）中への再懸
濁を２回行なった。′１０−のＴＢＧ ：抗’ｒＢＧ結
合試薬、２８−のホスフェートバッファー＋〇、 ０５
Ｘ ＢＳＡおよび２−の ｌ−７４）レーサー溶液（
ホスフェートバッファー＋ Ｏ，ＯＳ％ＢＳＡ ｌ ＠
／について０．１μＣ１高比放射能Ｔ４）を室温で１時
間混合した。遠心分離、傾瀉および新しいバッファー（
ホスフェ−）＋０．０５％ＢＳＡ ）中への再懸濁を２
回繰返した。一度作ったトレーサーＴ４ ： ＴＢＧ
：抗ＴＢＧ結合試薬を直ちに使用した。
で１時間混合した。遠心分離、傾瀉および新しいバッフ
ァー中（ホスフェート＋０．５％ＢＳＡ ）中への再懸
濁を２回行なった。′１０−のＴＢＧ ：抗’ｒＢＧ結
合試薬、２８−のホスフェートバッファー＋〇、 ０５
Ｘ ＢＳＡおよび２−の ｌ−７４）レーサー溶液（
ホスフェートバッファー＋ Ｏ，ＯＳ％ＢＳＡ ｌ ＠
／について０．１μＣ１高比放射能Ｔ４）を室温で１時
間混合した。遠心分離、傾瀉および新しいバッファー（
ホスフェ−）＋０．０５％ＢＳＡ ）中への再懸濁を２
回繰返した。一度作ったトレーサーＴ４ ： ＴＢＧ
：抗ＴＢＧ結合試薬を直ちに使用した。
２．１．４． Ｔ４およびＴ４・ＦｔＤ’ｌ’Ａ濃度
ストック溶液をホスフェート＋０．００５ Ｘ ＢＡＡ
で稀釈した。使用したＴ４濃度の範囲は：２０００−２
ｎｒ／ｍ／ （午１００−０．１ｐモル／管）であっ
た。使用したＴ４・ＥＤＴＡ濃度の範囲は＝ｓｏｏ。
ストック溶液をホスフェート＋０．００５ Ｘ ＢＡＡ
で稀釈した。使用したＴ４濃度の範囲は：２０００−２
ｎｒ／ｍ／ （午１００−０．１ｐモル／管）であっ
た。使用したＴ４・ＥＤＴＡ濃度の範囲は＝ｓｏｏ。
−８ｎｙ／ｄ （＝４００〜０．４ ｐ モル／管）で
あった。
あった。
これは同容量の３０％ドンキーアンチラビツトニ次抗体
および４ ＸＴＢＰＡ抗血清溶液を混合して１５Ｎトン
キーアンチラビツトと２Ｘ抗テＢＰ真の最終濃度とした
以外は抗ＴＢＯ結合試薬と同じようにして作った。
および４ ＸＴＢＰＡ抗血清溶液を混合して１５Ｎトン
キーアンチラビツトと２Ｘ抗テＢＰ真の最終濃度とした
以外は抗ＴＢＯ結合試薬と同じようにして作った。
２．２，２． ＴＢＰＡ ：抗ＴＢＰＡ結合試薬の形
成６００μｌの血清および２０−の抗テＢＰム結合試薬
を室温で１時間混合した。試薬の洗浄は、使−イ用した
バッファーがホスフェート＋ｏ、 ｏ ｏ ｓ ｘＢＳ
Ａであることを除いてＴＢＧに対するのと同じである。
成６００μｌの血清および２０−の抗テＢＰム結合試薬
を室温で１時間混合した。試薬の洗浄は、使−イ用した
バッファーがホスフェート＋ｏ、 ｏ ｏ ｓ ｘＢＳ
Ａであることを除いてＴＢＧに対するのと同じである。
上記テＢＰＡ ：抗テＢＰＡ結合試薬２０−、ホーフェ
ートバッファー＋ Ｏ，ＯＯ５％ＢＳＡ ｌ ５−およ
び Ｉ−テ４トレーサー溶液４−（ホスフェート＋０．
００５ＸＢＳＡ中０．２μＣ１／ｄの高比放射能〒４）
を室温で１時間混合した。錯体の洗浄はホスフェートバ
ッファー＋ ０．００５にＥＳＡを用いた以外トレーサ
ーＴＢＧ錯体に対するのと同じにした。−皮形成しりＩ
−Ｔ４ ： ＴＢＰＡ ：抗’１’ＢＰＡ結合試薬錯
体を直ちに使用した。
ートバッファー＋ Ｏ，ＯＯ５％ＢＳＡ ｌ ５−およ
び Ｉ−テ４トレーサー溶液４−（ホスフェート＋０．
００５ＸＢＳＡ中０．２μＣ１／ｄの高比放射能〒４）
を室温で１時間混合した。錯体の洗浄はホスフェートバ
ッファー＋ ０．００５にＥＳＡを用いた以外トレーサ
ーＴＢＧ錯体に対するのと同じにした。−皮形成しりＩ
−Ｔ４ ： ＴＢＰＡ ：抗’１’ＢＰＡ結合試薬錯
体を直ちに使用した。
２．２．４． ’Ｉ’４およびＴ４・Ｉｉ！Ｄ’ｌ’
Ａ濃度ストック溶液をホスフェートバッファー十ｏ、
ｏ ｏ ｓ％ＢＳＡで稀釈した。使用したテ４濃度範囲
は！８０００−８ ｎｆ／ｄｃ：４００−０．４ ｐモ
ル／管）であった。使用したＴ４・ＩＤＴＡ濃度範囲は
−８０００−８ｎｆ／ｄ （＝４００−０．４Ｐモ、ル
／管）を使用した。
Ａ濃度ストック溶液をホスフェートバッファー十ｏ、
ｏ ｏ ｓ％ＢＳＡで稀釈した。使用したテ４濃度範囲
は！８０００−８ ｎｆ／ｄｃ：４００−０．４ ｐモ
ル／管）であった。使用したＴ４・ＩＤＴＡ濃度範囲は
−８０００−８ｎｆ／ｄ （＝４００−０．４Ｐモ、ル
／管）を使用した。
する分析法
５０μｌのＴ４またはＴ４・ＥＤＴＡ稀釈液１０００−
のトレーサー二結合試薬録体渦 ３７℃で１時間 渦 ３７℃で１時間 渦 ） １５００ ｒｐｌ＋で遠心分離、傾瀉、計数。
のトレーサー二結合試薬録体渦 ３７℃で１時間 渦 ３７℃で１時間 渦 ） １５００ ｒｐｌ＋で遠心分離、傾瀉、計数。
か（して別のＴ４およびＴ４・ＥＤテＡ濃度でトレーサ
ーの結合百分率を二つの系で測定できる。
ーの結合百分率を二つの系で測定できる。
Ｔ４およびＴ４・ＩＤＴＡ濃度に対し、トレーサー結合
百分率をプロットし、これらの曲線から、非比結合の評
価をすることができた。次いでデータを再計算し、この
ブランク修正を用い、プロットし、トレーサー結合百分
率値の範囲に相当するＴ４およびＴ４・ＩＤ’ｒＡ濃度
を曲線から読みとることができた。トレーサーの同じ置
換を与える〒４と〒４・ＩＤＴＡの濃度の間の比を下記
式によって表わす。
百分率をプロットし、これらの曲線から、非比結合の評
価をすることができた。次いでデータを再計算し、この
ブランク修正を用い、プロットし、トレーサー結合百分
率値の範囲に相当するＴ４およびＴ４・ＩＤ’ｒＡ濃度
を曲線から読みとることができた。トレーサーの同じ置
換を与える〒４と〒４・ＩＤＴＡの濃度の間の比を下記
式によって表わす。
ｙ−ＩＬ＆したトレーサーＴ４の７ラクシヨンＫＴ４−
ＩＤＴＡ ” Ｆ テの２４ 、 ＩＤＴＡの濃度ＸＴ
４ ” ＦでのＴ４の濃度 ＫＡ’Ｉ’４−特定バインダーに対するＴ４の親和力常
数 に、Ｔ４・ＥＤＴＡ−特定バインダーに対するＴ４．１
ＤテＡの親和力常数 ｙに対する比をプロットして、結合したトレーサー！４
のフラクション（切片およびスロープの両方で）を親和
力常数の比を評価するのに使用できる。
ＩＤＴＡ ” Ｆ テの２４ 、 ＩＤＴＡの濃度ＸＴ
４ ” ＦでのＴ４の濃度 ＫＡ’Ｉ’４−特定バインダーに対するＴ４の親和力常
数 に、Ｔ４・ＥＤＴＡ−特定バインダーに対するＴ４．１
ＤテＡの親和力常数 ｙに対する比をプロットして、結合したトレーサー！４
のフラクション（切片およびスロープの両方で）を親和
力常数の比を評価するのに使用できる。
この方法で、Ｔ４・ＩＤＴＡがＴＢＧに結合し、Ｔ４の
親和力常数の３．５％にすぎなかった、そしてＴＢＰＡ
に対して、Ｔ４の親和力常数の２．７Ｘにすぎなかった
ことが判った。
親和力常数の３．５％にすぎなかった、そしてＴＢＰＡ
に対して、Ｔ４の親和力常数の２．７Ｘにすぎなかった
ことが判った。
また′１′４抗血清に対するＴ４・ＥＤＴＡの親和力常
数はＴ４のそれの９０．４ ％であることも判った。
数はＴ４のそれの９０．４ ％であることも判った。
従って〒４・ＥＤＴＡはＴＢＧおよびＴＢＰＡ （血清
中に天然に生成する二つの主結合性蛋白質）に対し非常
に弱くしかも結合せず、Ｔ４それ自体に対するのと同様
Ｔ４抗血清に対しては強く結合している。
中に天然に生成する二つの主結合性蛋白質）に対し非常
に弱くしかも結合せず、Ｔ４それ自体に対するのと同様
Ｔ４抗血清に対しては強く結合している。
実施例 ５
クロラミンＴおよび沃化（＋ｇｉＩ）ナトリウムを用い
交換反応によって！４・１ｉＤＴＡを Ｉでラベル付け
した。得られた比放射能は５００ｏＣ１／＃ｖであった
、これを０．９％の塩化ナトリウム、０９％の牛血清ア
ルブミンおよび０． Ｉ Ｎのアジ化ナトリウムを含有
するｐＨ７，４の６０−ホスフェートバッファー中の０
．１３μＣ１／ｄの作用濃度で使用した。
交換反応によって！４・１ｉＤＴＡを Ｉでラベル付け
した。得られた比放射能は５００ｏＣ１／＃ｖであった
、これを０．９％の塩化ナトリウム、０９％の牛血清ア
ルブミンおよび０． Ｉ Ｎのアジ化ナトリウムを含有
するｐＨ７，４の６０−ホスフェートバッファー中の０
．１３μＣ１／ｄの作用濃度で使用した。
ラテックス１４について０．５μｌのＴ４−比抗血清か
らの抗体およびｌ−について０．６６岬のラテックス粒
子を懸濁液が含有するようＩの大きさのラテックス粒子
に結合したテ４比抗血清からなる固体相抗体を使用した
。バッファーは０．１％のアジ化ナトリウムを含有する
ｐＨ７，４の１０ｍモルホスフェートであった。
らの抗体およびｌ−について０．６６岬のラテックス粒
子を懸濁液が含有するようＩの大きさのラテックス粒子
に結合したテ４比抗血清からなる固体相抗体を使用した
。バッファーは０．１％のアジ化ナトリウムを含有する
ｐＨ７，４の１０ｍモルホスフェートであった。
３、遊離！４血清標準
１ ｄｌについてＯ〜約１０ ｎｆの範囲の遊離Ｔ４濃
度を含有するよう、標準法で６個の人間血清プールを作
った。これらの標準品は平衡透析遊離Ｔ４分析について
補正した。
度を含有するよう、標準法で６個の人間血清プールを作
った。これらの標準品は平衡透析遊離Ｔ４分析について
補正した。
４、分析法
遊離！４分析をこの原案に従いポリスチレン分析管中に
入れた： １００μｌ血清標準または未知血清試料５００μ／ Ｉ
−〒４・ＥＤＴＡ ）レーサー溶液５００μ！固体相Ｔ
４抗体懸濁液 分析管を渦流混合し、１時間水浴中で３７℃で培養した
。管を２０分間１５００Ｆで遠心分離し、Ｆ澄液を傾瀉
した。沈澱の放射能を測定した。
入れた： １００μｌ血清標準または未知血清試料５００μ／ Ｉ
−〒４・ＥＤＴＡ ）レーサー溶液５００μ！固体相Ｔ
４抗体懸濁液 分析管を渦流混合し、１時間水浴中で３７℃で培養した
。管を２０分間１５００Ｆで遠心分離し、Ｆ澄液を傾瀉
した。沈澱の放射能を測定した。
下記の結果がこの方法で得られた結果の代表例であった
。
。
０ ６１．８
０．４５ ４１．２
０．９５ ３０．８
１．９ ２１．１
４．９ １２．４
９、０ ９．３
実施例 ６
種々な甲状腺状態の７３の血清試料をここに示した遊離
！４分析で測定し、また平衡透析遊離Ｔ４分析で測定し
た。平衡透析法は３７℃で血清試料の一夜透析を使用し
、続いて透析物の感応〒４・ＲＩＡを行なった。（この
方法はロンドン市ハイデン発行、エリスおよびエキンス
著「ザ・レイデイオイムノアッセイ・イン・クリニカル
・バイオケミストリＪ１９７５年第１８７・頁〜第１９
４頁に記載されている方法によった）。
！４分析で測定し、また平衡透析遊離Ｔ４分析で測定し
た。平衡透析法は３７℃で血清試料の一夜透析を使用し
、続いて透析物の感応〒４・ＲＩＡを行なった。（この
方法はロンドン市ハイデン発行、エリスおよびエキンス
著「ザ・レイデイオイムノアッセイ・イン・クリニカル
・バイオケミストリＪ１９７５年第１８７・頁〜第１９
４頁に記載されている方法によった）。
データの線状回帰分析は二組の結果の間にｒ−０，９８
で良好な相関を示した。
で良好な相関を示した。
実施例 ７
ここに示した遊離テ４分析における約５２０人の甲状腺
機能正常患者からの血清試料の測定は非パラメーター正
常範囲を０．７〜１．８ｎＰ／αとして評価可能にした
。
機能正常患者からの血清試料の測定は非パラメーター正
常範囲を０．７〜１．８ｎＰ／αとして評価可能にした
。
４１人の甲状腺機能減退の場合と３５人の甲状腺機能減
退の場合の判別の程度は、同じ試料について遊離チロキ
シン指数（Ｆ、 Ｔ、 １．）を測定することによって
得られるものよりすぐれていた。
退の場合の判別の程度は、同じ試料について遊離チロキ
シン指数（Ｆ、 Ｔ、 １．）を測定することによって
得られるものよりすぐれていた。
特にＦ’ＴＩ法では４１人の甲状腺機能減退の場合の中
の６人、そして甲状腺機能亢進の場合の３５人の中の３
人は誤診であった。しかしながら本発明の遊離Ｔ４分析
では、甲状腺機能減退の場合４１のうち４人、甲状腺機
能亢進の場合の３５人の中０人が誤診であった。
の６人、そして甲状腺機能亢進の場合の３５人の中の３
人は誤診であった。しかしながら本発明の遊離Ｔ４分析
では、甲状腺機能減退の場合４１のうち４人、甲状腺機
能亢進の場合の３５人の中０人が誤診であった。
異常に高いか低いＴ＆Ｇレベルを有する甲状腺機能正常
の非妊娠の場合、正常値より著しく高いか低い全Ｔ４レ
ベルを有することを下表に示す。
の非妊娠の場合、正常値より著しく高いか低い全Ｔ４レ
ベルを有することを下表に示す。
表中全り４結果単独は甲状腺診断における誤解を生ぜし
める。そしてＴ３−消費量結果と組合せてＦ、 ’Ｉ’
、 １．値を与えたときでさえも誤解を生ぜしめること
が残っている。しかしながらここに示した分析で得た遊
離！４レベルは、正常のまＩであり正しい診断を与えた
。
める。そしてＴ３−消費量結果と組合せてＦ、 ’Ｉ’
、 １．値を与えたときでさえも誤解を生ぜしめること
が残っている。しかしながらここに示した分析で得た遊
離！４レベルは、正常のまＩであり正しい診断を与えた
。
？、！、■、はクラークおよびホーンのＪ、Ｃｌ１ｎ。
Ｅｎｄｏｃｒｉｎ、ａｎｄ Ｍ＊ｔａｂ第２５巻１９６
５年第３９頁〜第４５頁に記載されている如く計算した
。
５年第３９頁〜第４５頁に記載されている如く計算した
。
式はＦ、 Ｔ、 ｉ、＝＋ （全Ｔ４（μＰ／ｄｔ）Ｘ
’ｌ’３消費量Ｘ１２８７÷１００〕である。
’ｌ’３消費量Ｘ１２８７÷１００〕である。
第１頁の続き
０発 明 者 レジナルト・モンクス
英国エイチピ−７９エルエル
・パツキンガムシャイア・アメ
ルシャム・ホワイト・ライオン
・ロード（番地なし）アメルシ
ャム・インターナショナル・リ
ミテッド内
０発 明 者 デヴイット・ピータ−・ノウオトニク
英国エイチピ−７９エルエル
・パツキンガムシャイア・−アメ
ルシャム・ホワイト・ライオン
・ロート（番地なし）アメルシ
ャム・インターナショナル・リ
ミテッド内
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、一般式 （式中ｘ１、ｒ％ｒおよびｘ４の各々は独立にＣ１、Ｂ
ｒ５ＩまたハＨテある、ただし、ｘｌ、Ｆ、Ｘ”オよび
ｘ４の少なくとも一つは！であり Ｘｉ、ｐ。 ！３およびｘｌの少なくとも二つはハロゲンである、Ｒ
はＯＨ，アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミ
ノ基またはアルコキシル基であり、各２は独立に−（”
％ ）ｎ ”％またバーＣＹｉＲＣＯＲテあり、ｎは１
，２または３である）を有するヨードチロニン化合物の
誘導体。 ２、 ｚが分子中の０．１または２の場所で−（ＣＨ
，）、ｌＮ４であり、残りの場所で−Ｃ％ ＣＯＲであ
る特許請求の範囲第１項記載の誘導体。 ３、シーヨードチロニン、トリーヨーＹチロニン、リバ
ーストリーヨードチロニン、チロキシン、３′−ブロモ
−５７−ヨード−３，５−ジーヨードチロニンおよヒ３
′−クロロー５′−ヨー）’−３゜５−ジーヨードチロ
ニンから選択したヨードチロニン化合物のアミドである
特許請求の範囲第１項または第２項記載の誘導体。 ４、 ニトリロトリ酢酸、エチレンジアミンテトラ酢酸
、およびジエチレントリアミンペンタ酢酸から選択した
アミノ酢酸のアミドである特許請求の範囲第１項〜第３
項の何れか一つに記載の誘導体。 ５、 エチレンジアミンテトラ酢酸またはジエチレント
リアミンペンタ酢酸とトリーヨードチロニンまたはチロ
キシンのアミドである特許請求の範囲第１項〜第４項の
何れか一つに記載の誘導体。 ６ エチレンジアミンテトラ酢酸とチロキシンのアミド
である特許請求の範囲第１項〜第５項の何れか一つに記
載の誘導体。 ７．放射性原子、発蛍光団、光発色間、酵素または化学
発光団からなる群から選択した物理的マーカーを含有す
るか結合した特許請求の範囲第１項〜第６項の何れか一
つに記載の誘導体。 ８ 沃素−１２５で放射性ラベル付けされている特許請
求の範囲第７項記載の誘導体。 ９、 ｔａ＋生物学的流体の試料を甲状腺ホルモンの
ラベル付き誘導体および甲状腺ホルモンに対する特定バ
インダーと混合し、 （ｂ）遊離甲状腺ホルモン、そのラベル付き誘導体およ
び特定バインダーの間で反応を行なわせ、（Ｏ）必要な
らば特定バインダーに結合するようになった甲状腺ホル
モンおよびそのラベル付き誘導体の部分をかく結合して
ない部分から分離し、 （ｄｌ特定バインダーに結合しているまたは結合してい
ない甲状腺ホルモンのラベル付き誘導体の量を測定し、 （−１生物学的流体中の遊離甲状腺ホルモンの濃度測定
に上記測定値を使用する ことによって１種以上の天然バインダーに結合した甲状
腺ホルモンも含有する生物学的流体中〕遊離甲状腺ホル
モンの濃度測定法において、甲状腺ホルモンのラベル付
き誘導体を、添加した特定バインダーに強力に結合する
が、生物学的流体中の天然バインダーには全く結合しな
いかまたは甲状腺ホルモンに対するよりも非常に弱く結
合するように選択し、かつ特許請求の範囲第７項または
第８項記載の誘導体から選択することを特徴とする方法
。 １０１種以上の天然バインダーに結合した甲状腺ホルモ
ンも含有する生物学的流体中の遊離甲状腺ホルモンの分
析に特許請求の範囲第７項または第８項記載の誘導体を
使用する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14602581A JPS5859954A (ja) | 1981-09-16 | 1981-09-16 | ヨ−ドチロニン化合物の誘導体および遊離ヨ−ドチロニン化合物の分析におけるそれらの使用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14602581A JPS5859954A (ja) | 1981-09-16 | 1981-09-16 | ヨ−ドチロニン化合物の誘導体および遊離ヨ−ドチロニン化合物の分析におけるそれらの使用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5859954A true JPS5859954A (ja) | 1983-04-09 |
| JPH0380800B2 JPH0380800B2 (ja) | 1991-12-26 |
Family
ID=15398393
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14602581A Granted JPS5859954A (ja) | 1981-09-16 | 1981-09-16 | ヨ−ドチロニン化合物の誘導体および遊離ヨ−ドチロニン化合物の分析におけるそれらの使用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5859954A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5562894A (en) * | 1991-08-09 | 1996-10-08 | Regents Of The University Of California | Amino-acyl-type and catecholamine-type contrast agents for MRI |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5659741A (en) * | 1979-09-10 | 1981-05-23 | Analytical Radiation Corp | Seed bonding diamine triacetic acid and its chelate |
-
1981
- 1981-09-16 JP JP14602581A patent/JPS5859954A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5659741A (en) * | 1979-09-10 | 1981-05-23 | Analytical Radiation Corp | Seed bonding diamine triacetic acid and its chelate |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5562894A (en) * | 1991-08-09 | 1996-10-08 | Regents Of The University Of California | Amino-acyl-type and catecholamine-type contrast agents for MRI |
| US5914097A (en) * | 1991-08-09 | 1999-06-22 | Regents Of The University Of California | Amino-acyl-type and catecholamine-type contrast agents for MRI |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0380800B2 (ja) | 1991-12-26 |
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