JPS58500088A - イソエンチ−ムの電気泳動分離法および該法に使用する電気泳動ゲル - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 イソエンチーム分離用電気泳動ゲル 技術分野 この発明は、インエンチームくまたはアイソエンザイム）を分離する電気泳動法 およびそれに使用する電気泳動ゲルに関する。

技術背景 インエンチーム（同位酵素）を分離する電気泳動法およびそれに使用する電気泳 動ゲルは当業者には周知Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｂｏｓｔｏｎ、　Ｍａｓｓ　（米） 、（１９６９）を参照されたい。一般に、イソエンチームの分離に用いられた電 気泳動ゲルは多糖類から成る種類のものである。

普通、これらの電気泳動ゲルには緩衝剤も存在する。

先行技術の電気泳動ゲルに使用される代表的な多糖類（限定を意図せず）として は、例えばデンプン、酢酸セルロース、寒天、アガロース、およびそれらの混合 体がある。

先行技術の電気泳動ゲルに使用される代表的な緩衝剤（限定を意図せず）として は、例えば前記Ｃａｗｌｅｙの第３３１〜３３２頁の第１表に示されている緩衝 剤がある。

イソエンチームを分離するだめの基本的な先行技術の電気泳動法に存在する１つ の問題は、それに使用された電気泳動ゲルの貯蔵寿命が比較的短いことである。

従って、イソエンチームの電気泳動分離に用いられ、優れた貯蔵寿命（保存性） を有する電気泳動ゲルを提供することが非常に望まれていた。

発明の開示 本発明によって、優れた貯蔵寿命を有する優れた電気泳動ゲルが提供される。本 発明の電気泳動ゲルは多糖類から成る種類のものである。本発明の優れた電気泳 動ゲルは、それがさらに２〜６個の炭素原子および２〜１１個の水酸基を有する 安定化する食のアルキルポリオールから成ることを特徴とする。アルキルポリオ ールは、電気泳動ゲルに混合すると優れた貯蔵寿命を有する生成物を提供する。

さらに、本発明の他の特徴および付随する利点は、次の発明を実施するための最 良の形態の説明を読むことによって当業者には明白となるであろう。

発明を実施するための最良の形態 本発明に使用できるアルキルポリオールはエチレン・グリコール、１，２−プロ パンジオール、１，５−プロパンジオール、グリセロール、１，２−ブタンジオ −ル、１．５−ブタンジオール、１．１１−ブタンジオール、２，５−ブタンジ オール、１，２．う−ブタントリオール、１，２．１１−ブタントリオール、エ リトリトール、ペンタエリトリトールおよびピナコールを含む（限定を意図せず ）。望ましくは、アルキルポリオールは、エチレングリコールおよびプロパンジ オールから成る群から選ぶ。

本発明の電気泳動ゲルに使用できる望ましい多糖類は寒天およびアガロースであ る。そのアガロースは低電気浸透性アガロース、中電気浸透性アガロース、また は高電気浸透性アガロースにすることができる。さらに望ましくは、本発明の電 気泳動ゲルに使用される多糖類は高電気浸透性アガロースである。

本発明の電気泳動ゲルは、さらに任意であるが抗菌剤を含むことができる。代表 的な抗菌剤（限定を意図せず）は抗生物質、・・ロゲン化有機化合物、および無 機化合物を含む。ここに使用できて容易に入手できる抗菌剤の１つはアジ化ナト リウムである。

本発明の電気泳動ゲルに使用される各種成分の厳密な濃度は決定的なものではな い。しかしながら、本発明ノミ気泳動ゲルは、アルキルポリオールの体積に対す る体積％表示で、望ましくは約０１〜約１５、さらに望１しくは約１〜約１０． 最適には約う〜約７％から成る。

本発明の電気泳動ゲルは当業者に周知のいずれの方法によっても調製できる。例 えば、前述のＣａｗｌｅｙ　の著書を参照されたい。一般に、ゲル溶液は、含有 する各種成分を混合し、しかもその混合体を約８０〜約１００℃の温度に加熱し ながら混合することによって調製する。電気泳動ゲルは標準の成形法捷たは流し 込み法によって調製することができろ。そのゲルは、いずれか都合のよい温度、 例えば約２〜約ＩＩＯ℃、望ましくは約１５〜約２６℃の温度に貯蔵することが できる。その電気泳動ゲルは使用の準備ができるまで密封プラスチック・トレー に貯蔵することが望ましい。

試料は先行技術に使用されるいずれの手法によっても、例えばマイクロリットル 注射器によって本発明の電気泳動ゲルに加えることができる。その電気泳動ゲル は１００ポルトにおいて２０分で電気泳動できる。

次に、そのゲルは、分析されるイソエンチームと反応できる周知の基質と共に適 当な温度、例えば室温〜約５０℃において都合のよい時間、例えば約２時間まで の間培養される。必要ならば、そのゲルは固定または適当な溶液で洗浄すること ができる。さらに、そのゲルは任意でちるが約８０〜９０℃の温度で乾燥される 。

次の実施例はさらに説明をするためだけのものであって、開示した発明の限定を 意図するものではない。

第１表に示す混合体を有する電気泳動ゲルをプラスチックの裏張り上に流し込ん だ。次にこれらの電気泳動ゲルはプラスチックのふたをかぶせたプラスチックト レー内に入れて、耐湿性のプラスチック・バッグに密封した。次に、密封された ゲルは第■表に示した温度で貯蔵して、定期的間隔で重量損失と電気泳動機能を 調べた。重量損失試験の結果を第■表に総括する。

０．０５Ｍバルビタール緩衝剤　×　×＊：調合された各電気泳動ゲルの初期重 量は約１＋、１１５〜約４７０３゜才＊、高電気浸透性アガロース。

第　π　表　重量損失 発明の範囲内のゲル　発明の範囲外のゲル（日）　ヰ　２５　３７　５０　７０ 　１１　２５　３７　５０　７０１　Ｖ＃　Ｑ／２　Ｖ′２ｏ、ｙ　Ｏ／２　Ｑ ／２　嘘　凶　０／２　い８Ｔ￥２Ｃ￥２Ｖ′２　ψ　凶　Ｚ　嘘　Ｖ　い　Ｚ １５　０／２Ｑ／２　い　い　０／２　φ　Ｖ　（２）い　い２２　ｏＡ　Ｖ２ い　１７２　２７２　０／２　０７２　０／２　２／２　５１５２３　１汐林！ 汐％０．＋　移　１第１■１汐　い　羽虫２９　（１／２　Ｑ／２　帖　２．／ ２１汐　０／２　０／２　０／２　１−４　羽虫５０　１；ｚｆ（１稙い　い　 １い　１錘ｌ砂　羽虫　ｌ　少屯３７　ｉＡ　％ル全　い　ル巾　ル令　羽虫　 い　ル全　１ｐヰ３　（ｌ　Ｖ２　ｏ／ａｈ汐１シ判　い　け　Ｏ／２　１ｐＲ 羽虫５０　％　Ｑ／２０／２　い１９判　％ｌガｌ効ｌシ負ル羽虫１　ｉ詮　ル 仝移！總い　ｏ７’２　０／２　０／２　％　羽虫５７　明：ＨＯ／２　％　ル 争　い　Ｏ／２　０／２　１いル張６１１　い　Ｃ￥２（７２１いル巾　ル巾ル 屯い羽虫　１４＊　：　不足数／試験数 ＊＊　：　Ｎ／Ｒは「実験せず」を意味する実　施　例　２ 第ｍ表に示した混合物を有する電気泳動ゲルをプラスチックの裏張り上に流し込 んだ。次にそのゲルをプラスチックのふたをかぶせたプラスチック・トレー内に 入れて、耐水性のプラスチック・バッグに密封した。

次に、密封したゲルは第■表に示した温度で貯蔵し。

定期的間隔で重量損失と電気泳動機能を調べた。重量損失試験の結果を第■表に 総括する。

Ｔｉｓ、０．７６５％Ｖ／Ｖ　Ｘ　Ｘ ＥＤＴＡ　、　０．０１１５％　Ｗ／Ｖ　Ｘ　Ｘホウ酸、０．２１１０％ｗ／ｖ ＸＸ ＊　：　混合した各電気泳動ゲルの初期重量は約４５５〜１４．６５　Ｆ＊＊： 　中位の電気浸透性アガロース 第　■　表　重量損失 Ｉ　ＮＡ＊　Ｎ／ｉ（ＮＡ　Ｖ２　嘘　ン２３　０／１＊＊　Ｏ／１　０／ｌ　 ＩＶＲＮＡＮハ５　０／ｌ　Ｏ／１　０／Ｉ　Ｎ／ＲＶ′Ｒ縫８０／ｌ　Ｏ／１ 　０／１　０／２　０／２　０／２１０　０／ｌ　Ｏ／ｌ　Ｏ／ｌ　Ｎ／Ｒい　 い１２　０／ｌ　Ｏ／１　ｏ７’ｔ　Ｎ／ＲＮ、４’ｔ　い１５　０／１　０／ １　０／１　０／２　０／２　０／２１７　０／ｌ　Ｏ／１　０／１　′Ｎ７′ ＲＩい　ｌ■１９　０／１　０／ｌ　Ｏ／ｌ　ＮＡＮＡ　い２２　０７”ｌ　Ｏ ／１　０／２　１／２　１／２　２／２２１１　０／１　０／ｌ　Ｏ／ｌ　％　 い　い２６　０７”１　０／Ｉ　Ｎ／Ｒφ　≠　い２９　０／１　０／ｌ　Ｏ／ ｌ　Ｏ／’２　０／２’　Ｏ／２５２　０／ｌ　Ｏ／Ｉ　ＮＡ　φ　Ｎ／’Ｒφ ５６　０／ｌ　Ｏ／１　１，１．Ａ　ｌ／２　０／２　Ｑ／２３９　０／ｌ　Ｏ ／ｌ　′ｉＶ′Ｒ縫　い　％４３　ｏ、”ｌ　Ｏ／ｌ　Ｎ／ｉ（２／２　０／２ 　０／２’ｌ　６　１／１　１／ｌ　ＮＡ　ＮＡ　い　％５０　１／１　０／ｌ 　Ｎ７Ｒ２／２　帖　○１５３　０／１　０／Ｉ　Ｎ／ｉ（Ｎ／ＲＮ／ＩＲＮ／ １ｔ５７　０／１　０／ｌ　肺　ン２　０／２　１／２＊　ＮＲは実験せずを示 す 木本　不足／試験数 第■表および第■表に示したデータは、本発明の範囲内のゲル、すなわち多糖類 、および２〜６個の炭素原子と２〜１１個の水酸基を有する安定化する責のアル キルポリオールから成る電気泳動ゲルは、種々の貯蔵温度において所定の期間に 渡ってアルキルポリオールを欠いた対応するゲルよりもそれらの重量をよく維持 できることを示す。言い換えると、第■表および第■表に示したデータは、アル キルポリオールの多糖類マトリックスへの混合は多糖類−水の構造がこわれるこ とおよびその結果水の脱出による重量損失を防ぐ傾向にあることを示す。

この開示に基いて、多くの他の変化および派生が当業者には当然想起されるが、 それらは本発明の範囲内に包括されるべきものである。

手　続　補　正　書く方式） ％式％ ａ　発明（考寮）の名称、指定商品の区分インエンチームの電気泳動分離法およ び該法に使用する電気泳動ゲル う、補正する者 事件との関係　特許出願人 名称（氏名）　ベンクマン・インストルメンツ・インコーポレーテソド＆　補正 によシ増加する発明の数　ｊ）　発明明　細　書 インエンチームの電気泳動分離法および該法に使用する電気泳動ゲル 技術分野 この発明は、イソエンチーム（またはアイソエンザイム）を分離する電気泳動法 およびそれに使用する電気泳動ゲルに関する。

技術背景 インエンチーム（同位酵素）を分離する電気泳動法およびそれに使用する電気泳 動ゲルは当業者には周知Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｂｏｓｔｏｎ、　Ｍａｓｓ　（米） 、（１９６９）ｉ参照されたい。一般に、イソエンチームの分離に用いられた電 気泳動ゲルは多糖類から成る種類のものである。

普通、これらの電気泳動ゲルには緩衝剤も存在する。

先行技術の電気泳動ゲルに使用される代表的な多糖類（限定を意図せず）として は、例えばデンプン、酢酸セルロース、寒天、アガロース、およびそれらの混合 体がある。

先行技術の電気泳動ゲルに使用される代表的な緩衝剤（限定を意図せず）として は、例えば前記Ｃａｗｌ　ｅｙの第５３１〜３３２頁の第１表に示されている緩 衝剤補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の７第１項）昭和５７年 ９月ｉｌ１日 特許庁長官若杉和夫殿 Ｌ　特許出願の表示 ＰＣＴ／ＵＳ　８２１０００２３ ２発明の名称 イソエンチームの電気泳動分離法および該法に使用する電気泳動ゲル う、特許出願人 住　所　アメリカ合衆国カリフォルニア用９２６３Ｌフラートン。

ハーバ−・ブールバード２５００ 名称　ベンクマン・インストルメンツ・インコーホレーテッド４、代理人 〒１００ 氏　名　弁護士　ウォーレン・ジー・シミオール５、補正書の提出の年月日 １９８２年６月１日 ６、添付書類の目録 （１）補正書の写しく翻訳文）　１通 補正の内容 原請求項１乃至２１１を削除し、新たに新規請求項１乃至１７項を出願する。

「（新規）Ｌ　寒天、アガロース、およびそれらの混合物から成る群から選択さ れる多糖類から成る型の電気泳動ゲルであって、該電気泳動ゲルが、さらに２〜 １１個の炭素原子と２個の水酸基を有する安定化する量のアルキルポリオールか ら成ることを特徴とする電気泳動ゲル。

（新規）２．　前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約１５％の量で存在す るところの特許請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。

（新規）３　前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約１０％の量で存在する ところの特許請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。

（新規）４．　前記アルキルポリオールがエチレン・グリコール、１．２−プロ パンジオール、１．′５−プロパンジオール、１．２−ブタンジオール、１゜う −ブタンジオール、および２，３−ブタンジオールから成る群から選択されると ころの特許請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。

（新規）５　前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約１５％の景で存在する ところの特許請求の範囲第４項の電気泳動ゲル。

（新規）６　前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約１０％の量で存在する ところの特許請求の範囲第４項の電気泳動ゲル。

（新規）７．　前記ポリオールがエチレン・グリコールとプロパンジオールから 成る群から選択されるところの特許請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。

（新規）ａ　前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約１０％の量で存在する ところの特許請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。

（新規）９　寒天、アガロ−昇、およびそれらの混合物から成る群から選択され る多糖類から成る型の電気泳動ゲルが、２〜１１個の炭素原子と２個の水酸基を 有する安定化する量のアルキルポリオールの存在下で貯蔵されることを特徴とす る電気泳動ゲルの貯蔵方法。

（新規）１０　前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約１５％の量で存在す るところの特許請求の範囲第９項の方法。

（新規）　１１　前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約１０％の量で存在 するところの特許請求の範囲第９項の方法。

（新規）１２．前記アルキルポリオールが、エチレングリコール、１．２−プロ パンジオール、１，３＝プロパンジオール、１，２−ブタンジオール、１１５− ブタンジオール、１．ＩＪ−ブタンジオールおよび２，３−ブタンジオールから 成る群から選択されるところの特許請求の範囲第９項の方法。

（新規）　１５　前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約１５％の量で存在 するところの特許請求の範囲第１２項の方法。

（新規）　１４．　前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約１５％の量で存 在するところの特許請求の範囲第１２項の方法。

ｌＦｒ規）Ｆｔ　前記アルキルポリオールがエチレン・グリコールとプロパンジ オールから成る群から選択されるところの特許請求の範囲第９項の方法。

（新規）　１６　前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約１５％の量で存在 するところの特許請求の範囲第１５項の方法。

（新規）１７．前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約１０％の量で存在す るところの特許請求の範囲第１５項の方法。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｌ　多糖類から成るタイプであって、さらに、２〜６個の炭素原子と２〜４個の 水酸基を有する安定化する量のアルキルポリオールから成ることを特徴とする電 気泳動ゲル。 ２　前記アルキルポリオールが体積比で約０１〜約１５％の量で存在するところ の特許請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。 う、　前記アルキルポリオールが体積比で約１〜約１０％の量で存在するところ の特許請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。 ４、　前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約７％の量で存在するところの 特許請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。 １　前記アルキルポリオールがエチレン・クリコール、１，２−プロノマンジオ ール、１．５−プロノマンジオール、グリセロール、１，２−ブタンジオール、 １．５−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、２．５−ブタンジオール、 １，２．５−ブタントリオール、１．Ｉｔ、５−ブタントリオール、エリトリト ール、ペンタエリトリトール、およびピナコールから成る群から選択されるとこ ろの特許請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。 ６　前記アルキルポリオールが体積比で約０１〜約１５％の量で存在するところ の特許請求の範囲第５項の電気泳動ゲル。 ７、　前記アルキルポリオールが体積比で約１〜約１０％の量で存在するところ の特許請求の範囲第５項の電気泳動ゲル。 ＆　前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約７％の量で存在するところの特 許請求の範囲第５項の電気泳動ゲル。 ａ　前記アルキルポリオールがエチレン・グリコールおよびプロパンジオールか ら成る群から選択されるところの特許請求の範囲第１項の電気泳動ゲル。 １０、前記アルキルポリオールが体積比で約０１〜約１５％の量で存在するとこ ろの特許請求の範囲第９項の電気泳動ゲル。 ＩＬ　前記アルキルポリオールが体積比で約１〜約１０％の量で存在するところ の特許請求の範囲第９項の電気泳動ゲル。 １２　前記アルキルポリオールが体積比で約３〜７％の量で存在するところの特 許請求の範囲第９項の電気泳動ゲル。 込　２〜６個の炭素原子と２〜１１個の水酸基を有すするアルキルポリオールの 安定化する景の存在下で貯蔵されることを特徴とする多糖類から成るタイプの電 気泳動ゲルを貯蔵する方法。 １４、前記アルキルポリオールが体積比で約０１〜約１５％の量で存在するとこ ろの特許請求の範囲第１３項の方法。 １１　前記アルキルポリオールが体積比で約１〜約１０％の量で存在するところ の特許請求の範囲第１５項の方法。 １６、前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約７％の量で存在するところの 特許請求の範囲第１３項の方法。 １７　前記アルキルポリオールがエチレン・クリコール、１．２−プロパンジオ ール、１．３−プロパンジオール、グリセロール、１．２−ブタンジオール、１ ．５−ブタンジオール、１，１１−ブタンジオール、２、）−ブタンジオール、 １，２．３−ブタントリオール、１，２．４−ブタントリオール、エリトリトー ル、ペンタエリトリトール、およびピナコールから成る群から選択されるところ の特許請求の範囲第１３項の方法。 ｌ＆　前記アルキルポリオールが体積比で約０１〜約１５％の量で存在するとこ ろの特許請求の範囲第１７項の方法。 Ｉ’ｌｌ　前記アルキルポリオールが体積比で約１〜約１０％の量で存在すると ころの特許請求の範囲第１７項の方法。 ２０６前記アルキルポリオールが体積比で約５〜約７％の量で存在するところの 特許請求の範囲第１７項の方法。 ２Ｌ　前記アルキルポリオールがエチレン・クリコールおよびプロパンジオール から成る群から選択されるところの特許請求の範囲第１３項の方法。 ２２　前記アルキルポリオールが体積比で約０．１〜約１５％の量で存在すると ころの特許請求の範囲第２１項の方法。 ２五　前記アルキルポリオールが体積比で約１〜約１５％の量で存在するところ の特許請求の範囲第２１項の方法。 ２１＋、前記アルキルポリオールが体積比で約う〜約７％の量で存在するところ の特許請求の範囲第２１項の方法。